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不同静电纺丝膜上骨髓间充质干细胞的黏附、增殖与成血管平滑肌分化

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中国组织工程研究 2025年第4期29卷 661-669页

作者：孙现娟王秋花张锦艺杨杨杨王文双张晓晴滨州医学院基础医学院人体解剖与组织胚胎学教研室生物材料与组织再生国际合作联合实验室山东省烟台市264003 烟台毓璜顶医院妇科山东省烟台市264000

背景:临床上迫切需要小口径人工血管来治疗冠状动脉和外周动脉疾病,目前,血管组织工程已成为制备小口径人工血管的主要方法,选择合适的生物材料和细胞来源是小口径组织工程血管构建成功的关键因素。目的:观察4种静电纺丝膜材料对骨髓间... 详细信息

背景:临床上迫切需要小口径人工血管来治疗冠状动脉和外周动脉疾病,目前,血管组织工程已成为制备小口径人工血管的主要方法,选择合适的生物材料和细胞来源是小口径组织工程血管构建成功的关键因素。目的:观察4种静电纺丝膜材料对骨髓间充质干细胞增殖、黏附及分化为血管平滑肌细胞的影响。方法:分离提取SD大鼠骨髓间充质干细胞。将骨髓间充质干细胞分别接种于聚己内酯(PCL)、聚己内酯-透明质酸(PCL-HA)、聚己内酯-丝素蛋白(PCL-SF)、聚己内酯-明胶(PCL-GEL)静电纺丝膜材料上,培养1,3,7 d后,扫描电镜下观察材料上的细胞排布,鬼笔环肽染色观察材料上的细胞增殖与黏附,qRT-PCR检测材料上细胞分泌的CD90、Meflin、转化生长因子βmRNA表达;向血管平滑肌细胞诱导分化7 d后,qRT-PCR检测材料上细胞ɑ-平滑肌肌动蛋白mRNA表达。结果与结论:①扫描电镜下可见骨髓间充质干细胞在4种静电纺丝膜上均沿着静电纺丝膜的纤维走向排列;②鬼笔环肽染色显示,骨髓间充质干细胞在4种静电纺丝膜上分布规律,均沿着纤维走向呈现平行分布,并且PCL-HA、PCL-SF、PCL-GEL静电纺丝膜较PCL静电纺丝膜更有利于骨髓间充质干细胞的增殖、黏附,PCL-SF静电纺丝膜相较于PCL-HA、PCL-GEL静电纺丝膜更有利于骨髓间充质干细胞的增殖、黏附;③qRT-PCR检测显示,4种静电纺丝膜材料均可维持骨髓间充质干细胞CD90和Meflin的mRNA表达,组间比较差异无显著性意义(P>0.05);PCL-HA、PCL-SF、PCL-GEL组培养1,7 d的转化生长因子βmRNA表达高于PCL组(P组织工程血管。

关键词：骨髓间充质干细胞小口径组织工程血管静电纺丝聚己内酯聚己内酯-透明质酸聚己内酯-丝素蛋白聚己内酯-明胶

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单细胞转录组测序技术在帕金森病中的应用

中国组织工程研究 2025年第1期29卷 193-201页

作者：刘子瑜耿丹丹张润姣刘清李一博王宏方谢文梦王文钰郝佳欣王磊河北医科大学人体解剖与组织胚胎学教研室河北省石家庄市050017 河北医科大学神经与血管生物学教育部重点实验室河北省石家庄市050017

背景:帕金森病以中脑特别是黑质致密部为主要病理改变,导致患者运动和非运动功能受损。目前研究受制于细胞异质性,其发病机制仍需要更深入的阐明。近些年,单细胞转录组测序(single-cell RNA sequencing,scRNA-seq)逐渐应用于神经退行性... 详细信息

