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3-磷酸甘油醛脱氢酶在鸭疫里默氏杆菌感染过程中的致病作用

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中国兽医学报 2023年第3期43卷 488-496页

作者：高继业李金蓉黄伟李继祥李德龙陈思怀西南大学动物医学学院重庆402460

为深入探讨3-磷酸甘油醛脱氢酶(RaGAPDH)在鸭疫里默氏菌(Riemerella anatipestifer,R.anatipestifer)致病过程中的作用,研究采用等位基因交换技术将RaGAPDH的编码基因gap从血清Ⅰ型R.anatipestifer菌株CZ2中敲除,产生gap基因缺失突株CZ2△gap,比较研究该突变菌株与野生型菌株生物学特征的异同及抗RaGAPDH多克隆抗体对雏鸭的被动免疫保护效率。结果显示,突变菌株CZ2△gap在生长曲线、生化特性、细菌菌落形态等方面与野生菌株非常相似,但是对14日龄樱桃谷鸭的LD50由野生株的4.2×10^(7)CFU下降到109CFU,突变株对鸭胚成纤维细胞的黏附、入侵能力明显下降(P动物试验研究表明,抗RaGAPDH多克隆抗体可保护14日龄樱桃谷鸭抗R.anatipestifer感染,0.5,1.0,1.5 mL剂量组的保护率分别为19.5%,50.0%,52.8%,其中1.0,1.5 mL剂量组的差异不显著(P<0.01)。结果表明,RaGAPDH是R.anatipestifer的一个致病因子,并可能作为黏附素发挥作用。

关键词： 3-磷酸甘油醛脱氢酶鸭疫里默氏杆菌毒力因子黏附素细胞外蛋白质

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呼吸道病毒和细菌共感染分子机制研究进展

中国兽医学报 2022年第10期42卷 2109-2116页

作者：陈静李燕燕袁祥叶超彭远义西南大学动物医学学院重庆400715

呼吸道感染性疾病严重威胁人畜健康,可导致人和动物免疫功能低下,严重的导致感染性肺炎,甚至引起死亡。呼吸道病毒和细菌共感染是引起该类疾病的重要病因,其共感染机制问题已日益受到业界的广泛关注。现从病原相互作用、病理损伤和宿主... 详细信息

呼吸道感染性疾病严重威胁人畜健康,可导致人和动物免疫功能低下,严重的导致感染性肺炎,甚至引起死亡。呼吸道病毒和细菌共感染是引起该类疾病的重要病因,其共感染机制问题已日益受到业界的广泛关注。现从病原相互作用、病理损伤和宿主免疫调控机制等方面,对近年来呼吸道病毒和细菌共感染的分子机制研究进展进行了综述,以期为病毒和细菌共感染机制的深入研究及呼吸道感染性疾病防控提供重要理论参考。

关键词：呼吸道感染病毒细菌共感染分子机制

前列腺素F2α剂量依赖性对黄体溶解效果评价及其调控基因表达模式分析

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中国兽医学报 2022年第10期42卷 2090-2098页

作者：杨恒李利财西南大学动物医学学院重庆荣昌402460

本试验旨在探究不同剂量外源性PGF对小鼠黄体(corpus luteum, CL)溶解效果的影响及其剂量依赖性关系。选用60只60日龄、体质量30~34 g雌性昆明小鼠随机分为6组,分别采用腹腔注射1,10,50,100,200μg PGF。通过H.E染色法监测卵巢的形态学... 详细信息

本试验旨在探究不同剂量外源性PGF对小鼠黄体(corpus luteum, CL)溶解效果的影响及其剂量依赖性关系。选用60只60日龄、体质量30~34 g雌性昆明小鼠随机分为6组,分别采用腹腔注射1,10,50,100,200μg PGF。通过H.E染色法监测卵巢的形态学变化,ELISA法检测小鼠血清孕酮水平及利用qRT-PCR检测孕酮合成关键酶/细胞凋亡相关基因表达情况。结果显示,与对照组相比,不同剂量PGF处理组中昆明小鼠的CL溶解效果为50μg组>10μg组>100μg组>1μg组>200μg组;CL功能性指征结果显示PGF在50μg剂量范围内,小鼠体内P含量会随着PGF处理剂量的增加而呈现递增趋势;而且,P合成关键酶基因检测结果显示StAR和3β-HSD表达量在PGF注射剂量为50μg时呈现最低水平;同时,CL结构性指征检测结果发现此时促凋亡因子BAX基因、BAX/BCL-2比率及Caspase-3基因表达呈极显著性上调(P动物繁殖技能障碍(如持久CL)及优化PGs主导的高效繁殖技术方案研究奠定坚实的理论基础。

