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尿源性干细胞的分离、培养、鉴定及永生化

重庆医科大学学报 2017年第5期42卷 526-531页

作者：耿睿之何云锋张尧张元原吴小候重庆医科大学附属第一医院泌尿外科重庆400016 维克森林大学再生医学中心美国北卡罗来纳州27106

目的:分离、培养、鉴定尿液来源的干细胞并永生化,为后续下尿路组织重建的研究提供种子细胞。方法:收集人新鲜尿液,对得到的单个贴壁细胞进行培养。倒置显微镜观察尿源性干细胞(urine-derived stem cells,USC)形态,免疫荧光以及流式细... 详细信息

目的:分离、培养、鉴定尿液来源的干细胞并永生化,为后续下尿路组织重建的研究提供种子细胞。方法:收集人新鲜尿液,对得到的单个贴壁细胞进行培养。倒置显微镜观察尿源性干细胞(urine-derived stem cells,USC)形态,免疫荧光以及流式细胞术检测干细胞表面标记物。RT-PCR检测尿路上皮细胞和平滑肌相关基因。诱导USC向尿路上皮细胞和平滑肌细胞分化。将p SEB-h TERT逆转录病毒感染USC得到永生化的尿源性干细胞(immortalized urine-derived stem cells,i USC)。RT-PCR以及Western blot检测i USC和USC中h TERT基因和蛋白的表达并绘制增殖曲线。对i USC检测干细胞表面标记物CD73、CD90、CD146、SSEA-4及免疫荧光检测尿溶蛋白Ⅰa和肌间线蛋白。结果:成功分离培养得到USC,其外观呈"米粒状",干细胞表面标记物CD73、CD90、CD146、SSEA-4均呈阳性;RT-PCR结果显示尿路上皮细胞表面标记物(尿溶蛋白Ⅰa和Ⅲ、细胞角蛋白-7和13)及平滑肌表面标记物(肌间线蛋白和α-平滑肌肌动蛋白)表达阳性。RT-PCR中h TERT基因表达量为41 636.00±4 134.42,同USC(25 452.67±1 586.32)比较具有统计学意义(P=0.032);Western blot中h TERT蛋白表达量为94 479.00±7 102.20,同USC(61 541.67±3 956.54)比较具有统计学意义(P=0.017)。i USC能连续多代培养,增殖曲线呈"S"形,且与USC对比其增殖能力增强(P0 d=0.272,P1 d=0.043,P3 d=0.000,P5 d=0.006,P7 d=0.001,P9 d=0.025),细胞增殖与天数(P=0.000,F=219.572)和细胞类型(P=0.000,F=90.855)均相关;CD34、CD73、CD90、CD146、SSEA-4依次为0.3%、91.4%、15.3%、99.4%、95.3%,表达无变化;免疫荧光显示尿溶蛋白Ⅰa和肌间线蛋白呈阳性表达。结论:成功从尿液中分离、培养、鉴定尿源性干细胞并永生化,即i USC为再生医学和组织工程学提供稳定安全的种子细胞。

关键词：干细胞泌尿系统细胞永生化

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创新药物研发心得及展望

中国新药杂志 2010年第24期19卷 2217-2220页

作者：陈伟美国杜克大学医学中心北卡罗来纳州27710

文章旨在综述临床前药物研发的思路和过程,并结合笔者实验室的工作探讨如何高效开展药物研发,从而使新药从实验室到病床的转化能更成功顺利完成,且缩短时间。笔者主要针对再生医学(regenerative medicine)和癌症两个治疗领域,重点研究了... 详细信息

文章旨在综述临床前药物研发的思路和过程,并结合笔者实验室的工作探讨如何高效开展药物研发,从而使新药从实验室到病床的转化能更成功顺利完成,且缩短时间。笔者主要针对再生医学(regenerative medicine)和癌症两个治疗领域,重点研究了7次跨膜蛋白细胞受体Smoothened和Frizzled的信号传导和信号通路调节,并以其作为新药靶分子,通过独创的高通量药物筛选平台,获得了许多高效、专一的小分子化合物。由于目前世界上尚无这类急需新药,我们对已经上市的"成熟药物"进行再定向,获得了能用于再生医学的特定糖皮质激素(针对Smoothened)和用于癌症治疗的氯硝柳胺(针对Frizzled)。通过多年努力,系统地建立了一个具有短、中、长期目标的创新药物研发体系。