背景:帕金森病以中脑特别是黑质致密部为主要病理改变,导致患者运动和非运动功能受损。目前研究受制于细胞异质性,其发病机制仍需要更深入的阐明。近些年,单细胞转录组测序(single-cell RNA sequencing,scRNA-seq)逐渐应用于神经退行性疾病中,对于理解细胞间异质性、疾病发展机制和治疗策略有重要意义。目的:综述近些年scRNA-seq技术应用于帕金森病的研究进展,为scRNA-seq在帕金森病诊断和治疗中应用提供理论基础。方法:由第一作者应用计算机系统检索中国知网、万方医学网数据库、PubMed、Web of Science数据库的相关文献,中文检索词为“单细胞RNA测序,帕金森病,细胞异质性,细胞亚型,多巴胺能神经元,胶质细胞”;英文检索词为“single-cell RNA-seq,Parkinson Disease,heterogeneity,subtypes,dopaminergic neurons,glial cells”,最终纳入71篇文献进行综述分析。结果与结论:(1)scRNA-seq是一种在单细胞水平上利用RNA测序对特定细胞群体进行基因表达谱定量的高通量实验技术,从分子水平揭示细胞奥秘。与传统的测序技术相比,scRNA-seq技术通过对细胞转录组进行自动聚类分析,从而揭示各种生理和病理情况下复杂组织中细胞类型多样性和特异性基因表达的变化。(2)通过scRNA-seq阐明多巴胺能神经元发育过程以及各种细胞亚型的独特功能特性,从而更好地了解具有潜在治疗作用的分子靶点。(3)利用scRNA-seq分析,提高了研究者对帕金森病胶质细胞反应的了解,从而全面表征了不同的细胞类型群体,并鉴定出与神经变性相关的胶质细胞亚群,绘制了有价值的单细胞图谱,作为未来研究的参考数据。(4)应用scRNA-seq检测胚胎小鼠以及干细胞,将有助于改善细胞治疗的体外分化方案和质量控制,以及评估干细胞衍生的中脑多巴胺能神经元的整体细胞质量和发育阶段。

关键词：单细胞转录组测序帕金森病神经退行性疾病细胞异质性综述

SR9009联合吲哚丙酸通过核因子κB信号通路减轻C2C12成肌细胞的炎症反应

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中国组织工程研究 2025年第6期29卷 1220-1229页

作者：姬慧慧蒋旭张志敏邢运虹王亮亮李娜宋雨庭罗旭光崔慧林曹锡梅山西医科大学组织学与胚胎学教研室山西省晋中市030604 山西医科大学法医学院山西省晋中市030604 山西医科大学微生物免疫学教研室山西省晋中市030604 山西医科大学山西省临床级细胞治疗转化中试基地山西省晋中市030604

背景:钟基因Rev-erbα参与调节炎症,但激活Rev-erbα会增加心脑血管疾病风险。为降低相关风险,探索Rev-erbα激动剂SR9009联合其他药物来减轻骨骼肌成肌细胞炎症,奠定治疗炎症相关性骨骼肌萎缩的理论基础。目的:探讨脂多糖刺激C2C12成... 详细信息

