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雷公藤鲨烯环氧酶基因克隆与表达分析

西北植物学报 2018年第5期38卷 785-791页

作者：祝传书刘艳陈蒙蒙蒲时冯俊涛张兴西北农林科技大学无公害农药研究服务中心陕西杨陵712100 陕西省生物农药工程技术研究中心陕西杨陵712100

以雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)发状根为试验材料,采用RT-PCR方法,克隆得到2个雷公藤鲨烯环氧酶编码基因,命名为TwSE1(GenBank登录号MG717395)和TwSE2(GenBank登录号MG717396)。序列分析表明,TwSE1和TwSE2的开放阅读框分别为1 578和1 584bp,分别编码525和527个氨基酸,2条序列相似性为76.18%,但N端序列不保守。实时荧光定量PCR检测雷公藤鲨烯环氧酶在不同组织部位的表达模式,以及雷公藤发状根受茉莉酸甲酯(MeJA)诱导后基因表达的结果表明,TwSE1、TwSE2基因在雷公藤根、茎、嫩叶、老叶、花中均有表达,TwSE1在花中表达丰度最高,在根中表达丰度最低;但TwSE2在花和嫩叶中表达量最高,在老叶中表达量最低,且TwSE2在各组织部位的表达量都低于TwSE1。雷公藤发状根经MeJA诱导后,TwSE1、TwSE2基因表达量均上升,都表现为表达量先上升后下降再上升的趋势,并于诱导后3h达到一个高水平表达,之后下降,在诱导12h后表达量又迅速上升;在相同诱导条件下,TwSE2基因表达水平的提高小于TwSE1基因。

关键词：雷公藤鲨烯环氧酶克隆表达

诱导子对雷公藤不定根生长和次生代谢产物含量的影响

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生物工程学报 2015年第5期31卷 734-743页

作者：李琰赵磊崔蕾雷嘉敏张兴西北农林科技大学生命科学学院陕西杨凌712100 西北农林科技大学无公害农药研究服务中心陕西省生物农药工程技术研究中心陕西杨凌712100

为探讨真菌诱导子以及硝酸银等非生物诱导子对雷公藤不定根生长及次生代谢产物含量的影响。以雷公藤不定根为材料,通过向培养基中添加不同种类的真菌诱导子以及硝酸银等非生物诱导子,采用高效液相色谱检测不定根中雷公藤甲素和生物碱含... 详细信息

为探讨真菌诱导子以及硝酸银等非生物诱导子对雷公藤不定根生长及次生代谢产物含量的影响。以雷公藤不定根为材料,通过向培养基中添加不同种类的真菌诱导子以及硝酸银等非生物诱导子,采用高效液相色谱检测不定根中雷公藤甲素和生物碱含量。结果表明:各种真菌诱导子不影响不定根的生长,但对次生代谢产物含量有显著影响,其中,苹果炭疽和柿子炭疽诱导子的加入不仅使不定根中雷公藤甲素的含量分别提高了2.24和1.93倍,生物碱的含量也各提高了2.02和2.07倍。苹果炭疽诱导子浓度为50μg/m L时比较适合雷公藤不定根生长及雷公藤甲素和生物碱的积累。硝酸银抑制不定根的生长和生物碱的积累,但促进雷公藤甲素的积累。硝酸银浓度为25μmol/L时雷公藤甲素含量为对照的1.71倍。茉莉酸甲酯浓度为50μmol/L时,不定根增长量为对照的1.04倍,雷公藤甲素和生物碱含量分别为对照的1.64倍和2.12倍。酵母提取物浓度为2 g/L时,雷公藤甲素含量为对照的1.48倍。表明培养基中添加硝酸银和酵母提取物对不定根中雷公藤甲素的合成具有明显的促进作用,苹果炭疽和茉莉酸甲酯的协同作用既能促进雷公藤甲素的合成又能促进雷公藤生物碱的合成。

