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鼠抗沙眼衣原体Tarp蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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南方医科大学学报 2010年第10期30卷 2219-2223页

作者：王洁张颖骞钟光明余平中南大学基础医学院免疫学系湖南长沙410078 美国德克萨斯大学圣安东尼奥健康科学中心微生物学免疫学系

目的制备抗衣原体Tarp蛋白的单克隆抗体,为探讨Tarp蛋白的生物学特性及功能提供实验工具。方法克隆表达沙眼衣原体血清型D重组Tarp融合蛋白,并以其为免疫原免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行常规融合,应用间接免... 详细信息

目的制备抗衣原体Tarp蛋白的单克隆抗体,为探讨Tarp蛋白的生物学特性及功能提供实验工具。方法克隆表达沙眼衣原体血清型D重组Tarp融合蛋白,并以其为免疫原免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行常规融合,应用间接免疫荧光法筛选阳性克隆和有限稀释克隆化,获得鼠抗沙眼衣原体血清型DTarp蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,ELISA法鉴定单克隆抗体的抗Tarp特异性,并应用间接免疫荧光法鉴定单克隆抗体的亚类和衣原体种属特异性。结果成功克隆表达了重组GST-Tarp融合蛋白,其相对分子质量约为136kDa;成功地建立了7株稳定分泌抗Tarp蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株;7株单克隆抗体均特异性的识别Tarp蛋白而不识别其他衣原体性蛋白;2株单克隆抗体(R5B6.2和R8G7.2)的免疫球蛋白亚类为IgG2a,其余5株单克隆抗体(R4D5,R2H1.2,R12B12,R2H7和R5G8.1)的免疫球蛋白亚类均为IgG1;7株单克隆抗体全部特异性识别衣原体血清型A、D、L2,而不识别MoPn、6BC和AR39。结论获得了特异性识别沙眼衣原体血清型DTarp蛋白的单克隆抗体,为Tarp蛋白的结构及生物学功能研究奠定了基础。

关键词：沙眼衣原体 Tarp 单克隆抗体

赖氨酰氧化酶LOXL2稳定性的理论计算研究

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中国生物化学与分子生物学报 2024年第5期40卷 685-695页

作者：林李锐林凯邹海鹰许丽艳李恩民东庚汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室广东汕头515041 汕头大学医学院生物信息学教研室广东汕头515041 汕头大学医学院医学信息学研究中心广东汕头515041 汕头大学医学院广东省沿海高发地区分子生物学重点实验室广东汕头515041 汕头大学医学院肿瘤研究中心广东汕头515041 汕头市医学科学院广东汕头515041

赖氨酰氧化酶LOXL2是一种依赖于铜离子的胺氧化酶,催化胶原蛋白和弹性蛋白的赖氨酸残基侧链发生氧化脱氨,发挥着稳固细胞外基质的作用。而稳定性是蛋白质的一个重要特性,直接影响蛋白质的分子动态及其正常功能发挥,这与人类的健康和疾... 详细信息

赖氨酰氧化酶LOXL2是一种依赖于铜离子的胺氧化酶,催化胶原蛋白和弹性蛋白的赖氨酸残基侧链发生氧化脱氨,发挥着稳固细胞外基质的作用。而稳定性是蛋白质的一个重要特性,直接影响蛋白质的分子动态及其正常功能发挥,这与人类的健康和疾病密切相关。然而,关于LOXL2的稳定性目前鲜有报道,哪些位点对其稳定性有显著影响尚不清楚。本研究采用冷冻电镜和Alphafold2的数据,建立LOXL2的全长结构,通过分子动力学模拟得到其优化构象。再通过4种方法(mCSM,PremPS,DeepDDG和FoldX),计算所有位点的稳定性属性,筛选出对稳定性有显性影响的位点(定义为关键位点)。结果表明,95个关键位点对LOXL2的稳定性具有显著影响,在5个结构域上的分布数量依次为14、13、8、11和26,而结构域间的连接肽段上也有23个关键位点。在这些关键位点中,类型及数量分别为Leu(24个)、Val(20个)、Ile(12个)、Trp(11个)、Phe(11个)、Tyr(6个)、Cys(6个)、Met(4个)和Arg(1个)。其中大部分关键位点(88个)为疏水性质,这与蛋白质折叠的主要力量为疏水作用的情况是一致的,而Cys两两成对,构成二硫键,对LOXL2的结构及功能发挥重要作用。讨论中,我们将预测结果与实验值进行比较,并用自由能微扰方法,对部分关键位点进行比较,从多方面论证此项工作的可信度。此项研究,可为靶向LOXL2的疾病治疗研究,提供重要指导。

