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抗寒无核葡萄杂种胚挽救及分子标记辅助选择

中国农业科学 2021年第6期54卷 1218-1228页

作者：朱佩佩罗燚佳向雯张明磊张剑侠西北农林科技大学园艺学院/旱区作物逆境生物学国家重点实验室/农业部西北地区园艺作物生物与种质创制重点实验室

【目的】利用胚挽救技术创制抗寒无核葡萄新种质,为选育抗寒无核葡萄新品种奠定基础。【方法】分别以抗寒欧美杂交无核葡萄品种‘Jupiter’和欧山杂种有核优系‘00-1-5’(‘玫瑰香’×‘山葡萄黑龙江实生’)为父本,5个欧亚种无核品种‘R... 详细信息

【目的】利用胚挽救技术创制抗寒无核葡萄新种质,为选育抗寒无核葡萄新品种奠定基础。【方法】分别以抗寒欧美杂交无核葡萄品种‘Jupiter’和欧山杂种有核优系‘00-1-5’(‘玫瑰香’×‘山葡萄黑龙江实生’)为父本,5个欧亚种无核品种‘Ruby Seedless’‘秦红1号’‘秦红2号’‘Crimson Seedless’和‘秦秀’为母本杂交,在各母本最佳胚珠取样时期取样,以固-液双相培养基MM3和ER分别作为胚发育培养基进行胚珠培养,比较不同母本和2种培养基对胚发育率、萌发率、成苗率及畸形苗率的影响;以WPM+0.2 mg·L6-BA+0.1 mg·LIAA固体培养基作为胚萌发培养基,获得胚挽救后代,经炼苗后移栽至田间;分别在2MS+0.2 mg·L6-BA+0.1 mg·LIAA培养基中添加0、1.0和1.6 mg·LZnSO进行畸形苗转化正常苗培养,以筛选最适宜转化培养基;利用无核基因分子标记SCF27-2000对胚挽救后代进行无核性状分子检测。【结果】5个杂交组合的胚珠接种至MM3培养基的数量为2 158个,获得发育胚175个和胚挽救苗118株;接种至ER培养基的胚珠数为894个,获得发育胚74个和胚挽救苗58株。以‘00-1-5’为父本的2个杂交组合中,‘秦红2号’比‘秦秀’更适合作为母本,其杂种胚的发育率和成苗率最高,分别为17.04%和7.41%;以‘Jupiter’为父本的3个杂交组合中,‘Ruby Seedless’×‘Jupiter’效果最好,胚发育率和成苗率分别为13.71%和10.67%,其次是‘秦红1号’×‘Jupiter’,胚发育率和成苗率分别为14.39%和4.71%,而‘Crimson Seedless’×‘Jupiter’胚发育率和成苗率最低,分别为9.55%和1.76%。接种至MM3培养基的胚珠,获得的胚发育率和成苗率均高于ER培养基。畸形苗率最高的是‘秦红1号’×‘Jupiter’,而‘Ruby Seedless’×‘Jupiter’未出现畸形苗,ER培养基比MM3培养基形成的畸形苗率高。‘秦红2号’×‘00-1-5’组合畸形苗接种至2MS+1.6 mg·LZnSO+0.2 mg·L6-BA+0.1 mg·LIAA转化培养基效果最好,转化率为40.00%。利用无核标记SCF27-2000对5个杂交组合176株杂种后代检测表明,159个株系拥有无核基因分子标记。【结论】‘Ruby Seedless’‘秦红1号’和‘秦红2号’适宜作为胚挽救育种的母本,而‘Crimson Seedless’和‘秦秀’不适合作为胚挽救育种的母本,培养基MM3比ER更适宜作为胚发育培养基,拥有无核基因分子标记的159株胚挽救苗为培育抗寒无核葡萄新品种提供了种质基础。

关键词：无核葡萄抗寒性胚挽救新种质分子标记辅助选择

中国野生毛葡萄芪合成酶基因表达与抗白粉病分析

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中国农业科学 2019年第14期52卷 2436-2449页

作者：刘梦琦吴凤颖王跃进西北农林科技大学园艺学院/旱区作物逆境生物学国家重点实验室/农业部西北地区园艺作物生物与种质创制重点实验室

【目的】葡萄是世界性重要果树,欧洲葡萄品种因其优质高产被广泛栽培,但其突出缺点是抗病性弱,尤其易受白粉病危害。葡萄中芪合成酶(stilbene synthase,STS)的代谢产物白藜芦醇是植物体内具有抗病功能的植保素,果实中的白藜芦醇对人具... 详细信息

