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利用CRISPR/Cas9技术构建Pmepa1基因敲除的TCMK1小鼠肾小管上皮细胞系

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生物技术通报 2024年第2期40卷 73-79页

作者：张宏民龙雯劳筱清陈雯妍商雪梅王洪连王丽粟宏伟沈宏萍沈宏春西南医科大学中西医结合学院泸州646000 西南医科大学附属中医医院泸州646000

【目的】利用CRISPR/Cas9技术构建Pmepa1基因敲除的TCMK1小鼠肾小管上皮细胞系,并探讨Pmepa1敲除对TGF-β刺激下TCMK1细胞纤维化的影响,为研究Pmepa1在纤维化模型中的作用提供细胞模型。【方法】根据CRISPR/Cas9设计原则设计靶向小鼠Pme... 详细信息

【目的】利用CRISPR/Cas9技术构建Pmepa1基因敲除的TCMK1小鼠肾小管上皮细胞系,并探讨Pmepa1敲除对TGF-β刺激下TCMK1细胞纤维化的影响,为研究Pmepa1在纤维化模型中的作用提供细胞模型。【方法】根据CRISPR/Cas9设计原则设计靶向小鼠Pmepa1基因组序列的sgRNA序列,构建pX333载体并转染进入TCMK1细胞,采用流式分选m Cherry阳性细胞、单克隆细胞扩增和测序鉴定Pmepa1敲除细胞,Western blot验证Pmepa1基因敲除情况。采用RT-PCR和Western blot分析Pmepa1敲除对TGF-β1诱导的R-Smad的活化和纤维化的影响。【结果】将sgRNA设计在Pmepa1第2个外显子,pX333-Pmepa1质粒转染TCMK1细胞48 h后,观察到mCherry荧光蛋白的表达,流式细胞分析转染效率约为17%,pX333-Pmepa1质粒转染阳性细胞经流式分选和单克隆扩增培养,得到19个细胞克隆,对Pmepa1基因位点上sgRNA靶点序列PCR扩增测序分析发现2个双等位基因移码突变细胞,Western blot验证Pmepa1蛋白表达缺失,表明Pmepa1基因敲除TCMK1细胞株构建成功,与未敲除细胞相比,Pmepa1敲除细胞在TGF-β1刺激下,p-Smad2和p-Smad3的表达显著升高,并且促进纤维化基因Fibronectin和Collagen I的表达。【结论】利用CRISPR/Cas9技术成功构建Pmepa1基因敲除TCMK1小鼠肾小管上皮细胞系,为Pmepa1蛋白的功能研究建立了细胞模型以及Pmepa1在纤维化中的重要作用。

关键词： CRISPR/Cas9技术 Pmepa1 TCMK1细胞系纤维化

基于随机森林的维持性血液透析病人及配偶恐惧疾病进展的影响因素

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护理研究 2024年第5期38卷 812-819页

作者：张杰兰马奔驰余兆兰柯燕鞠梅西南医科大学附属医院四川646000 西南医科大学附属中医医院西南医科大学护理学院

目的:采用随机森林算法探讨中老年维持性血液透析病人及配偶恐惧疾病进展的影响因素。方法:采用方便抽样法,抽取泸州市3所三级甲等医院血液透析中心进行治疗的239对中老年维持性血液透析病人及病人的配偶进行调查,采用随机森林模型进行... 详细信息

目的:采用随机森林算法探讨中老年维持性血液透析病人及配偶恐惧疾病进展的影响因素。方法:采用方便抽样法,抽取泸州市3所三级甲等医院血液透析中心进行治疗的239对中老年维持性血液透析病人及病人的配偶进行调查,采用随机森林模型进行影响因素重要性排序。结果:中老年维持性血液透析病人恐惧疾病进展总得分为(38.48±8.49)分,配偶恐惧疾病进展总得分为(38.05±8.21)分。随机森林重要性排序显示,病人透析龄、积极应对方式、年龄是影响中老年病人恐惧疾病进展的前3位重要影响因素;配偶积极应对方式、疾病感知、社会支持是影响中老年维持性血液透析病人配偶恐惧疾病进展的前3位重要影响因素。结论:中老年维持性血液透析病人及配偶普遍存在较严重恐惧疾病进展心理。临床医务人员需引起重视,针对不同特征的病人及配偶制定个性化的干预措施。

关键词：维持性血液透析中老年人配偶恐惧疾病进展影响因素重要性

有序多孔辅料载体调控中药精油挥发释药的研究进展

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中成药 2024年第4期46卷 1225-1229页

作者：任桂林蒲清荣刘增金黄锐赵剑西南医科大学附属中医医院四川泸州646000

中药精油是芳香中药防病治病的物质基础,理化性质独特,生物活性显著。吸嗅递药是其主流给药形式,但挥发性强,释药不均衡的特性导致临床疗效不持久、不稳定。多孔材料是一种内部呈互相连通或隔断的气相孔隙网状结构,由固相骨架将气相孔... 详细信息

