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人巨细胞病毒pUL76蛋白非保守C端与蛋白聚集体形成的研究

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安徽医科大学学报 2015年第4期50卷 411-415页

作者：张文昌陈敬贤王明丽安徽医科大学微生物学教研室合肥230032 哥伦比亚大学病理与细胞生物学系纽约10032

目的通过分别构建人巨细胞病毒(HCMV)UL76基因编码蛋白的全长以及保守N端和非保守C端的真核表达质粒,探讨p UL76引起核内蛋白聚集体形成的决定序列。方法根据Gen Bank中HCMV AD169(FJ527563.1)株基因序列设计分别用于扩增p UL76全长以... 详细信息

目的通过分别构建人巨细胞病毒(HCMV)UL76基因编码蛋白的全长以及保守N端和非保守C端的真核表达质粒,探讨p UL76引起核内蛋白聚集体形成的决定序列。方法根据Gen Bank中HCMV AD169(FJ527563.1)株基因序列设计分别用于扩增p UL76全长以及保守N端和非保守C端的引物,将3段序列分别构建至增强型绿色荧光蛋白表达载体(p EGFP-N1)中,经双酶切和测序验证重组质粒的正确构建。空载体和3种重组质粒分别瞬时转染人胚肺成纤维细胞(HELF)和人肝癌细胞(Hep G-2),经逆转录(RTPCR)和Western blot法验证各段基因的正确表达,在荧光显微镜下观察转染不同重组质粒后细胞核内蛋白聚集体形成的状态。结果 p EGFP-N1空载体和p UL76保守N端均不能引起核内蛋白聚集体的形成,而p UL76及其非保守C端均能够引起核内蛋白聚集体的形成。结论 p UL76非保守C端是其引起核内蛋白聚集体形成所必须的。

关键词：人巨细胞病毒 UL76 蛋白聚集体

髓母细胞瘤分子亚型中CD8+T淋巴细胞浸润的临床病理特点

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北京大学学报（医学版） 2024年第3期56卷 512-518页

作者：柴晓东孙子文李海爽朱靓怡刘小旦刘延涛裴斐常青北京大学第三医院病理科北京100191 北京大学基础医学院病理学系北京100191 北京市神经外科研究所神经病理中心北京100070

目的:研究CD8+T细胞在髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)各个分子亚型中的浸润特点,分析CD8+T细胞浸润与患者预后的关系,以及C-X-C基序趋化因子11(C-X-C motif chemokine ligand 11)的表达及其受体CXCR3在CD8+T细胞中的表达情况,为进一步... 详细信息

目的:研究CD8+T细胞在髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)各个分子亚型中的浸润特点,分析CD8+T细胞浸润与患者预后的关系,以及C-X-C基序趋化因子11(C-X-C motif chemokine ligand 11)的表达及其受体CXCR3在CD8+T细胞中的表达情况,为进一步探索MB中CD8+T细胞浸润可能的调节机制提供临床病理依据。方法:筛选2012—2019年间来自多所医学中心、具有完整临床资料的MB患者共48例(4个分子亚型各12例),利用NanoString PanCancer IO360 TM基因表达检测平台对48例MB患者的肿瘤标本进行转录组学分析,对患者肿瘤组织的石蜡切片进行CD8免疫组织化学染色分析,验证各亚型MB中CD8+T细胞数量的差异。通过数据库生物信息学分析,探讨CD8+T细胞浸润与患者预后的关系及各种趋化因子在各亚型MB中的表达差异,并采用双重免疫荧光染色验证MB中CD8+T细胞表面CXCR3受体的表达情况,探讨CD8+T细胞浸润至肿瘤内的可能分子机制。结果:MB的WNT亚型中的CD8+T细胞特征指数相对较高,提示WNT亚型中的CD8+T细胞数量显著高于其他三个亚型,这一现象通过CD8免疫组织化学染色方法以及R2在线数据分析平台对美国基因表达数据库Gene Expression Omnibus(GEO)进行数据挖掘得到了证实,且CD8+T细胞增多与患者的生存期呈正相关。数据库分析显示,CXCL11在WNT亚型MB中的表达量明显高于其他三个亚型。免疫荧光染色结果显示,CD8+T细胞表面存在CXCL11的受体CXCR3,提示CD8+T细胞可能通过表面受体CXCR3受CXCL11趋化至MB的微环境中。结论:CD8+T细胞在WNT亚型MB中的浸润相对多于其他亚型,其机制可能与CXCL11-CXCR3趋化因子系统的激活相关,且肿瘤内CD8+T细胞浸润较多的患者预后较好,此结果可能为MB中CD8+T细胞浸润调节机制提供有益的临床病理依据,为未来MB的免疫治疗提供新的潜在治疗靶点。