【目的】葡萄是世界性重要果树,欧洲葡萄品种因其优质高产被广泛栽培,但其突出缺点是抗病性弱,尤其易受白粉病危害。葡萄中芪合成酶(stilbene synthase,STS)的代谢产物白藜芦醇是植物体内具有抗病功能的植保素,果实中的白藜芦醇对人具有保健作用。中国野生毛葡萄‘丹凤-2’抗病性强且白藜芦醇含量高。论文旨在研究中国野生毛葡萄‘丹凤-2’芪合成酶基因(STS)及其功能,应用于抗病育种来提高欧洲葡萄抗病性及果实中芪类物质含量。【方法】同源克隆中国野生毛葡萄‘丹凤-2’芪合成酶基因VqSTS26和VqSTS32,构建pCAMBIA35S::VqSTSs::GFP过表达载体;以器官发生途径诱导的无核白分生愈伤组织作为受体材料,采用农杆菌介导法进行遗传转化,获得转基因葡萄植株;分别从转录水平和代谢产物水平比较转基因与野生型无核白在自然生长条件与人工接种葡萄白粉病菌(Uncinula necator)诱导下STS表达及芪类物质产生与积累的差异;通过显微观察白粉病菌在转基因与野生型无核白叶片上的生长发育进程,统计孢子萌发、菌丝生长与分生孢子梗形成数目,对转基因植株进行抗病性分析。【结果】通过PCR检测和Western blot鉴定,获得了稳定转化VqSTS26植株8株和稳定转化VqSTS32植株5株。在自然生长条件下实时荧光定量PCR分析表明VqSTS26、VqSTS32转基因无核白STS的表达量显著提高,芪合成酶上游基因PAL与下游基因RSGT的表达量上调,而与芪合成酶存在底物竞争关系的CHS表达下调;液相色谱分析表明芪类物质主要以糖苷的反式云杉新苷形式存在,VqSTS26、VqSTS32转基因无核白芪类物质的含量极显著高于野生型无核白。STS的表达及其产物合成受白粉病菌诱导,随白粉病菌诱导,STS表达量在1—2 dpi时显著升高,至7 dpi时表达量达最高;诱导表达产生的芪类物质由原来的反式云杉新苷新增加了反式白藜芦醇和葡萄素,且含量增加;转基因植株在STS表达量、芪类物质的积累方面均极显著高于野生型无核白。显微观察白粉病菌在葡萄叶片上的生长发育状态,对比野生型无核白,转基因植株白粉病菌生长受到抑制,菌丝发育更迟,7 dpi时转基因葡萄叶片上的分生孢子梗数量低于野生型无核白。【结论】过表达中国野生毛葡萄‘丹凤-2’VqSTS26和VqSTS32可以提高无核白中STS的表达量,促进芪类物质的形成与积累,抑制转基因无核白叶片上白粉病菌的生长。因此,中国野生毛葡萄‘丹凤-2’与其携带的STS及其产物,是定向改良欧洲葡萄品种白粉病抗性与芪类物质含量的重要种质资源与基因资源。

关键词：中国野生毛葡萄芪合成酶基因白藜芦醇白粉病抗病性遗传转化

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葡萄无核基因及无核育种研究进展

园艺学报 2019年第9期46卷 1711-1726页

作者：李莎莎王跃进西北农林科技大学园艺学院旱区作物逆境生物学国家重点实验室农业部西北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室

无核葡萄是世界葡萄生产与消费的重要发展趋势,也是主要的育种目标。从无核葡萄的分类、无核性状的形成、无核形成的分子机制、内源激素调控、遗传与育种现状等几个方面进行论述。以基因组学和基因编辑等生物技术的快速发展为背景,对今... 详细信息

无核葡萄是世界葡萄生产与消费的重要发展趋势,也是主要的育种目标。从无核葡萄的分类、无核性状的形成、无核形成的分子机制、内源激素调控、遗传与育种现状等几个方面进行论述。以基因组学和基因编辑等生物技术的快速发展为背景,对今后葡萄无核机理研究的展开和无核葡萄的育种进行展望,以期为无核葡萄的育种提供一定的理论参考依据。

