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鼠抗沙眼衣原体Tarp蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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南方医科大学学报 2010年第10期30卷 2219-2223页

作者：王洁张颖骞钟光明余平中南大学基础医学院免疫学系湖南长沙410078 美国德克萨斯大学圣安东尼奥健康科学中心微生物学免疫学系

目的制备抗衣原体Tarp蛋白的单克隆抗体,为探讨Tarp蛋白的生物学特性及功能提供实验工具。方法克隆表达沙眼衣原体血清型D重组Tarp融合蛋白,并以其为免疫原免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行常规融合,应用间接免... 详细信息

目的制备抗衣原体Tarp蛋白的单克隆抗体,为探讨Tarp蛋白的生物学特性及功能提供实验工具。方法克隆表达沙眼衣原体血清型D重组Tarp融合蛋白,并以其为免疫原免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行常规融合,应用间接免疫荧光法筛选阳性克隆和有限稀释克隆化,获得鼠抗沙眼衣原体血清型DTarp蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,ELISA法鉴定单克隆抗体的抗Tarp特异性,并应用间接免疫荧光法鉴定单克隆抗体的亚类和衣原体种属特异性。结果成功克隆表达了重组GST-Tarp融合蛋白,其相对分子质量约为136kDa;成功地建立了7株稳定分泌抗Tarp蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株;7株单克隆抗体均特异性的识别Tarp蛋白而不识别其他衣原体性蛋白;2株单克隆抗体(R5B6.2和R8G7.2)的免疫球蛋白亚类为IgG2a,其余5株单克隆抗体(R4D5,R2H1.2,R12B12,R2H7和R5G8.1)的免疫球蛋白亚类均为IgG1;7株单克隆抗体全部特异性识别衣原体血清型A、D、L2,而不识别MoPn、6BC和AR39。结论获得了特异性识别沙眼衣原体血清型DTarp蛋白的单克隆抗体,为Tarp蛋白的结构及生物学功能研究奠定了基础。

关键词：沙眼衣原体 Tarp 单克隆抗体

沙眼衣原体OmcBc基因的克隆、表达与抗原性研究

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南方医科大学学报 2010年第7期30卷 1558-1561页

作者：王洁张颖骞钟光明余平中南大学基础医学院免疫学系湖南长沙410078 美国德克萨斯大学圣安东尼奥健康科学中心微生物学免疫学系

目的探讨重组沙眼衣原体OmcB基因C端编码蛋白的抗原性,为衣原体感染性疾病的早期诊断和疫苗研究提供新的靶标。方法采用PCR技术从沙眼衣原体基因组中扩增OmcB的C端(T270-Y553)序列,并构建pGEX-6p-CtOmcBc原核表达质粒,转染大肠杆菌XL-1b... 详细信息

目的探讨重组沙眼衣原体OmcB基因C端编码蛋白的抗原性,为衣原体感染性疾病的早期诊断和疫苗研究提供新的靶标。方法采用PCR技术从沙眼衣原体基因组中扩增OmcB的C端(T270-Y553)序列,并构建pGEX-6p-CtOmcBc原核表达质粒,转染大肠杆菌XL-1blue,IPTG诱导表达重组GST-OmcBc融合蛋白;收集120例Ct生殖道感染患者血清,以CtD血清型灭活的EB分别于皮下和腹腔免疫7只新西兰大白兔和5只Balb/C小鼠,以CtD血清型活的EB滴鼻感染9只Balb/C小鼠,分别收集这些动物免疫血清;间接免疫荧光法检测各血清中抗衣原体特异性抗体的效价;ELISA法检测重组GST-OmcBc融合蛋白与各免疫血清的反应性。结果成功构建了pGEX-6p-CtOmcBc原核表达质粒,经测序显示插入基因长度为852bp,编码284个氨基酸。IPTG成功诱导表达了重组GST-OmcBc融合蛋白,其分子质量约为57kDa;所制备和收集的各免疫血清均含高滴度抗衣原体特异性抗体;ELISA结果显示重组GST-OmcBc融合蛋白对各免疫血清均具有强的抗原性。结论 CtOmcBc是衣原体的一个免疫优势蛋白,重组GST-OmcBc融合蛋白的成功表达及其良好的抗原性为进一步开展衣原体感染早期诊断研究和疫苗的研发奠定了基础。

