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基于GEO数据库结合网络药理学和分子对接技术探究玉竹抗抑郁作用机制

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食品工业科技 2025年第1期46卷 359-366页

作者：姜振旭王朝兴王宇亮赵宏沈宇孙诗晴马永哲宋明明张宇佳木斯大学药学院黑龙江佳木斯154007 黑龙江省新药创制与药效毒理评价重点实验室黑龙江佳木斯154007

目的:基于生物信息学和网络药理学方法筛选玉竹治疗抑郁症的潜在药物靶点和信号通路,并通过PC12细胞实验初步证实其抗抑郁药效。方法:下载GSE98793表达矩阵和GPL570平台信息进行差异表达基因筛选;通过检索TCMSP数据库进行成分筛选,利用C... 详细信息

目的:基于生物信息学和网络药理学方法筛选玉竹治疗抑郁症的潜在药物靶点和信号通路,并通过PC12细胞实验初步证实其抗抑郁药效。方法:下载GSE98793表达矩阵和GPL570平台信息进行差异表达基因筛选;通过检索TCMSP数据库进行成分筛选,利用Cytoscape3.7.1软件,构建玉竹“药物-成分-靶点”相互作用网络图和PPI网络图;利用DAVID数据库,进行GO和KEGG富集分析;使用SYBYL-X 2.0软件对主要活性成分及靶点进行分子对接验证;采用谷氨酸(Glu)诱导PC12细胞模型后,将玉竹醇提物按低、中、高剂量进行分组给药,考查其对PC12细胞损伤的保护作用。结果:筛选得到玉竹抗抑郁活性成分23个,活性靶点34个;“药物-成分-靶点”网络图显示棕榈酸、月桂酸、(+)-雪松醇等为玉竹抗抑郁的主要活性成分;PPI网络图显示PTGS2、PTGS1、SLC6A2、GABRA1、TNF等为关键靶点;通过GO富集分析得到GO条目共209个,其中包括生物过程(BP)149个,细胞组分(CC)23个,分子功能(MF)37个;主要涉及Chemical carcinogenesis-receptor activation、Small cell lung cancer和Adipocytokine signaling pathway等信号通路;分子对接结果显示,玉竹主要活性成分与抑郁症主要靶点对接结果具有良好稳定性;体外细胞实验结果表明,600μg/mL的玉竹醇提物对Glu诱导的PC12细胞损伤具有明显恢复作用。结论:玉竹可能通过炎症反应、氧化应激和前列腺素合成等途径发挥抗抑郁作用。

关键词：玉竹抑郁症网络药理学 GEO 数据库作用机制

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毛细管柱固定蛋白质方法的研究进展

分析化学 2009年第6期37卷 929-934页

作者：陈文静凌笑梅北京大学药学院药物分析教研室

在熔融石英毛细管中,固定化的蛋白质(酶)在手性拆分、蛋白质肽谱、药物筛选、样品预浓缩等方面具有重要应用。本文对用于毛细管中蛋白质固定的溶胶-凝胶法、物理吸附法、离子鳌合吸附法、基于脂质的蛋白固定和共价键合法进行了综述。

关键词：蛋白质固定溶胶-凝胶法物理吸附法离子鳌合吸附法脂质固定蛋白共价键合评述

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HPLC测定四方蒿中总木犀草素苷的含量

中国药学杂志 2005年第8期40卷 618-620页

作者：汪凤梅姚彤炜曾苏浙江大学药学院药物分析研究室

目的建立用反相高效液相色谱法测定四方蒿提取浸膏中主要黄酮苷(木犀草素)含量的方法。方法以ODS C18柱为分析柱,PH 2.0磷酸缓冲液-四氢呋喃-异丙醇(70:30:5)为流动相,检测波长为360 nm结果该黄酮水解后的苷元——木犀草素线性关系良好... 详细信息

目的建立用反相高效液相色谱法测定四方蒿提取浸膏中主要黄酮苷(木犀草素)含量的方法。方法以ODS C18柱为分析柱,PH 2.0磷酸缓冲液-四氢呋喃-异丙醇(70:30:5)为流动相,检测波长为360 nm结果该黄酮水解后的苷元——木犀草素线性关系良好,在高、中、低浓度的日内精密度分别是2.82%,3 41%,5.17%;日间精密度分别是2.56%,5.46%,6.87%; 标准曲线线性0.999 9;检测限为50 ng·mL-1,定量限为(2.40±0.13)μg·mL-1,方法回收率为高、中、低分别是101.28%, 105.58%,95.56%。结论木犀草素苷含量为(3.12±0.15)% 此法操作简便,准确率。

