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呼吸道合胞病毒NS1蛋白鼠单克隆抗体的制备

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生物工程学报 2024年第5期40卷 1536-1547页

作者：陈娇王亚娟陈志华茹毅郑海学裴晶晶中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046 兰州理工大学生命科学与工程学院甘肃兰州730050

本研究旨在制备抗呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NS1)单克隆抗体,以分析在转染和感染过程中NS1蛋白的表达和分布情况,并评估其在免疫沉淀反应中的应用价值。将NS1基因片段构建... 详细信息

本研究旨在制备抗呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NS1)单克隆抗体,以分析在转染和感染过程中NS1蛋白的表达和分布情况,并评估其在免疫沉淀反应中的应用价值。将NS1基因片段构建至原核表达质粒,经大肠杆菌表达、亲和层析纯化后得到NS1蛋白,将纯化的蛋白免疫小鼠后,通过间接酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)技术筛选能稳定分泌NS1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并将该单抗用于间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)与免疫印迹(Western blotting)检测,分析RSV NS1在过表达细胞和病毒感染细胞中的表达与分布情况,评估该单抗在免疫沉淀反应中的应用价值。结果发现,RSV NS1蛋白在大肠杆菌中成功表达及纯化,免疫小鼠后,获得了一株特异性强、反应性好的RSV NS1单抗,其亚型为IgG1,且抗体效价可达1:15360000;使用该单抗鉴定出RSV NS1蛋白在转染和感染细胞中正常表达,IFA结果表明,NS1主要分布在细胞质与细胞核;并验证该单抗在免疫沉淀反应中作为捕获抗体能够特异性结合细胞中表达的NS1蛋白。本研究经原核表达系统成功获得RSV NS1蛋白,成功制备出抗RSV NS1单抗,该抗体能特异性识别NS1蛋白,可被应用于免疫沉淀方法,为NS1蛋白的功能研究奠定了基础。

关键词：呼吸道合胞病毒 NS1蛋白原核表达单克隆抗体免疫沉淀

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荧光RNA及其生物传感技术研究进展

遗传 2024年第2期46卷 92-108页

作者：左方婷张雅强杨慧敏杨弋陈显军华东理工大学光遗传学与合成生物学交叉学科研究中心生物反应器工程国家重点实验室华东理工大学药学院上海市细胞代谢光遗传学技术前沿科学研究基地华东理工大学生物工程学院

荧光RNA技术是一种新兴的RNA标记技术，可用于活细胞RNA的原位实时标记与成像，对于人们理解RNA的功能和调控机制发挥着至关重要的作用。基于荧光RNA的生物传感技术可用于活细胞内小分子代谢物以及蛋白质等靶标的实时动态检测，为生命... 详细信息

荧光RNA技术是一种新兴的RNA标记技术，可用于活细胞RNA的原位实时标记与成像，对于人们理解RNA的功能和调控机制发挥着至关重要的作用。基于荧光RNA的生物传感技术可用于活细胞内小分子代谢物以及蛋白质等靶标的实时动态检测，为生命科学基础研究以及生物医学传感技术开发提供极具价值的工具。本文对遗传编码的荧光RNA的发展历程、荧光RNA技术在活细胞RNA成像，以及基于荧光RNA的生物传感技术在活细胞代谢物检测等方面的应用进行了介绍和总结，并对该领域的发展现状和未来发展方向展开讨论和展望，以期为该技术的进一步发展和在相关领域的应用提供参考。

关键词：荧光RNA 荧光标记 RNA成像生物传感

呼吸道合胞病毒NS2蛋白单克隆抗体的制备及初步研究

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病毒学报 2024年第2期40卷 302-313页

作者：王亚娟陈娇陈志华茹毅郑海学裴晶晶兰州理工大学生命科学与工程学院兰州730050 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心兰州730046

呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)是一种引起婴幼儿下呼吸道感染的RNA病毒,其非结构蛋白(Nonstructural protein 2,NS2)在病毒复制和宿主抗病毒免疫中起到关键作用,但目前尚无商品化NS2单克隆抗体。本研究选取NS2基因,... 详细信息

呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)是一种引起婴幼儿下呼吸道感染的RNA病毒,其非结构蛋白(Nonstructural protein 2,NS2)在病毒复制和宿主抗病毒免疫中起到关键作用,但目前尚无商品化NS2单克隆抗体。本研究选取NS2基因,经密码子优化后构建重组质粒pET-32a-NS2。将该重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经16℃诱导表达后,对表达蛋白进行SDS-PAGE鉴定。应用亲和层析技术纯化重组蛋白,将纯化的蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体,并将该单克隆抗体用于Western blot分析、免疫荧光检测和免疫沉淀反应。结果表明,诱导后的重组蛋白为可溶性表达,并经纯化后得到高纯度的NS2蛋白;纯化的NS2蛋白免疫小鼠后,获得了一株特异性强、反应性好的RSV NS2单克隆抗体4A4 2B2,其亚型为IgG1,且抗体效价可达1∶1024000;使用该单克隆抗体鉴定出RSV NS2蛋白在转染和感染细胞中正常表达,且NS2主要分布在细胞质中,在细胞核周围形成点状聚集体;在免疫沉淀反应中,该单克隆抗体作为捕获抗体能够特异性结合细胞中表达的NS2蛋白,为NS2蛋白的功能研究奠定了基础。

关键词：呼吸道合胞病毒 NS2蛋白原核表达单克隆抗体

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脑卒中患者二级预防健康教育的最佳证据总结

现代医药卫生 2024年第S01期40卷 28-33页

作者：许剑蕾荣晓珊陈晶晶袁浩斌李艳王正廖阳上海市养志康复医院(上海市阳光康复中心) 上海201619 澳门理工学院中国澳门999078

目的检索、评鉴和汇总脑卒中患者二级预防健康教育的最佳证据。方法检索有关脑卒中患者二级预防健康教育的相关证据包括临床实践指南、专家共识、证据总结等,检索时限为2017年10月至2022年10月。检索的数据库和专业网站包括The Cochrane... 详细信息

目的检索、评鉴和汇总脑卒中患者二级预防健康教育的最佳证据。方法检索有关脑卒中患者二级预防健康教育的相关证据包括临床实践指南、专家共识、证据总结等,检索时限为2017年10月至2022年10月。检索的数据库和专业网站包括The Cochrane Library、The Joanna Briggs Institute Library、National Institute for Health and Care Excellence、国际指南协作网、加拿大安大略注册护士协会网站、BMJ最佳临床实践、UpToDate、CINAHL、PubMed、Science Direct、医脉通、中国生物医学文献服务网、中国知网、万方数据库、维普、澳大利亚国家脑卒中基金会、美国卒中学会、欧洲卒中组织、中国卒中学会、中国康复医学会等。由2名研究者独立对检索到的文献进行质量评鉴和证据提取。研究者之间的任何意见分歧进行讨论,并达成共识。结果共纳入8篇文献,其中实践指南5篇、专家共识3篇。汇总的最佳证据主要涉及脑卒中危险因素管理和服药管理等10个方面,共33项。结论脑卒中患者二级预防的健康教育应重点关注危险因素管理和服药管理。建议医护人员在应用证据时,充分考虑临床的实际情况,并结合患者的需求和偏好,制定个性化的健康教育方案,降低脑卒中的复发率。

关键词：脑卒中二级预防健康教育证据总结循证护理

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Tollip敲除猪肾细胞系的构建

畜牧兽医学报 2024年第4期55卷 1810-1818页

作者：王家丽杨帆邵文华黄梦瑶曹伟军蒲秀瑛张伟郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730000 兰州理工大学生命科学与工程学院兰州730050 甘肃省病原生物学基础学科研究中心兰州730046

旨在探究Toll作用蛋白(toll-interacting protein, Tollip)对口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)增殖的影响,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Tollip基因缺失的猪肾细胞系(porcine kidney cell line, PK-15),并通过PCR测序和Western blot确认敲除效果,然后利用CCK-8试剂盒测定Tollip缺失后细胞活力变化,确认敲除细胞与野生细胞无显著差异,用FMDV感染敲除细胞后,采用Western blot、间接免疫荧光、实时荧光定量和病毒滴度测定等方法测定病毒在敲除细胞系中复制情况。结果显示:感染FMDV后,敲除细胞与野生细胞相比,显著促进了病毒的复制。综上,在PK-15细胞上,成功构建Tollip缺失细胞系,且试验表明Tollip的缺失有助于FMDV的复制。研究结果为后续Tollip功能研究及抗病毒机制研究提供理论依据。

