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抗真菌γ-硫堇蛋白Rs-afp1基因导入苹果获得转基因植株

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农业生物技术学报 2001年第3期9卷 239-242+307页

作者：刘庆忠,赵红军,孙清荣,J.Ingersoll,F.A.Hammerschlag 山东省果树研究所山东省果树研究所山东省果树研究所美国农业部beltsville农业研究中心美国农业部beltsville农业研究中心泰安　271000 泰安　271000 泰安　271000

以“皇家嘎啦”（Ｒｏｙａｌ　Ｇａｌａ）苹果（Ｍａｌｕｓ　ｄｏｍｅｓｔｉｃａ　Ｂｏｒｋｈ）为试材，在绿色组织特异表达的菠菜核酮糖二磷酸羧化酶／加氧酶的激活酶（Ｒｕｂｉｓｃｏ－ａｃｔｉｖａｓｅ）启动子（ＲＣＡＰ）驱动下，... 详细信息

以“皇家嘎啦”（Ｒｏｙａｌ　Ｇａｌａ）苹果（Ｍａｌｕｓ　ｄｏｍｅｓｔｉｃａ　Ｂｏｒｋｈ）为试材，在绿色组织特异表达的菠菜核酮糖二磷酸羧化酶／加氧酶的激活酶（Ｒｕｂｉｓｃｏ－ａｃｔｉｖａｓｅ）启动子（ＲＣＡＰ）驱动下，将抗真菌γ－硫堇蛋白（γ－ｔｈｉｏｎｉｎ）Ｒｓ－ａｆｐ１基因和ｕｉｄＡ（ｇｕｓ）基因导入白化茎段外植体，获得了ｎｐｔⅡ抗性植株。转化体经ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇ杂交检测，证实了γ－硫堇蛋白Ｒｓ－ａｆｐ１基因和ｇｕｓ基因已经整合到苹果的染色体组上。ｇｕｓ染色证实了ＲＣＡＰ启动子在苹果组织中的特异性表达。转基因植株已移栽于大田，进行农业性状鉴定。

关键词： γ-硫堇蛋白 Rubisco激活酶抗真菌转基因苹果

猪繁殖与呼吸综合征病毒作为外源基因表达活载体的研究进展

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中国兽医科学 2024年第6期54卷 816-823页

作者：王树茂王桂花王安冉段宏勇姜一峰周艳君高飞李丽薇山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 中国农业科学院、上海兽医研究所上海200241 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

自美国(1987年)和欧洲(1990年)首次分离猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)以来,该病毒在全球流行已超过30年。直至今日,PRRSV仍然不断变异和进化,在我国的流行态势尤其复杂,在后非洲猪瘟时代仍然是影响养猪业的最具经济意义的病原体之一。... 详细信息

自美国(1987年)和欧洲(1990年)首次分离猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)以来,该病毒在全球流行已超过30年。直至今日,PRRSV仍然不断变异和进化,在我国的流行态势尤其复杂,在后非洲猪瘟时代仍然是影响养猪业的最具经济意义的病原体之一。目前,市售疫苗包括传统灭活病毒疫苗(KV)和改良活病毒疫苗(MLV)。然而,PRRSV的疫苗预防和控制尚未完全实现。当前迫切需要开发一种安全、有效、通用的基因工程疫苗。基于PRRSV感染性克隆反向遗传平台表达外源基因,包括标记基因、免疫增强基因或其他病毒抗原基因,构建重组PRRSV疫苗、基因缺失疫苗、广谱通用疫苗等成为了研究的热点。在此,我们综述了近年来PRRSV作为病毒活载体表达外源基因的研究进展及其在新型基因工程疫苗开发中的潜在应用前景。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 基因工程疫苗感染性克隆外源基因

梨韧皮部特异表达启动子AtSUC2驱动下的GUS基因的转化和表达

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园艺学报 2008年第4期35卷 487-492页

作者：孙清荣孙洪雁赵衍茹斯·海门得罗伯特·戴维斯山东省果树研究所山东泰安271000 美国农业部百思维尔农业研究中心植物分子病理实验室美国马里兰20705

以‘Old Home’梨无菌苗叶片为外植体,利用根癌农杆菌介导将专一在韧皮部表达启动子AtSUC2驱动下的GUS基因转入‘Old Home’中。筛选出了‘Old Home’梨叶片高效遗传转化的最佳条件:农杆菌和外植体在液体培养基上共培比在固体培养基上... 详细信息