关键词：髓母细胞瘤肿瘤微环境 CD8阳性T淋巴细胞趋化因子CXCL11

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微核激活cGAS-STING信号通路的机制及其肿瘤免疫功能

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浙江大学学报（医学版） 2024年第1期53卷 25-34页

作者：沈琴徐平龙梅陈浙江大学生命科学研究院浙江杭州310058 浙江大学生命系统稳态与保护教育部重点实验室、浙江省癌症分子细胞生物学重点实验室浙江杭州310058 浙江大学杭州国际科创中心智能医药研究所浙江杭州311200 浙江大学癌症研究院浙江杭州310058

环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)-干扰素基因刺激因子(STING)信号通路可监测微生物入侵和组织损伤等生理病理异常状态,是天然免疫系统的重要组成之一。作为DNA感受器,cGAS主要识别异常定位于细胞质的双链DNA(dsDNA),通过催化合成二级信使... 详细信息

环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)-干扰素基因刺激因子(STING)信号通路可监测微生物入侵和组织损伤等生理病理异常状态,是天然免疫系统的重要组成之一。作为DNA感受器,cGAS主要识别异常定位于细胞质的双链DNA(dsDNA),通过催化合成二级信使环鸟苷酸-腺苷酸启动由STING介导的Ⅰ型干扰素和炎症信号通路。微核是有丝分裂后期染色体错误分离的产物,也是细胞质dsDNA的重要来源之一。作为一类不稳定的亚细胞器结构,微核核膜倾向于不可逆的破裂,导致微核基因组DNA暴露在细胞质中。暴露的微核基因组DNA招募并激活cGAS-STING信号通路,诱导STING下游信号通路活化,包括Ⅰ型干扰素信号通路和经典核因子κB(NF-κB)信号通路,导致细胞衰老、细胞凋亡和细胞自噬的发生,从而介导免疫系统的活化以清除肿瘤细胞,或者直接诱导肿瘤细胞死亡。另外,STING持续激活诱导的内质网应激,以及慢性Ⅰ型干扰素信号通路和非经典NF-κB信号通路的活化,营造了免疫抑制的肿瘤微环境,导致肿瘤细胞免疫逃逸,促进肿瘤转移和肿瘤细胞存活。因此,在肿瘤的发生发展和治疗过程中,活化的cGAS-STING免疫通路扮演着抑制或促进肿瘤的双重作用。本文阐述了肿瘤微环境中微核诱导cGAS-STING免疫通路活化的机制研究进展,探讨了其在肿瘤发生发展和治疗中的潜在重要作用。

关键词：环鸟苷酸-腺苷酸合成酶-干扰素基因刺激因子信号通路染色体不稳定微核肿瘤免疫综述

髓母细胞瘤分子亚型中CD8T细胞浸润的临床病理特点

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北京大学学报(医学版) 2024年

作者：柴晓东孙子文李海爽朱靓怡刘小旦刘延涛裴斐常青北京大学基础医学院病理学系北京大学第三医院病理科北京市神经外科研究所神经病理中心

目的：研究CD8+T细胞在髓母细胞瘤(medulloblastoma， MB)各个分子亚型中的浸润特点，分析CD8+T细胞浸润与患者预后的关系以及C-X-C基序趋化因子11(C-X-C motif chemokine ligand 11)的表达及其受体CXCR3在CD8+T细胞中的表达情况，为进... 详细信息

