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钙离子对人牙囊细胞增殖、迁移和成骨分化的影响

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上海口腔医学 2019年第6期28卷 572-577页

作者：赵娴曾锦左东川徐洁余京泓徐晓梅西南医科大学附属口腔医院正畸科四川泸州646000 西南医科大学口颌面修复重建和再生实验室电生理学教育部重点实验室心血管医学研究所四川泸州646000

目的:探讨Ca2+对人牙囊细胞增殖、迁移及成骨分化能力的影响。方法:分离、培养人牙囊细胞(human dental follicle cells,hDFCs),免疫荧光染色检测hDFCs来源,茜素红S和油红O染色鉴定多向分化能力;设置不同Ca2+浓度,CCK8法检测1、3、5、7 ... 详细信息

目的:探讨Ca2+对人牙囊细胞增殖、迁移及成骨分化能力的影响。方法:分离、培养人牙囊细胞(human dental follicle cells,hDFCs),免疫荧光染色检测hDFCs来源,茜素红S和油红O染色鉴定多向分化能力;设置不同Ca2+浓度,CCK8法检测1、3、5、7 d时hDFCs的增殖能力;Transwell小室检测24 h时hDFCs的迁移能力;茜素红染色半定量分析法检测钙结节形成;反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测成骨分化相关基因RUNT相关转录因子2(runtrelated transcription factor 2,RUNX2)、骨钙素(osteocalcin,OCN)的表达。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析。结果:与对照组相比,3、5、7 d时,3、4、5 mmol/L Ca2+显著促进hDFCs增殖(P0.05)。茜素红染色结果表明,Ca2+浓度达4 mmol/L时,可显著促进矿化结节生成(P<0.01),矿化物生成与Ca2+呈浓度依赖性。RT-qPCR结果表明,Ca2+上调成骨分化相关基因RUNX2、OCN的表达(P<0.01)。结论:低浓度Ca2+有利于人牙囊细胞增殖与迁移,而高浓度Ca2+更有利于人牙囊细胞成骨分化。

关键词：人牙囊细胞钙离子迁移增殖成骨分化

补骨脂酚启动自噬减轻β-GP诱导的小鼠主动脉中膜钙化

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重庆医科大学学报 2023年第7期48卷 784-792页

作者：何虎强朱俊龙李勤罗泽恩代江红胥雄飞曾宏刘勇西南医科大学附属医院血管外科、西南医科大学心血管医学研究所、医学电生理学教育部重点实验室、四川心血管病防治协同创新中心泸州646000

目的:在选定的36种中药单体中筛选能够启动细胞自噬的药物;探究补骨脂酚对小鼠血管平滑肌细胞自噬的影响以及对血管平滑肌细胞钙化的影响。方法:从中草药中提取的黄酮类化合物以不同浓度处理人脑胶质瘤细胞(human glioma cells,U87)72 h... 详细信息

目的:在选定的36种中药单体中筛选能够启动细胞自噬的药物;探究补骨脂酚对小鼠血管平滑肌细胞自噬的影响以及对血管平滑肌细胞钙化的影响。方法:从中草药中提取的黄酮类化合物以不同浓度处理人脑胶质瘤细胞(human glioma cells,U87)72 h,用MTT法得到药物对U87细胞的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50)),并以小于IC_(50)浓度的条件下以不同浓度梯度处理U87细胞,观察U87细胞GFP-LC3微管相关蛋白1轻链3(Microtubule-associated protein light chain 3,LC3)的荧光信号和Western blot检测自噬指标LC3从而观察细胞自噬活动激活情况,以筛选出能够启动自噬的药物。后续选取补骨脂酚进行进一步实验,探究药物启动自噬后对血管平滑肌细胞钙化的影响。使用β-GP构建小鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)钙化模型,分为对照组(C-CTR组)和钙化组(C-CAL组),并通过Western blot检测Runx2、BMP2及LC3的表达。使用补骨脂酚干预后,分为对照组(C-CTR组)、钙化组(C-CAL组)、钙化+补骨脂酚组(C-CAL+Administration组)、对照+补骨脂酚组(C-CTR+Administration组)4组,分别用Western blot检测LC3、Runx2和BMP2,用茜素红染色观察细胞钙化结节的形成。在动物实验中使用高脂饮食同时在腹腔注射维生素D的方式构建小鼠主动脉钙化模型,使用腹腔注射补骨脂酚的方式对小鼠进行干预,分为对照组(CTR组)、钙化组(CAL组)、钙化+补骨脂酚组(CAL+Administration组)、对照+补骨脂酚组(CTR+Administration组)4组。通过冯库萨染色观察主动脉中膜钙沉积情况,使用HE染色法观察小鼠主动脉中膜的厚度。结果:观察LC3的荧光强度和Western blot提示:细辛脂素(Asarinim)、补骨脂甲素(Bavachin)、灯心草酚(Juncusol)、桑黄酮(Mullberrin)、地榆皂苷2(Ziyuglycoside 2)、补骨脂酚(Bakuchiol)、补骨乙素(Corylifolinin)、五味子甲素(Schisandrin A)、五味子乙素(Schisandrin B)可以显著增加自噬小体的表达(P血管平滑肌细胞中,BMP2、Runx2以及LC3的表达显著增加(P<0.05)。使用补骨脂酚干预后Western blot结果提示BMP2和Runx2表达降低(P<0.05),LC3-Ⅱ表达显增加(P<0.05)。茜素红结果显示钙结节沉积也显著降低(P<0.05)。动物实验中,补骨脂酚干预后HE结果显示中膜厚度较钙化组显著增厚,冯库萨染色结果提示补骨脂酚可以显著减轻钙沉积。结论:补骨脂酚可以激活VSMCs的自噬,并减缓小鼠主动脉钙化的进程。