关键词：葡萄无核基因遗传机理育种

中国野生毛葡萄芪合酶基因表达及对葡萄抗白粉病的影响

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中国农业科学 2021年第2期54卷 310-323页

作者：丁茜赵凯茜王跃进西北农林科技大学园艺学院/旱区作物逆境生物学国家重点实验室/农业农村部西北地区园艺作物生物与种质创制重点实验室

【目的】克隆中国野生毛葡萄(Vitis quinquangularis)‘丹凤-2’芪合酶(stilbene synthase)基因(STS)并研究其功能,为提高欧洲葡萄(V. vinifera)的白粉病抗性及品质提供依据。【方法】利用同源克隆法获得中国野生毛葡萄‘丹凤-2’芪合... 详细信息

【目的】克隆中国野生毛葡萄(Vitis quinquangularis)‘丹凤-2’芪合酶(stilbene synthase)基因(STS)并研究其功能,为提高欧洲葡萄(V. vinifera)的白粉病抗性及品质提供依据。【方法】利用同源克隆法获得中国野生毛葡萄‘丹凤-2’芪合酶基因VqSTS9和VqSTS21,构建植物过表达载体;用无核白单芽茎段诱导出分生愈伤组织,作为农杆菌介导法遗传转化的受体材料,获得抗性植株,经过不同水平检测,确定转基因植株;对野生型和转基因植株叶片人工接种葡萄白粉病菌(Uncinula necator),通过显微技术观察叶片受白粉病菌侵染后的情况,比较两者对白粉病的抗性;利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析野生型和转基因植株在自然条件和接种白粉病菌后STS及其相关基因的表达,用高效液相色谱法(HPLC)检测转基因植株中芪类物质的种类与含量。【结果】同源序列克隆得到VqSTS9(JQ868689)与VqSTS21(JQ868677)的cDNA序列,长度为1 179 bp。经PCR和Western blot检测,鉴定出过表达VqSTS9无核白植株4株和过表达VqSTS21无核白植株3株。显微观察发现,与野生型植株相比,转VqSTS9和VqSTS21植株叶片上的菌丝生长较慢,表现出对白粉病的抗性。qRT-PCR结果表明,自然生长条件下,与野生型植株相比,转VqSTS9和VqSTS21植株STS的表达量提高,STS上游苯丙氨酸裂解酶基因(PAL)、下游白藜芦醇糖基转移酶基因(RSGT)、转录因子基因(MYB14、MYB15)的表达量均不同程度上升,而查尔酮合成酶基因(CHS)表达量降低;人工接种白粉病菌后,与野生型植株相比,转基因植株STS表达量显著上调。高效液相色谱分析表明,自然条件下,芪类物质主要以反式云杉新苷形式存在,转基因植株芪类物质的含量高于野生型植株;在接种白粉病菌诱导表达后,除了反式云杉新苷,还产生了反式白藜芦醇和葡萄素,即转基因植株体内芪类物质的种类和含量均有所增加。【结论】将VqSTS9、VqSTS21转入无核白后,转基因植株STS的表达量增高,芪类物质的含量与种类增加,并抑制白粉病菌的生长。因此,中国野生毛葡萄‘丹凤-2’携带的VqSTS9和VqSTS21能够增强欧洲葡萄对白粉病的抗性,‘丹凤-2’可用作葡萄抗病性育种的种质资源。

关键词：中国野生毛葡萄芪合酶基因白藜芦醇白粉病遗传转化抗病性

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野生毛葡萄芪合成酶基因双向启动子活性分析

果树学报 2016年第2期33卷 137-147页

作者：和静李瑞民王跃进西北农林科技大学园艺学院陕西杨凌712100 旱区作物逆境生物学国家重点试验室陕西杨凌712100 农业部西北地区园艺作物生物学与种质创制重点试验室陕西杨凌712100

【目的】研究中国野生毛葡萄‘丹凤-2’(Vitis quinquangularis‘Danfeng-2’)芪合成酶(stilbene synthase)基因双向启动子的启动活性与差异。【方法】通过染色体步移技术克隆中国野生毛葡萄‘丹凤-2’芪合成酶基因双向启动子,并与Uid ... 详细信息

