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施马伦贝格病毒实时荧光RT-RAA快检方法的建立

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畜牧兽医学报 2024年

作者：陈嘉仪黄晓琪王炜杰莫竣喻王苏艳丹珍翁姆陈劲松张瑞周泷李彦敏张志东西南民族大学畜牧兽医学院

旨在建立一种快速检测施马伦贝格病毒(SBV)的方法。本研究对于SBV S基因，设计特异性引物和探针，通过优化反应条件，建立SBV反转录重组酶介导核酸恒温扩增(RT-RAA)检测方法。结果显示，该方法在38℃条件下，8 min内即可特异性检出SBV... 详细信息

旨在建立一种快速检测施马伦贝格病毒(SBV)的方法。本研究对于SBV S基因，设计特异性引物和探针，通过优化反应条件，建立SBV反转录重组酶介导核酸恒温扩增(RT-RAA)检测方法。结果显示，该方法在38℃条件下，8 min内即可特异性检出SBV，与口蹄疫病毒(FMDV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、非洲马瘟病毒(AHSV)、塞内卡谷病毒(SVV)、水疱性口炎病毒(VSV)无交叉反应，其敏感性为 103拷贝/反应，且批内和批间重复性变异系数均小于5%。对模拟阳性和阴性绵羊样品的检出率为100%，与SBV 的RT-qPCR检测结果一致。本研究成功建立了一种快速、敏感、特异的SBV实时荧光RT-RAA方法，为SBV防控提供新技术手段。

关键词：施马伦贝格病毒重组酶介导核酸恒温扩增方法快速检测

猫泛白细胞减少症病毒A91S变异株对猫的致病性及基因组特征研究

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畜牧兽医学报 2024年第6期55卷 2560-2568页

作者：周宁汤承许佳岳华陈曦西南民族大学畜牧兽医学院成都610041

猫泛白细胞减少症病毒(feline panleukopenia virus, FPV)是一种对猫危害严重的病原。近年来,一种VP2 91位氨基酸残基由A突变为S的FPV变异株(FPV A91S变异株)已经在国内广泛流行,但目前还未见该变异株对猫致病性的报道,本试验旨在探究FP... 详细信息

猫泛白细胞减少症病毒(feline panleukopenia virus, FPV)是一种对猫危害严重的病原。近年来,一种VP2 91位氨基酸残基由A突变为S的FPV变异株(FPV A91S变异株)已经在国内广泛流行,但目前还未见该变异株对猫致病性的报道,本试验旨在探究FPV A91S变异株对猫的感染特性及其分子特征。利用F81细胞分离FPV A91S变异株,并研究其血凝特性、对猫的致病性及其基因组特征。成功分离到一株FPV A91S变异株,纯化后病毒滴度为10~(4.6 )TCID_(50)·mL^(-1);该毒株能在pH 6.0~6.5、4和37℃条件下有效凝集猪红细胞;分离株经口服成功感染幼猫,引起呕吐、腹泻、白细胞急剧降低、眼睑脓性分泌物等症状,并在5 d内导致猫死亡;大体和组织病理变化发现严重的肠道和肺出血。获得该毒株近乎全长的基因组序列,其VP2蛋白的关键位点氨基酸符合典型FPV特征。除了VP2 A91S的突变外,其NS1蛋白也有3个独特的氨基酸突变(D23N、I443V和H596Q),这些特征导致FPV A91S毒株在进化树中单独聚为一支,具有独特的遗传进化趋势。本研究首次探究了FPV A91S变异株的血凝性和对猫的致病性,为进一步了解FPV的生物学特性和遗传变异提供参考。

关键词：猫泛白细胞减少症病毒 FPV VP2 A91 S变异体血凝性致病性遗传进化

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山羊Aichivirus C的分离鉴定及演化分析

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畜牧兽医学报 2024年第8期55卷 3612-3622页

作者：程玉婷阿比克哈莫杨晨张丁中任云鑫岳华汤承西南民族大学畜牧兽医学院成都610041

C型爱知病毒(Aichivirus C)是新近证实的致山羊腹泻病毒,本研究旨在分离山羊Aichivirus C并分析其基因组特征。在四川某暴发腹泻的山羊场采集腹泻粪便9份,1只病死羔羊的组织样本13份,进行常见的腹泻病原检测。采用Vero细胞系对山羊Aichi... 详细信息