关键词：雷公藤不定根诱导子次生代谢产物

两种农药树干注射对垂柳叶内PPO和POD活性及同工酶谱的影响

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2007年第4期35卷 145-149页

作者：唐光辉田鹏鹏陈安良冯俊涛张兴西北农林科技大学西北农林科技大学无公害农药研究服务中心陕西省生物农药工程技术研究中心陕西杨凌712100

研究了吡虫啉和啶虫脒树干注射对垂柳叶内多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)活性及其同工酶谱变化的影响。结果表明,两种杀虫剂树干注射均可引起垂柳叶片PPO活性上升,POD活性下降。吡虫啉处理对PPO和POD活性的影响均大于啶虫脒,两种药... 详细信息

研究了吡虫啉和啶虫脒树干注射对垂柳叶内多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)活性及其同工酶谱变化的影响。结果表明,两种杀虫剂树干注射均可引起垂柳叶片PPO活性上升,POD活性下降。吡虫啉处理对PPO和POD活性的影响均大于啶虫脒,两种药剂处理后15 d PPO活性均达到最大值,10 d POD活性均最低,药后30 d PPO和POD活性逐渐恢复到对照水平。吡虫啉处理使PPO同工酶酶带E1(Rf=0．71)消失,E2(Rf=0．77)活性升高;啶虫脒处理使PPO同工酶酶带E1活性升高,E2消失;药后10,45 d各处理酶带带型基本稳定。吡虫啉处理使POD同工酶药后10 d酶带P1(Rf=0．51)、P4(Rf=0．67)消失,45 d P1消失而P4又出现;啶虫脒处理使POD同工酶酶带P1活性升高,P2(Rf=0．56)消失,药后10,45 d酶带带型相同。说明PPO和POD活性变化及其同工酶谱变化与注药种类有密切关系,可作为研究树干注药对树体生理影响的指标。

关键词：树干注药吡虫啉啶虫脒垂柳多酚氧化酶过氧化物酶同工酶

不同氨基酸对雷公藤不定根生长及次生代谢产物含量的影响

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中国中药杂志 2014年第12期39卷 2267-2274页

作者：温鹏飞雷嘉敏李群崔蕾李琰张兴西北农林科技大学生命科学学院陕西杨凌712100 西北农林科技大学无公害农药研究服务中心/陕西省生物农药工程技术研究中心陕西杨凌712100

以雷公藤不定根为材料,通过在MS培养基中添加不同浓度的天冬氨酸,异亮氨酸,半胱氨酸和精氨酸,研究其对雷公藤不定根生长和次生代谢产物含量的影响。结果表明:第3周添加0.25 mmol·L-1天冬氨酸时,虽然不定根增长量为对照的80%,但不定根... 详细信息

以雷公藤不定根为材料,通过在MS培养基中添加不同浓度的天冬氨酸,异亮氨酸,半胱氨酸和精氨酸,研究其对雷公藤不定根生长和次生代谢产物含量的影响。结果表明:第3周添加0.25 mmol·L-1天冬氨酸时,虽然不定根增长量为对照的80%,但不定根及培养液中雷公藤内酯醇含量分别为对照的1.36,1.3倍,雷公藤吉碱含量分别为对照的1.16,1.37倍,雷公藤次碱的含量分别为对照的1.22,1.63倍。第3周添加0.05 mmol·L-1的异亮氨酸时不定根增长量为对照的97.3%,不定根及培养液中雷公藤吉碱分别为对照的1.02,1.27倍,雷公藤次碱的含量分别为对照的1.36,1.15倍。第1周添加0.25 mmol·L-1半胱氨酸时,不定根增长量仅为对照的77.5%,但不定根中雷公藤内酯醇含量为对照的1.87倍。第2周添加1.00 mmol·L-1半胱氨酸时,培养液中雷公藤次碱含量为对照的2.97倍。在第3周精氨酸浓度为0.5 mmol·L-1时,不定根增长量为对照124.2%,雷公藤吉碱和次碱的含量分别为对照的1.3,1.4倍。

关键词：雷公藤不定根组织培养氨基酸次生代谢产物

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雷公藤不定根培养体系的建立及中试放大研究

中国中药杂志 2015年第1期40卷 53-58页

作者：李琰崔蕾杨钰琪赵磊雷嘉敏张兴西北农林科技大学生命科学学院陕西杨凌712100 西北农林科技大学无公害农药研究服务中心陕西省生物农药工程技术研究中心陕西杨凌712100