【目的】研究中国野生毛葡萄‘丹凤-2’(Vitis quinquangularis‘Danfeng-2’)芪合成酶(stilbene synthase)基因双向启动子的启动活性与差异。【方法】通过染色体步移技术克隆中国野生毛葡萄‘丹凤-2’芪合成酶基因双向启动子,并与Uid A基因(β-葡萄糖苷酶基因,GUS)融合,利用真空渗透法在葡萄叶片中瞬时表达,组织化学染色和GUS蛋白定量法分别检测白粉菌接种、温度处理、茉莉酸甲酯、脱落酸和水杨酸处理对双向启动子活性的影响。以毛葡萄‘丹凤-2’和欧洲葡萄‘赤霞珠’不同成熟时期果实的c DNA为模板,通过荧光实时定量PCR的方法分析Vq STS12/Vv STS31和Vq STS33/Vv STS32的表达情况。【结果】Pvq DSTS12受到白粉菌、茉莉酸甲酯、高温和低温的诱导后,启动活性增强,对水杨酸和脱落酸处理不敏感;Pvq DSTS33在茉莉酸甲酯处理下启动活性增强,在高温和低温的处理下启动活性降低,对水杨酸、脱落酸和白粉病处理不敏感。荧光实时定量PCR结果显示,在果实发育的6个时期中,‘丹凤-2’Vq STS12和Vq STS33的表达量均高于‘赤霞珠’Vv STS31和Vv STS32。4个基因的基本表达趋势为:浆果转色期之前持续增长,转色后期下降,浆果半熟期达到最高峰,浆果成熟期表达降低。其中毛葡萄‘丹凤-2’Vq STS12的表达量在转色后期并未降低且增加到上一时期的2.3倍;欧洲葡萄Vv STS32基因在成熟期表达量升高为前一时期的1.42倍。【结论】双向启动子活性的研究为利用植物天然双向启动子提供依据。

关键词：中国野生毛葡萄芪合成酶双向启动子 GUS

无核葡萄胚珠发育过程中内源激素及多胺含量的变化

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中国农业科学 2023年第23期56卷 4789-4800页

作者：朱佩佩秦浩翔张剑侠西北农林科技大学园艺学院/旱区作物逆境生物学国家重点实验室/农业农村部西北地区园艺作物生物与种质创制重点实验室

【目的】探究无核葡萄胚珠发育过程中内源激素和多胺含量变化对胚发育的影响，为花前喷洒外源激素及胚珠离体培养条件下培养基中添加外源激素以促进胚的发育提供理论依据。【方法】以欧亚种葡萄(Vitis vinifera L.)有核品种‘京秀’及... 详细信息

【目的】探究无核葡萄胚珠发育过程中内源激素和多胺含量变化对胚发育的影响，为花前喷洒外源激素及胚珠离体培养条件下培养基中添加外源激素以促进胚的发育提供理论依据。【方法】以欧亚种葡萄(Vitis vinifera L.)有核品种‘京秀’及其F1代种子败育型无核品种‘秦秀’为材料，采用高效液相色谱质谱(high performance liquid chromatography mass spectrometry,HPLCMS)和超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatography,UPLC)分析方法，比较二者在果实不同发育时期胚珠中内源激素和多胺含量的变化规律。【结果】对于生长素(IAA)、玉米素(ZT)、玉米素核苷(ZR)和N6-异戊烯腺嘌呤(i PAS)含量，‘京秀’在花后39 d达到最高值，‘秦秀’在花后42 d达到最高值，但前者最高值均高于后者(1.5倍以上)；对于茉莉酸(JA)和水杨酸(SA)含量，‘京秀’在花后36 d(2 000 ng·g-1和6 500 ng·g-1)开始急剧上升，至花后39 d时均达到最高值(6 500 ng·g-1和10 000 ng·g-1)，之后下降并在花后42—45 d维持在较高水平，而‘秦秀’自花后36 d(3 500 ng·g-1和3 000 ng·g-1)开始一直下降并处于较低的水平；对于氨基环丙烷羧酸(ACC)含量，‘京秀’在花后39 d时几乎为0，然后迅速上升，在花后45 d时达到最高值(1 200 ng·g-1)，而‘秦秀’在花后39 d时达到最高值(900 ng·g-1)，之后下降至花后42 d时几乎为0，并一直维持在极低的水平；对于脱落酸(ABA)含量，‘京秀’在花后36—45 d一直处于几乎为0的水平，而‘秦秀’自花后39 d从0开始急速上升到42 d的最高值(900 ng·g-1)；对于腐胺(Put)、精胺(Spm)和亚精胺(Spd)含量，2个品种变化趋势相似，但‘京秀’一直高于‘秦秀’，除精胺最高值均出现在花后42 d外，腐胺和亚精胺最高值在‘京秀’中为花后42 d，‘秦秀’为39 d。【结论】与有核品种‘京秀’相比，无核品种‘秦秀’胚珠中生长促进物质(IAA、CTK、GA3、ACC、JA、SA、Put、Spd和Spm)含量较低，而生长抑制物质(ABA)含量较高，(IAA+GA3)/ABA、(IAA+ZT+GA3)/ABA、Spm/多胺(PAs)、(Spd+Spm)/PAs和(Spd+Spm)/Put的比值较低，可能是导致其胚败育的主要原因之一。因此，在无核葡萄胚挽救过程中,可通过花前喷洒或者培养基中添加一定浓度的生长促进物质来抑制胚的败育。