关键词：沙眼衣原体 OmcB 抗原性

沙眼衣原体激活MAPK通路而非NF-κB通路诱导IL-8生成

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中南大学学报（医学版） 2010年第4期35卷 307-313页

作者：陈凡程文张赛丹钟光明余平中南大学湘雅医院心内科长沙410008 中南大学基础医学院免疫学系长沙410078 美国德克萨斯大学圣安东尼奥健康科学中心免疫学与微生物学系

目的:研究沙眼衣原体诱导上皮细胞产生IL-8的信号通路。方法:应用Western印迹、免疫荧光技术和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测沙眼衣原体感染Hela229细胞后诱导的细胞内、外IL-8表达情况,并对细胞内IL-8定位;Western印迹和免疫荧光技术检... 详细信息

目的:研究沙眼衣原体诱导上皮细胞产生IL-8的信号通路。方法:应用Western印迹、免疫荧光技术和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测沙眼衣原体感染Hela229细胞后诱导的细胞内、外IL-8表达情况,并对细胞内IL-8定位;Western印迹和免疫荧光技术检测沙眼衣原体感染后MAPK和NF-κB信号通路活化情况;利用MAPK和NF-κB信号通路化学抑制剂抑制MAPK和NF-κB通路,观察其对沙眼衣原体诱导IL-8生成的影响。结果:沙眼衣原体感染可诱导IL-8产生,呈时间依赖性;沙眼衣原体感染可激活MAPK/ERK和MAPK/p38信号通路,但不能激活NF-κB信号通路;利用化学抑制剂抑制ERK和p38通路可以抑制沙眼衣原体诱导上皮细胞产生IL-8。结论:沙眼衣原体诱导上皮细胞产生IL-8依赖于MAPK信号通路,但不依赖NF-κB信号通路。

关键词：沙眼衣原体 MAPK通路 NF-κB通路 IL-8

沙眼衣原体D型生殖道感染小鼠动物模型的建立及评价

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中华微生物学和免疫学杂志 2012年第3期32卷 212-217页

作者：陆春雪吴移谋彭波胡四海李忠玉陈丽丽钟光明南华大学病原生物研究所衡阳421001 南华大学肿瘤研究所美国德克萨斯大学圣安东尼奥健康科学中心微生物学与免疫学系

目的建立沙眼衣原体（Chlamydiatrachomatis，Ct）D型感染小鼠生殖道动物模型，为研究人类生殖道ct感染的病理变化和致病机制提供实验基础。方法分离20个临床株，经阴道接种C3H／HeJ小鼠，得到清除时间明显延长的临床株（UT0603）。应... 详细信息

目的建立沙眼衣原体（Chlamydiatrachomatis，Ct）D型感染小鼠生殖道动物模型，为研究人类生殖道ct感染的病理变化和致病机制提供实验基础。方法分离20个临床株，经阴道接种C3H／HeJ小鼠，得到清除时间明显延长的临床株（UT0603）。应用该临床株建立ctD型感染模型，免疫荧光检测阴道脱落上皮细胞中衣原体的含量；原位组织免疫荧光检测上生殖道的衣原体感染定植情况；分离生殖道组织，肉眼观察并进行病理学评分。结果ct临床株感染小鼠下生殖道其排菌量及排菌周期明显延长，可见衣原体有上行感染和定植，并能引发类似人类生殖道感染的病理变化。结论成功建立了CtD型生殖道感染动物模型。

关键词：沙眼衣原体生殖道感染动物模型

Melatonin及其衍生物作为急性严重呼吸系统综合征急救用药的理论基础和临床应用的可行性

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中国药理学通报 2003年第7期19卷 721-722页

作者：谭敦宪霍玉书杜冠华张均田美国德克萨斯州立大学圣安东尼奥健康科学中心分子与细胞结构教研室美国德克萨斯州立大学圣安东尼奥健康科学中心微生物与免疫教研室中国医学科学院药物研究所北京100050

已有研究资料表明 ,Melatonin作为一种维生素样内源物质 ,具有多方面的生理作用和极强的抗炎、抗自由基作用 ,在组织损伤方面可以发挥保护作用。近来实验研究证明 ,Melatonin对急性呼吸综合征具有改善症状作用 ,在Melatonin基础上新合... 详细信息