以‘Old Home’梨无菌苗叶片为外植体,利用根癌农杆菌介导将专一在韧皮部表达启动子AtSUC2驱动下的GUS基因转入‘Old Home’中。筛选出了‘Old Home’梨叶片高效遗传转化的最佳条件:农杆菌和外植体在液体培养基上共培比在固体培养基上共培转化率提高5倍。PCR分析和Southern杂交鉴定表明GUS基因已整合到转基因植株的基因组中,组织化学检测和Western杂交鉴定证明了GUS基因在转基因植株韧皮部中的表达。

关键词：梨启动子韧皮部特异表达基因转化

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GUA基因在梨转化植株中的稳定表达

植物生理学通讯 2008年第3期44卷 465-468页

作者：孙清荣孙洪雁赵衍 HAMMOND Rosemarie DAVIS Robert 山东省果树研究所山东泰安271000 美国农业部百思维尔农业研究中心植物分子病理实验室

以获得的梨转GUS基因植株的试管苗为试材,转基因植株的叶片在含卡那霉素的再生培养基上可成功再生不定梢,这些不定梢在含卡那霉素的生根培养基上可诱导生根。再生不定梢经组织化学检测仍表现出GUS基因的表达。而非转基因植株的叶片在含... 详细信息

以获得的梨转GUS基因植株的试管苗为试材,转基因植株的叶片在含卡那霉素的再生培养基上可成功再生不定梢,这些不定梢在含卡那霉素的生根培养基上可诱导生根。再生不定梢经组织化学检测仍表现出GUS基因的表达。而非转基因植株的叶片在含卡那霉素的再生培养基上不能产生不定梢,显示外源基因在转基因植株中的表达在无性繁殖后代中是稳定遗传的。

关键词：梨转基因植株 GUS基因稳定表达

茎段外植体白化处理促进“皇家嘎拉”苹果不定芽再生

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落叶果树 2001年第1期33卷 4-7页

作者：刘庆忠 Salih.S F.A.Hammerschlag 山东省果树研究所泰安271000 美国农业部beltsville农业研究中心

研究比较了来自正常和白化处理的皇家嘎拉 (RoyalGala)苹果 (MalusdomesticBorkh)新梢节段外植体不定芽的离体再生。结果表明 ,白化处理的新梢顶部第一节段外植体所产生的不定芽数比第二、第三、第四节段分别高 2、8、73倍 ;白化新梢的... 详细信息

研究比较了来自正常和白化处理的皇家嘎拉 (RoyalGala)苹果 (MalusdomesticBorkh)新梢节段外植体不定芽的离体再生。结果表明 ,白化处理的新梢顶部第一节段外植体所产生的不定芽数比第二、第三、第四节段分别高 2、8、73倍 ;白化新梢的外植体不定芽再生数目比同一部位正常新梢高 7倍。培养基添加较低浓度的TDZ有利于不定芽再生 ,对白化外植体来说 ,1 μmol/L比 1 0 μmol/L高 2 .5倍 ,非白化外植体则高 7倍 ,平均每个外植体的不定芽再生数高达 68.8个。白化第一节段外植体的不定芽再生能力比常用的叶片外植体高 4倍。

关键词：皇家嘎拉苹果茎段外植体离体再生白化处理不定芬

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培育苹果转基因植株的研究

落叶果树 2000年第1期32卷 5-9页

作者：刘庆忠 Hammerschlag F.A. 山东省果树研究所泰安271000 美国农业部beltsville农业研究中心

采用“皇家嘎拉”苹果（ＭａｌｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃａＢｏｒｋｈ）白化茎段外植体，通过根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）ＥＨＡ１０５（ｐ３５ＳＧＵＳｉｎｔ）介导，证明了培养基中存在生长... 详细信息