中药精油是芳香中药防病治病的物质基础,理化性质独特,生物活性显著。吸嗅递药是其主流给药形式,但挥发性强,释药不均衡的特性导致临床疗效不持久、不稳定。多孔材料是一种内部呈互相连通或隔断的气相孔隙网状结构,由固相骨架将气相孔隙隔开的新型功能性结构材料,用有序多孔材料吸附固化精油可以提高稳定性,减缓其挥发速率。本文就吸附固化技术的多孔材料调控中药精油挥发释药的研究进行综述,揭示多孔材料调控中药精油释放的作用机制,以期为中药精油的释放控制及应用提供参考与借鉴。

关键词：中药精油有序多孔材料吸附固化技术挥发性调控机制

异鼠李素通过抑制LncRNA-gm33782减轻AKI肾小管炎性细胞凋亡

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中国实验动物学报 2024年第6期32卷 762-771页

作者：贾建谭睿陟钟霞粟宏伟王丽西南医科大学附属中医医院中西医结合研究中心四川泸州646000 西南医科大学附属中医医院泌尿外科四川泸州646000

目的探讨长链非编码RNA-gm33782(LncRNA-gm33782)在急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)肾小管损伤中的功能以及异鼠李素改善肾小管炎性细胞凋亡的作用机制。方法将48只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、治疗组(AKI模型构建后... 详细信息

目的探讨长链非编码RNA-gm33782(LncRNA-gm33782)在急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)肾小管损伤中的功能以及异鼠李素改善肾小管炎性细胞凋亡的作用机制。方法将48只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、治疗组(AKI模型构建后灌胃给予30 mg/kg异鼠李素)、空载质粒电转染组、LncRNA-gm33782敲低组、LncRNA-gm33782过表达组、LncRNA-gm33782敲低组+模型组、LncRNA-gm33782过表达+治疗组8组,通过腹腔一次性注射20 mg/kg顺铂诱导小鼠AKI,原位电转染技术用于介导肾LncRNA-gm33782的敲低和过表达。采用Chirp实验捕获AKI肾LncRNA-gm33782结合蛋白进行质谱分析,挖掘LncRNA-gm33782直接作用靶蛋白;通过观察电转染敲低LncRNA-gm33782和异鼠李素(isorhamnetin,ISO)治疗干预后小鼠肾功能、病理结构改变、肾炎性因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)表达,评价LncRNA-gm33782在AKI中的作用;NF-κB被作为介导炎症的关键信号通路,Bax、Bcl-2蛋白表达量以及流式凋亡检测结果被用于评价异鼠李素对AKI肾小管炎性细胞凋亡的治疗作用。结果AKI小鼠肾表现出严重的肾小管损伤以及巨噬细胞浸润和炎症,异鼠李素的治疗干预和LncRNA-gm33782电转染敲低均能够减轻AKI肾损伤。LncRNA-gm33782主要表达于AKI损伤的肾小管细胞,质谱检测发现补体因子-H(complement factor-H,CFH)与其有直接结合关系。体外过表达LncRNA-gm33782后,CFH表达量随即升高,而异鼠李素对AKI细胞炎性凋亡的治疗作用受到抑制。结论异鼠李素是通过抑制LncRNA-gm33782对CFH的调控作用减轻AKI肾小管细胞炎性凋亡。

关键词：急性肾损伤 LncRNA-gm33782 肾原位电转染异鼠李素炎性凋亡

家庭韧性在卵巢癌患者自我感受负担与生命质量间的中介效应

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现代预防医学 2024年第2期51卷 360-365页

作者：张璐官平鲁光洪韩兴平余朝锈傅静西南医科大学护理学院西南医科大学附属医院肿瘤科西南医科大学附属中医医院肿瘤科

目的探讨卵巢癌患者自我感受负担、家庭韧性和生命质量间的关系，分析家庭韧性在自我感受负担和生命质量间的潜在作用。方法便利选取2022年5月至2023年1月在四川省两所三级甲等医院肿瘤科住院的卵巢癌患者作为研究对象，采用一般资料... 详细信息