关键词：小鼠黄体(CL)溶解 PGF2α 最佳剂量表达模式

CD44通过影响猪流行性腹泻病毒复制调节钠氢交换体3活性

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畜牧兽医学报 2024年第5期55卷 2176-2185页

作者：王静张淑娟胡霞刘向阳张兴翠宋振辉西南大学动物医学院重庆402460 新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052

本研究旨在研究CD44(cluster of differentiation 44)对感染猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)的猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)中钠氢交换体3(NHE3)表达及膜转移的影响。以IPEC-J2为细胞模型,采用RT-qPCR和Western blot检测感染PEDV后不同时间点IPEC-J2细胞中NHE3和PEDV N表达量变化;转染质粒调控IPEC-J2中CD44表达后,采用TCID50和Western blot检测PEDV感染后不同时间点PEDV复制水平和NHE3蛋白表达变化,采用火焰原子吸收法检测IPEC-J2细胞内外Na^(+)浓度变化。转录组数据和细胞试验结果显示,与对照组相比,PEDV感染后IPEC-J2细胞中CD44蛋白表达水平和mRNA表达量均呈上调趋势,24~48 h内上升显著(P<0.05),而PEDV N蛋白表达水平在12~48 h内则呈显著下降趋势(P<0.05)。此外,CD44重组质粒转染试验结果显示,与PEDV感染组相比,过表达CD44后感染PEDV组细胞中病毒滴度和PEDV N蛋白表达水平显著降低(P<0.05),而干扰CD44后感染PEDV组细胞中病毒滴度和PEDV N蛋白表达水平则显著上升(P<0.05)。以上结果表明,高表达CD44具有抑制PEDV复制的作用,干扰CD44后PEDV复制增多。同时,为研究PEDV感染情况下,CD44是否参与了IPEC-J2细胞中NHE3表达的调节,采用Western blot和火焰原子吸收法检测了调节CD44后膜NHE3蛋白的表达水平和细胞内外Na^(+)浓度。结果表明,过表达CD44显著促进了膜NHE3蛋白的表达和活性(P<0.05),细胞内外Na^(+)浓度逐渐恢复正常水平。相反,干扰CD44显著降低了膜NHE3蛋白的表达和活性(P<0.05),细胞内外Na^(+)浓度呈现失衡状态。结果提示,CD44可能是缓解PEDV引发仔猪腹泻的潜在治疗靶点,它通过抑制IPEC-J2细胞中PEDV的复制来增加转移至质膜上的NHE3数量,从而维持细胞内外Na^(+)运转平衡。

关键词： CD44 猪流行性腹泻病毒钠氢交换体3 钠离子

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基于结肠代谢组学和网络药理学整合策略探究参苓白术散治疗溃疡性结肠炎的作用机制

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中国中药杂志 2024年第7期49卷 1749-1761页

作者：徐续扬覃施媛张丽芳姜盛铭张昕杰马琪西南大学动物医学院重庆402460

参苓白术散是治疗溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的常用复方,该研究采用结肠代谢组学整合网络药理学探究其治疗UC的作用机制。BALB/c小鼠随机分成空白组、模型组、参苓白术散组、柳氮磺胺吡啶组,运用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术对小鼠... 详细信息

参苓白术散是治疗溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的常用复方,该研究采用结肠代谢组学整合网络药理学探究其治疗UC的作用机制。BALB/c小鼠随机分成空白组、模型组、参苓白术散组、柳氮磺胺吡啶组,运用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术对小鼠结肠组织代谢谱进行分析,筛选差异代谢物及相关代谢通路;基于在线数据库筛选参苓白术散活性成分及作用靶点、UC疾病靶点,利用STRING和Cytoscape 3.9.1构建参苓白术散治疗UC核心靶点的蛋白-蛋白互作网络,采用DAVID数据库进行基因本体(GO)功能和京都基因组百科全书(KEGG)通路富集,并构建“代谢物-反应-酶-基因”网络进行代谢组学与网络药理学联合分析。参苓白术散对UC结肠组织中参与D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢,咖啡因代谢,鞘脂类代谢,精氨酸生物合成,赖氨酸降解,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,甘油磷脂代谢和嘧啶代谢等代谢通路的25种代谢物有显著回调趋势;参苓白术散治疗UC的47个核心靶点参与了MAPK信号通路、TNF信号通路、Toll样受体信号通路、脂质和动脉粥样硬化、炎症性肠病、Th17细胞分化等。整合分析显示甘油磷脂代谢和嘧啶代谢是参苓白术散治疗UC的关键代谢途径。结果表明参苓白术散可以通过调节结肠代谢物改善结肠黏膜形态,调控炎症相关核心靶基因降低炎症水平,缓解机体脂质代谢紊乱发挥治疗UC的作用。