关键词：种子败育型无核葡萄胚珠胚内源激素多胺

中国野生毛葡萄转录因子Vq WRKY6与Vqb ZIP1互作调控抗白粉病功能分析

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中国农业科学 2022年第23期55卷 4626-4639页

作者：张洁姜长岳王跃进西北农林科技大学园艺学院/旱区作物逆境生物学国家重点实验室/农业农村部西北地区园艺作物生物与种质创制重点实验室

【目的】欧洲葡萄作为世界葡萄主栽品种，具有产量高、品质佳的优点，但对病害抵抗能力差。白粉病是严重危害葡萄栽培的一种真菌性病害，中国野生葡萄资源丰富，可为抗病育种提供充足种质资源。论文旨在筛选调控抗白粉病的葡萄转录因子... 详细信息

【目的】欧洲葡萄作为世界葡萄主栽品种，具有产量高、品质佳的优点，但对病害抵抗能力差。白粉病是严重危害葡萄栽培的一种真菌性病害，中国野生葡萄资源丰富，可为抗病育种提供充足种质资源。论文旨在筛选调控抗白粉病的葡萄转录因子基因，探究转录因子基因调控抗白粉病的作用机理，为选育葡萄抗病品种提供优质的基因资源。【方法】从中国野生毛葡萄‘商-24’中克隆得到转录因子基因VqWRKY6，使用DANMAN和MEGA-X软件对序列进行分析。利用PEG介导转化拟南芥原生质体进行亚细胞定位分析发挥转录调控作用的位置，利用酵母双杂交和双分子荧光互补试验证明VqWRKY6能够和转录因子VqbZIP1互作形成转录复合体。以感病葡萄‘赤霞珠’叶片为试材，通过农杆菌介导法瞬时转化到‘赤霞珠’葡萄叶片，叶片进行白粉菌（Uncinula necator）接种后，观察发病症状，用台盼蓝染色在显微镜下观察菌丝发育进程，使用DAB染色观察活性氧积累，比较共同过表达VqWRKY6和VqbZIP1的葡萄叶片、单独过表达VqWRKY6的葡萄叶片、单独过表达VqbZIP1的葡萄叶片和对照组叶片的差异。使用实时荧光定量PCR技术对抗病基因在白粉菌诱导下的表达水平进行分析。【结果】VqWRKY6定位于葡萄2号染色体，编码342个氨基酸，属于WRKY家族的groupⅢ亚家族。亚细胞定位和酵母转录激活试验证明，VqWRKY6在细胞核内发挥转录调控功能且在酵母中有转录激活活性。‘赤霞珠’叶片共同过表达VqWRKY6和VqbZIP1后，叶片表面白粉菌菌丝扩繁速率显著慢于单独过表达VqWRKY6和单独过表达VqbZIP1的叶片，共同过表达VqWRKY6和VqbZIP1的叶片组织中活性氧含量显著高于单独过表达VqWRKY6和单独过表达VqbZIP1的叶片；此外，VqWRKY6和VqbZIP1的协同调控能够激活茉莉酸（JA）途径的PR3、PR4，基因表达量显著上调。【结论】VqWRKY6和VqbZIP1协同作用可能通过激活JA抗病途径，促进活性氧产生，增强抗病基因表达，抑制白粉菌的生长，从而提高葡萄对白粉病的抗性。因此，中国野生毛葡萄‘商-24’是重要的抗病种质资源，而VqWRKY6与VqbZIP1可作为重要的抗病基因资源。