关键词：赖氨酰氧化酶样2 稳定性分子动力学模拟计算预测吉布斯自由能

慢性间歇性低氧激活NLRP1炎性小体引起小鼠肝损伤

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第4期40卷 327-332页

作者：余孝海孙敏琼汪金丽张森安徽医科大学基础医学院机能学实验中心安徽合肥230032 安徽城市管理职业学院健康养老学院公共管理教研室安徽合肥230011

目的探讨慢性间歇性低氧(CIH)是否能激活含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白1(NLRP1)炎性小体引起肝损伤。方法将C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、 CIH组。CIH组小鼠放入CIH仓进行造模(每天8 h,连续4周)。造模后,采用H... 详细信息

目的探讨慢性间歇性低氧(CIH)是否能激活含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白1(NLRP1)炎性小体引起肝损伤。方法将C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、 CIH组。CIH组小鼠放入CIH仓进行造模(每天8 h,连续4周)。造模后,采用HE染色观察肝组织细胞形态、试剂盒检测小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平,二氢乙啶(DHE)标记检测肝组织活性氧(ROS)的水平,免疫组织化学染色法检测小鼠肝组织NLRP1、含胱天蛋白酶激活和募集结构域凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和胱天蛋白酶1(caspase-1)的表达和定位,Western blot法检测小鼠肝组织中NLRP1、 ASC、 caspase-1、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的蛋白表达,ELISA检测小鼠血清IL-1β、 TNF-α水平。结果与对照组相比,CIH组肝细胞病变明显,细胞出现破裂、坏死、炎症细胞聚集,ALT、 AST、 ROS、 IL-1β和TNF-α水平显著升高;NLRP1、 ASC、caspase-1、IL-1β和TNF-α的蛋白表达升高。结论 CIH通过激活NLRP1炎性小体引起肝损伤。

关键词：慢性间歇性低氧(CIH) 炎性小体(inflammasome) 肝损伤活性氧(ROS)

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人线粒体tRNA修饰与疾病

中国细胞生物学学报 2024年第9期 1623-1634页

作者：张勇周小龙核糖核酸功能与应用全国重点实验室中国科学院分子细胞科学卓越创新中心/生物化学与细胞生物学研究所中国科学院大学国科大杭州高等研究院生命与健康科学学院浙江省系统健康科学重点实验室

人线粒体作为细胞中重要的能量工厂,拥有自己的基因组。线粒体基因组编码2种rRNA和22种tRNA,用于翻译产生13种氧化磷酸化复合物亚基。线粒体t RNA(mt-tRNA)作为接头分子携带特定氨基酸参与线粒体蛋白质合成。线粒体tRNA上含有18种转录... 详细信息

人线粒体作为细胞中重要的能量工厂,拥有自己的基因组。线粒体基因组编码2种rRNA和22种tRNA,用于翻译产生13种氧化磷酸化复合物亚基。线粒体t RNA(mt-tRNA)作为接头分子携带特定氨基酸参与线粒体蛋白质合成。线粒体tRNA上含有18种转录后修饰。这些修饰对于稳定tRNA结构,介导密码子与反密码子的相互作用具有重要作用。因此,线粒体t RNA修饰水平和修饰酶的异常变化与线粒体功能紊乱及疾病的发生发展密切相关。该文综述部分线粒体tRNA修饰的研究进展并介绍它们与线粒体脑肌病、神经系统疾病和癌症的关系。

关键词：线粒体 tRNA修饰线粒体脑肌病神经系统疾病癌症

RNA的冷冻电镜结构研究与结构预测方法发展

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生命的化学 2024年第9期44卷 1591-1601页

作者：彭嘉豪李祖洋丛尧中国科学院分子细胞科学卓越创新中心上海生物化学与细胞生物学研究所核糖核酸功能与应用重点实验室中国科学院大学国科大杭州高等研究院生命与健康科学学院中国科学院大学浙江省系统健康科学重点实验室

近十年来冷冻电镜技术飞速发展，应用冷冻电镜解析的蛋白质结构数量迅速增加，各类结构预测软件也日臻成熟，蛋白质高级结构的准确性和预测精度和速度得到了巨大提升。作为功能载体和遗传信息的中间体，RNA的潜在应用正不断地被发掘，... 详细信息

近十年来冷冻电镜技术飞速发展，应用冷冻电镜解析的蛋白质结构数量迅速增加，各类结构预测软件也日臻成熟，蛋白质高级结构的准确性和预测精度和速度得到了巨大提升。作为功能载体和遗传信息的中间体，RNA的潜在应用正不断地被发掘，相关药物和疫苗研究蓬勃发展。但相较于蛋白质结构研究，RNA三维结构解析和预测仍面临挑战和机遇。本文将从RNA的冷冻电镜结构解析及其解析新策略、RNA结构预测方法和软件发展三个方面入手，介绍其高级结构的研究进展，旨在为RNA新结构的解析、功能型RNA的发现和RNA药物设计提供参考。