C型爱知病毒(Aichivirus C)是新近证实的致山羊腹泻病毒,本研究旨在分离山羊Aichivirus C并分析其基因组特征。在四川某暴发腹泻的山羊场采集腹泻粪便9份,1只病死羔羊的组织样本13份,进行常见的腹泻病原检测。采用Vero细胞系对山羊Aichivirus C阳性样本进行病毒分离,以PCR、间接免疫荧光试验和电镜技术对分离毒株进行鉴定,并扩增获得其基因组序列。结果显示:通过RT-PCR方法从9份山羊腹泻粪便样本中检出Aichivirus C阳性8份,羔羊的组织样本中检出Aichivirus C阳性8份,其它常见的致山羊腹泻病原在上述粪便和组织样本中均未检出。使用Vero细胞系成功从阳性样品中分离到2株山羊Aichivirus C,其病毒滴度分别为10^(6.5)TCID_(50)·mL^(-1)和10^(5.9)TCID 50·mL^(-1)。获得两条近乎全长基因组序列,与GenBank中山羊源Aichivirus C毒株的核苷酸相似性为78.8%~97.4%,与国内SWUN/F11/2019毒株的核苷酸相似性为97.0%~97.4%。此外,本研究还从5份临床阳性样本中扩增出VP0、VP 3和VP 1基因完整序列。基于基因组的演化分析显示:获得的两个病毒株与SWUN/F11/2019毒株在系统发育树上聚为一支。并且,这些毒株的VP 0和VP 1基因编码蛋白也有独特的氨基酸突变。综上所述,本研究分离得到2株山羊Aichivirus C,获得了其近乎全长基因组序列,与国内SWUN/F11/2019毒株亲缘关系最近,其VP 0和VP 1基因具有独特的分子特征。本结果丰富了国内山羊源Aichivirus C的分子遗传信息,为进一步研究山羊Aichivirus C的致病性和分子生物学特征提供了参考。

关键词：山羊腹泻 C型爱知病毒分离鉴定分子特征

20~35kg川中黑山羊公羊能量需要量研究

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动物营养学报 2024年第1期36卷 428-437页

作者：吴璇杨尚霖罗巧慧黄太华张正帆史海涛郭春华西南民族大学畜牧兽医学院成都610041 阿坝职业学院阿坝623200

本试验旨在研究20~35 kg川中黑山羊公羊的能量需要量,为川中黑山羊的科学饲养提供营养需要参数。采用比较屠宰试验法,选择2.5月龄、体重(19.97±5.47)kg的健康断奶川中黑山羊去势公羔22只,试验开始时屠宰4只,其余18只羔羊分为3个饲喂水... 详细信息

本试验旨在研究20~35 kg川中黑山羊公羊的能量需要量,为川中黑山羊的科学饲养提供营养需要参数。采用比较屠宰试验法,选择2.5月龄、体重(19.97±5.47)kg的健康断奶川中黑山羊去势公羔22只,试验开始时屠宰4只,其余18只羔羊分为3个饲喂水平组(每组6只羊):自由采食组(AL组)、75%自由采食组(AL75组)、60%自由采食组(AL60组)。试验羊单笼单饲,试验期96 d。在饲养试验结束前4 d开展消化代谢试验,收集全粪全尿。当AL组试验羊平均体重达到35 kg时结束饲养试验,每组选取接近该组平均体重的4只羊(共12只)进行屠宰,屠体冷冻保存待测。结果表明:1)20~35 kg生长川中黑山羊维持净能需要量(NE m)为178.24 kJ/(kg BW 0.75·d),维持代谢能需要量(ME m)为263.74 kJ/(kg BW 0.75·d),代谢能维持利用效率(k m)为0.68。2)日增重100~300 g/d的川中黑山羊的生长净能需要量(NE g)为0.99~3.71 MJ/d,生长代谢能需要量(ME g)为3.15~11.78 MJ/d,代谢能生长利用效率(kg)为0.31。本研究可为我国地方品种肉羊饲养标准的健全提供数据参考。

关键词：川中黑山羊代谢能净能能量需要量

施马伦贝格病毒实时荧光RT-RAA快检方法的建立

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畜牧兽医学报 2024年第8期55卷 3740-3744页

作者：陈嘉仪黄晓琪王炜杰莫竣喻王苏艳丹珍翁姆陈劲松张瑞周泷李彦敏张志东西南民族大学畜牧兽医学院成都610041

旨在建立一种快速检测施马伦贝格病毒(SBV)的方法。本研究对于SBV S基因,设计特异性引物和探针,通过优化反应条件,建立SBV反转录重组酶介导核酸恒温扩增(RT-RAA)检测方法。结果显示,该方法在38℃条件下,8 min内即可特异性检出SBV,与口... 详细信息