以MS为基本培养基,进行雷公藤不定根的诱导研究时发现,不论是以雷公藤幼叶还是以幼叶诱导的愈伤组织为外植体,在添加1.0 mg·L-1IBA的培养基上均可以诱导出不定根并建立良好的不定根培养体系;以雷公藤愈伤组织建立的悬浮细胞在添加2.0~4... 详细信息

以MS为基本培养基,进行雷公藤不定根的诱导研究时发现,不论是以雷公藤幼叶还是以幼叶诱导的愈伤组织为外植体,在添加1.0 mg·L-1IBA的培养基上均可以诱导出不定根并建立良好的不定根培养体系;以雷公藤愈伤组织建立的悬浮细胞在添加2.0~4.0 mg·L-1NAA时,也可以形成不定根并建立稳定的不定根培养体系,雷公藤不定根的3个培养体系中雷公藤甲素含量均超过自然生长的根皮中的含量,其中AR3不定根中雷公藤甲素含量最高,为根皮的5.3倍。在使用5 L发酵罐进行中试放大培养时,与250 m L摇瓶培养相比,每升培养基不定根增长量、次生代谢产物含量差异不大,这为通过组织培养生产雷公藤次生代谢产物奠定了基础。

关键词：雷公藤不定根诱导中试放大次生代谢产物

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4种戊烷脒同系物对灰霉病的防治效果

植物保护学报 2006年第1期33卷 68-72页

作者：陈安良何军廉应江冯俊涛张兴西北农林科技大学无公害农药研究服务中心杨凌712100 陕西省生物农药工程技术研究中心杨凌712100

采用载玻片萌发法、抑制菌丝生长速率法、组织测定法,结合田间小区试验,系统研究了戊烷脒及其同系物乙烷脒、丙烷脒、丁烷脒对番茄灰霉病菌的抑制活性和田间防治效果。结果表明,各化合物对灰霉病均有一定的抑制活性,其中丙烷脒和丁烷脒... 详细信息

采用载玻片萌发法、抑制菌丝生长速率法、组织测定法,结合田间小区试验,系统研究了戊烷脒及其同系物乙烷脒、丙烷脒、丁烷脒对番茄灰霉病菌的抑制活性和田间防治效果。结果表明,各化合物对灰霉病均有一定的抑制活性,其中丙烷脒和丁烷脒对灰霉病的抑制活性较高,二者抑制菌丝生长的EC50分别为0.6821mg/L和2.1599mg/L,抑制孢子萌发的EC50分别为2.7510mg/L和5.7362mg/L;丙烷脒和丁烷脒对番茄灰霉病有较高的保护和治疗作用;在田间试验条件下,连续2次施药后,以120gai/hm2施用剂量防治豇豆灰霉病,丙烷脒和丁烷脒的防治效果分别为78.03%和54.52%,以100gai/hm2施用剂量防治草莓灰霉病,防治效果分别为71.97%和68.96%,均优于对照药剂施佳乐(450gai/hm2)和速克灵(468.8gai/hm2)。丙烷脒和丁烷脒具有开发成为农用杀菌剂的潜力。

关键词：戊烷脒丁烷脒丙烷脒灰霉病抑菌效果

小白菜中残留虫酰肼的超临界流体萃取条件的研究

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色谱 2004年第3期22卷 263-266页

作者：杨立荣张兴陈安良李广泽西北农林科技大学无公害农药研究服务中心

将超临界流体萃取(supercriticalfluidextraction,SFE)技术与高效液相色谱分析相结合,建立了特异性杀虫剂虫酰肼的萃取分离方法。SFE对虫酰肼的萃取条件:压力48.3MPa(7000psi),温度60℃,静态萃取时间20min,CO2体积10mL,改性剂甲醇添加量... 详细信息

