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庚型肝炎病毒E2蛋白在转基因小鼠细胞内的定位及致病性研究

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第二军医大学学报 2000年第9期21卷 842-845页

作者：胡卫江陈景山戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 美国耶鲁大学

目的 :在已建成庚型肝炎病毒 (HGV)转基因小鼠模型的基础上 ,研究 HGV包膜蛋白 E2在转基因小鼠体内的表达及定位 ,并探讨 HGV在转基因小鼠体内是否引起病理学改变。方法 :取小鼠的器官组织用免疫组织化学方法 ,以 HGV E2蛋白的单克隆... 详细信息

目的 :在已建成庚型肝炎病毒 (HGV)转基因小鼠模型的基础上 ,研究 HGV包膜蛋白 E2在转基因小鼠体内的表达及定位 ,并探讨 HGV在转基因小鼠体内是否引起病理学改变。方法 :取小鼠的器官组织用免疫组织化学方法 ,以 HGV E2蛋白的单克隆抗体对 HGV包膜蛋白 E2的表达进行分析和定位。通过血清 AL T检测及常规病理学技术观察转基因小鼠不同器官的病理学变化。结果 :免疫组织化学结果表明 ,HGV E2主要表达于转基因小鼠肝细胞膜 ,少量表达于胞质内 ;肾脏、心脏、肺及脾脏均未呈现 E2蛋白的阳性反应。组织病理学检查显示转基因小鼠的肝细胞出现水样变性、脂肪变性及淋巴细胞浸润等轻度炎性反应 ,这些变化不随年龄增长而加重 ;其他组织的病理学检查无异常。转基因小鼠血清转氨酶 AL T与对照小鼠无明显差异。结论 :HGV包膜蛋白 E2的表达具有相对的嗜肝性 ,主要分布在转基因小鼠的肝细胞膜 ,并可引起轻度肝细胞损伤。

关键词：转基因 E2蛋白致病性庚型肝炎 HGV

Scya1,Scya2和Scya12是控制小鼠对单相缓和非复发型实验应变性脑脊髓炎(EAE)易感性的侯选基因

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云南大学学报（自然科学版） 1999年第S3期21卷 217-218页

作者： Russell J.Butterfied 马润林 James F.Hachary R.W.Doerge Elizabeth P.Blankenhorn CoryTeuscher 美国伊利诺依大学病理生物学系中国科学院遗传研究所医学和动物分子生物学实验室北京100101 美国普度大学统计及农学系美国阿利海涅健康大学微生物及免疫学系

鼻咽癌组织中EB病毒LMP1与Fascin及磷酸化Stat3表达的相关性

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癌症 2008年第10期27卷 1070-1076页

作者：刘秋雨韩安家游淑源董愉杨清绪吴珏珩黎孟枫中山大学附属第一医院病理科中山大学中山医学院病理学教研室广东广州510080 广东省惠州市中心人民医院病理科广东惠州516001 中山大学中山医学院微生物学教研室

背景与目的:EB病毒潜伏膜蛋白1(latent membrane protein 1,LMP1)是一重要的癌基因。Fascin蛋白是一种能与F-肌动蛋白结合的细胞骨架蛋白,参与细胞的迁移、粘附等功能。磷酸化的信号转导及转录激活因子3(phosphorylated signal transduc... 详细信息

