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失活ChiA和v-cath基因的重组BmNPV表达hGM-CSF

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生物化学与生物物理进展 2005年第10期32卷 947-952页

作者：贡成良薛仁宇曹广力石晓燕沈卫德苏州大学生命科学学院苏州215123

利用DNA同源重组技术使家蚕核型多角体病毒的多角体蛋白基因取代v-cath、ChiA两基因的部分编码区域和共同的启动子区域,获得了v-cath、ChiA两基因同时失活的、可形成多角体的、并能表达人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的重组病毒BmNPVpol... 详细信息

利用DNA同源重组技术使家蚕核型多角体病毒的多角体蛋白基因取代v-cath、ChiA两基因的部分编码区域和共同的启动子区域,获得了v-cath、ChiA两基因同时失活的、可形成多角体的、并能表达人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的重组病毒BmNPVpolh+CP-ChiA-GMCSF+.研究结果显示:v-cath、ChiA两基因的失活不影响病毒的复制及多角体的形成,但感染细胞的存活时间比野生病毒感染的多2天,可明显改善外源基因在培养细胞和家蚕中的表达水平;感染BmNPVpolh+CP-ChiA-GMCSF+的家蚕幼虫体表保持正常,无野生病毒感染后引起的破皮流脓现象.

关键词：家蚕核型多角体病毒半胱氨酸蛋白酶几丁质酶人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子

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Ⅰ型内含子核酶研究进展

生物化学与生物物理进展 2003年第3期30卷 363-369页

作者：李志杰张翼武汉大学生命科学学院武汉430072 武汉大学生命科学学院生物技术系武汉430072

Ⅰ型内含子核酶作为最早被发现的RNA催化剂 ,在过去 2 0年里得到了深入研究 .相关研究成果使人们在RNA的生物学功能、催化特征、结构与折叠特征等方面的认识有了革命性更新 .回顾了Ⅰ型内含子核酶研究的主要进展 ,重点对近年来在Ⅰ型内... 详细信息

Ⅰ型内含子核酶作为最早被发现的RNA催化剂 ,在过去 2 0年里得到了深入研究 .相关研究成果使人们在RNA的生物学功能、催化特征、结构与折叠特征等方面的认识有了革命性更新 .回顾了Ⅰ型内含子核酶研究的主要进展 ,重点对近年来在Ⅰ型内含子核酶的结构和折叠方面所取得的重要成果进行了介绍。

关键词： Ⅰ型内含子核酶催化结构折叠 RNA催化剂

胰岛素原基因的高效分泌表达系统——甲醇酵母Pichia pastoris

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浙江大学学报（工学版） 2005年第7期39卷 1091-1095页

作者：吴颖钱凯先浙江大学生命科学学院生物技术系浙江杭州310027

为了提高重组人胰岛素的表达效率,使用了近年发展起来的真核表达系统-甲醇酵母Pichia pastoris. Pichia pastoris以甲醇为其惟一碳源,而乙醇氧化酶基因的启动子是强启动子,可用来调控异源蛋白的表达.该系统具有操作技术简单,可进行高水... 详细信息

为了提高重组人胰岛素的表达效率,使用了近年发展起来的真核表达系统-甲醇酵母Pichia pastoris. Pichia pastoris以甲醇为其惟一碳源,而乙醇氧化酶基因的启动子是强启动子,可用来调控异源蛋白的表达.该系统具有操作技术简单,可进行高水平的胞内或胞外表达,及对表达产物进行翻译后修饰与加工等显著优点.将含有小C肽或不含有C肽的人胰岛素原类似物基因整合到酵母基因组上来发酵生产人胰岛素原,在表达量上,每升发酵液中可以得到胰岛素原250～300mg,分泌水平约占总蛋白量的20%,重组人胰岛素具有与猪胰岛素相同的受体结合能力和生物活性.

关键词：胰岛素原甲醇酵母 Pichia pastoris 乙醇氧化酶(AOX) 表达系统

大鼠慢波睡眠和睡眠过渡期脑电信号的小波变换分析(英文)

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生物化学与生物物理学报 2003年第8期35卷 741-746页

作者：封洲燕浙江大学生命科学学院生物技术系杭州310027

EEG信号经常包含许多快速的时变信息 ,将较长时间段的EEG信号近似看作平稳信号 ,进行FFT谱估计 ,存在其局限性。应用多分辨率小波变换方法 ,在频域和时域上可以同时定位分析大鼠慢波睡眠和睡眠过渡期脑电的动态变化特性。采用慢性埋植... 详细信息