关键词：药物研发靶分子信号通路药物筛选药物再定向再生医学癌症干细胞

三维生物打印结合海藻酸钠和纤维蛋白原构建仿生尿道修复补片的实验研究

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上海医学 2019年第3期42卷 164-169页

作者：张楷乐杨熙牛长梅赵伟新杨冉星王营胡晓勇傅强上海交通大学附属第六人民医院泌尿外科上海200233 苏州诺普再生医学有限公司美国维克森林大学再生医学研究所

目的将三维(3D)生物打印技术应用于尿道修复补片的构建,并评估其力学性能、细胞活力和临床应用可行性。方法以兔尿道组织和脱细胞基质作为模板,分离兔尿道成纤维细胞,应用3D生物打印技术结合海藻酸钠和纤维蛋白原水凝胶共同制备两种负... 详细信息

目的将三维(3D)生物打印技术应用于尿道修复补片的构建,并评估其力学性能、细胞活力和临床应用可行性。方法以兔尿道组织和脱细胞基质作为模板,分离兔尿道成纤维细胞,应用3D生物打印技术结合海藻酸钠和纤维蛋白原水凝胶共同制备两种负载兔成纤维细胞的仿生尿道修复补片:仿生尿道修复补片1(单纯海藻酸钠水凝胶构建的尿道补片)和仿生尿道修复补片2(在海藻酸钠水凝胶基础上使用纤维蛋白原水凝胶构建的尿道补片)。通过生物降解实验和生物力学测试分别评估仿生尿道修复补片1的生物降解性和力学性能。通过细胞活性染色,观察并计算0、3、6 d仿生尿道修复补片1和2内细胞的存活率。通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)实验检测仿生尿道修复补片2内纤维蛋白原水凝胶中细胞的扩增速率,以分光光度计吸光度(A值)表示。结果生物降解实验结果显示,仿生尿道修复补片1在Ⅱ型胶原酶溶液和灭菌水中均有明显的降解,10 d内其在Ⅱ型胶原酶溶液中的降解速率显著快于在灭菌水中,10～20 d时的降解速率较在灭菌水中平稳,>20～研究奠定了研究基础。

关键词：纤维蛋白原生物打印,三维海藻酸钠仿生尿道修复补片

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Janus微/纳米颗粒在生物医学中的应用

中国组织工程研究 2025年第28期29卷 6101-6109页

作者：陈森林朱舟万乾炳四川大学华西口腔医院修复科口腔疾病研究国家重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心四川省成都市610041

背景:Janus微/纳米颗粒因具有形状、结构、功能各向异性被广泛应用于组织工程、药物递送、癌症治疗、生物影像和传感等医学领域。目的:阐述Janus微/纳米颗粒在生物医学的前沿应用。方法:通过计算机检索中国知网、万方、PubMed、Web of S... 详细信息

背景:Janus微/纳米颗粒因具有形状、结构、功能各向异性被广泛应用于组织工程、药物递送、癌症治疗、生物影像和传感等医学领域。目的:阐述Janus微/纳米颗粒在生物医学的前沿应用。方法:通过计算机检索中国知网、万方、PubMed、Web of Science数据库中2010-2024年发表的相关文献,分别以“Janus纳米颗粒,Janus颗粒,双面神颗粒,药物递送,癌症治疗,生物影像,生物传感,组织工程”和“Janus nanoparticle,Janus particle,Drug delivery,Cancer therapy,Biosensing,Bioimaging,Tissue engineering”为中、英文检索词,进行筛选、整理、归纳、总结,最终纳入69篇文献进行综述。结果与结论:Janus微/纳米颗粒可根据基础材料性质分为有机、无机、有机-无机复合三大类,其合成策略有遮蔽、自组装、相分离、微流控和成核生长等。Janus微/纳米颗粒可通过高负载率、门控释放、自主运动等特性进行高效率药物递送。Janus微/纳米颗粒除了增强传统癌症治疗措施(放化疗)的治疗效果外,还可以应用于细胞免疫、蛋白药物、细胞铁死亡等新兴癌症治疗方法;可应用于增强生物影像(CT、MRI、超声)的增敏剂,实现高质量成像,用于指导诊断和治疗;可通过运载生长因子、增强生物支架机械性能和抗菌效果,应用于组织工程。综合目前的研究,研究者们通过集合不同有机聚合物、无机材料的物化特性以不同的合成策略合成功能定制的Janus微/纳米颗粒,应用于复杂的生物医学领域。目前Janus微/纳米颗粒应用于组织再生领域、大规模生产和人体临床试验的报道较少,因此该类材料的开发、合成策略、临床安全评估和转化仍需投入更大的研究力度。

关键词： Janus微/纳米颗粒组织工程药物运输癌症治疗生物影像生物传感工程化材料

柔毛水杨梅一个新成分促大鼠心肌再生效果及其治疗心肌梗死的初步研究

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中华心血管病杂志 2011年第5期39卷 414-419页