已有研究资料表明 ,Melatonin作为一种维生素样内源物质 ,具有多方面的生理作用和极强的抗炎、抗自由基作用 ,在组织损伤方面可以发挥保护作用。近来实验研究证明 ,Melatonin对急性呼吸综合征具有改善症状作用 ,在Melatonin基础上新合成的具有强大抗氧化作用的衍生物也表现良好的作用。

关键词： melatonin 急性严重呼吸系统综合征抗氧化作用

IL-10通过抑制IFN-γ和IL-2表达促进鼠衣原体感染

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中华微生物学和免疫学杂志 2019年第2期39卷 126-130页

作者：贺庆芝贺梦婷王昕罗晓清吴移谋钟光明南华大学药学与生物科学学院湖南省分子靶标新药研究协同创新中心衡阳421001 美国德克萨斯大学圣安东尼奥健康科学中心圣安东尼奥78229

目的初步探讨IL-10促进鼠衣原体感染的可能分子机制。方法鼠衣原体经灌胃或子宫内感染C57BL/6野生型和IL-10^-/-小鼠后,采用间接免疫荧光试验检测肠道和生殖道内鼠衣原体的生长情况;输卵管积水评分评估生殖道疾病严重程度;酶联免疫吸附... 详细信息

目的初步探讨IL-10促进鼠衣原体感染的可能分子机制。方法鼠衣原体经灌胃或子宫内感染C57BL/6野生型和IL-10^-/-小鼠后,采用间接免疫荧光试验检测肠道和生殖道内鼠衣原体的生长情况;输卵管积水评分评估生殖道疾病严重程度;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血液中IFN-γ和IL-2的表达水平。结果与野生型小鼠相比,IL-10^-/-小鼠的肠道和生殖道均具有较强的衣原体清除能力,同时细胞因子IFN-γ和IL-2的表达显著性增加。此外,野生型小鼠表现出更严重的输卵管病理损伤。结论IL-10通过抑制IFN-γ和IL-2的表达使宿主清除衣原体能力下降,从而促进衣原体在小鼠体内生长,加重输卵管积水的发病率。

关键词：沙眼衣原体 1L-10 细胞因子免疫

TLR2信号在沙眼衣原体生殖道感染中介导了早期炎症细胞因子的产生

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免疫学杂志 2015年第6期31卷 496-500页

作者：王振辉常晓彤郝敏宋桂芹侯丽娟张颖骞解放军第251医院核医学科张家口075000 河北北方学院生物化学教研室张家口075000 德克萨斯大学圣安东尼奥健康科学中心微生物学与免疫学系美国德克萨斯州圣安东尼奥78229

目的探讨TLR2和TLR4在小鼠沙眼衣原体生殖道感染免疫应答中的作用。方法用沙眼衣原体小鼠肺炎株(Mo Pn,1×104IFUs)经生殖道感染野生型小鼠(WT,11只)、TLR2基因缺陷小鼠(TLR2 KO,14只)和TLR4基因缺陷小鼠(TLR4 KO,11只),复制生殖道沙眼... 详细信息

目的探讨TLR2和TLR4在小鼠沙眼衣原体生殖道感染免疫应答中的作用。方法用沙眼衣原体小鼠肺炎株(Mo Pn,1×104IFUs)经生殖道感染野生型小鼠(WT,11只)、TLR2基因缺陷小鼠(TLR2 KO,14只)和TLR4基因缺陷小鼠(TLR4 KO,11只),复制生殖道沙眼衣原体感染模型。于感染后不同时间点取生殖道分泌物,部分用于免疫荧光法检测衣原体包涵体数量,部分用于炎症细胞因子IL-1α、IL-6和MIP-2水平检测。在感染后第70天,处死小鼠,无菌分离腹腔巨噬细胞,于体外衣原体Mo Pn感染,培养24 h后,测定上清液中IL-1α、IL-6和MIP-2含量。细胞因子含量测定均采用ELISA法。结果 TLR2 KO或TLR4 KO小鼠与WT小鼠在每一个检测时间点下生殖道带菌量无差异,且带菌持续时间相同,截止到感染后第38天,3种基因型所有小鼠均清除了下生殖道感染的衣原体。TLR2基因缺失小鼠巨噬细胞产生的炎症细胞因子IL-1α、IL-6和MIP-2水平均明显低于野生型WT小鼠(P0.05);TLR2基因缺失小鼠棉拭子标本同样具有较低水平的炎症细胞因子(P免疫应答部分依赖于TLR2,而不依赖TLR4。