背景与目的:EB病毒潜伏膜蛋白1(latent membrane protein 1,LMP1)是一重要的癌基因。Fascin蛋白是一种能与F-肌动蛋白结合的细胞骨架蛋白,参与细胞的迁移、粘附等功能。磷酸化的信号转导及转录激活因子3(phosphorylated signal transducer and activator of transcription 3,pStat3)是信号转导及转录激活因子(STATs)家族中与人类肿瘤发生发展密切相关的一种蛋白。本实验通过检测鼻咽癌及淋巴结转移癌中LMP1、Fascin和pStat3的表达,以探讨这些指标在鼻咽癌发生发展中的意义。方法:采用原位杂交和免疫组化法分别检测43例鼻咽癌组织(21例伴淋巴结转移;22例未伴淋巴结转移)及相应的21例癌转移淋巴结中EB病毒编码的非多聚腺苷酸RNA(EBV-encoded small RNA,EBER)的表达及LMP1、Fascin、pStat3、p53、Ki-67和Bcl-2的表达,并采用统计学分析上述各蛋白表达水平之间的相关性。采用Western blot检测转染LMP1表达质粒对鼻咽癌细胞中Fascin和pStat3表达的影响。结果:43例鼻咽癌组织及21例癌转移淋巴结中,EBER均呈阳性表达;43例鼻咽癌组织中,LMP1、Fascin、pStat3、p53、Ki-67、Bcl-2的阳性表达率分别为69.8%(30/43)、93.0%(40/43)、72.1%(31/43)、90.7%(39/43)、88.4%(38/43)、88.4%(38/43),LMP1的表达与其余5种指标的表达之间均具有明显的正相关(P<0.05)。21例鼻咽癌淋巴结转移组织中LMP1表达率为46.7%(10/21)。LMP1表达可明显提高鼻咽癌细胞中Fascin和pStat3的表达水平。结论:鼻咽癌组织及淋巴结转移癌组织中LMP1均有较高的表达率。鼻咽癌组织中LMP1表达与Fascin和pStat3表达之间均存在正相关。LMP1表达可明显上调鼻咽癌细胞中Fascin和pStat3的表达水平。LMP1的表达与癌细胞的增殖指数密切相关。

关键词：鼻咽肿瘤 Epstein-Barr病毒潜伏膜蛋白1 Fascin STAT

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使用限制性内切酶分析不同的伪狂犬病病毒株

中国畜禽传染病 1989年第5期11卷 38-40,19页

作者：李树根 Peter Cowen 广州动植物检疫所中心实验室美国北卡罗来纳州州立大学兽医学院微生物学病理学和寄生虫病学系

使用Bam HI、Hinf I、KPn I和Sal I限制性内切酶。对美国北卡罗来纳州的5株伪狂犬病病毒以及Shope、Ind-FH伪狂犬病强毒株和改良的Norden伪狂犬病弱毒疫苗株提纯的DNA进行了分析。结果,Shope、Ind-FH和Norden毒株的DNA酶切图谱。无论从... 详细信息

使用Bam HI、Hinf I、KPn I和Sal I限制性内切酶。对美国北卡罗来纳州的5株伪狂犬病病毒以及Shope、Ind-FH伪狂犬病强毒株和改良的Norden伪狂犬病弱毒疫苗株提纯的DNA进行了分析。结果,Shope、Ind-FH和Norden毒株的DNA酶切图谱。无论从DNA片段数量、降解的位置,还是从分子量测定的结果,都与北卡罗来纳州的5株伪狂犬病病毒存在不同程度的差异。NC85-1与NC86-1毒株类似DNA酶切图谱的伪狂犬病病毒,而NC86-2,NC87-1和NC87-2毒株显然是不同DNA酶切图谱的3株伪狂犬病病毒。

关键词：伪狂犬病毒株限制性内切酶分析

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使用PCR检测角膜绿脓杆菌(英文)

国际眼科杂志 2011年第7期11卷 1125-1131页

作者： Maria E.Hillenbrand Paul P.Thompson Robert M.Q.Shanks Regis P.Kowalski 美国宾夕法尼亚州匹兹堡大学医学院眼科及视觉科学研究中心UPMC眼科中心The Charles T.Campbell.眼科微生物学实验室

目的:确定一个种特异性的实时聚合酶链反应(PCR)法检测绿脓杆菌(PA),一个可能提供给其他细菌病原体通用目标的用于PA的次一级目标DNA,并验证这种用于诊断测试的检测方法。方法:利用已知PA的角膜炎株建立对ecfXPA基因和16SrRNA基因的PCR... 详细信息

目的:确定一个种特异性的实时聚合酶链反应(PCR)法检测绿脓杆菌(PA),一个可能提供给其他细菌病原体通用目标的用于PA的次一级目标DNA,并验证这种用于诊断测试的检测方法。方法:利用已知PA的角膜炎株建立对ecfXPA基因和16SrRNA基因的PCR检测。两个实验的结果参数是"检测限"(LOD),扩增效率(AE)和聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)扩增产物分析。两种检测方法通过对20例PADNA阳性的真阳性临床标本和20例不含有PADNA的真阴性样品的检测进行了验证。描述性统计和PAGE分析用作为结果参数。结果:通过ecfX检测的AE为96.6%,而LOD为每微升33.6目标DNA拷贝。16SrRNA检测的AE为103.4%,而LOD为每微升8.12拷贝。ecfX和16SrRNA检测的敏感性,特异性,阳性预测值,阴性预测值,效率分别为(75%,95%,94%,79%和85%),及(70%,100%,100%,77%和85%)。这两种PCR方法经过了验证,通过了PAGE分析的DNA图谱确认。结论:这里描述的PCR方法可能是对PA角膜炎标准诊断方法的一种有用的辅助检测。

