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PTPα高表达致NIH3T3细胞恶变早期相关基因的筛选与鉴定

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生物化学与生物物理学报 2002年第5期34卷 601-607页

作者：杨劲松郑新民陈诗书上海第二医科大学生化教研室、分子生物学实验室、人类基因治疗研究中心美国康奈尔大学上海第二医科大学生化教研室、分子生物学实验室、人类基因治疗研究中心上海200025 纽约14850

利用已建立的蛋白质酪氨酸磷酸酶α(PTPα)诱导表达模型筛选NIH3T3细胞中PTPα诱导表达前后的差别表达基因 ,有利于探索肿瘤早期形成的机制。诱导PTPα表达 2 4h ,用差异显示逆转录PCR获得 6 5条差异片段 ,利用生物信息学方法分析这些... 详细信息

利用已建立的蛋白质酪氨酸磷酸酶α(PTPα)诱导表达模型筛选NIH3T3细胞中PTPα诱导表达前后的差别表达基因 ,有利于探索肿瘤早期形成的机制。诱导PTPα表达 2 4h ,用差异显示逆转录PCR获得 6 5条差异片段 ,利用生物信息学方法分析这些差异片段 ,发现其中含有 2 9种已知基因、1 2种已知EST、6种未知EST ;对已知基因进行功能查询和分析 ,发现它们分别与信号转导、细胞骨架及粘附、转录与翻译、能量代谢、凋亡及核糖体蛋白质相关 ,其中G蛋白基因、TCR基因、类Trx基因、小窝蛋白 1 (caveolin 1 )基因经RT PCR及Northern印迹实验证实了差异表达的真实性。结果表明 ,PTPα诱导表达 2 4h后多种基因发生了表达变化 ,涉及细胞生理多方面的功能 ,其中一些基因在癌变的早期起重要的作用 ,这为深入探讨肿瘤早期形成机制打下基础 ,也可为基因治疗候选靶点的选择提供依据

关键词：蛋白质酪氨酸磷酸酶α 差别表达肿瘤形成机制

NIH3T3细胞中PTPα基因高表达激活Src的早期细胞表型变化

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生物化学与生物物理学报 2002年第2期34卷 193-198页

利用蛋白质酪氨酸磷酸酶α(PTPα)基因转染NIH3T3细胞 ,研究PTPα诱导前后细胞生物学行为的变化 ,为肿瘤形成早期机制的研究提供细胞模型。用携带PTPα基因的四环素调控体系转染NIH3T3细胞并诱导 2 4h后 ,用RT PCR和蛋白质印迹法证实PT... 详细信息

利用蛋白质酪氨酸磷酸酶α(PTPα)基因转染NIH3T3细胞 ,研究PTPα诱导前后细胞生物学行为的变化 ,为肿瘤形成早期机制的研究提供细胞模型。用携带PTPα基因的四环素调控体系转染NIH3T3细胞并诱导 2 4h后 ,用RT PCR和蛋白质印迹法证实PTPα在诱导细胞中的表达高于未诱导细胞 ,用RT PCR及蛋白质印迹法发现内源性Src的表达水平在诱导与未诱导细胞中没有变化 ,而Src激酶的活性在诱导细胞中增高 ,并且在诱导细胞中Src的酪氨酸磷酸化水平降低。再用透射式电子显微镜和流式细胞技术观察到诱导细胞的表型已发生变化 ,实验结果表明PTPα诱导 2 4h使细胞的表型开始发生转化 ,这种变化很可能与PTPα表达水平升高使SrcC末端的pTyr52 7去磷酸化而激活Src相关

关键词： PTPα Src 转化

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体外合成大鼠血清淀粉样A蛋白

生物化学杂志 1990年第6期6卷 543-548页

作者：马康涛张迺蘅廖晓令北京医科大学生化教研室美国德州大学生化分子生物学系

血清淀粉样A蛋白(Serum Amyloid A-SAA)是一个急性期蛋白,在人和小鼠血浆中长时间维持较高的浓度,即会发展为病理学的淀粉样变。但是在大鼠中从未发现这种情况,而对大鼠SAA的研究人们还一无所知。我们使用体外系统研究了大鼠血清淀粉样... 详细信息

血清淀粉样A蛋白(Serum Amyloid A-SAA)是一个急性期蛋白,在人和小鼠血浆中长时间维持较高的浓度,即会发展为病理学的淀粉样变。但是在大鼠中从未发现这种情况,而对大鼠SAA的研究人们还一无所知。我们使用体外系统研究了大鼠血清淀粉样A蛋白的转录和转译。在体外系统中合成的大鼠SAAmRNA的分子量约为0.5～0.56kb,用合成的mRNA转译的蛋白质分子量为8.2～10kD。用体外系统转录和转译的结果证明,这个体系重复性好,与体内的结果相似。