背景:钟基因Rev-erbα参与调节炎症,但激活Rev-erbα会增加心脑血管疾病风险。为降低相关风险,探索Rev-erbα激动剂SR9009联合其他药物来减轻骨骼肌成肌细胞炎症,奠定治疗炎症相关性骨骼肌萎缩的理论基础。目的:探讨脂多糖刺激C2C12成肌细胞时吲哚丙酸、SR9009与核因子κB信号通路的关系。方法:①1μg/mL脂多糖刺激C2C12成肌细胞,RNA转录组测序结合KEGG通路富集分析信号通路。②CCK-8法检测C2C12成肌细胞活性,筛选吲哚丙酸的最佳给药浓度;然后将细胞分为空白对照组、脂多糖(1μg/mL)组、SR9009(10μmol/L)+脂多糖组、吲哚丙酸(80μmol/L)+脂多糖组、吲哚丙酸+SR9009+脂多糖组,ELISA检测细胞上清液中白细胞介素6水平,RT-qPCR检测白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、Toll样受体4、CD14 mRNA表达,Western blot检测NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达。③siRNA敲减Rev-erbα,RT-qPCR评估敲减效率,检测白细胞介素6、肿瘤坏死因子αmRNA表达。结果与结论:①与空白对照组比较,脂多糖时间依赖性抑制成肌细胞融合形成肌管,白细胞介素6、肿瘤坏死因子αmRNA表达水平升高,细胞上清液中白细胞介素6水平显著升高;KEGG通路分析支持脂多糖刺激激活核因子κB信号通路。②吲哚丙酸浓度>80μmol/L时抑制C2C12成肌细胞活性;吲哚丙酸和SR9009通过抑制核因子κB信号通路发挥抗炎作用,降低白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、Toll样受体4、CD14 mRNA表达水平,p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达比值低于脂多糖组。SR9009联合吲哚丙酸显著降低脂多糖诱导的炎症,Toll样受体4、CD14、白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA表达水平进一步下调,p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达比值显著低于吲哚丙酸+脂多糖组和SR9009+脂多糖组。③Rev-erbα随脂多糖刺激时间依赖性升高;siRNA敲减Rev-erbα效率达58%以上,成功敲减Rev-erbα后添加脂多糖,白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA表达较脂多糖组显著上调。④结果说明,Rev-erbα可以作为调节炎症反应的靶点,SR9009靶向激活Rev-erbα联合吲哚丙酸能抑制核因子κB信号通路显著减轻C2C12成肌细胞的炎症反应,联合抗炎效果优于单独干预。

关键词： Rev-erbα SR9009 吲哚丙酸脂多糖核因子κB信号通路 C2C12成肌细胞

露蜂房纯化蛋白对急性髓系白血病患者骨髓细胞的影响

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中国药理学通报 2007年第5期23卷 685-687页

作者：时彦张圣明张雪莉吴洪娟李峰杰潍坊医学院组织胚胎学教研室

目的研究中药露蜂房纯化蛋白(nidus vespae protein-Ⅱ,NVP-Ⅱ)对急性髓系白血病(AML)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)的作用并探讨其机制。方法采用NVP-Ⅱ在体外作用于AML患者BMMNC,经光镜、电镜、Hochest33258染色法、TdT缺口末端标记(TUN... 详细信息

目的研究中药露蜂房纯化蛋白(nidus vespae protein-Ⅱ,NVP-Ⅱ)对急性髓系白血病(AML)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)的作用并探讨其机制。方法采用NVP-Ⅱ在体外作用于AML患者BMMNC,经光镜、电镜、Hochest33258染色法、TdT缺口末端标记(TUNEL)技术等方法检测NVP-Ⅱ对AML患者BMMNC的影响。结果不同浓度NVP-Ⅱ对AML患者BMMNC有不同程度的生长抑制和诱导凋亡作用。①光镜下观察到,与生理盐水对照组比较,NVP-Ⅱ处理组AML患者BMMNC数量明显减少,胞质内颗粒增多,并有较多的细胞碎片。②透射电镜下发现,NVP-Ⅱ处理组AML患者BMMNC细胞核染色质浓缩、碎裂,靠核膜边集呈块状,并形成凋亡小体;线粒体基质深染,呈现空泡样变及髓样变。③Hochest33258染色法显示,NVP-Ⅱ处理组AML患者BMMNC核染色质高度凝聚,致密浓染,或裂解呈碎块状,边缘光滑清晰。④TUNEL检测见阳性细胞核深染,NVP-Ⅱ处理组与生理盐水处理组比较,凋亡细胞明显增多(P<0.05)。结论NVP-Ⅱ可抑制AML患者BMMNC生长并诱导其凋亡。

关键词：露蜂房蛋白白血病骨髓单个核细胞凋亡

围着床期小鼠卵巢黄体生成素受体和血管内皮生长因子表达的免疫组织化学研究

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解剖学报 2009年第4期40卷 647-650页

作者：石运芝魏丽华葛丽杜辉宋文刚泰山医学院组织胚胎学教研室

目的探讨黄体生成素受体（LHR）和血管内皮生长因子（VEGF）在围着床期小鼠卵巢中的生物学作用。方法应用免疫组织化学SABC法和图像分析,检测LHR与VEGF在昆明小鼠（n=28）动情期、孕1d、孕4d和孕6d卵巢中的分布状况和变化规律。结果LHR... 详细信息