采用“皇家嘎拉”苹果（ＭａｌｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃａＢｏｒｋｈ）白化茎段外植体，通过根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）ＥＨＡ１０５（ｐ３５ＳＧＵＳｉｎｔ）介导，证明了培养基中存在生长素可促进基因转化，转化效率比对照提高２倍以上。将外植体与ＥＨＡ１０１（ｐ３５ＳＧＵＳ）株系在含有生长素的培养基中共培养，获得了转基因植株。采用ＰＣＲ分析和ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ核酸杂交，确定ＧＵＳ基因已整合到苹果植株的染色体上。组织化学染色确定了ＧＵＳ基因在植株体内的表达。

关键词：苹果 GUS基因农杆菌转基因植株抗病育种

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家禽的精液保存

国外畜牧学(猪与禽) 1984年第1期 21-23页

作者： T.J.Sexton 许怀让美国农业部beltsville农业研究中心家禽生理实验室

引言家禽育种工作者当前面临一个困扰着大多数牲畜饲养业的共同问题,即生产成本不断增长。劳力、饲料和能源成本的不断增长迫使育种者考虑较经济的家禽繁殖法。例如,原种鸡和火鸡的育种场和祖代火鸡的育种场都在用人工授精(AI)技术生产... 详细信息

引言家禽育种工作者当前面临一个困扰着大多数牲畜饲养业的共同问题,即生产成本不断增长。劳力、饲料和能源成本的不断增长迫使育种者考虑较经济的家禽繁殖法。例如,原种鸡和火鸡的育种场和祖代火鸡的育种场都在用人工授精(AI)技术生产种蛋。AI的一个缺点是需要一些工作人员,这意味着成本有相当大的增加。然而,育种者可以通过革新技术和设备,实现机械化,研究保证种公禽最大精液产量的方法,以及改进稀释和保存精液的方法来降低AI的成本。使精液在0℃以上保存达24小时,即可使原代和祖代育种场更好地应用遗传性

关键词：冷冻精液受精力火鸡冻融受精率繁殖性能鸡精液精液处理精液保存禽类家禽

基于UHPLC-LTQ-Orbitrap高分辨质谱的黄花菜中化学成分快速鉴定及裂解途径分析

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中国食品学报 2020年第9期20卷 256-264页

作者：刘伟孙江浩张菊华张群朱向荣苏东林单杨湖南省农业科学院湖南省农产品加工研究所长沙410125 中南大学隆平分院长沙410125 美国农业部贝尔茨维尔人类营养研究中心美国贝尔茨维尔20705

采用超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱(UHPLC-LTQ-Orbitrap)高分辨质谱法分析黄花菜中的化学成分。在负离子模式下,采用Hypersil Gold AQ RP-C18色谱柱(100 mm×3.0 mm,1.9μm),以0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸乙腈溶液为流动相梯度... 详细信息

采用超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱(UHPLC-LTQ-Orbitrap)高分辨质谱法分析黄花菜中的化学成分。在负离子模式下,采用Hypersil Gold AQ RP-C18色谱柱(100 mm×3.0 mm,1.9μm),以0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸乙腈溶液为流动相梯度洗脱,流速0.3 mL/min;用LTQ-Orbitrap高分辨质谱解析多级质谱数据,并对成分进行定性分析。根据液相保留时间、紫外吸收、精确分子质量数据、多级质谱碎片离子和相关文献报道,从黄花菜中共鉴定出27个组分。其中,酚酸类化合物12个,黄酮醇类15个及其它类1个。本方法可高效、快速、灵敏、全面地分析黄花菜的化学成分,可实现酚酸及黄酮类不同化合物的鉴别,为探讨黄花菜的药效物质基础和类似化合物的结构鉴定提供理论依据。

关键词：黄花菜超高效液相色谱 LTQ-Orbitrap高分辨质谱裂解途径

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球虫病——一个长期存在的问题

国外畜牧学（猪与禽） 1991年第3期11卷 39-42页

作者：易明 M.D.Ruff 美国农业部beltsville农业研究中心畜禽科学研究所

为最终消灭由球虫病所造成的经济损失。可能要依靠结合应用多种方法(如疫苗接种、管理和投药)的防制措施。

关键词：球虫病防治