作者：莫烨华彭鹏林晓莉李中玉程蕾李明广州暨南大学再生医学教育部重点实验室 510632 香港创新医学实验室美国麻省大学分子医学中心

目的通过建立大鼠心肌梗死模型,探讨柔毛水杨梅的活性部位促进心肌再生的治疗效果.方法通过体内、体外生物活性导向的方法从中约柔毛水杨梅分离出促间充质干细胞向心肌分化的有效部位,作为治疗心肌梗死的成分,标记为心肌修复组分（HRF... 详细信息

目的通过建立大鼠心肌梗死模型,探讨柔毛水杨梅的活性部位促进心肌再生的治疗效果.方法通过体内、体外生物活性导向的方法从中约柔毛水杨梅分离出促间充质干细胞向心肌分化的有效部位,作为治疗心肌梗死的成分,标记为心肌修复组分（HRF）.将证实具有相似程度左心室梗死的20只实验大鼠分成治疗组和对照组,治疗组（n=10）予HRF灌胃（20 mg·kg-1·d-1）,对照组（n=10）予等量水灌胃,灌胃4周.用超声心动描记术评估心脏功能,Masson三色染色法计算心肌梗死面积及免疫组化双染色法确定心肌梗死区是否有新再牛的心肌细胞.结果治疗第2周,给药组的左心室射血分数[（66.2±6.9）%比（55.7±6.0）%,P〈0.01]和左心室短轴缩短分数[（46.8 ±5.8）%比（36.4±5.2）%,P〈0.01]均明显高于对照组（P〈0.01）,4周后检测改善效果仍然明显（P〈0.01）.治疗组4周后,心肌梗死面积相对芹心室总面积的百分比为19.O%±6.1%,明显低于对照组的31.1%±8.6%（P〈0.01）,并在心脏的梗死区内发现大量心肌细胞再生.结论中药柔毛水杨梅中分离出的这个全新的有效组分可以治疗心肌梗死,从而为治疗心肌梗死开辟了新方法.

关键词：心肌梗死心肌再生柔毛水杨梅

组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D调控H9c2细胞中HIF-1α/VEGF通路(英文)

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中国生物化学与分子生物学报 2020年第2期36卷 190-196页

作者：王燕刘淑宝张文菁朱冰梅南京中医药大学医学与生命科学学院药理学系南京210023 四川大学华西医院再生医学研究中心成都610041 田纳西大学健康科学中心医学院遗传学基因组学与信息学部孟菲斯38163美国

组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D(histone-lysine N-methyltransferase 2D,KMT2D)作为主要的组蛋白3第4位赖氨酸(H3K4)甲基转移酶,在调控胚胎发育、组织分化、代谢和肿瘤抑制方面发挥重要作用。在小鼠体内,敲除Kmt2d会导致严重的心脏发育缺陷... 详细信息

组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D(histone-lysine N-methyltransferase 2D,KMT2D)作为主要的组蛋白3第4位赖氨酸(H3K4)甲基转移酶,在调控胚胎发育、组织分化、代谢和肿瘤抑制方面发挥重要作用。在小鼠体内,敲除Kmt2d会导致严重的心脏发育缺陷最终造成胚胎期死亡。低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)作为调节细胞应对低氧的关键转录因子,能够调控多种下游基因转录。有相关研究揭示,表观遗传调控者能够调节HIF-1α的稳定性和活性。同样,作为表观遗传调控者的组蛋白甲基转移酶KMT2D是否参与低氧条件下HIF-1α对下游基因的调控,目前仍未知。在本研究中,观察在Kmt2d正常或缺乏的情况下,心肌细胞H9c2对低氧环境的应答反应。结果显示,与常氧条件相比,低氧状态下HIF-1α、组蛋白乙酰化酶P300、KMT2D及其介导的H3K4一甲基化(H3K4 mono-methylation,H3K4me1)的蛋白质水平增加(P研究表明,低氧条件下KMT2D参与调控HIF-1α和下游基因Vegf的表达。

关键词：组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D 组蛋白H3K4一甲基化低氧低氧诱导因子-1α/血管内皮生长因子

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牙髓再生治疗的临床操作管理及疗效评价

中华口腔医学杂志 2019年第9期54卷 584-588,589,590页

作者：黄定明杨懋彬周学东四川大学华西口腔医院牙体牙髓科口腔疾病研究国家重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心成都610041 2美国天普大学口腔医学院牙髓科天普大学口腔医学院再生医学实验室费城19140