关键词：补骨脂酚自噬血管平滑肌细胞动脉中膜钙化

4NQO诱导大鼠舌黏膜癌变过程中波形蛋白的表达研究

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重庆医学 2016年第16期45卷 2194-2197页

作者：邓婷婷谭红毛亮聂敏海西南医科大学口颌面修复重建和再生实验室/心血管医学研究所心肌电生理实验室四川泸州646000

目的研究舌黏膜癌变过程各阶段中波形蛋白的表达,探讨其在舌鳞状细胞癌(TSCC)发生、发展中的意义。方法采用4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)饮水法诱导大鼠TSCC的发生,收集发生过程中正常舌黏膜、上皮单纯增生、轻度上皮异常增生、中度上皮... 详细信息

目的研究舌黏膜癌变过程各阶段中波形蛋白的表达,探讨其在舌鳞状细胞癌(TSCC)发生、发展中的意义。方法采用4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)饮水法诱导大鼠TSCC的发生,收集发生过程中正常舌黏膜、上皮单纯增生、轻度上皮异常增生、中度上皮异常增生、重度上皮异常增生及TSCC组织标本共56例。采用免疫组织化学法检测波形蛋白的表达情况,并采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测各组织的波形蛋白mRNA表达量。结果免疫组织化学中,随着大鼠舌黏膜异常增生程度的增加,波形蛋白表达阳性率明显上升,各组间差异有统计学意义(χ2=10.685,P<0.05)。病变各组与正常舌黏膜组比较,mRNA表达差异均具有统计学意义(P<0.05);轻度、中重度上皮异常增生组、鳞癌组与上皮单纯增生组进行比较,鳞癌组差异有统计学意义(P<0.05)。上皮单纯增生、轻度、中重度上皮异常增生组、鳞癌组波形蛋白mRNA表达量分别是正常舌黏膜组的1.22、1.28、1.29、1.42倍。结论在4NQO诱导大鼠舌黏膜癌变过程中,波形蛋白随病变程度的增加表达增高,这与肿瘤的侵袭密切相关,有可能作为舌黏膜上皮癌变的预测指标。

关键词：波形蛋白 mRNA 舌鳞状细胞癌实时荧光定量PCR 4-硝基喹啉-1-氧化物

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纳米二氧化硅生物毒性的研究进展

医学研究生学报 2020年第2期33卷 220-224页

作者：刘亚琴(综述) 曹济民(审校) 西南医科大学心血管医学研究所泸州646000

纳米二氧化硅因为其独特的理化性质而被广泛应用于抗菌剂、分子探针、药物载体等多个领域中。由于纳米材料自身结构和功能的活跃性,其生物安全性近年来也成为毒理学研究的热点。文章综合国内外现有研究报道,从纳米二氧化硅在细胞水平和... 详细信息