将超临界流体萃取(supercriticalfluidextraction,SFE)技术与高效液相色谱分析相结合,建立了特异性杀虫剂虫酰肼的萃取分离方法。SFE对虫酰肼的萃取条件:压力48.3MPa(7000psi),温度60℃,静态萃取时间20min,CO2体积10mL,改性剂甲醇添加量0 04mL/g,丙酮为收集溶剂。在此条件下,SFE对虫酰肼的萃取率为100 75%,所得样品可直接用于高效液相色谱分析。色谱条件:紫外二极管阵列检测器(检测波长为245nm),C18键合色谱柱,乙腈水(体积比为55∶45)流动相,流速1 0mL/min,柱温25℃,进样量5μL。

关键词：超临界流体萃取高效液相色谱法虫酰肼残留小白菜

植物源杀螨剂40%川芎油·冬青油环保型乳油的研制

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西北林学院学报 2013年第3期28卷 155-160页

作者：黄乾龙周一万马志卿冯俊涛张兴西北农林科技大学无公害农药研究服务中心陕西省生物农药工程技术研究中心陕西杨陵712100

以朱砂叶螨(Tetranychus cinnabarinus)为供试害螨,采用玻片浸渍法,进行川芎油和冬青油的复配增效研究。结果表明:川芎油与冬青油以质量比(W∶W)为1∶1.5混用对朱砂叶螨具显著增效作用,LC50为622.93mg.L-1,共毒系数达616.94;通过溶剂、... 详细信息

以朱砂叶螨(Tetranychus cinnabarinus)为供试害螨,采用玻片浸渍法,进行川芎油和冬青油的复配增效研究。结果表明:川芎油与冬青油以质量比(W∶W)为1∶1.5混用对朱砂叶螨具显著增效作用,LC50为622.93mg.L-1,共毒系数达616.94;通过溶剂、乳化剂等助剂筛选,确定了40%川芎油.冬青油环保型乳油的配方;质量检测表明以该配方配制的制剂符合商品农药的各项要求;田间药效试验表明,40%川芎油.冬青油环保型乳油对朱砂叶螨(***)和山楂叶螨(***)均具有较好的防治效果,800mg.L-1处理药后7d防效均在90%以上,与对照药剂1.8%阿维菌素EC 9mg.L-1处理防效相当,值得在经济作物上推广。

关键词：川芎油冬青油朱砂叶螨混用增效植物源杀螨剂

恒定pH对Xenorhabdus nematophila YL001抑菌活性及抑菌物质合成相关基因表达的影响

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西北农业学报 2016年第9期25卷 1413-1419页

作者：郭蔷薇张淑静李忝珍王茜王永宏张兴西北农林科技大学无公害农药研究服务中心陕西省生物农药工程技术研究中心陕西杨凌712100

为明确恒定pH对Xenorhabdus nematophila YL001抑菌物质产生及相关抑菌物质合成的影响,对pH 5.5、pH 7.0及pH 8.5培养条件下*** YL001的抑菌活性、主要抑菌物质[Xenocoumacin1(XCN1)和Nematophin]的代谢差异及主要抑菌物质的生物合成基... 详细信息

为明确恒定pH对Xenorhabdus nematophila YL001抑菌物质产生及相关抑菌物质合成的影响,对pH 5.5、pH 7.0及pH 8.5培养条件下*** YL001的抑菌活性、主要抑菌物质[Xenocoumacin1(XCN1)和Nematophin]的代谢差异及主要抑菌物质的生物合成基因与相关转录调节子基因的表达量进行分析。结果表明,*** YL001发酵液对枯草芽孢杆菌和番茄灰霉病菌的抑菌作用在pH 7.0时最佳,而其胞外产物乙酸乙酯与甲醇提取物对枯草芽孢杆菌和番茄灰霉病菌的抑菌作用在pH 8.5时最佳;LC-MS分析表明,随pH的升高,活性物质xcn1的相对含量逐渐升高,而Nematophin的相对含量则先升高后下降;qRT-PCR分析表明,不同恒定pH下,*** YL001主要抑菌物质生物合成基因及相关转录调节子基因的表达量存在显著差异。pH可显著影响*** YL001菌株的抑菌活性及代谢,且碱性条件更利于活性物质的产生并保持稳定性。

关键词：嗜线虫致病杆菌恒定pH 胞外产物提取物基因表达