关键词：绿脓杆菌角膜实时聚合酶链反应 ecfX 16S rRNA

KSHV RTA介导的宿主细胞Bcl-2表达上调促进病毒的溶解性感染

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中国现代医学杂志 2013年第29期23卷 8-13页

作者：高建明 Erle S.Robertson 三峡大学医学院病理生理学教研室湖北宜昌443002 美国宾夕法尼亚大学医学院微生物学教研室宾夕法尼亚费城19104

目的研究卡泼肉瘤病毒(kaposis's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)编码的复制转录激活因子(replication and transcription activator,RTA)调控宿主细胞Bcl-2表达的分子机制及其生物学意义。方法用实时聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹(western blotting)技术检测RTA转染的细胞、TPA诱导的KSHV阳性细胞Bcl-2 mRNA和蛋白质表达水平;采用荧光素酶报告基因技术检测RTA对Bcl-2基因启动子活性的调节。构建RNA干扰慢病毒载体,筛选稳定感染的BC3细胞,TPA诱导48 h后,分别用PCR、PI染色流式细胞术检测病毒子DNA和细胞凋亡率。结果 RTA转染的细胞、TPA诱导的KSHV阳性细胞Bcl-2 mRNA和蛋白质表达水平显著增高。RTA反式激活Bcl-2基因启动子,这种激活作用具有剂量依赖性。用RNA干扰技术抑制Bcl-2基因后,TPA诱导的KSHV阳性细胞与对照组细胞相比凋亡率增加,病毒子产生减少。结论KSHV RTA能够调控内源性细胞凋亡信号通路,延缓溶解性感染宿主细胞的凋亡,并促进病毒子产生。

关键词：复制转录激活因子 B细胞淋巴瘤-2 表达上调抗凋亡溶解性感染

54例慢性乙型肝炎患者肝组织乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA与血清HBsAg定量检测结果分析

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中华肝脏病杂志 2011年第11期19卷 815-817页

作者：李韦杰李伯安赵景民韩佳琪刘妍江玲毛远丽鲁凤民徐东平解放军第三0二医院肝衰竭诊疗研究中心北京100039 解放军第三0二医院临床检验中心北京100039 解放军第三0二医院肝病理科北京100039 北京大学医学部微生物学系

目的检测慢性乙型肝炎患者肝组织HBV共价闭合环状DNA（cccDNA）和血清HBsAg，分析两种定量指标之间及其与血清HBVDNA载量的相关性。方法应用PSAD消化＋滚环扩增＋跨缺口实时荧光PCR方法，定量检测54例慢性乙型肝炎患者甲醛固定石蜡包埋... 详细信息

目的检测慢性乙型肝炎患者肝组织HBV共价闭合环状DNA（cccDNA）和血清HBsAg，分析两种定量指标之间及其与血清HBVDNA载量的相关性。方法应用PSAD消化＋滚环扩增＋跨缺口实时荧光PCR方法，定量检测54例慢性乙型肝炎患者甲醛固定石蜡包埋肝组织HBVcccDNA水平；用化学发光试剂定量检测患者血清HBsAg。用Pearson检验及直线回归分析方法对数据进行分析。结果患者肝组织HBVcccDNA与血清HBsAg定量水平之间呈正相关（r=0．459，P〈0．01），但与血清HBVDNA载量相关性无统计学意义；血清HBsAg定量水平与血清HBVDNA载量呈正相关（r=0．328，P〈0．05），与病毒复制效率呈负相关（r=－0．373，P〈0．05）。结论慢性乙型肝炎患者肝组织HBVcccDNA载量与血清HBsAg定量水平相关，结合血清HBVDNA定量检测，可以更全面的反映HBV的复制水平，评价抗病毒疗效。