关键词：四方蒿木犀草素高效液相色谱

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重组大鼠长链2-羟酸氧化酶的克隆与表达

中国药学杂志 2013年第5期48卷 331-336页

作者：苏晨余露山姚彤炜曾苏浙江大学药学院药物分析与药物代谢实验室杭州310058

目的克隆表达大鼠长链2-羟酸氧化酶。方法以鼠肾cDNA为模板,扩增大鼠长链2-羟酸氧化酶基因,连接到pET-28a(+)载体上构建重组质粒pET28a-rHao2,转化表达宿主Rosetta(DE3)。利用IPTG诱导重组蛋白的表达,并通过Ni柱纯化。通过监测DCIP在605... 详细信息

目的克隆表达大鼠长链2-羟酸氧化酶。方法以鼠肾cDNA为模板,扩增大鼠长链2-羟酸氧化酶基因,连接到pET-28a(+)载体上构建重组质粒pET28a-rHao2,转化表达宿主Rosetta(DE3)。利用IPTG诱导重组蛋白的表达,并通过Ni柱纯化。通过监测DCIP在605 nm处吸光度值的变化来测定其对经典底物的酶动力学参数,验证活性。结果成功构建了表达质粒pET28a-rHao2(β1)和pET28a-rHao2(β2),并诱导表达了大鼠长链2-羟酸氧化酶两种同工酶β1和β2,其对2-羟基辛酸的Km分别为(25.1±1.9)和(24.6±1.2)μmol.L-1;对2-羟基异己酸的Km分别为(24.6±2.3)和(22.4±1.6)μmol.L-1。结论成功克隆表达了大鼠长链2-羟酸氧化酶两种同工酶β1和β2,获得了纯度高,活性好的重组酶,可为其体外底物及抑制剂的筛选提供模型。

关键词：长链2-羟酸氧化酶克隆表达

HPLC-ELSD在肝微粒体中银杏萜内酯的测定及其代谢研究中的应用

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中国药学杂志 2005年第22期40卷 1745-1748页

作者：裘雅渔姚彤炜浙江大学药学院药物分析与药物代谢研究室

目的为研究银杏萜内酯的代谢作用机制和进一步开发利用,建立其体外代谢的HPLC-ELSD测定法。方法以Dia-monsilTMODS-C18为色谱柱;甲醇-水(37:63)为流动相,流速1.0mL·min-1;蒸发光散射检测器(ELSD)检测:漂移管温度60℃,雾化气(N2)压力0.2... 详细信息

目的为研究银杏萜内酯的代谢作用机制和进一步开发利用,建立其体外代谢的HPLC-ELSD测定法。方法以Dia-monsilTMODS-C18为色谱柱;甲醇-水(37:63)为流动相,流速1.0mL·min-1;蒸发光散射检测器(ELSD)检测:漂移管温度60℃,雾化气(N2)压力0.25MPa。鼠肝微粒体孵育液中银杏萜内酯用乙醚提取,空气流下挥干乙醚,残渣用适量流动相溶解,取40μL进样,测定剩余银杏内酯A,B,C和白果内酯的含量。对鼠肝微粒体孵育液中银杏萜内酯的HPLC-ELSD进行方法学研究,并应用于银杏萜内酯的体外代谢研究。结果白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C分别在3.30-133.60,6.8-136.0,5.40-109.0和3.6-72.0mg·L-1内呈现良好的线性关系,相关系数r分别为0.9936,0.9964,0.9959和0.9930(n=5)。测得定量限分别为3.30,6.80,5.40和3.60mg·L-1(RSD<15%,n=3);检测限分别为12,32,20和16ng(S/N=3);方法回收率分别为85.9%-102.9%,85.9%-98.3%,88.6%-98.9%和85.4%-101.8%(n=5),日内、日间精密度小于10.5%。孵育液中其他成分不干扰银杏萜内酯的测定。结论本法简便、准确,可用于银杏萜内酯的体外代谢研究。

关键词：银杏内酯微粒体药物代谢高效液相色谱法蒸发光散射检测器

人细胞色素P450 3A4突变体CYP3A4.3,CYP3A4.4,CYP3A4.5和CYP3A4.18重组酶的异源表达与活性

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中国药理学与毒理学杂志 2009年第6期23卷 456-463页

作者：王晓雯曾苏浙江大学药学院药物分析与药物代谢实验室浙江杭州310058

目的重组表达人细胞色素P450(CYP)3A4突变体CYP3A4.3,CYP3A4.4,CYP3A4.5和CYP3A4.18蛋白,为CYP3A4代谢活性的体外研究提供单一酶源。方法应用杆状病毒表达系统构建含有上述各CYP3A4突变体基因序列的重组病毒,将其连同含人源还原型烟酰... 详细信息