关键词：血清淀粉样A 急性期反应体

血管紧张素Ⅱ对大鼠下丘脑内血管升压素基因转录的影响

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生理学报 1995年第4期47卷 373-380页

作者：陆利民宋后燕姚泰上海医科大学生理学教研室上海医科大学分子遗传学教研室

实验在雄性ＳＤ大鼠中进行，用核酸斑点杂交技术观察下丘脑组织中血管升压素（ＡＶＰ）基因转录水平变化，用异羟基洋地黄毒甙（ＤＩＧ）标记的２６个碱基长寡聚核苷酸作为检测探针。实验中观察到，用渗透压微泵向大鼠侧脑室内连续注射... 详细信息

实验在雄性ＳＤ大鼠中进行，用核酸斑点杂交技术观察下丘脑组织中血管升压素（ＡＶＰ）基因转录水平变化，用异羟基洋地黄毒甙（ＤＩＧ）标记的２６个碱基长寡聚核苷酸作为检测探针。实验中观察到，用渗透压微泵向大鼠侧脑室内连续注射微量血管紧张素Ⅱ（０．２ｎｍｏｌ／ｈ）２ｄ后，可引起动物饮水量显著增加，下丘脑组织中ＡＶＰ基因转录水平升高，但无统计学显著意义。将实验动物每日饮水量限制在与对照动物相同的每日饮水量之后，侧脑室内注射ＡＮＧⅡ可导致下丘脑组织中ＡＶＰ基因转录水平显著升高。另外，给动物饮用２％ＮａＣｌ溶液或禁水后，也观察到下丘脑组织中ＡＶＰ基因转录水平升高。脑室内连续注射ＡＮＧⅡ受体拮抗剂Ｄｕｐ７５３（０．９ｎｍｏｌ／ｈ，６ｄ），或腹腔内注射血管紧张素转化酶抑制剂巯甲丙脯酸（Ｃａｐｔｏｐｒｉｌ５ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）），不能阻断高渗刺激或禁水引起的下丘脑ＡＶＰ基因转录水平升高效应。上述实验结果表明，脑室内给予ＡＮＧⅡ可以使ＡＶＰ基因转录水平升高，在限制饮水的情况下，ＡＮＧⅡ的这种效应更为显著。另外，禁水引起的ＡＶＰ基因转录水平升高效应，看来并不需要内源性ＡＮＧⅡ参与。

关键词：血管升压素血管紧张素Ⅱ 基因转录下丘脑

E6-AP在前列腺癌LNCaP细胞基因表达调控中的作用

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吉林大学学报（医学版） 2010年第6期36卷 1098-1101,1207页

作者：杜培革韩笑梁骥李贺安丽萍徐广宇傅桂莲北华大学药学院微生物与生化教研室吉林吉林132013 美国迈阿密大学米勒医学院分子药学和细胞药学教研室美国佛罗里达33124

目的:探讨前列腺癌LNCaP细胞中E6相关蛋白(E6-AP)对雄激素受体(AR)和丝苏氨酸激酶(Akt)表达的调节作用,阐明E6-AP的作用机制。方法:应用双稳定表达的人前列腺癌细胞株LNCaP/E6-AP细胞,通过Western blotting分析E6-AP过表达对细胞中AR和... 详细信息

目的:探讨前列腺癌LNCaP细胞中E6相关蛋白(E6-AP)对雄激素受体(AR)和丝苏氨酸激酶(Akt)表达的调节作用,阐明E6-AP的作用机制。方法:应用双稳定表达的人前列腺癌细胞株LNCaP/E6-AP细胞,通过Western blotting分析E6-AP过表达对细胞中AR和Akt蛋白表达水平的影响;利用免疫荧光技术观察E6-AP与AR在细胞中的定位关系。结果:与E6-AP低表达的LNCaP细胞比较,E6-AP过表达的LNCaP细胞中AR蛋白和磷酸化的AR蛋白的表达量明显降低(P<0.05);Akt蛋白和磷酸化的Akt蛋白的表达量明显升高(P<0.01)。免疫荧光法检测结果显示:E6-AP和AR在细胞中定位情况相似。结论:E6-AP过表达可下调AR蛋白和磷酸化AR蛋白的表达,并上调Akt蛋白及磷酸化Akt蛋白的表达,且E6-AP与AR在细胞中定位基本一致,E6-AP可能与前列腺癌的发生和发展密切相关。

关键词：雄激素受体 E6相关蛋白丝苏氨酸激酶

乙型肝炎表面抗原作为肿瘤免疫攻击靶点的研究

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乙型肝炎表面抗原作为肿瘤免疫攻击靶点的研究

IL-12与GM-CSF联合基因治疗小鼠肝癌的研究

2001'全国肿瘤外科学术会议

作者：邱双健叶胜龙汤钊猷 Shiguang Qian Clark Andrew Bonham Xiao Xiao John J Fung Lina Lu 复旦大学附属中山医院肝癌研究所美国匹兹堡大学移植研究所美国匹兹堡大学生化和分子遗传教研室

＜正＞研究乙型肝炎表面抗原（HBsAg）作为肝细胞癌相关抗原用于肿瘤免疫基因治疗的可能性。方法:应用免疫组化方法检测 HBsAg 在肝癌中的表达频率。观察基因工程修饰的树突状细胞（DC）瘤苗诱导的 HBsAg 特异的抗瘤效应,分别以表达 HBs...