目的探讨黄体生成素受体（LHR）和血管内皮生长因子（VEGF）在围着床期小鼠卵巢中的生物学作用。方法应用免疫组织化学SABC法和图像分析,检测LHR与VEGF在昆明小鼠（n=28）动情期、孕1d、孕4d和孕6d卵巢中的分布状况和变化规律。结果LHR与VEGF免疫阳性细胞具有相似的分布和变化规律。在动情期,较大的卵泡周围的基质细胞呈强阳性着色,与其他组相比,差异显著（P＆lt;0.05）。随着妊娠的继续,颗粒黄体细胞的着色逐渐增强,在孕6d时表达最强。在动情期和孕1d,部分血管内皮和血细胞分别呈VEGF和LHR强阳性着色。从孕1d开始,卵泡膜细胞呈LHR阳性着色。结论LHR和VEGF的表达与围着床期小鼠卵巢中卵泡的发育、排卵和黄体形成过程密切相关。

关键词：黄体生成素受体血管内皮生长因子围着床期卵巢免疫组织化学小鼠

乙醇激活ALDH2对2型糖尿病大鼠睾丸损伤的影响

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中国药理学通报 2015年第7期31卷 962-966页

作者：李徽徽于影贺文欣周艳梅柴继侠蚌埠医学院组织学与胚胎学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院生理学教研室安徽蚌埠233030

目的观察乙醇激活乙醛脱氢酶2(ALDH2)对2型糖尿病大鼠睾丸损伤的影响。方法健康♂SD大鼠高糖高脂饮食联合低剂量链脲佐菌素(STZ)(35 mg·kg-1)制备2型糖尿病大鼠模型。成模后,将大鼠随机分为正常对照组、2型糖尿病组、乙醇+2型糖尿病组(... 详细信息

目的观察乙醇激活乙醛脱氢酶2(ALDH2)对2型糖尿病大鼠睾丸损伤的影响。方法健康♂SD大鼠高糖高脂饮食联合低剂量链脲佐菌素(STZ)(35 mg·kg-1)制备2型糖尿病大鼠模型。成模后,将大鼠随机分为正常对照组、2型糖尿病组、乙醇+2型糖尿病组(n=6)。乙醇+2型糖尿病组大鼠先给予体积分数0.025乙醇喂养1周后,改用体积分数0.05乙醇继续喂养7周;正常对照组和2型糖尿病组大鼠常规喂养8周。8周后,测定血糖、糖化血红蛋白、血清睾酮、睾丸质量系数等指标,观察睾丸组织结构改变,检测睾丸组织ALDH2 mRNA、转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA水平和TGF-β1阳性率的变化。结果与正常对照组比较,2型糖尿病组大鼠血糖、糖化血红蛋白和睾丸质量系数均明显升高,血清睾酮水平明显降低,睾丸组织中部分生精小管萎缩,各级生精细胞减少,排列疏松,睾丸间质细胞减少,睾丸组织ALDH2 mRNA水平明显减少,TGF-β1 mRNA水平和TGF-β1阳性率明显升高。给予乙醇干预后,与2型糖尿病组比较,乙醇+2型糖尿病组大鼠血糖、糖化血红蛋白和睾丸质量系数降低,血清睾酮水平升高,病理改变减轻,睾丸组织ALDH2 mRNA水平明显升高、TGF-β1 mRNA水平和TGF-β1阳性率明显降低。结论激活ALDH2可能通过下调TGF-β1的表达,减轻2型糖尿病对睾丸的损伤。

关键词： 2型糖尿病乙醛脱氢酶2 睾丸转化生长因子β1 乙醇链脲佐菌素大鼠

重复性经脊髓磁刺激促进脊髓损伤小鼠运动功能恢复

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中国组织工程研究 2025年第11期29卷 2252-2260页