目的重组表达人细胞色素P450(CYP)3A4突变体CYP3A4.3,CYP3A4.4,CYP3A4.5和CYP3A4.18蛋白,为CYP3A4代谢活性的体外研究提供单一酶源。方法应用杆状病毒表达系统构建含有上述各CYP3A4突变体基因序列的重组病毒,将其连同含人源还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸-P450氧化还原酶(POR)和细胞色素b5基因的重组病毒共同感染昆虫草地夜蛾细胞Sf9得到CYP3A4突变体与POR和细胞色素b5共表达的重组蛋白,分别以高效液相色谱法和荧光分析法测定各重组酶对睾酮和7-甲氧基-4-三氟甲基香豆素的代谢活性。结果在mRNA分子水平上验证了CYP3A4突变体CYP3A4*3,CYP3A4*4,CYP3A4*5和CYP3A4*18基因在Sf9细胞中的转录。感染了各重组病毒的Sf9细胞裂解液对睾酮和7-苄氧基-4-三氟甲基香豆素有明显代谢。结论应用杆状病毒-昆虫细胞表达系统在体外成功表达了具有催化活性的人CYP3A4突变体CYP3A4.3,CYP3A4.4,CYP3A4.5和CYP3A4.18蛋白,其中CYP3A4.5活性显著低于野生型蛋白,CYP3A4.18活性显著高于野生型蛋白,而CYP3A4.3和CYP3A4.4与野生型蛋白活性近似。

关键词：细胞色素P450CYP3A4 突变杆状病毒科睾酮

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多波长K系数法测定氯芬待因复方片剂的含量

光谱学与光谱分析 1999年第3期19卷 476-477页

作者：张兰桐和悦王春英周月绵张爱华刘伟娜张振华河北医科大学药学院药物分析教研室

本文报道了多波长Ｋ系数法测定氯芬待因复方片剂中双氯芬酸钠、磷酸可待因两组分含量的研究。结果表明，双氯芬酸钠在１１．１８～２５．４０μｇ／ｍＬ、磷酸可待因在６．７８５～１５．４２μｇ／ｍＬ范围内ΔＡ值与浓度线性关系良好... 详细信息

本文报道了多波长Ｋ系数法测定氯芬待因复方片剂中双氯芬酸钠、磷酸可待因两组分含量的研究。结果表明，双氯芬酸钠在１１．１８～２５．４０μｇ／ｍＬ、磷酸可待因在６．７８５～１５．４２μｇ／ｍＬ范围内ΔＡ值与浓度线性关系良好，回归方程分别为ΔＡ双＝－０．００６７４ｃ双－１．４１８５×１０－３，ｒ＝０．９９９６；ΔＡ＝－０．０１３０ｃ可－１．８２２×１０－３，ｒ＝０．９９９８。双氯芬酸钠和磷酸可待因的平均回收率及相对标准偏差分别为１００．１％，０．３６％；１００．７％，０．８０％。方法简便，快速，结果满意。

关键词：双氯芬酸钠磷酸可待因氯芬待因复方片剂测定

Madaline网络分离重叠光谱峰在灰色体系分析中的应用

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分析化学 1999年第8期27卷 875-880页

作者：方慧生吴玉田陈斌第二军医大学药学院药物分析教研室第二军医大学药学院药物分析教研室上海200433

将Madaline网络分离重叠光谱峰法应用于组成范围已知的灰色体系进行分析.模拟数据研究表明:当测量误差在[-0.005,+0.005]范围内,且所含组分峰形相同但峰位不同时,最低检测限是峰位差不小于1.5nm.15个实际样品分析表明:本法能给出比较满... 详细信息

将Madaline网络分离重叠光谱峰法应用于组成范围已知的灰色体系进行分析.模拟数据研究表明:当测量误差在[-0.005,+0.005]范围内,且所含组分峰形相同但峰位不同时,最低检测限是峰位差不小于1.5nm.15个实际样品分析表明:本法能给出比较满意的分析结果.它为组成范围已知的灰色体系分析提供了一种新途径.

关键词：多重自适应线性神经网络灰色体系

Madaline网络分离重叠光谱峰及其在多组分同时分析中的应用

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分析化学 1999年第1期27卷 14-19页

作者：方慧生吴玉田朱臻宇第二军医大学药学院药物分析教研室第二军医大学药学院药物分析教研室上海200433

首先应用Madaline网络分离混合物中各组分的重叠光谱峰,然后对感兴趣的组分进行测定.一个两组分混合物的分析表明:本法的分析的结果优于偏最小二乘法的分析结果.

关键词：神经网络重叠光谱偏最小二乘法