目的：研究CD8+T细胞在髓母细胞瘤(medulloblastoma， MB)各个分子亚型中的浸润特点，分析CD8+T细胞浸润与患者预后的关系以及C-X-C基序趋化因子11(C-X-C motif chemokine ligand 11)的表达及其受体CXCR3在CD8+T细胞中的表达情况，为进一步探索MB中CD8+T细胞浸润可能的调节机制提供临床病理依据。方法：筛选2012—2019年间来自多所医学中心、具有完整临床资料的MB患者共48例(4个分子亚型各12例)，利用NanoString PanCancer IO360TM基因套餐对48例MB患者的肿瘤标本进行转录组学分析，对患者肿瘤组织的石蜡切片进行CD8免疫组织化学染色分析，验证各亚型MB中CD8+T细胞数量的差异。通过数据库生物信息学分析，探讨CD8+T细胞浸润与患者预后的关系及各种趋化因子在各亚型MB中的表达差异，并采用双重免疫荧光染色验证MB中CD8+T细胞表面CXCR3受体的表达情况，探讨CD8+T细胞浸润至肿瘤内的可能分子机制。结果：MB的WNT (wingless)亚型中的CD8+T细胞特征指数相对较高，提示WNT亚型中的CD8+T细胞数量显著高于其他三个亚型，这一现象通过CD8免疫组织化学染色方法以及R2在线数据分析平台对美国基因表达数据库Gene Expression Omnibus (GEO)进行数据挖掘得到了证实，且CD8+T细胞增多与患者的生存期呈正相关。数据库分析显示，CXCL11在WNT亚型MB中的表达量明显高于其他三个亚型。免疫荧光染色结果显示，CD8+T细胞表面存在CXCL11的受体CXCR3，提示CD8+T细胞可能通过表面受体CXCR3受CXCL11趋化至MB的微环境中。结论：CD8+T细胞在WNT亚型MB中的浸润相对多于其他亚型，其机制可能与CXCL11-CXCR3趋化因子系统的激活相关，且肿瘤内CD8+T细胞浸润较多的患者预后较好，此结果可能为MB中CD8+T细胞浸润调节机制提供有益的临床病理依据，为未来MB的免疫治疗提供新的潜在治疗靶点。

关键词：髓母细胞瘤肿瘤微环境 CD8阳性T淋巴细胞趋化因子CXCL11

Mimivims——一种可能的新呼吸道病毒

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第7期29卷 668-670页

作者：陈敬贤周荣钟南山 10032纽约美国哥伦比亚大学病理与细胞生物系广州呼吸疾病研究所 510120

Mimivirus最初发现于英格兰北部城市Bradford一座冷却水塔的水中，曾经被误认为是一种新的细菌（Bradford球菌）。后来经电镜观察，发现它在宿主阿米巴细胞中呈规则的廿面体结构，直径达400nm，外面没有包膜，而是环绕着一圈80nm长的众... 详细信息

Mimivirus最初发现于英格兰北部城市Bradford一座冷却水塔的水中，曾经被误认为是一种新的细菌（Bradford球菌）。后来经电镜观察，发现它在宿主阿米巴细胞中呈规则的廿面体结构，直径达400nm，外面没有包膜，而是环绕着一圈80nm长的众多纤毛（fibril）。

关键词：呼吸道病毒电镜观察冷却水英格兰阿米巴

应用小瓶离心培养法分离检测2009年1—6月广州市成人流感样病例相关病毒

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中华检验医学杂志 2010年第2期33卷 132-137页

作者：杨子峰王玉涛秦笙罗翌关文达李际强占扬清张雪周荣莫自耀陈敬贤陈荣昌广州医学院第一附属医院呼吸疾病国家重点实验室 510230 广东省中医院急诊科美国哥伦比亚大学病理与细胞生物学系

目的应用高通量的小瓶离心法快速分离检测广州市成人流感样病例相关病毒，分析广州地区患有ILI的成人呼吸道病毒感染情况，评价其在临床实验室开展快速病毒培养的意义。方法采集2009年1—6月广州市成人流感样病例患者标本652份，应用小... 详细信息