关键词： CRISPR/Cas9 Tollip基因细胞系口蹄疫病毒

NiTi形状记忆合金的功能特性及其应用发展

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材料工程 2024年第2期52卷 60-77页

作者：杨超廖雨欣卢海洲颜安蔡潍锶李鹏旭华南理工大学国家金属材料近净成形工程技术研究中心广州510640 广东技术师范大学机电学院广州510665

NiTi形状记忆合金(shape memory alloys,SMAs)作为一种智能材料,具有良好的超弹性、形状记忆效应和生物相容性等功能特性,被广泛应用于航空航天、医疗器械和工程建筑等领域。其中超弹性在宏观上表现为发生较大的变形仍能恢复原形状,且... 详细信息

NiTi形状记忆合金(shape memory alloys,SMAs)作为一种智能材料,具有良好的超弹性、形状记忆效应和生物相容性等功能特性,被广泛应用于航空航天、医疗器械和工程建筑等领域。其中超弹性在宏观上表现为发生较大的变形仍能恢复原形状,且其远大于常见金属可恢复的弹性应变。形状记忆效应则是温度激励下奥氏体和马氏体两相的相互转变,根据宏观变形分为单程、双程和全程形状记忆效应。而NiTi SMAs的生物相容性体现在低弹性模量和低生物毒性等方面,可应用于正畸、矫正、心血管支架等医疗器件。为充分发挥NiTi SMAs的功能,研究者们不断开发NiTi SMAs相关的智能结构。本文简要综述了近年来研究和发展NiTi SMAs的不同功能特性及其对应的智能结构典型应用,详细介绍和讨论了NiTi SMAs的功能特性、关注问题和应用领域。同时,也对NiTi SMAs阻尼性能和储氢特性进行了阐述。最后,展望了NiTi SMAs在各领域应用上尚需重点关注的问题:利用增材制造技术调控微观结构实现超弹性的稳定性提升;通过建立本构模型为形状记忆效应的稳定应用提供理论指导,并进一步优化结构实现形状记忆效应的宏观放大;提高NiTi SMAs在生物环境里的耐腐蚀性和医疗应用推广。因此,推动NiTi SMAs在不同应用领域的个性化和功能定制化,尚需大量的跨学科研究。

关键词： NiTi形状记忆合金功能特性智能结构

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口蹄疫病毒非结构蛋白3A的研究进展

中国兽医科学 2024年第4期54卷 441-445页

作者：王家丽杨帆邵文华黄梦瑶曹伟军张伟郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046 兰州理工大学生命科学与工程学院甘肃兰州730050 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的一种最具影响、最难控制的动物疫病之一,严重危害着偶蹄动物的健康。FMDV属于单股正链RNA病毒,由结构蛋白和非结构蛋白组成。本文系统总结了口蹄疫病毒非结构蛋白3A的结构和功能特点,有助于进一... 详细信息

口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的一种最具影响、最难控制的动物疫病之一,严重危害着偶蹄动物的健康。FMDV属于单股正链RNA病毒,由结构蛋白和非结构蛋白组成。本文系统总结了口蹄疫病毒非结构蛋白3A的结构和功能特点,有助于进一步研究FMDV的感染机制并为FMD防控提供参考。

关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白 3A 结构功能

基于RAD-seq测序技术的墨西哥湾扇贝遗传改良后代及其双亲的遗传结构分析

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基因组学与应用生物学 2024年

作者：卢怡凝张元张柯馨李腾刘付少梅方家熙刘志刚广东海洋大学水产学院广东省海产无脊椎动物科技创新中心湛江银浪海洋生物技术有限公司香港理工大学应用生物及化学科技学系

本研究旨在为阐明遗传改良后代墨西哥湾扇贝“橙黄1号”杂交选育系F5与其双亲的遗传关系及遗传进展。运用RAD-seq测序技术，对4个群体共96份扇贝样本进行了主成分分析、系统进化树构建及群体结构分析。进一步对墨西哥湾扇贝“橙黄1号”F... 详细信息