旨在建立一种快速检测施马伦贝格病毒(SBV)的方法。本研究对于SBV S基因,设计特异性引物和探针,通过优化反应条件,建立SBV反转录重组酶介导核酸恒温扩增(RT-RAA)检测方法。结果显示,该方法在38℃条件下,8 min内即可特异性检出SBV,与口蹄疫病毒(FMDV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、非洲马瘟病毒(AHSV)、塞内卡谷病毒(SVV)、水疱性口炎病毒(VSV)无交叉反应,其敏感性为103拷贝/反应,且批内和批间重复性变异系数均小于5%。对模拟阳性和阴性绵羊样品的检出率为100%,与SBV的RT-qPCR检测结果一致。本研究成功建立了一种快速、敏感、特异的SBV实时荧光RT-RAA方法,为SBV防控提供新技术手段。

关键词：施马伦贝格病毒重组酶介导核酸恒温扩增方法快速检测

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牦牛胃溶菌酶抗小鼠腹泻的研究

动物营养学报 2024年第3期36卷 1952-1963页

作者：杨杜基袁小迪李飙张雨寒孙鸿炜刘益丽袁国荣江明锋西南民族大学畜牧兽医学院成都610041 茂县科学技术和农业畜牧局茂县623200

本研究采用PichiaPink^(TM)毕赤酵母表达系统对牦牛胃溶菌酶进行异源表达,以探索提高重组牦牛胃溶菌酶表达量的方法以及重组牦牛胃溶菌酶对大肠杆菌O111所致小鼠腹泻的治疗作用。试验选取10只体重相近的无特定病原体昆明小鼠,用大肠杆菌... 详细信息

本研究采用PichiaPink^(TM)毕赤酵母表达系统对牦牛胃溶菌酶进行异源表达,以探索提高重组牦牛胃溶菌酶表达量的方法以及重组牦牛胃溶菌酶对大肠杆菌O111所致小鼠腹泻的治疗作用。试验选取10只体重相近的无特定病原体昆明小鼠,用大肠杆菌O111建立小鼠腹泻模型;建模成功后取30只小鼠随机分为6组,每组5只,设对照组、腹泻模型组、牦牛胃溶菌酶组、重组牦牛胃溶菌酶组、抗生素治疗组、溶菌酶产品治疗组,除对照组和腹泻模型组外其余各组灌胃给药,记录小鼠采食量及体重;第4天采血后全部扑杀,取小鼠十二指肠组织制切片做形态学观察;取肠道内容物进行肠道菌群Alpha和Beta多样性分析。结果表明:重组牦牛胃溶菌酶在诱导96 h时表达量最高,分子质量约为15.6 ku,比活性为1428.58 U/mg。攻毒后腹泻模型组、溶菌酶产品治疗组与对照组相比采食量显著降低(P<0.05);腹泻模型组与对照组相比,白细胞数、淋巴细胞数和中性粒细胞数均有极显著升高(P<0.01);十二指肠病理解剖观察发现,牦牛胃溶菌酶组肠道绒毛有所增长且厚度增加;重组牦牛胃溶菌酶组肠绒毛有所恢复。Alpha多样性分析发现,牦牛胃溶菌酶组的Simpson指数与对照组相比显著增加(P<0.05);腹泻模型组的变形菌门和弯曲杆菌门相对丰度显著增加(P<0.05);重组牦牛胃溶菌酶组和牦牛胃溶菌酶组的厚壁菌门和拟杆菌门相对丰度有所增加。本研究表明,牦牛胃溶菌酶对大肠杆菌引起的腹泻有较好的治疗效果。由于牦牛胃溶菌酶具备较强抗胃蛋白酶能力,其原酶及重组酶在饲料添加剂以及在食品加工和医疗卫生等领域具有一定的应用潜力。

关键词：牦牛胃溶菌酶 PichiaPinkTM毕赤酵母表达系统重组牦牛溶菌酶肠道菌群小鼠腹泻

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甘露糖化碳纳米管包裹蕨麻多糖作为REV核酸疫苗免疫佐剂的研究

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黑龙江畜牧兽医 2024年第16期 89-96页

作者：肖乃依李杭雨刘鸿瑞金圣涵房笑淞赵永新封海波西南民族大学畜牧兽医学院成都610041

为了研究甘露糖化碳纳米管包裹蕨麻多糖作为禽网状内皮组织增生症病毒(REV)核酸疫苗免疫佐剂对雏鸡免疫功能的影响,试验利用REV特异性抗原基因gp90与真核表达载体pTT5构建重组质粒pTT5-gp90,提取蕨麻多糖并测定其多糖含量,利用傅里叶红... 详细信息