目的应用高通量的小瓶离心法快速分离检测广州市成人流感样病例相关病毒，分析广州地区患有ILI的成人呼吸道病毒感染情况，评价其在临床实验室开展快速病毒培养的意义。方法采集2009年1—6月广州市成人流感样病例患者标本652份，应用小瓶离心法（包括MDCK、HEp-2、LLC—MK2和MRC-54种细胞），离心接种后，通过观察CPE、血凝（HA）、血吸附（HAD）及直接免疫荧光法（IF）等方法进行病毒分离鉴定。结果652份成人流感样病例标本中共检出阳性161份，5种病毒病原体，病毒培养阳性率为24．69％，其中甲型流感病毒62株（62／161，38．51％），乙型流感病毒88株（88／161，54．65％），副流感病毒8株（8／161，4．96％），腺病毒2株（2／161，1．24％），呼吸道合胞病毒1株（1／161，0．62％k用小瓶离心培养法发出各种病毒培养报告的平均时间分别为：流感病毒2d、腺病毒3d、副流感病毒3d。结论（1）离心培养法具有快速、灵敏、高通量的特点，对临床实验室诊断病毒具有应用推广价值。（2）在分离的ILI病原体中，流感病毒占主导，乙型流感病毒为优势毒株，白2009年1月延续至6月，并呈逐步增多的态势，出现夏季高峰。

关键词：正黏病毒科病毒培养呼吸道感染

新生儿咽拭子检测在诊断单纯疱疹病毒先天性感染中的意义

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安徽医科大学学报 2012年第7期47卷 813-816页

作者：任鹏姚娟金艳葛俊李法锦汪晓婷吉阳赵蕾江龙凤陈敬贤王明丽安徽医科大学微生物学教研室合肥230032 合肥市妇幼保健院合肥230001 美国哥伦比亚大学病理与细胞生物学系纽约10032

目的以巢式PCR检测新生儿脐带血中单纯疱疹病毒1型(HSV-1)gD基因和HSV-2 gG基因并用测序确认的结果为参比,分析利用新生儿咽拭子检测相应病毒基因在诊断新生儿HSV先天性感染中的意义。方法采集顺产新生儿抗凝脐带血35份,同时采集咽拭子3... 详细信息

目的以巢式PCR检测新生儿脐带血中单纯疱疹病毒1型(HSV-1)gD基因和HSV-2 gG基因并用测序确认的结果为参比,分析利用新生儿咽拭子检测相应病毒基因在诊断新生儿HSV先天性感染中的意义。方法采集顺产新生儿抗凝脐带血35份,同时采集咽拭子35份。采用检测HSV-1 gD基因和HSV-2 gG基因的PCR法检测新生儿脐带血和咽拭子标本DNA,阳性扩增结果确认后,比较咽拭子检测与脐带血检测结果,以及咽拭子检测特异性、灵敏度、阳性预测值和阴性预测值4个指标,分析新生儿咽拭子检测能否为诊断HSV先天性感染提供依据。结果 35份脐带血中HSV-1阳性率28.6%(10/35),咽拭子HSV-1阳性率25.7%(9/35),两者差异无统计学意义。脐带血中HSV-2阳性率22.8%(8/35),咽拭子HSV-2阳性率28.6%(10/35),两者差异无统计学意义。HSV-1两种标本检测一致率68.6%;HSV-2两种标本一致率77.1%。咽拭子HSV-1、HSV-2检测灵敏度分别为40.0%和62.5%,特异性分别为80.0%和84.6%,阳性预测值分别为44.4%和50.0%,阴性预测值分别为76.9%和88.0%。结论以新生儿脐带血单核细胞中HSV-1 gD基因和HSV-2 gG基因检测结果为参比,新生儿咽拭子检测与脐带血检测具有较高的一致性,表明咽拭子检测用于新生儿HSV先天性感染诊断具有重要的临床应用价值。

关键词：单纯疱疹病毒脐带血咽拭子先天性感染

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水痘-带状疱疹病毒的基因分型与分子进化

病毒学报 2012年第5期28卷 584-590页

作者：江龙凤甘霖陈敬贤王明丽安徽医科大学微生物学教研室合肥230032 中国科学院武汉病毒研究所武汉430071 哥伦比亚大学病理与细胞生物学教研室纽约10032