EEG信号经常包含许多快速的时变信息 ,将较长时间段的EEG信号近似看作平稳信号 ,进行FFT谱估计 ,存在其局限性。应用多分辨率小波变换方法 ,在频域和时域上可以同时定位分析大鼠慢波睡眠和睡眠过渡期脑电的动态变化特性。采用慢性埋植电极记录自由活动大鼠的皮层脑电 ,将信号用小波变换分解成δ、θ、α和 β四个分量 ,求各分量的功率和功率百分比的时间变化曲线 ,并与FFT功率谱分析结果进行比较。结果表明 :慢波睡眠期EEG中有 2 6 .2 %± 7.7%的时间段上δ分量功率小于总功率的 5 0 % ,且δ分量较大时 ,其他分量较小 ;δ分量较小时 ,其他分量较大 ,差别显著。此结果揭示了δ节律与θ和α节律之间的一种互补关系。而传统的FFT功率谱分析方法只能显示δ分量为主 (占总功率 70 .6 %± 6 .4 % )的功率谱 ,不能提供时变信息。对于睡眠过渡期的非稳态EEG信号 ,利用小波变换分解得到的θ和α分量可以鉴别出睡眠纺锤波 ,计算睡眠纺锤波的平均持续时间 ,并比较纺锤波和非纺锤波时期各个频谱分量的变化情况。由此可见 ,小波变换可用于计算新的EEG时频定量分析指标用于分析生理、病理和药理作用引起的睡眠EEG的变化过程 ,以弥补传统FFT功率谱分析的不足之处

关键词：小波变换 EEG 慢波睡眠睡眠过渡期 FFT功率谱

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噬菌体展示技术及其在弓形虫研究中的应用

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2004年第5期22卷 309-311页

作者：谭红岩李勤王媛媛钱旻华东师范大学生命科学学院上海200062 苏州大学生命科学学院生物技术系苏州215007

将病原体的免疫原与λ噬菌体或其他病毒的衣壳蛋白融合后一起展示于病毒表面,这样形成的新的病毒颗粒可用作疫苗.Smith[1]通过基因工程手段将外源基因插入到丝状噬菌体的PⅢ蛋白基因中,成功地使外源多肽展示在噬菌体的表面,而且用抗体... 详细信息

将病原体的免疫原与λ噬菌体或其他病毒的衣壳蛋白融合后一起展示于病毒表面,这样形成的新的病毒颗粒可用作疫苗.Smith[1]通过基因工程手段将外源基因插入到丝状噬菌体的PⅢ蛋白基因中,成功地使外源多肽展示在噬菌体的表面,而且用抗体检测发现该外源多肽具有同天然产物相同的生物活性.这标志着噬菌体展示技术的诞生.而Geysen等[2]认为含有关键残基的短肽能够模拟蛋白质上的功能位点,而且多数情况下,几个关键残基与其受体所形成的非共价键构成了全部结合的主要部分.这就为噬菌体展示技术奠定了理论基础.

关键词：弓形虫噬菌体展示技术多肽丝状噬菌体病原体免疫原病毒颗粒外源基因蛋白基因基因工程

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人源microRNA分子表达库的构建

生物化学与生物物理进展 2007年第4期34卷 389-394页

作者：崔军付汉江冯军军朱捷铁轶邢瑞云汪成富郑晓飞军事医学科学院放射与辐射医学研究所苏州大学生命科学学院苏州215123 苏州大学生命科学学院

microRNA(miRNA)是一类长度为22nt左右的单链非编码小RNA分子,通过与靶mRNA分子结合而沉默其表达.目前,虽然在多种生物中发现了大量的miRNA,但对它们的功能还知之甚少.为了深入研究miRNA的功能,构建了一个包括170多种人源miRNA表达载体... 详细信息

microRNA(miRNA)是一类长度为22nt左右的单链非编码小RNA分子,通过与靶mRNA分子结合而沉默其表达.目前,虽然在多种生物中发现了大量的miRNA,但对它们的功能还知之甚少.为了深入研究miRNA的功能,构建了一个包括170多种人源miRNA表达载体的miRNA分子表达库,并对部分表达载体采用RNA印迹及双荧光素酶分析技术进行验证.实验证明:这些miRNA表达载体在HEK-293细胞内可以高水平表达miRNA前体和成熟的miRNA,并且能抑制含有相应靶位点的报告基因的表达.这些结果表明:该miRNA表达库可以表达功能miRNA,并可用于miRNA功能的筛选和研究.

关键词： miRNA 表达库功能筛选

重组人ICOS蛋白在大肠杆菌中的表达及其对B细胞活性的作用(英文)

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第7期35卷 601-605页

作者：邓忠彬陆长明黄伟达沈丽琴朱伟马泓冰范盘生张学光复旦大学生命科学学院生物化学系苏州大学生物技术研究所苏州大学生物技术研究所苏州215007 上海200433

ICOS (induciblecostimulator)是一种表达在活化T细胞上的新型共刺激分子 ,它的配体GL5 0组成性表达在B细胞及巨噬细胞上。ICOS可以促使Th2细胞的分化 ,能促进IL 4、IL 10的分泌。从扁桃体中克隆到ICOS基因 ,构建了PET ICOS重组载体 ,... 详细信息