纳米二氧化硅因为其独特的理化性质而被广泛应用于抗菌剂、分子探针、药物载体等多个领域中。由于纳米材料自身结构和功能的活跃性,其生物安全性近年来也成为毒理学研究的热点。文章综合国内外现有研究报道,从纳米二氧化硅在细胞水平和动物水平的毒性作用、影响毒性作用的因素和毒性作用机制进行综述,为纳米二氧化硅的研发、应用和生物安全性提供参考。

关键词：纳米二氧化硅毒性生物安全性

外泌体介导的靶向基因运送及在心血管疾病中的应用

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中国生物化学与分子生物学报 2016年第12期32卷 1286-1294页

作者：李雪党喜同曾晓荣西南医科大学心血管医学研究所医学电生理学教育部重点实验室四川省心血管疾病防治协同创新中心四川泸州646000

外泌体是体内几乎所有细胞分泌的具有双层脂质膜结构的纳米级小囊泡。外泌体大小均匀,平均直径为40-120 nm,存在于所有体液中。外泌体曾一度被认为是细胞成熟过程中清除废弃细胞器的‘垃圾袋’。但近年研究显示：外泌体含有丰富的来源... 详细信息

外泌体是体内几乎所有细胞分泌的具有双层脂质膜结构的纳米级小囊泡。外泌体大小均匀,平均直径为40-120 nm,存在于所有体液中。外泌体曾一度被认为是细胞成熟过程中清除废弃细胞器的‘垃圾袋’。但近年研究显示：外泌体含有丰富的来源于‘供体细胞’的信号分子,如蛋白质、DNA、mRNA、miRNA以及lncRNA等。当外泌体与‘受体细胞’融合时,这些信号分子便被运送到‘受体细胞’,从而实现细胞-细胞之间的通讯,影响‘受体细胞’的生理病理过程。虽然外泌体的研究目前主要集中在癌症等疾病的预防、诊断与治疗中,但是越来越多的研究显示,外泌体在心血管系统的生理及病理过程中同样发挥着重要作用。本文将对外泌体的起源、分离与纯化方法及外泌体介导的‘细胞-细胞’之间的通讯机制进行综述,并重点论述利用基因工程技术对外泌体进行靶向运输的方法及靶向外泌体运送在心血管疾病治疗中的应用。

关键词：外泌体 miRNA 靶向基因运送心血管疾病基因治疗

银杏内酯A对老年大鼠心肌细胞收缩功能的影响

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中国药理学通报 2018年第12期34卷 1674-1678页

作者：郝艳玲薛敏孙红曾晓荣徐州医科大学基础医学国家级实验教学示范中心机能实验分中心江苏徐州221004 徐州医科大学生理教研室江苏徐州221004 西南医科大学医学电生理学教育部重点实验室心血管医学研究所四川泸州646000

目的探讨银杏内酯A后处理对缺血/再灌注(ischemia/reperfusion, I/R)损伤的老年大鼠单个心肌细胞收缩功能的影响及其机制。方法将SD老年大鼠离体心脏用酶分离获得单个心肌细胞,并制备细胞水平I/R损伤模型,分别用0.1、1、10、30、100μmo... 详细信息

目的探讨银杏内酯A后处理对缺血/再灌注(ischemia/reperfusion, I/R)损伤的老年大鼠单个心肌细胞收缩功能的影响及其机制。方法将SD老年大鼠离体心脏用酶分离获得单个心肌细胞,并制备细胞水平I/R损伤模型,分别用0.1、1、10、30、100μmol·L^(-1)的银杏内酯A在模拟复灌注时进行后处理,并检测细胞存活率、单个心肌细胞收缩幅度、收缩时间(TTP)、舒张50%时间(R_(50))和舒张100%时间(R_(100));检测培养基中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)和超氧化物岐化酶(superoxide dismutase, SOD)的含量;测定细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达。在银杏内酯A最佳浓度组中加入PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002,检测细胞中p-Akt蛋白表达变化。结果银杏内酯A浓度在10、30μmol·L^(-1)时,增加心肌细胞存活率,明显增强心肌细胞的收缩幅度(P心肌细胞的收缩力,降低心肌I/R的损伤程度。

关键词：银杏内酯A 缺血/再灌注老年大鼠心肌细胞收缩功能 PI3K/Akt信号通路

橙皮苷对雌激素和孕激素诱导雌性大鼠乳腺增生的抑制作用

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中国临床药理学杂志 2024年第1期40卷 77-81页