关键词： RNA 冷冻电镜三维结构结构预测

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生物化学与生物物理进展 2024年第8期51卷 1848-1859页

作者：张帅刘森湖北工业大学生命科学与健康工程学院工业发酵省部共建协同创新中心武汉430068 湖北工业大学生命科学与健康工程学院发酵工程教育部重点实验室武汉430068 湖北微生元生物科技有限公司鄂州436006

线粒体是细胞内能量代谢的中心,对于维持细胞稳态而言,其形态和功能的调控至关重要。小分子泛素相关修饰物蛋白(small ubiquitin-related modifier protein,SUMO)修饰和发动蛋白相关蛋白1(dynamin-related protein 1,DRP1)在细胞调控中... 详细信息

线粒体是细胞内能量代谢的中心,对于维持细胞稳态而言,其形态和功能的调控至关重要。小分子泛素相关修饰物蛋白(small ubiquitin-related modifier protein,SUMO)修饰和发动蛋白相关蛋白1(dynamin-related protein 1,DRP1)在细胞调控中扮演着重要角色,尤其与线粒体动力学密切相关。SUMO修饰是一种重要的蛋白质修饰形式,通过将靶蛋白与SUMO相连来调节这些蛋白质的功能。而DRP1是线粒体分裂蛋白,负责调节线粒体的形态和功能。近年来研究发现,SUMO修饰与DRP1之间存在复杂的相互作用网络,对于线粒体的分裂、融合、自噬等起着重要作用。在DRP1的可变结构域中,有8个赖氨酸残基可以在线粒体锚定蛋白连接酶(mitochondrial-anchored protein ligase,MAPL)的作用下完成SUMO修饰。并且不同亚型的SUMO蛋白对于DRP1功能的调节也不同。SUMO1修饰会使DRP1向线粒体富集,促进线粒体的分裂;SUMO2/3修饰会使DRP1向细胞质转移,减少线粒体的分裂。在实际的细胞程序中,不同亚型SUMO的修饰水平往往是由SUMO特异性蛋白酶(SUMO-specific proteases,SENPs)的类型决定。线粒体作为细胞中重要的能量供应细胞器,其动力学的异常往往会导致诸多疾病的发生,例如:心肌缺血再灌注性损伤、阿尔茨海默病、脑血栓、视网膜病变等。本文综述了SUMO修饰与DRP1之间相互作用对于线粒体动力学调控的研究进展,为进一步揭示细胞调控机制和发展相关疾病的治疗策略提供一定的参考。

关键词：线粒体动力学蛋白质翻译后修饰小分子泛素相关修饰物蛋白修饰发动蛋白相关蛋白1 线粒体分裂

卫矛醇通过调节Toll样受体4/髓样分化因子88/核因子-κB信号通路缓解脂多糖诱导的猪肠道上皮细胞损伤

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动物营养学报 2024年第6期36卷 3952-3962页

作者：王晗刘正群朱龙博李宁郑梓闫峻穆淑琴孙超西北农林科技大学动物科技学院杨凌712100 天津市农业科学院畜牧兽医研究所天津市畜禽分子育种与生物技术重点实验室天津市畜禽健康养殖工程技术中心天津300381

本试验旨在通过构建猪肠道上皮细胞(IPEC-J2细胞)经脂多糖(LPS)刺激后细胞损伤模型,揭示卫矛醇(DUL)对LPS处理后的IPEC-J2细胞屏障受损和炎症损伤的缓解作用及其可能的分子机制。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测IPEC-J2细胞活力,以确定... 详细信息

本试验旨在通过构建猪肠道上皮细胞(IPEC-J2细胞)经脂多糖(LPS)刺激后细胞损伤模型,揭示卫矛醇(DUL)对LPS处理后的IPEC-J2细胞屏障受损和炎症损伤的缓解作用及其可能的分子机制。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测IPEC-J2细胞活力,以确定LPS造模浓度(150μg/mL)和最佳DUL处理浓度(200μmol/L)。试验设3个组:对照(CON)组、LPS组和DUL组。IPEC-J2细胞贴壁后,CON组先用完全培养基处理24 h,然后用DMEM培养基处理24 h;LPS组先用完全培养基处理24 h,然后用含有150μg/mL LPS的DMEM培养基处理24 h;DUL组先用含有200μmol/L DUL的完全培养基处理24 h,然后用含有150μg/mL LPS的DMEM培养基处理24 h。观察各组IPEC-J2细胞生长状态,划痕试验评价细胞的迁移和增殖能力,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测屏障和炎症相关基因的mRNA和蛋白相对表达水平。结果表明:1)在IPEC-J2细胞上,确定200μmol/L的DUL为最佳处理浓度,150μg/mL的LPS为有效致炎浓度。2)相较于LPS组,DUL预处理缓解了细胞密度降低、细胞空泡增多、细胞边界不清晰的情况。3)相较于LPS组,DUL预处理显著增加了细胞迁移距离和细胞迁移面积(P细胞介素-1β(IL-1β)的mRNA和蛋白相对表达水平和Toll样受体4(TLR4)的蛋白相对表达水平以及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、白细胞介素-18(IL-18)的mRNA表达相对表达水平(P细胞屏障损伤和炎症反应。