水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)又称人类疱疹病毒3型,属疱疹病毒科,与单纯疱疹病毒HSV-1、HSV-2一起归入α亚科。人类是其唯一的自然宿主,对其普遍易感。VZV引起的原发感染表现为水痘,并在宿主的感觉神经节内潜伏,再激... 详细信息

水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)又称人类疱疹病毒3型,属疱疹病毒科,与单纯疱疹病毒HSV-1、HSV-2一起归入α亚科。人类是其唯一的自然宿主,对其普遍易感。VZV引起的原发感染表现为水痘,并在宿主的感觉神经节内潜伏,再激活时可引起带状疱疹。近年来VZV分子流行病学的研究涉及流行病学、病毒学、生物信息学等相关领域,通过监测、研究VZV的基因变异,区分疫苗株或野生株引起的感染,探讨世界范围内各VZV病毒株的系统发育关系和各遗传支之间的分子进化史。现将近年来有关VZV不同的地理分布和遗传支进化的研究状况综述如下。

关键词：水痘-带状疱疹病毒进化重组遗传支基因型

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南方医科大学学报 2024年第6期44卷 1209-1216页

作者：孙畅郑士耀李梅杨铭秦梦园徐媛梁伟华胡建明王良海李锋周虹杨兰石河子大学医学院病理系//石河子大学第一附属医院病理科新疆维吾尔自治区石河子832000 首都医科大学附属北京朝阳医院病理科北京100000 乳山市人民医院病理科山东威海264200 烟台市莱阳中心医院病理科山东烟台264000 澳大利亚悉尼大学ANZAC研究所悉尼2050

目的探讨食管鳞状细胞癌(鳞癌)中干性相关分子胚胎干细胞关键因子(Nanog)和侵袭迁移相关分子基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达及其之间的调控关系。方法运用免疫组织化学技术检测127例食管鳞癌组织和82例... 详细信息

目的探讨食管鳞状细胞癌(鳞癌)中干性相关分子胚胎干细胞关键因子(Nanog)和侵袭迁移相关分子基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达及其之间的调控关系。方法运用免疫组织化学技术检测127例食管鳞癌组织和82例癌旁正常组织中Nanog和MMP-2/MMP-9蛋白的表达情况,分析Nanog和MMP-2/MMP-9蛋白的表达水平、相关性及与食管鳞癌患者的临床病理参数和预后之间的关系;采用GEO数据库分析Nanog等干性相关分子主要富集通路;应用TIMER在线网站分析食管癌中TβR1和MMP-2及MMP-9的相关性。在体外运用siRNA转染的方式将食管鳞癌细胞株分为正常对照组、Nanog低表达组,采用划痕实验分析其对食管鳞癌细胞迁移的影响,qRT-PCR及Western blotting检测两组之间TβR1、p-Smad2/3、MMP-2/MMP-9的表达情况。结果 Nanog和MMP-2/MMP-9蛋白在食管鳞癌组织中表达均上调(χ^(2)=70.475,P0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,Nanog和MMP-2/MMP-9蛋白高表达组的食管鳞癌患者生存时间短于低表达组(P生物信息学分析显示,Nanog等干性相关分子主要富集在转化生长因子-β(TGF-β)信号通路,MMP-2/MMP-9与TβR1表达在食管癌中呈正相关关系。体外划痕实验结果显示,Nanog促进食管鳞癌细胞系的迁移;qRT-PCR及Western blotting结果显示,敲低Nanog后,TβR1、p-Smad2/3、MMP-2/MMP-9的表达水平明显降低。结论 Nanog和MMP-2/MMP-9蛋白在食管鳞癌患者组织中高表达且呈正相关,其与食管鳞癌患者的肿瘤浸润深度、淋巴结转移及预后密切相关,且Nanog通过TGF-β信号通路影响MMP-2/MMP-9蛋白的表达。

关键词：食管鳞状细胞癌胚胎干细胞关键因子基质金属蛋白酶-2/基质金属蛋白酶-9 浸润转移生存分析