作者：杨阳杨晓芬黄培森冷婕杨凡李永佳达州中医药职业学院针灸康复学院四川达州635000 达州市中心医院重症医学科四川达州635000 达州市中心医院中医科四川达州635000 四川文理学院发展规划处四川达州635000 西南医科大学附属中医医院乳腺甲状腺血管外科四川泸州646000 川北医学院附属医院妇科四川南充637000

目的研究橙皮苷(Hsp)对乳腺增生(MGH)大鼠的治疗作用,及可能的作用机制。方法将60只雌性大鼠随机分为空白组、模型组、对照组和低、中、高剂量实验组,每组10只。除空白组外,其余各组均肌内注射雌激素和孕激素诱导大鼠MGH模型。低、中、... 详细信息

目的研究橙皮苷(Hsp)对乳腺增生(MGH)大鼠的治疗作用,及可能的作用机制。方法将60只雌性大鼠随机分为空白组、模型组、对照组和低、中、高剂量实验组,每组10只。除空白组外,其余各组均肌内注射雌激素和孕激素诱导大鼠MGH模型。低、中、高剂量实验组分别灌胃给予25、50、100 mg·kg^(-1)的Hsp;对照组灌胃给予5 mg·kg^(-1)的他莫昔芬;空白组和模型组均灌胃给予等体积0.9%NaCl。6组大鼠每天给药1次,持续给药30 d。给药结束后,测量大鼠乳头高度和直径及子宫系数,用酶联免疫吸附试验法检测血清性激素含量,用试剂盒检测氧化应激指标的水平,用蛋白质印迹法检测相关蛋白的表达水平。结果中、高剂量实验组和对照组、模型组、空白组大鼠的乳头直径分别为(1.41±0.20)、(1.18±0.21)、(1.23±0.20)、(1.75±0.13)和(1.02±0.06)mm,乳头高度分别为(1.62±0.24)、(1.41±0.19)、(1.47±0.16)、(1.87±0.32)和(1.23±0.14)mm,子宫系数分别为(0.55±0.08)、(0.37±0.05)、(0.41±0.04)、(0.72±0.11)和(0.34±0.03)mg·g^(-1),雌激素受体α(ERα)相对表达水平分别为0.54±0.05、0.13±0.02、0.13±0.03、0.89±0.08和0.10±0.02,孕酮受体(PR)相对表达水平分别为0.43±0.03、0.08±0.01、0.87±0.07、0.20±0.04和0.14±0.03,磷酸化细胞外调节激酶1/2(ERK1/2)/ERK1/2分别为0.50±0.03、0.06±0.02、0.83±0.05、0.09±0.04和0.04±0.01。中、高剂量实验组和对照组的上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论Hsp可减少大鼠乳头直径、高度及子宫系数,调节性激素水平,抗氧化应激,抑制ERα、PR和p-ERK1/2蛋白表达。

关键词：橙皮苷雌激素乳腺增生超氧化物歧化酶细胞外调节激酶1/2

中文版自我管理和过渡期准备问卷在青少年癫痫患者中的信度、效度检验

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现代临床护理 2024年第3期23卷 59-65页

作者：夏庆尹华英李双子王婷徐驰黄雪雪熊娅曾巧红重庆医科大学附属儿童医院国家儿童健康与疾病临床医学研究中心儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室神经科重庆400014 重庆医科大学附属儿童医院国家儿童健康与疾病临床医学研究中心儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室儿童保健科重庆400014 江西省儿童医院神经内科江西南昌330000 重庆大学附属三峡医院江南分院儿童神经心血管病区重庆404000 贵阳市第二人民医院儿科贵州贵阳550000

目的检验中文版自我管理和过渡期准备问卷[self-management and transition to adulthood with Rx=treatment(STARx)questionnaire]在青少年癫痫患者中的信度和效度。方法采用便利抽样法,选取436名确诊癫痫的青少年患者为研究对象,样本1... 详细信息