关键词：肝炎病毒 ,乙型共价闭合环状DNA 肝炎抗原乙型

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Double-hit淋巴瘤诊治新进展

中国肿瘤临床 2016年第14期43卷 594-597页

作者：吕慧娟董玲贾晓辉孔令喆王先火孟斌付凯张会来天津医科大学肿瘤医院淋巴瘤内科中美淋巴血液肿瘤诊治中心国家肿瘤临床医学研究中心天津市肿瘤防治重点实验室天津市300060 天津医科大学肿瘤医院病理科国家肿瘤临床医学研究中心中美淋巴血液肿瘤诊治中心天津市肿瘤防治重点实验室美国内布拉斯加大学医学中心

荧光原位杂交技术(FISH)是诊断"二次打击"淋巴瘤(double-hit lymphoma,DHL)的金标准,并能够指导治疗。C-myc/Bcl-2和C-myc/Bcl-6双表达淋巴瘤(double-expression lymphoma,DEL)的发病率高于DHL,约2/3的DEL为non-GCB亚型,而DHL大部分是GCB亚型。对于免疫组织化学检验结果,C-myc/Bcl-2或Bcl-6高表达的患者需作FISH检查确诊DHL,但是目前对于界定C-myc/Bcl-2或Bcl-6高表达的临界值仍存在争议。DHL具有相对独特的临床特征和不良预后,关于Myc/Bcl-6 DHL和Myc/Bcl-2 DHL之间的预后差异目前还未达成共识。尽管高强度的化疗如R-EPOCH/Hyper CVAD可以延长DHL患者的无进展生存期(progression-free survival,PFS)和总生存期(overall survival,OS),但总体来说现有治疗方案对DHL疗效不佳。特异性的靶向药物有望取代传统化疗的主导地位,改善其不良预后,并为其制定个体化治疗提供依据和方向。根据以上特征,2016年新版WHO淋巴瘤分类将其定义为高级别B细胞淋巴瘤伴Bcl-2或/和Bcl-6与Myc基因重排的独立亚型。本文就DHL的定义、发病机理、争论的焦点及最新的诊治进展作一综述。

关键词：二次打击淋巴瘤双表达淋巴瘤诊断治疗研究进展

结核分枝杆菌抗原Ag85B-Mpt64 190-198-HspX融合蛋白免疫原性的初步观察

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第2期29卷 103-107页

作者：李青姜雯雯雒彧于红娟宋楠楠王秉翔刘昕张颖祝秉东兰州大学结核病研究中心暨病理生理学研究所 730000 兰州大学结核病研究中心暨病原生物学研究所 730000 兰州生物制品研究所 730046 美国霍普金斯大学布隆博格公共卫生学院分子微生物学与免疫学系

目的为了建立对潜伏感染细菌的保护性免疫应答，本研究选择结核分枝杆菌休眠期、对数生长期最重要的保护性抗原HspX、Mpt64的190～198位的氨基酸多肽（CD8^＋T细胞表位）及Ag85B，构建融合蛋白Ag85B-Mpt64 190-198-HspX（AMH），并对其... 详细信息

目的为了建立对潜伏感染细菌的保护性免疫应答，本研究选择结核分枝杆菌休眠期、对数生长期最重要的保护性抗原HspX、Mpt64的190～198位的氨基酸多肽（CD8^＋T细胞表位）及Ag85B，构建融合蛋白Ag85B-Mpt64 190-198-HspX（AMH），并对其免疫原性进行研究。方法PCR分别扩增Ag85B、Mpt64 190-198-HspX基因，并依次插入pET-28a质粒中，在大肠杆菌BL21中表达纯化AMH蛋白。将该蛋白和佐剂二甲基三十六烷基铵和卡介苗多糖核酸（DDA＋BCG—PSN）混合构建亚单位疫苗，分别于1、4、7周皮下免疫C57BL／6小鼠3次，最后一次免疫5周后检测体液免疫与细胞免疫反应。结果该融合蛋白以包涵体形式能在大肠杆菌中稳定表达，经Ni—NTA层析柱纯化得到纯度较高的蛋白；构建的亚单位疫苗免疫动物能产生针对结核杆菌特定抗原（PPD、Ag85B、Mpt64 190-198和HspX）的特异性的细胞免疫和体液免疫应答，具有较强的免疫原性。结论融合蛋白AMH作为结核亚单位疫苗候选的融合蛋白抗原有必要进一步研究。

关键词：结核分枝杆菌亚单位疫苗融合蛋白 Ag85B HspX