ICOS (induciblecostimulator)是一种表达在活化T细胞上的新型共刺激分子 ,它的配体GL5 0组成性表达在B细胞及巨噬细胞上。ICOS可以促使Th2细胞的分化 ,能促进IL 4、IL 10的分泌。从扁桃体中克隆到ICOS基因 ,构建了PET ICOS重组载体 ,并在大肠杆菌中得到高效表达 ,经SDS电泳及Western印迹法鉴定 ,所获得的蛋白质为特异性目的蛋白质。继而利用ICOS联合IL 10以及PWM驱动的B细胞体外培养系统 ,分析了ICOS在B细胞生长及抗体产生中的作用。结果表明 ,ICOS在PWM体外培养体系中 ,能有效地促进B细胞生长以及协同IL 10增加IgG的分泌。

关键词：共刺激分子 ICOS蛋白大肠杆菌抗体

盐生盐杆菌RM07 DNA片段在大肠杆菌中的定点诱变和启动子功能分析

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Acta Genetica Sinica 2004年第5期31卷 525-532页

作者：杨洋沈萍武汉大学生命科学学院生物技术系武汉430072

将来源于嗜盐古生菌———盐生盐杆菌 (Halobacteriumhalobium)基因组的RM0 7DNA片段以正反两个方向分别插入大肠杆菌启动子探针载体pKK2 32 8携带的报告基因———氯霉素抗性基因 (cat)的上游 ,得到RM0 7 cat融合的质粒pRM0 7 1(+)和p... 详细信息

将来源于嗜盐古生菌———盐生盐杆菌 (Halobacteriumhalobium)基因组的RM0 7DNA片段以正反两个方向分别插入大肠杆菌启动子探针载体pKK2 32 8携带的报告基因———氯霉素抗性基因 (cat)的上游 ,得到RM0 7 cat融合的质粒pRM0 7 1(+)和pRM0 7 1(- ) ,将其分别转入大肠杆菌HB10 1,进而检测了不同转化子菌株的氯霉素抗性水平和细胞内氯霉素乙酰转移酶蛋白质浓度。结果表明 :正向的RM0 7片段在真细菌 (大肠杆菌 )中具有启动子活性 ,能够驱动cat报告基因的表达 ;而反向的RM0 7片段在大肠杆菌中不具有启动子活性。对RM0 7片段进行了定点诱变分析 ,检测了特定核苷酸突变对启动子活性的影响 ,结果进一步精确定位了RM0 7片段中对在大肠杆菌中的启动子功能有重要作用的关键碱基 ,并且通过改造RM0 7片段的碱基组成成分大幅提高了其在大肠杆菌中的启动子活性。

关键词：盐生盐杆菌大肠杆菌启动子功能

ZNF268基因启动子区的克隆及功能分析(英文)

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Acta Genetica Sinica 2004年第3期31卷 221-226页

作者：彭晓孙燕刘辉苟德明李文鑫武汉大学生命科学学院生物技术系武汉430072

锌指基因家族是人体中最大的基因家族 ,它参与细胞分化、胚胎发育 ,并与许多疾病的发生相关。人类ZNF2 68基因是一个在人胚肝中特异性表达的C2 H2 型锌指基因 ,并可能在人的早期肝脏发育中起重要作用。为了研究ZNF2 68基因表达调控的分... 详细信息

锌指基因家族是人体中最大的基因家族 ,它参与细胞分化、胚胎发育 ,并与许多疾病的发生相关。人类ZNF2 68基因是一个在人胚肝中特异性表达的C2 H2 型锌指基因 ,并可能在人的早期肝脏发育中起重要作用。为了研究ZNF2 68基因表达调控的分子机制 ,以正常人总基因组为模板PCR扩增了ZNF2 68基因的 5′调控区 2 53 3bp片段 ,并将此片段插入启动子缺失的EGFP(增强型绿色荧光蛋白 )载体构建了重组质粒pZNF2 68 EGFP。用脂质体介导的方法将pZNF2 68 EGFP转染NIH 3T3、COS7、K562、HeLa 4个细胞系。在激光共聚焦显微镜下观察绿色荧光的表达 ,发现在每个细胞系中 ,转染了重组质粒pZNF2 68 EGFP的细胞均有荧光表达 ,但其起始表达时间均晚于转染了阳性对照质粒pEGFP C1的细胞且荧光较弱。这表明ZNF2 68基因的 5′调控区 2 5kb片段是一个有功能的启动子 ,但该启动子与CMV启动子相比活性较弱。选择易培养的HeLa细胞系用于缺失研究。将一系列 5′端 -2 456bp至-2 0bp缺失、3′端均为 + 77bp的缺失片段插入启动子缺失的CAT(氯酶素酰胺转移酶 )载体构建了一系列重组质粒。将这些重组质粒转染HeLa细胞系进行缺失分析 ,并通过共转染pCMV Sport βgal质粒校正转染效率。结果表明 ,ZNF2 68启动子 -2 456～ -163

关键词： ZNF268基因启动子克隆转录调控