关键词：卫矛醇 IPEC-J2细胞 TLR4/Myd88/NF-κB信号通路炎性损伤肠道屏障

罗望子多糖对无麸质马铃薯淀粉面糊特性及面包品质的影响

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食品科学 2024年第20期45卷 115-119+1+121-122页

作者：孙雨佳李帝明刘彦涛李鹏飞孙福生张艳杨楠湖北工业大学生命科学与健康工程学院菲利普斯亲水胶体研究中心湖北省食品胶体国际科技合作基地广西民族大学林产化学与工程国家民委重点实验室广西林产化学与工程重点实验室

本研究通过添加不同质量分数（0%、1%、2%、3%、4%，以淀粉质量计）的罗望子多糖（tamarind seed polysaccharide,TSP）赋予马铃薯淀粉面包类面筋特性，以改善无麸质面包的加工性能和质地品质。研究结果表明，添加TSP可以提高面糊的峰... 详细信息

本研究通过添加不同质量分数（0%、1%、2%、3%、4%，以淀粉质量计）的罗望子多糖（tamarind seed polysaccharide,TSP）赋予马铃薯淀粉面包类面筋特性，以改善无麸质面包的加工性能和质地品质。研究结果表明，添加TSP可以提高面糊的峰值黏度，改善面糊的黏弹性，赋予其类面筋的网络结构特性。随着TSP的添加，无麸质面包的烘焙损失率从26.01%显著降低至20.36%，面包比容也由1.27 mL/g增至最大值（3.19 mL/g）。TSP的加入显著改善了面包的质构特性，降低了面包的硬度、凝聚性、咀嚼性以及回复性，使面包呈现更松软的质地。添加TSP有利于延缓面包的老化，从而延长产品的保质期。采用主成分分析方法解析了面包品质、烘焙性能与原料糊化特性的相关性。本研究可拓展TSP的食品应用范围，并为无麸质淀粉产品的开发提供新思路和理论基础。

关键词：无麸质面包罗望子多糖烘焙性能主成分分析

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工程化细胞外囊泡的设计合成与生物医学应用

合成生物学 2024年第1期5卷 154-173页

作者：刘夺刘培源李连月王雅欣崔钰惠薛慧敏王汉杰天津大学生命科学学院天津市微纳生物材料与检疗技术工程中心天津市生物大分子结构功能与应用重点实验室天津300072 天津大学化工学院合成生物学前沿科学中心天津300072

近年来,细胞外囊泡因其与疾病发生发展密切相关而受到越来越广泛的关注。随着细胞外囊泡参与生命功能调控的机制被不断解析,利用细胞外囊泡作为药物载体,用于靶向治疗的工作也相继开展。细胞外囊泡作为药物载体,与人工载体相比,具有高... 详细信息

近年来,细胞外囊泡因其与疾病发生发展密切相关而受到越来越广泛的关注。随着细胞外囊泡参与生命功能调控的机制被不断解析,利用细胞外囊泡作为药物载体,用于靶向治疗的工作也相继开展。细胞外囊泡作为药物载体,与人工载体相比,具有高生物相容性、低免疫原性和良好的生物膜融合能力,同时有着参与细胞通信的归巢效应等天然优势。然而,细胞外囊泡的生物医学应用也存在表面修饰复杂、包载能力差、产量较低等问题,导致使用范围严重受限。工程化细胞外囊泡是指对天然细胞外囊泡进行人工改造,使其能够特异性靶向受体细胞或组织,实现所包载功能分子的精准递送,并支撑可放大生产的模式,从而展现出广阔的生物医学应用前景。合成生物学技术的引入,可实现底盘细胞的从头设计再造,支撑细胞外囊泡的标准化、模块化合成。本文首先概括了工程化细胞外囊泡的表面修饰、工程化细胞外囊泡的功能分子包载的方法和应用;其次总结了工程化细胞外囊泡的生产制备,如提升细胞外囊泡产量的工程化策略、细胞外囊泡的放大生产与提取纯化等;最后展望了合成生物学通过改造底盘细胞基因组、人工设计囊泡表面蛋白、调控分子包载的细胞过程等定制化合成细胞外囊泡的前景。合成生物学技术的发展与使用可推动工程化细胞外囊泡的定制化设计与合成,将进一步精细控制其属性、提升其效能、拓展其应用,争取将其早日广泛应用于人类健康事业。

关键词：细胞外囊泡生物医学工程化靶向治疗底盘细胞合成生物学