目的检验中文版自我管理和过渡期准备问卷[self-management and transition to adulthood with Rx=treatment(STARx)questionnaire]在青少年癫痫患者中的信度和效度。方法采用便利抽样法,选取436名确诊癫痫的青少年患者为研究对象,样本1共250例,采用条目水平的内容效度指数(item-level content validity index,I-CVI)和问卷水平的内容效度指数(scale-level content validity index,S-CVI)评价问卷的内容效度,采用探索性因子分析对量表结构进行探索,采用Cronbachα系数评价量表的内部一致性信度。样本2186例,采用验证性因子分析验证量表的结构效度,采用Cronbachα系数、Spearman-Brown系数和重测信度系数评价量表的信度。结果中文版STARx的总条目内容效度指数为0.981,条目水平的内容效度指数为0.833~1.000;问卷探索性因子分析,特征值>1的公因子有4个,累积方差贡献率为70.309%,且各条目在其公因子上的负荷值为0.636~0.831,较原问卷6个维度减少了2个维度;验证性因子分析显示,卡方比自由度(chi-square/degree of freedom,χ^(2)/df)为2.53(<3),近似误差均方根为0.091(<0.1),数据与模型的拟合度良好;问卷总的Cronbachα系数为0.917,折半信度为0.730,重测信度为0.940。结论STARx在青少年癫痫患者的检验中显示信度、效度良好,可作为评价癫痫青少年至成人过渡期准备水平的有效工具。

关键词：青少年癫痫过渡期准备自我管理和过渡期准备问卷信度效度

激活TGR5通过抑制CaN/NAFT3减轻ET-1诱导的心肌细胞肥大

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第三军医大学学报 2019年第10期41卷 939-946页

作者：陈德秀李家富冯健西南医科大学附属医院心血管内科医学电生理学教育部重点实验室四川泸州646000

目的观察G蛋白偶联胆汁酸受体1(G protein-coupled bile acid receptor 1,TGR5)受体激活后对内皮素-1(endothelin-1,ET-1)诱导心肌细胞肥大的作用及其机制的探讨。方法原代培养乳鼠心肌细胞,分为空白对照组和ET-1组,ET-1组的浓度分别为1... 详细信息

目的观察G蛋白偶联胆汁酸受体1(G protein-coupled bile acid receptor 1,TGR5)受体激活后对内皮素-1(endothelin-1,ET-1)诱导心肌细胞肥大的作用及其机制的探讨。方法原代培养乳鼠心肌细胞,分为空白对照组和ET-1组,ET-1组的浓度分别为10^(-6)、10^(-7)、10^(-8) mmol/L,分别培养12、24、36、48 h,分别检测各组心肌细胞表面积和总蛋白浓度,建立心肌肥大细胞模型。将心肌细胞分为对照组、ET-1组、ET-1+INT-777(TGR5受体激动剂)组、ET-1+INT-777+TGR5 siRNA(干扰TGR5表达)组、ET-1+INT-777+TGR5 siRNA-NC(空病毒)组。采用图像分析系统测定心肌细胞表面积,BCA法测定细胞总蛋白量,RT-PCR检测TGR5、钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)的mRNA,Western blot方法检测心房尿钠因子(atrial natriuretic factor,ANF)、β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)、TGR5、CaN、活化T细胞核因子3(activated T cell nuclear factor 3,NFAT3)的蛋白表达变化。结果 48 h内,ET-1诱导心肌细胞肥大在10^(-8) mmol/L～10^(-6) mmol/L浓度范围内成明显浓度依赖性和时间依赖性(P心肌细胞表面积为(3 624.7±71.60)um^2,总蛋白量(51.810±1.47)μg,显著高于对照组表面积(1 560.8±3 188.94)um^2和总蛋白(37.827±0.47)μg(P心肌细胞表面积、总蛋白、ANF及β-MHC表达增加(P心肌细胞表面积(4 167.59±271.11)um^2、总蛋白(57.765±0.553)μg、ANF/GAPDH(0.587±0.012)、β-MHC/GAPDH(0.422±0.016)、CaN/GAPDH(0.529±0.006)及NFAT3/Histone3(0.811±0.014)相比,给予TGR5受体激动剂组心肌细胞表面积(2 421.69±123.61)um^2、总蛋白(42.714±0.542)μg、ANF/GAPDH(0.229±0.011)、β-MHC/GAPDH(0.230±0.018)、CaN/GAPDH(0.247±0.008)及NFAT3/Histone3(0.407±0.008)的表达表达增加受到抑制(P心肌细胞肥大,其机制可能部分与抑制CaN/NFAT3信号通路有关。

关键词： G蛋白偶联胆汁酸受体1 内皮素-1 心肌细胞肥大钙调神经磷酸酶活化T细胞核因子3