关键词：参苓白术散溃疡性结肠炎结肠代谢组学网络药理学

基于猪圆环病毒2型复制子的复制型表达载体的构建

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生物工程学报 2023年第7期39卷 2634-2643页

作者：蔡晓雪李俊李章勋杜红旭曹立亭马跃西南大学动物医学院重庆402460

DNA疫苗在动物体内表达抗原基因的水平是决定DNA疫苗免疫效果的关键,而提高DNA疫苗抗原基因表达水平的途径之一是利用可在动物细胞内复制的质粒作为载体。本研究利用pcDNA3.1构建了1个基于猪圆环病毒2(porcine circovirus 2,PCV2)复制... 详细信息

DNA疫苗在动物体内表达抗原基因的水平是决定DNA疫苗免疫效果的关键,而提高DNA疫苗抗原基因表达水平的途径之一是利用可在动物细胞内复制的质粒作为载体。本研究利用pcDNA3.1构建了1个基于猪圆环病毒2(porcine circovirus 2,PCV2)复制子的复制型DNA疫苗载体pCMVori,再将增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因分别克隆入pCMVori和对照质粒pcDNA3.1中,然后分别转染PK-15细胞,48 h后观察两组转染细胞EGFP表达情况后分别提取细胞质粒和RNA。利用Bcl I酶切前、后的质粒为模板通过定量PCR检测质粒的复制效率,并通过反转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测PCV2复制子的Rep基因转录产物。通过Image J软件分析两组转染细胞的平均荧光强度,并通过定量RT-PCR定量检测两组转染细胞的EGFP基因转录水平。结果显示,pCMVori在细胞内48 h的复制效率达到136%,RT-PCR结果证实Rep和Rep’均有转录。pCMVori-EGFP转染细胞的平均荧光强度比pcDNA3.1-EGFP的高39.14%,定量RT-PCR检测结果显示,前者的EGFP转录水平也比后者高40%。本研究结果表明,所构建的复制型DNA疫苗载体pCMVori可在真核细胞中独立复制,克隆的目的基因的表达水平也因此获得提升,为构建复制型DNA疫苗奠定了基础。

关键词： DNA复制子表达载体猪圆环病毒2型 DNA疫苗

姜黄素抑制PEDV感染Vero细胞的作用研究

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中国兽医科学 2023年第5期53卷 641-648页

作者：刘向阳周扬张淑娟胡霞王静张利雷程红宋振辉新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052 西南大学动物医学院重庆402460

为探究姜黄素是否具有抑制猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染的作用,本研究以Vero细胞为实验对象,分别设置阴性(空白)对照组、PEDV感染组、姜黄素处理组、姜黄素预处理后感染PEDV组,在PEDV感染后观察细胞病变,利用RT-qPCR、Western-blot、IFA... 详细信息

为探究姜黄素是否具有抑制猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染的作用,本研究以Vero细胞为实验对象,分别设置阴性(空白)对照组、PEDV感染组、姜黄素处理组、姜黄素预处理后感染PEDV组,在PEDV感染后观察细胞病变,利用RT-qPCR、Western-blot、IFA技术和病毒滴度测定法检测PEDV在Vero细胞中的增殖情况。结果显示,与阴性对照组相比,PEDV感染Vero细胞后有明显细胞病变,即细胞拉丝、细胞核固缩并空泡化。与PEDV感染组相比,姜黄素预处理后显著抑制了病毒在细胞内的增殖(P0.05);姜黄素处理后除IFN-α分泌水平无明显变化外,IFN-β分泌水平及MX1、ISG15、ZAP转录水平均显著上调(P<0.05)。结果表明,姜黄素能够增强Vero细胞抗病毒细胞因子的抗病毒效果,抑制PEDV在Vero细胞中的增殖,这首次证实了姜黄素具有抑制PEDV感染Vero细胞的抗病毒作用,为防控PEDV有效抗病毒药物的研发提供了参考。