目的探讨卵巢癌患者自我感受负担、家庭韧性和生命质量间的关系，分析家庭韧性在自我感受负担和生命质量间的潜在作用。方法便利选取2022年5月至2023年1月在四川省两所三级甲等医院肿瘤科住院的卵巢癌患者作为研究对象，采用一般资料调查表、家庭韧性评估量表(FRAS)、癌症患者自我感受负担量表(SPBS-CP)、卵巢癌患者生命质量量表(FACT-O)进行问卷调查。使用SPSS 22.0对数据进行描述性分析、相关性分析和多元线性回归分析，使用PROCESS 3.4程序分析家庭韧性在自我感受负担和生命质量间的中介效应，及Bootstrap法对中介效应进行检验。结果卵巢癌患者家庭韧性得分为(140.61±15.82)分、自我感受负担得分为(59.46±19.95)分、生命质量得分为(91.52±32.01)分。卵巢癌患者家庭韧性与生命质量呈正相关关系(r=0.464,P<0.01);自我感受负担与家庭韧性、生命质量呈负相关关系(r=-0.385、-0.439,P<0.01)。家庭韧性在卵巢癌患者自我感受负担与生命质量间有部分中介作用，中介效应占总效应的30.35%。结论卵巢癌患者自我感受负担处于中度水平，家庭韧性处于中等偏下水平，生命质量有待改善。建议医护人员可通过增强家庭支持、树立应对信念以及促进家庭沟通等健康教育方式，提升患者的家庭韧性并减轻患者自我感受负担，进而改善其生命质量。

关键词：卵巢癌家庭韧性自我感受负担生命质量中介效应

风热感冒临床表型组及药物表型组的构建与表型组学研究

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中药药理与临床 2024年第1期40卷 103-106页

作者：刘子渝高晨皓叶玲玉段大跃西南医科大学附属中医医院泸州646099 西南医科大学中医药表型组学研究中心泸州646000

随着中医药现代化的深入发展,新兴科学表型组学(Phenomics)已成为传统中医药融合现代医学的新研究范式。本文提出以中医证候为框架,结合现代医学对证候相关临床表型特征的共识,构建风热感冒临床表型组,并根据方证相应原则,建立大型“病... 详细信息

随着中医药现代化的深入发展,新兴科学表型组学(Phenomics)已成为传统中医药融合现代医学的新研究范式。本文提出以中医证候为框架,结合现代医学对证候相关临床表型特征的共识,构建风热感冒临床表型组,并根据方证相应原则,建立大型“病证方”相结合的风热感冒临床表型组及银翘散药物表型组队列,进行多组学集合的表型组学研究的理论和方法。为中医证候的量化诊断和治疗以及临床疗效评价提供客观科学依据,最终实现风热感冒的精准防治。

关键词：银翘散风热感冒表型组学中医药代谢组学精准医学

髌上入路和髌旁内侧入路髓内钉治疗胫骨多段骨折的疗效比较

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中国修复重建外科杂志 2024年

作者：徐学鹏赵亮范玮张喜海西南医科大学附属医院骨与关节外科

目的比较膝关节半伸直位髌上入路与髌旁内侧入路胫骨髓内钉治疗胫骨多段骨折的临床疗效。方法回顾分析2018年7月—2022年12月收治且符合选择标准的43例采用髓内钉治疗的胫骨多段骨折患者临床资料，其中23例采用髌上入路（A组），20例... 详细信息

目的比较膝关节半伸直位髌上入路与髌旁内侧入路胫骨髓内钉治疗胫骨多段骨折的临床疗效。方法回顾分析2018年7月—2022年12月收治且符合选择标准的43例采用髓内钉治疗的胫骨多段骨折患者临床资料，其中23例采用髌上入路（A组），20例采用髌旁内侧入路（B组）。两组患者性别、年龄、致伤原因、受伤至手术时间、骨折国际内固定研究协会/美国骨创伤协会（AO/OTA）分型及术前疼痛视觉模拟评分（VAS）、膝关节活动度（range of motion,ROM）等基线资料比较差异无统计学意义（P>0.05）。记录并比较两组患者手术时间、术中失血量、切口长度、术中透视次数及骨折愈合时间，统计两组术后4、8、12周膝关节VAS评分及ROM，观察术后并发症发生情况；末次随访时采用Lysholm评分评价膝关节功能。结果两组患者均顺利完成手术，术中无神经、血管损伤等并发症，所有切口均Ⅰ期愈合。两组手术时间、术中失血量、术中透视次数比较差异无统计学意义（P>0.05）；但B组手术切口长于A组，差异有统计学意义（P0.05）。两组骨折均愈合，愈合时间比较差异无统计学意义（P>0.05）。随访期间无内固定物松动、断裂及骨折复位丢失等并发症发生。末次随访时，B组膝关节Lysholm评分显著优于A组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论膝关节半伸直位髌上入路与髌旁内侧入路髓内钉治疗胫骨多段骨折均可获得满意疗效，髌旁内侧入路早期膝关节疼痛症状更轻，远期膝关节功能更优。