作者：宋海旺姜冠华穆盈盈付善羽孙宝飞李玉美余资江杨丹贵州医科大学基础医学院人体解剖学教研室贵州省贵安新区561113 贵州医科大学基础医学院贵州省贵安新区561113

背景:研究表明重复性经脊髓磁刺激能够抑制脊髓损伤炎症反应,在脊髓区域施加磁场刺激,以调节神经元的兴奋性和突触传递,从而促进神经系统的可塑性和修复。目的:观察重复性经脊髓磁刺激对脊髓损伤后小鼠Toll样受体4/核因子κB/NLRP3信号... 详细信息

背景:研究表明重复性经脊髓磁刺激能够抑制脊髓损伤炎症反应,在脊髓区域施加磁场刺激,以调节神经元的兴奋性和突触传递,从而促进神经系统的可塑性和修复。目的:观察重复性经脊髓磁刺激对脊髓损伤后小鼠Toll样受体4/核因子κB/NLRP3信号通路的影响,探讨其对运动功能恢复的机制。方法:将SPF级雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、脊髓损伤组、重复性经脊髓磁刺激组,后2组小鼠麻醉后采用咬骨钳剔除T9椎板,暴露脊髓,使用小型动脉瘤夹夹持脊髓20 s建立脊髓损伤模型。重复性经脊髓磁刺激组小鼠脊髓损伤的第1天开始进行为期21 d的重复性经脊髓磁刺激干预。每天持续10 min,每周刺激5 d,休息2 d。于脊髓损伤后1,3,7,14,21 d进行小鼠运动功能BMS评分,利用Western Blot检测脊髓损伤处的水通道蛋白AQP4、凋亡因子Bax、Bcl-2、CL-Caspase-3、炎症因子肿瘤坏死因子α、干扰素γ、白细胞介素6、白细胞介素4和Toll样受体4/核因子κB/NLRP3信号通路相关蛋白的表达,氧化应激试剂盒检测脊髓损伤处超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶的活性及丙二醛浓度,免疫荧光染色法检测神经元核抗原的表达。结果与结论:(1)重复性经脊髓磁刺激组小鼠的BMS评分高于脊髓损伤组(P<0.05);(2)与脊髓损伤组相比,重复性经脊髓磁刺激组脊髓含水量降低、AQP4蛋白表达降低;丙二醛浓度、Bax、CL-Caspase-3、肿瘤坏死因子α、干扰素γ、白细胞介素6与Toll样受体4/核因子κB/NLRP3信号通路相关蛋白的表达均降低(P<0.05),而超氧化物歧化酶活性、谷胱甘肽过氧化物酶活性、Bcl-2、白细胞介素4与神经元核抗原的表达均升高(P<0.05);(3)结果说明,重复性经脊髓磁刺激能下调Toll样受体4/核因子κB/NLRP3信号通路相关蛋白的表达,缓解脊髓损伤后的脊髓水肿、氧化应激、凋亡反应和炎症反应等,发挥神经保护作用,从而促进脊髓损伤后小鼠后肢运动功能的恢复。

关键词：脊髓损伤重复性经脊髓磁刺激 TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路脊髓水肿氧化应激凋亡反应炎症反应神经保护运动功能

慢性砷中毒大鼠空肠中P物质、生长抑素表达与形态结构改变的关系．

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中华地方病学杂志 2013年第2期32卷 155-158页

作者：李金华李远慧孔祥照李娜金婷婷贵阳医学院组织胚胎学教研室 550004

目的探讨慢性砷中毒对大鼠空肠P物质（sP）、生长抑素（SS）表达的影响及其与空肠形态结构变化的关系。方法将45只清洁级SD大鼠按性别和体质量随机分为对照（0．0mg·kg-1·d-1）、低砷（0．4mg·kg-1·d-1）、高砷（***·kg-1·d-1）... 详细信息