关键词：姜黄素猪流行性腹泻病毒 Vero细胞抗病毒细胞因子

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生物法合成肠炎沙门菌糖蛋白

生物工程学报 2022年第6期38卷 2377-2388页

作者：李梦如刘恩张文芋罗洪艳李沛西南大学动物医学院重庆400700

肠炎沙门菌(Salmonella enteritidis)是一种重要的人兽共患病原菌,在对该菌感染的预防与控制上一直存在困难,而糖蛋白疫苗的出现为其预防提供了新的思路。对于糖蛋白的合成,一般采用传统的化学交联方法,该法制备流程烦琐、生产成本高。... 详细信息

肠炎沙门菌(Salmonella enteritidis)是一种重要的人兽共患病原菌,在对该菌感染的预防与控制上一直存在困难,而糖蛋白疫苗的出现为其预防提供了新的思路。对于糖蛋白的合成,一般采用传统的化学交联方法,该法制备流程烦琐、生产成本高。因此,探索经济且稳定的生物合成方法非常必要。为了实现生物法合成肠炎沙门菌糖蛋白,本研究利用CRISPR/Cas9方法构建肠炎沙门菌waa L基因缺失株SEΔwaa L,使用银染的方法检测细菌外膜脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)的合成情况。使用环形PCR方法构建了表达寡糖转移酶PglL、重组铜绿假单胞菌的外毒素(recombinant Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,r EPA)和霍乱毒素B亚单位(cholera toxin B subunit,CTB)的表达质粒,并分别在rEPA的N端和CTB的C端加入了PilE;糖基化位点序列。将重组质粒转化到SE ΔwaaL中,诱导表达后通过Western blotting方法对糖蛋白的合成进行验证,并通过镍柱(Ni-NTA)对糖蛋白进行纯化。结果表明,waaL基因的缺失阻断了肠炎沙门菌LPS正常合成,在该缺失株中rEPA和CTB蛋白均可成功表达。此外,在表达寡糖转移酶PglL的情况下,rEPA和CTB发生了明显的糖基化,其糖基化部分为肠炎沙门菌O抗原多糖。本研究结果证明肠炎沙门菌缺失waaL基因后,在寡糖转移酶PglL的作用下可以将自身O抗原多糖链共价连接到载体蛋白rEPA和CTB上,形成糖蛋白,为生物法合成肠炎沙门菌糖蛋白的研究奠定了基础。

关键词：生物法糖蛋白肠炎沙门菌 CRISPR/Cas9方法 PglL

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牛源大肠杆菌对小鼠致病性研究

中国兽医学报 2023年

作者：李红丽闫巍文闫益波刘一飞乔国峰孟冬霞王志宇吉林大学动物医学学院山西农业大学动物医学学院

对本实验室所分离的20株大肠杆菌进行小鼠致病性试验,将132只小鼠随机分为22组,每组6只,设2个对照组,对照1组不灌服任何东西,对照2组灌服0.2 ml。生理盐水,20组试验组小鼠则每只灌服浓度为5×108CFU/mL的对应大肠杆菌菌液0.2 mL。称量... 详细信息

对本实验室所分离的20株大肠杆菌进行小鼠致病性试验,将132只小鼠随机分为22组,每组6只,设2个对照组,对照1组不灌服任何东西,对照2组灌服0.2 ml。生理盐水,20组试验组小鼠则每只灌服浓度为5×108CFU/mL的对应大肠杆菌菌液0.2 mL。称量并记录攻毒前后小鼠体质量,用酶联免疫分析试剂盒检测小鼠血清中C反应蛋白、白介素8、肿瘤坏死因子-α的浓度,进行组间差异分析,进而分析分离菌株的致病性关键因子。结果表明,携带有2种类型毒力基因的大肠杆菌可导致小鼠产生炎症反应,而仅携带一种类型毒力基因的大肠杆菌不能引起小鼠炎症反应,并通过数据分析建立了一种大肠杆菌致病性评估体系。本研究为探究牛源大肠杆菌致病性关键因素和牛大肠杆菌病的科学防控提供理论基础。

关键词：牛源大肠杆菌致病性毒力基因