为了研究甘露糖化碳纳米管包裹蕨麻多糖作为禽网状内皮组织增生症病毒(REV)核酸疫苗免疫佐剂对雏鸡免疫功能的影响,试验利用REV特异性抗原基因gp90与真核表达载体pTT5构建重组质粒pTT5-gp90,提取蕨麻多糖并测定其多糖含量,利用傅里叶红外光谱对甘露糖化碳纳米管进行检测,然后采用CCK-8法测定鸡巨噬细胞(HD11)活性,确定重组质粒pTT5-gp90、蕨麻多糖及甘露糖化碳纳米管使用的质量浓度;将80只未感染REV的1日龄雌性三黄鸡分为对照组、重组质粒pTT5-gp90组、质粒与多糖PAP-gp90组、混合物PAP-gp90@M-M组,分别进行免疫接种、攻毒,免疫后第0,7,14,21天采集血液,检测白细胞介素-4(IL-4)与γ干扰素(IFN-γ)质量浓度、REV抗体效价;攻毒后第7,14,21天饲喂前称量体重并统计累计死亡率,解剖后取脾脏和肝脏,计算脏器指数。结果表明:重组质粒pTT5-gp90、蕨麻多糖、甘露糖化碳纳米管质量浓度分别为100,500,30μg/mL时,HD11细胞活性较高;免疫后第7,14,21,28天,与对照组比较,混合物PAP-gp90@M-M组血清IL-4与IFN-γ质量浓度及REV抗体效价明显上调;攻毒后第3,10天雏鸡体重升高,累计死亡率降低;肝脏指数低于重组质粒pTT5-gp90组,高于对照组,但均差异不显著(P>0.05);脾脏指数显著低于重组质粒pTT5-gp90组(P0.05)。说明甘露糖化碳纳米管包裹蕨麻多糖可作为REV核酸疫苗的免疫佐剂,该佐剂可通过增强雏鸡免疫力、诱导免疫应答、降低死亡率来提高REV核酸疫苗的免疫效果。

关键词：甘露糖化碳纳米管蕨麻多糖禽网状内皮组织增生症病毒核酸疫苗免疫佐剂

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铸牢中华民族共同体意识的社区实践研究——基于广州市J社区的调查

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广西民族研究 2024年第2期 86-93页

作者：马冬梅孟小鸽广东技术师范大学民族学院广东广州510665

随着城市化进程的不断推进和社会开放程度的日渐提高,我国人口大流动、大融居及各民族全方位互嵌态势日益凸显。社区已然成为各民族交往交流交融的重要场所和铸牢中华民族共同体意识的实践场域。这就需要从政治基础、社会基础、服务基... 详细信息

随着城市化进程的不断推进和社会开放程度的日渐提高,我国人口大流动、大融居及各民族全方位互嵌态势日益凸显。社区已然成为各民族交往交流交融的重要场所和铸牢中华民族共同体意识的实践场域。这就需要从政治基础、社会基础、服务基础及情感基础等方面入手,促进各族流动人口在空间、经济、文化、社会、心理等的全方位互嵌,推动社区铸牢中华民族共同体意识工作真正落到实处。

关键词：铸牢中华民族共同体意识社区实践

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试论崇祯后期的“用海御虏”

中国边疆史地研究 2024年第1期34卷 175-186,F0003页

作者：高志超广东技术师范大学民族学院广州市530630

崇祯后期“用海御虏”是明朝海疆治理的重要组成部分。其中“岛帅”的弃与置,登、辽、关、津四镇水师统军权从分散到划一,王武纬、范志完、宋献等人先后筹划以海岛屯驻为基础的“海上阵线”,为该时期“用海”的主要内容。尽管无法挽救... 详细信息

崇祯后期“用海御虏”是明朝海疆治理的重要组成部分。其中“岛帅”的弃与置,登、辽、关、津四镇水师统军权从分散到划一,王武纬、范志完、宋献等人先后筹划以海岛屯驻为基础的“海上阵线”,为该时期“用海”的主要内容。尽管无法挽救明朝的灭亡,但相较天启年间之“用海”,上述措施呈现新的特点,并对清初黄、渤海海防建设带来巨大影响。

关键词： “用海御虏” 岛帅四镇水师海上阵线