目的探讨慢性砷中毒对大鼠空肠P物质（sP）、生长抑素（SS）表达的影响及其与空肠形态结构变化的关系。方法将45只清洁级SD大鼠按性别和体质量随机分为对照（0．0mg·kg-1·d-1）、低砷（0．4mg·kg-1·d-1）、高砷（***·kg-1·d-1）组，每组15只。分别自由饮用砷（三氧化二砷，As203）含量为O、2、50mg／h的蒸馏水溶液，连续染毒4个月。采用HE染色、免疫组化链霉亲和素一生物素复合物（SABC）法光镜下观察空肠形态结构变化及SP、SS阳性细胞数．Biomias图像分析软件测定SP、SS阳性细胞平均灰度值。结果光镜下，慢性砷中毒大鼠部分空肠绒毛不规则；部分纹状缘脱落，不整齐；杯状细胞增多；固有层内炎性细胞浸润；小肠腺部分细胞出现空泡。3组大鼠空肠SP、SS阳性细胞计数比较，差异有统计学意义（F值分别为608．54、227．59，P均〈0．05），其中低、高砷组[（1．85-I-0．25）、（1．83±0．24）个／视野和（4．24±0．33）、（3．31±0．41）个／视野]明显高于对照组[（0．94±0．21）、（1．14±0．14）个／视野]，且高砷组明显高于低砷组（P均〈0．05）。3组大鼠空肠SP、SS阳性细胞平均灰度值比较，差异有统计学意义（F值分别为68．43、26．57，P均〈0．05），其中低、高砷组（125．13±2．35、131．28±5．66和118．30±4．58、124．03±3．94）明显低于对照组（133．76±3．61、137．57±5．49），且高砷组明显低于低砷组（尸均〈0．05）。结论慢性砷中毒大鼠空肠黏膜损伤及形态结构改变与SP、SS表达上调有关。

关键词：砷中毒大鼠空肠 P物质生长抑素

变异链球菌sepM基因中存在与变链素IV形成相关的突变类型

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南方医科大学学报 2021年第6期41卷 876-882页

作者：刘姗姗刘玉东张容秀路晓淼胡浩胡洁张凯孙钰蚌埠医学院第一附属医院口腔科安徽蚌埠233004 蚌埠医学院组织胚胎学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院卫生检验与检疫学教研室安徽蚌埠233030

目的了解sepM基因在变异链球菌临床株中的突变类型及其分布特征;探索sepM基因突变与变异链球菌变链素IV形成能力的关系。方法采用抑菌圈法检测80株变异链球菌临床株的变链素IV形成能力,根据核心基因组多位点序列分型方法构建这80株变异... 详细信息

目的了解sepM基因在变异链球菌临床株中的突变类型及其分布特征;探索sepM基因突变与变异链球菌变链素IV形成能力的关系。方法采用抑菌圈法检测80株变异链球菌临床株的变链素IV形成能力,根据核心基因组多位点序列分型方法构建这80株变异链球菌临床株的最小生成树,根据最大似然法构建这80个样本的进化树。采用GeneMarkS软件预测这些菌株的编码基因,并将预测到的基因与参考基因组UA159的sepM基因序列进行比对,了解sepM基因在变异链球菌临床株中的突变类型及其分布特征。通过分析变链素IV形成组和无变链素IV形成组菌株中差异分布的突变类型及比较突变组和无突变组菌株中抑菌圈的大小,明确与变链素IV形成相关的突变类型。结果 80株变异链球菌临床株中有变链素IV形成(变链素IV形成组)和无变链素IV形成(无变链素IV形成组)的菌株各25和55株。最小生成树结果提示变链素IV形成组菌株之间的等位基因差异少于变链素IV形成组和无变链素形成组组间菌株,并且变链素IV形成组菌株间起源类似。80株变异链球菌临床株中共检测到34个单碱基突变位点,其中有4个碱基突变(C31T、G533A、C756T、C1036T)在组间存在差异(P分别为0.001、<0.001、0.025及0.003)。这些差异分布的突变均与变链素IV的形成呈正相关。结论变异链球菌临床株sepM基因中存在与变链素IV形成相关的突变类型。

关键词： sepM基因基因突变变链素IV 变异链球菌