牙髓坏死的患牙实现牙髓再生是目前牙体牙髓病临床治疗的探索热点,对于牙根未发育完成的年轻恒牙,采用血运重建术可部分实现牙髓再生和牙根继续发育成熟的目的。如何规范地开展此项技术提高疗效值得探讨,本文对牙髓再生技术中临床开展... 详细信息

牙髓坏死的患牙实现牙髓再生是目前牙体牙髓病临床治疗的探索热点,对于牙根未发育完成的年轻恒牙,采用血运重建术可部分实现牙髓再生和牙根继续发育成熟的目的。如何规范地开展此项技术提高疗效值得探讨,本文对牙髓再生技术中临床开展最广泛且获得一定疗效的牙髓血运重建技术的适应证选择、治疗前的准备、治疗步骤以及疗效评价等方面进行论述。

关键词：牙髓病学临床管理牙髓再生疗效评价

全身麻醉后手法牵引复位联合颈前路椎间盘切除减压融合术治疗下颈椎绞锁脱位的疗效分析

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中华创伤骨科杂志 2022年第7期24卷 577-582页

作者：李中麒李淼曹勇段春岳吴建煌胡建中吴天定中南大学湘雅医院骨科脊柱外科长沙410008 器官损伤衰老与再生医学湖南省重点实验室长沙410008 中南大学湘雅医院国家老年疾病临床医学研究中心长沙410008

目的探讨全身麻醉后手法牵引复位联合颈前路椎间盘切除减压融合术(ACDF)治疗下颈椎绞锁脱位的疗效。方法回顾性分析2019年1月至2020年12月中南大学湘雅医院骨科脊柱外科收治的53例外伤性下颈椎单节段脱位合并单/双侧关节突关节绞锁患者... 详细信息

目的探讨全身麻醉后手法牵引复位联合颈前路椎间盘切除减压融合术(ACDF)治疗下颈椎绞锁脱位的疗效。方法回顾性分析2019年1月至2020年12月中南大学湘雅医院骨科脊柱外科收治的53例外伤性下颈椎单节段脱位合并单/双侧关节突关节绞锁患者资料。男36例,女17例;年龄18~64岁,平均45.5岁。患者均在神经电生理监测下行手法牵引复位联合ACDF治疗,通过观察并发症,并比较手术前、后的美国脊髓损伤协会(ASIA)分级、改良的日本骨科协会(mJOA)评分和颈椎功能障碍指数(NDI)评估疗效。结果所有患者术后随访16~30个月(平均24个月),术后切口无感染,均一期愈合。患者术后出现谵妄2例,腹胀9例,下肢深静脉血栓形成4例,中枢性尿崩1例。术后影像学资料显示所有患者均实现颈椎序列复位,椎间骨性融合,无内固定物松脱。末次随访时患者的脊髓功能ASIA分级与术前相比,总体改善率为84.9%(45/53),VAS评分(2.0±0.5)分、mJOA评分(13.1±3.1)分、NDI指数(16.6±5.9)与术前[(7.5±1.5)分、(6.9±3.5)分、37.8±7.8]比较均显著改善,差异有统计学意义(P<0.05)。结论充分评估患者损伤状态的前提下,全身麻醉后在神经电生理监测下手法牵引复位联合ACDF是治疗单节段下颈椎骨折脱位合并关节突绞锁的安全、有效的方式。

关键词：颈椎脊柱骨折脱位手法复位

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不可逆电穿孔肿瘤消融器械发展现状

中国医疗器械杂志 2021年第6期45卷 655-661页

作者：何天帅谭焜孙倩倩张芷芮陈雪吕毅吴荣谦西安交通大学第一附属医院精准外科与再生医学国家地方联合工程研究中心西安市710061 西安交通大学第一附属医院陕西省再生医学与外科工程研究中心西安市710061 西安交通大学医学部西安市710061

介绍了不可逆电穿孔消融肿瘤的机制、优势、应用范围,以及目前世界上最先进的已获临床许可的医疗器械和研究用设备。临床用医疗器械包括美国Angiodynamics公司生产的Nanoknife 3.0、中国浙江赛诺微生产的Dophi^(TM) N3000陡脉冲治疗系... 详细信息

介绍了不可逆电穿孔消融肿瘤的机制、优势、应用范围,以及目前世界上最先进的已获临床许可的医疗器械和研究用设备。临床用医疗器械包括美国Angiodynamics公司生产的Nanoknife 3.0、中国浙江赛诺微生产的Dophi^(TM) N3000陡脉冲治疗系统和上海睿刀科技生产的复合陡脉冲治疗设备。研究用设备包括BTX或Bio-Rad公司生产的电穿孔仪。

关键词：不可逆电穿孔肿瘤消融电穿孔仪