关键词：沙眼衣原体 Toll样受体2 Toll样受体4 生殖道感染免疫应答

IL-17在沙眼衣原体呼吸道感染早期表达及与衣原体复制的关系

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第三军医大学学报 2009年第16期31卷 1563-1565页

作者：张效云程建贞高丽芬张颖骞钟光明河北北方学院生物化学教研室河北张家口075000 美国德克萨斯大学圣安东尼奥健康科学中心微生物免疫系

目的探讨炎症性细胞因子IL-17在沙眼衣原体呼吸道感染中的早期表达及与衣原体复制的关系。方法128只小鼠按随机数字表法分为实验组和对照组,实验组用4000包涵体形成单位(IFU)沙眼衣原体小鼠肺炎株(MoPn)通过鼻腔感染小鼠,对照组则给予... 详细信息

目的探讨炎症性细胞因子IL-17在沙眼衣原体呼吸道感染中的早期表达及与衣原体复制的关系。方法128只小鼠按随机数字表法分为实验组和对照组,实验组用4000包涵体形成单位(IFU)沙眼衣原体小鼠肺炎株(MoPn)通过鼻腔感染小鼠,对照组则给予等量蔗糖磷酸盐缓冲液(SPG),分别在感染后0、1、1.5、2、3、4、8、12d处死小鼠,用免疫荧光检测(IFA)衣原体在肺组织中的生长情况,通过ELISA检测小鼠肺组织IL-17表达。24只小鼠分为3组,分别用160、800、4000IFUMoPn通过鼻腔感染小鼠,于感染后第2天测定肺组织中衣原体生长及IL-17表达。16只小鼠随机分为2组,用4000IFUMoPn通过鼻腔感染小鼠,实验组肌肉注射利福平和氯霉素,对照组则给予等量PBS,于感染后第2天测定肺组织中衣原体生长及IL-17表达。结果MoPn感染后第1天,肺组织有衣原体生长,于感染后第8天达高峰。感染后第2天,IL-17在小鼠肺组织中的表达达峰值,并很快下降。仅剂量为4000IFUMoPn感染小鼠2d后,肺组织中同时有衣原体生长和IL-17的表达。经抗生素处理后衣原体生长被抑制,同时也检测不到IL-17的表达。结论IL-17在衣原体呼吸道感染早期出现,其表达情况与衣原体感染剂量和早期复制有关。

关键词：沙眼衣原体 IL-17 呼吸道感染抗生素固有免疫

沙眼衣原体蛋白水解酶CT841在感染细胞中的定位及抗原性研究

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免疫学杂志 2012年第3期28卷 203-207页

作者：陆春雪曾浩吴移谋彭波胡四海蔡恒玲李忠玉钟光明南华大学微生物与免疫学教研室衡阳421001 第三军医大学临床微生物学及免疫学教研室重庆400038 美国德克萨斯大学圣安东尼奥健康科学中心微生物学与免疫学系德州78229

目的分析沙眼衣原体蛋白水解酶CT841在感染细胞中的定位并探讨其抗原性。方法利用PCR技术获得衣原体CT841基因,将基因序列克隆到载体pGEX6p,转化大肠杆菌XL1-blue,IPTG诱导表达融合蛋白GST-CT841。融合蛋白经纯化后免疫小鼠制备特异性抗... 详细信息

目的分析沙眼衣原体蛋白水解酶CT841在感染细胞中的定位并探讨其抗原性。方法利用PCR技术获得衣原体CT841基因,将基因序列克隆到载体pGEX6p,转化大肠杆菌XL1-blue,IPTG诱导表达融合蛋白GST-CT841。融合蛋白经纯化后免疫小鼠制备特异性抗体,间接免疫荧光法分析CT841在感染细胞中的分布特征;ELISA法分析CT841的抗原性。结果CT841原核表达重组体成功构建;CT841在感染细胞的表达模式与主要外膜蛋白MOMP相似,而与衣原体蛋白酶样活性因子CPAF及包涵体膜蛋白IncA的分布模式不同;CT841与衣原体感染患者、猴、鼠血清均发生强烈的免疫反应。结论沙眼衣原体蛋白酶CT841是定位于衣原体菌体上的免疫优势抗原。

关键词：沙眼衣原体 CT841 细胞定位抗原性