＜正＞研究乙型肝炎表面抗原（HBsAg）作为肝细胞癌相关抗原用于肿瘤免疫基因治疗的可能性。方法:应用免疫组化方法检测 HBsAg 在肝癌中的表达频率。观察基因工程修饰的树突状细胞（DC）瘤苗诱导的 HBsAg 特异的抗瘤效应,分别以表达 HBsAg 的黑

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IL-12与GM-CSF联合基因治疗小鼠肝癌的研究

IL-12与GM-CSF联合基因治疗小鼠肝癌的研究

第八届全国肝癌学术会议

作者：邱双健叶胜龙 Zhong Wang 汤钊猷 Lina Lu Xiao Xiao 复旦大学附属中山医院、肝癌研究所美国匹兹堡大学生化和分子遗传教研室美国匹兹堡大学移植研究所

目的研究IL-12与GM-CSF联合基因治疗对小鼠皮下肝癌的治疗作用。方法将皮下接种 1x10BNL肝癌细胞的小鼠分上组于肿瘤接种3、6天后分别经尾静脉注射总量为25μg的细胞因子编码质粒:(1)pXX-GM-CSF、pXX-IL-12各12.5μg;(2)pXX-IL-12 25μg...

目的研究IL-12与GM-CSF联合基因治疗对小鼠皮下肝癌的治疗作用。方法将皮下接种 1x10BNL肝癌细胞的小鼠分上组于肿瘤接种3、6天后分别经尾静脉注射总量为25μg的细胞因子编码质粒:(1)pXX-GM-CSF、pXX-IL-12各12.5μg;(2)pXX-IL-12 25μg;(3)pXX-GM-CSF 25μg;(4) pXX-Neo 25μg,每组6只小鼠。观察小鼠皮下肿瘤生长情况及所诱导的细胞免疫反应。同时还研究了经尾静脉高压注射后小鼠血清IL-12、GM-CSF和IFN-γ分泌。结论 IL-12和GM-CSF联合基因治疗可以产生较强的抗瘤作用并可能减少IL-12的副作用。

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IL-12与GM-CSF联合基因治疗小鼠肝癌的研究

2001'全国肿瘤外科学术会议

作者：邱双健叶胜龙汤钊猷 Zhong Wang Lina Lu Xiao Xiao 复旦大学附属中山医院肝癌研究所美国匹兹堡大学移植研究所美国匹兹堡大学生化和分子遗传教研室

＜正＞研究 IL～12与 GM-GSF 联合基因治疗对小鼠皮下肝癌的治疗作用。方法:将皮下接种1x106BNL 肝癌细胞的小鼠分四组于接种肿瘤3、6天后分别经尾静脉注射细胞因子编码质粒:（1）PXX-GM-CSF、PXX-IL-12各12．5μg;（2）PXX-IL-12 25μg...

＜正＞研究 IL～12与 GM-GSF 联合基因治疗对小鼠皮下肝癌的治疗作用。方法:将皮下接种1x106BNL 肝癌细胞的小鼠分四组于接种肿瘤3、6天后分别经尾静脉注射细胞因子编码质粒:（1）PXX-GM-CSF、PXX-IL-12各12．5μg;（2）PXX-IL-12 25μg;（3）PXX-GM-CSF 25μg;（4）PXX-Neo 25gg,每组6只小鼠。观察小鼠皮下肿瘤生长情况以及所诱导的细胞免疫反应。

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人HMGB1酸性尾端对其抗菌活性的影响

中国生物化学与分子生物学报 2006年第7期22卷 524-529页

作者：龚薇何凤田李蓉芬高会广张艳黎松黄刚第三军区大学生物化学与分子生物学教研室重庆400038 匹兹堡大学

为研究人高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box-1,HMGB1)酸性尾端对其抗菌活性的影响,提取人外周血单个核细胞总RNA,经RT-PCR扩增得到编码人HMGB1的cDNA及其缺失酸性尾端的突变体cDNA(mcDNA),原核表达载体pQE-80L分别表达重组人HM... 详细信息

为研究人高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box-1,HMGB1)酸性尾端对其抗菌活性的影响,提取人外周血单个核细胞总RNA,经RT-PCR扩增得到编码人HMGB1的cDNA及其缺失酸性尾端的突变体cDNA(mcDNA),原核表达载体pQE-80L分别表达重组人HMGB1蛋白(rhHMGB1)及缺失酸性尾端的突变体蛋白(mrhHMGB1),经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化两种蛋白.通过试管稀释法、琼脂扩散法两种体外抗菌实验观察,并比较rhHMGB1及mrhHMGB1抗菌活性的差异.实验结果显示,rhHMGB1对大肠杆菌JM109、ATCC25922、DH5α有明确的抗菌活性,其抗菌活性强弱依次为JM109>ATCC25922>DH5α,而mrhHMGB1对大肠杆菌JM109、ATCC25922、DH5α则均无抗菌活性.实验结果表明,人HMGB1的酸性尾端对其抗菌活性的发挥至关重要,此研究为进一步探讨人HMGB1抗菌功能的机制奠定了基础.

关键词：人高迁移率族蛋白B1(HMGB1) 酸性尾端原核表达抗菌活性