关键词：胫骨多段骨折髌上入路髌旁内侧入路髓内钉

柴黄益肾颗粒对单侧输尿管梗阻小鼠肾纤维化的作用及其机制

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解放军医学杂志 2024年

作者：谢柯欢张浩军谭睿陟粟宏伟刘鹏李平王丽北京中日友好医院临床医学研究所北京顺义区中医医院肾病科西南医科大学附属中医医院泌尿外科西南医科大学附属中医医院中西结合研究中心

目的　探讨柴黄益肾颗粒对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾纤维化的作用及其作用机制。方法　将24只8周龄C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、模型组及柴黄益肾颗粒低、高剂量组(n=6)。对照组仅暴露且游离右侧肾输尿管；模型组行单侧输尿管梗阻... 详细信息

目的　探讨柴黄益肾颗粒对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾纤维化的作用及其作用机制。方法　将24只8周龄C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、模型组及柴黄益肾颗粒低、高剂量组(n=6)。对照组仅暴露且游离右侧肾输尿管；模型组行单侧输尿管梗阻建立UUO动物模型；柴黄益肾颗粒低、高剂量组按模型组方法建立UUO小鼠模型并分别予以3.8、7.6 g/kg柴黄益肾颗粒灌胃小鼠，7 d后麻醉处死小鼠收集肾标本。采用HE、Masson染色观察各组肾脏病理变化及纤维化程度，天狼星红染色观察胶原沉积情况。采用Western blotting检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)、Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)、糖原合成酶激酶3β(Gsk3β)、β-连环蛋白(β-catenin)相关蛋白的表达水平。采用RT-PCR检测A33、Gsk3β、β-catenin mRNA水平的变化。同时，利用转化生长因子-β(TGF-β)刺激肾小管上皮细胞(TCMK1)建立体外纤维化模型，柴黄益肾颗粒含药血清处理建立体外用药模型；并通过转染A33过表达质粒在TCMK1细胞内过表达A33，观察纤维化相关指标及A33、Gsk3β、β-catenin mRNA的表达变化。结果　RT-PCR检测结果显示，与对照组比较，模型组A33 mRNA水平明显升高，而柴黄益肾颗粒高、低剂量组则明显降低(P<0.05)。Western blotting检测结果显示，模型组α-SMA、FN、Col-Ⅰ等纤维化相关因子的表达水平明显高于对照组(P<0.05)；而与模型组比较，柴黄益肾颗粒低、高剂量组α-SMA、FN、Col-Ⅰ的表达水平则明显降低(P<0.05)。HE、Masson、免疫组化染色结果显示，与对照组比较，模型组肾脏结构损伤严重，胶原沉积明显增加，且Gsk3β、β-catenin蛋白表达水平明显升高(P<0.01)；与模型组比较，柴黄益肾颗粒低、高剂量组肾脏结构良好，肾脏损伤及纤维化程度均明显好转，Gsk3β、β-catenin蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。体外实验结果证实，与正常组比较，A33过表达可促进TCMK1细胞纤维化相关因子的上调，明显增加Wnt-β-catenin信号通路下游靶点Gsk3β和β-catenin mRNA的表达(P<0.05)，且A33过表达可逆转柴黄益肾颗粒含药血清下调的细胞纤维化改变(P<0.01)。结论　柴黄益肾颗粒可通过下调A33/Wnt/β-catenin信号通路明显改善UUO小鼠肾脏纤维化，且A33可能是肾纤维化的一个潜在治疗靶标。

关键词：柴黄益肾颗粒肾纤维化 Wnt/β-catenin信号通路

见血清化学成分、药理作用研究进展及其质量标志物的预测分析

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世界中医药 2024年第6期19卷 893-898,903页

作者：马艺宁梁盼杨露银蒲清荣董艳丽毛琳慎任维杨思进西南医科大学泸州646000 西南医科大学附属中医院泸州646000

见血清是兰科羊耳蒜植物,其药用历史悠久,具有清热解毒、凉血止血、消癥止痛之功效,用于吐血,咯血,肠风下血,血崩等病症。基于中药质量标志物(Q-marker)理论,从见血清的中药药性、传统功效、化学成分、现代药理作用等多个方面对见血清的... 详细信息

见血清是兰科羊耳蒜植物,其药用历史悠久,具有清热解毒、凉血止血、消癥止痛之功效,用于吐血,咯血,肠风下血,血崩等病症。基于中药质量标志物(Q-marker)理论,从见血清的中药药性、传统功效、化学成分、现代药理作用等多个方面对见血清的Q-marker进行预测。初步确定见血清的生物碱类、菲类、黄酮类可作为主要的Q-marker,为建立和完善见血清的质量控制及评价方法提供依据。

关键词：见血清研究现状化学成分药理作用质量标志物产地、药性传统功效