关键词：中国野生毛葡萄 WRKY转录因子白粉病转录调控

葡萄活性赤霉素合成关键基因VvGA3ox家族的克隆和表达分析

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园艺学报 2016年第12期43卷 2293-2303页

作者：刘炳臣王茜王跃进张朝红西北农林科技大学园艺学院旱区作物逆境生物学国家重点实验室农业部西北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室陕西杨凌712100

在植物赤霉素合成代谢中,GA3ox可将几种非活性赤霉素转化为具生理活性的赤霉素。以葡萄有核品种‘黑比诺’和无核品种‘无核白’为材料,克隆葡萄的VvGA3ox基因家族成员,分析基因结构、进行染色体定位和系统发育树构建,检测其组织器官表... 详细信息

在植物赤霉素合成代谢中,GA3ox可将几种非活性赤霉素转化为具生理活性的赤霉素。以葡萄有核品种‘黑比诺’和无核品种‘无核白’为材料,克隆葡萄的VvGA3ox基因家族成员,分析基因结构、进行染色体定位和系统发育树构建,检测其组织器官表达特性和在胚珠（幼种子）发育过程的表达变化。结果表明,葡萄基因组VvGA3ox家族有3个成员,c DNA长度分别为1313、1225和1480 bp,都包含2个外显子和1个内含子结构。组织器官特异性表达分析表明,VvGA3ox1在胚珠中的表达很低,在根中高表达;VvGA3ox2和VvGA3ox3在花和胚珠中的表达较高。在受精后胚珠（幼种子）发育过程中,VvGA3ox家族基因的表达趋势存在差异,其中VvGA3ox1在‘黑比诺’与‘无核白’中均是在盛花后30 d时上调之后下降;VvGA3ox2在‘黑比诺’中20-30 d极速上调之后下降,相应地‘无核白’中是先缓慢下降之后上升;VvGA3ox3在‘黑比诺’中逐渐下降,对应地‘无核白’中是在10-15 d先上升后在20-45 d呈下降趋势并逐渐与‘黑比诺’中的表达持平。VvGA3ox在有核和无核葡萄品种中表现较大差异表达,与葡萄无核性状有一定关系。

关键词：葡萄赤霉素 VvGA3ox 基因克隆表达分析

利用CRISPR/Cas9敲除葡萄VviPDS1基因的研究

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园艺学报 2019年第4期46卷 623-634页

作者：郭晔万东艳柴壮壮王跃进文颖强西北农林科技大学园艺学院农业部西北地区园艺作物生物学与种质创新重点实验室旱区作物逆境生物学国家重点实验室陕西杨凌712100

选择葡萄八氢番茄红素脱氢酶(Phytoene desaturase)基因VviPDS1为靶标,利用CRISPR/Cas9系统构建基因敲除载体,瞬时转化葡萄叶片原生质体,检测到不同类型的突变。通过农杆菌介导转化‘无核白’葡萄胚性愈伤组织,筛选获得卡那霉素抗性植... 详细信息

选择葡萄八氢番茄红素脱氢酶(Phytoene desaturase)基因VviPDS1为靶标,利用CRISPR/Cas9系统构建基因敲除载体,瞬时转化葡萄叶片原生质体,检测到不同类型的突变。通过农杆菌介导转化‘无核白’葡萄胚性愈伤组织,筛选获得卡那霉素抗性植株71株。经PCR鉴定,其中53株为阳性植株,阳性率为74.64%。测序结果表明,共有20株在靶点发生不同类型的突变,编辑效率为37.74%;其中9株产生了双等位基因突变。对其进行氨基酸序列预测,在第202位氨基酸之后发生了不同程度的变异。利用CRISPR/Cas9系统敲除VviPDS1获得的突变体植株呈现整体矮化,其叶片出现不同程度白化。表明CRISPR/Cas9系统可以通过细胞中的瞬时或稳定表达进行基因编辑,可以实现在葡萄编辑植株中产生纯合敲除。

关键词：葡萄 CRISPR/Cas9 PDS1 基因编辑