本研究旨在为阐明遗传改良后代墨西哥湾扇贝“橙黄1号”杂交选育系F5与其双亲的遗传关系及遗传进展。运用RAD-seq测序技术，对4个群体共96份扇贝样本进行了主成分分析、系统进化树构建及群体结构分析。进一步对墨西哥湾扇贝“橙黄1号”F5的30份样本进行亲本基因型转化及遗传多样性分析。结果表明，96份扇贝样本与参考基因组的平均比对率为96.45%，平均覆盖度为13.89%，平均覆盖深度为5.62×，共获得116 533个高质量单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism， SNP)位点。群体遗传结构分析表明，96份扇贝样本被明显划分为4个类群，墨西哥湾扇贝“橙黄1号”F5的遗传结构与其双亲相近，介于双亲之间，与外群华贵栉孔扇贝遗传结构相距较远。遗传多样性分析结果表明，墨西哥湾扇贝“橙黄1号”F5的平均观测杂合度0.148 5，低于平均期望杂合度0.378 1。说明经过5代选育，墨西哥湾扇贝“橙黄1号”F5的遗传基因获得纯化。研究结果为墨西哥湾扇贝“橙黄1号”的遗传背景、亲缘关系及遗传进展提供依据。

关键词：墨西哥湾扇贝“橙黄1号” SNP 遗传结构亲缘关系遗传进展

揭示“声-物理-化学”的本质:超声辅助过程中的空化和振动效应

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Chinese Journal of Catalysis 2024年第6期61卷 37-53页

作者：刘文元李珺陈撰梁志燕杨博杜昆富蒋宸 Ali Reza Mahjoub 邢明阳华东理工大学化学与分子工程学院先进材料重点实验室费林加诺贝尔奖科学家联合研究中心国际合作联合实验室材料生物学与动态化学前沿科学中心上海200237 塔比亚特莫德雷斯大学基础科学学院化学系德黑兰伊朗华东理工大学上海多介质环境催化与资源化工程技术研究中心上海200237

超声辅助工艺在清洗、合成、催化等领域得到广泛应用,展现出巨大的应用潜力.然而,人们对于超声辅助过程中反应机理的认识和理解仍然不足,这在一定程度上限制了其进一步的推广应用.此外,当前对于超声辅助过程关键问题的研究仍然存在一些... 详细信息

超声辅助工艺在清洗、合成、催化等领域得到广泛应用,展现出巨大的应用潜力.然而,人们对于超声辅助过程中反应机理的认识和理解仍然不足,这在一定程度上限制了其进一步的推广应用.此外,当前对于超声辅助过程关键问题的研究仍然存在一些被忽略之处,例如协同指数计算、成本评估等.基于此,将对超声辅助过程中的反应机理及这些被忽视的关键问题进行深入探讨和强调.在深入探究空化和振动效应这两个超声核心特征的基础上,本文全面回顾了超声辅助过程的研究现状,详细阐述了空化和振动的基本原理,并梳理了当前超声辅助工艺的研究进展.同时,从多个维度探讨了超声辅助工艺潜在的研究方向,并提出了以“声-物-化”为指导理念,旨在通过超声辅助工艺与其他领域的深度交叉融合,实现催化过程中的重大突破.特别是,本文详细介绍了“压电耦合高级氧化实现废水修复同步高效产氢”这一新兴技术,展现了超声在环境修复和能源生产领域的巨大潜力.针对该技术,本文提出以下展望:(1)在解析超声辅助过程的反应机理时,应明确识别并区分是否存在压电效应,以深化对反应机制的理解,提高超声辅助技术的效率和可控性;(2)超声辅助降解过程的重点研究应聚焦于协同指数计算、成本评估、仪器参数规格说明和新污染物的扩展等方面,以提升技术的实用性和经济性;(3)鼓励将人工智能等前沿技术整合到超声辅助过程中,以优化操作策略并获得最佳方案;(4)除了降低成本外,超声辅助过程还能促进高附加值产品的获取,并通过能量回收和再利用的方式,为降低碳排放做出贡献,从而助力实现降碳目标.(5)通过与不同领域的深度交叉,鼓励超声辅助催化工艺的创新扩展,特别是,通过耦合压电催化和高级氧化技术,实现废水修复过程中的能量和物质的回收,进而实现废水的资源化利用.(6)积极研发适用于超声辅助工艺机理研究的更精确的表征方法,如原位表征技术等,以减少或避免超声高能量输入对精密仪器的潜在损害.(7)利用模拟和密度泛函理论计算等手段,深入研究超声对催化过程的动态影响,为超声辅助工艺的优化提供科学依据.综上,本文以“声-物理-化学”的跨学科视角,深入剖析了超声辅助过程中的反应本质,不仅加深对其反应机理的理解,而且为超声辅助技术的广泛应用提供了理论支撑和新的思路.

关键词：超声辅助工艺空化效应振动效应压电效应污染物降解