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传染性皮下和造血器官坏死病毒RPA与CRISPRCas12a可视化快速检测方法的建立

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中国兽医科学 2024年第5期54卷 595-601页

作者：周傲白雪徐博文沙才华邵建宏赵福振廖秀云黄海超蒋晓霞罗宝正陈轩拱北海关技术中心广东珠海519015

根据传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)基因序列的保守区域设计并合成多组RPA引物和特异性crRNA,经过筛选与优化,建立RPA-Cas12a系统荧光检测法和试纸条法2种可视化快速检测IHHNV的方法。结果显示,这2种可视化检测方法在37℃恒温反应... 详细信息

根据传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)基因序列的保守区域设计并合成多组RPA引物和特异性crRNA,经过筛选与优化,建立RPA-Cas12a系统荧光检测法和试纸条法2种可视化快速检测IHHNV的方法。结果显示,这2种可视化检测方法在37℃恒温反应40 min可检测出IHHNV;与对虾白斑综合征病毒、虾肝肠胞虫和十足目虹彩病毒1无交叉反应;该方法灵敏度较高,最低检测浓度为10 copies/μL;应用该方法对10份IHHNV阳性临床样本进行检测,阳性检出率为100%。综合结果表明,建立的荧光法和试纸条2种可视化检测IHHNV的方法操作简单,反应灵敏,适用于对虾养殖场或基层实验室对IHHNV的定期监测和初筛。

关键词：传染性皮下和造血器官坏死病毒重组酶聚合酶扩增 CRISPR-Cas12a 检测方法

QuEChERS-UPLC-MS/MS同时测定畜禽肉中10种肾上腺素相关类药物残留

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化学研究与应用 2024年第10期36卷 109-116页

作者：张彤刘瑜林森姚兆佳闫超杰董振霖徐静李一尘李志远沈阳海关技术中心辽宁沈阳110016 锦州海关技术中心辽宁锦州121000 大连海关技术中心辽宁大连116000 上海爱博才思科技有限公司上海200000

本文建立了一种应用超高效液相色谱-串联质谱仪同时测定畜禽肉中肾上腺素类、拟肾上腺素类、肾上腺素代谢物共10种肾上腺素类药物的检测方法。考察了不同前处理条件和仪器条件对检测结果的影响,从而选出最佳解决方案。目标物以乙睛提取... 详细信息

本文建立了一种应用超高效液相色谱-串联质谱仪同时测定畜禽肉中肾上腺素类、拟肾上腺素类、肾上腺素代谢物共10种肾上腺素类药物的检测方法。考察了不同前处理条件和仪器条件对检测结果的影响,从而选出最佳解决方案。目标物以乙睛提取,分散固相萃取法(QuEChERS)净化,用Shim-packGISTC18作为色谱柱,甲醇和含0.1%甲酸的5mmol:L^(-1)乙酸铵水溶液作为流动相,UPLC-MS/MS确证检测,外标法定量。该方法定量限0.2~2.0μg·kg^(-1),回收率75.6~107.5%,相对标准偏差1.1~8.7%。该方法与传统检测方法相比,具有检测药物种类多、最低检测限低、稳定性好、简便快捷、节省试剂等优势。同时应用该方法对市售的畜禽肉样本进行检测分析,确定多种肾上腺素类药物在畜禽肉中的残留情况,为更好地控制市场上的畜禽肉品质提供技术支撑。

关键词：肾上腺素畜禽肉快速分散固相萃取液相色谱-串联质谱

玉米褪绿斑驳病毒RT-PCR检测引物的筛选

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中国植保导刊 2024年第4期44卷 82-88页

作者：李献锋于璇冯黎霞丁钿魏霜龙阳刘海军广州海关技术中心广东广州510623 广州白云机场海关综合技术服务中心广东广州510470 湛江海关技术中心广东湛江524022

收集18对已报道的玉米褪绿斑驳病毒(MCMV)RT-PCR检测引物,利用MCMV阳性样品和健康样品进行测试,对实际表现较优的引物进一步分析其特异性和灵敏度,再以220份玉米种子样品进行验证。结果显示,在测试的18对引物中,有2对引物MCMV PF7/MCMV ... 详细信息

收集18对已报道的玉米褪绿斑驳病毒(MCMV)RT-PCR检测引物,利用MCMV阳性样品和健康样品进行测试,对实际表现较优的引物进一步分析其特异性和灵敏度,再以220份玉米种子样品进行验证。结果显示,在测试的18对引物中,有2对引物MCMV PF7/MCMV PR7和M-PCR-F/M-PCR-R对MCMV的检测效果较优,其对7种其他玉米病毒均无交叉反应,检测灵敏度可达到200 pg/μL;实际样品检测中,应用上述2对引物检测的结果一致,均检出6份阳性样品。根据测试结果,推荐使用引物MCMV PF7/MCMV PR7和M-PCR-F/M-PCR-R用于玉米种子携带MCMV的检测。

关键词：玉米褪绿斑驳病毒 RT-PCR 引物筛选玉米种子检测

白斑综合征病毒DETECTR检测系统的建立

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中国兽医科学 2024年第8期54卷 1056-1064页

作者：徐博文周傲白雪廖秀云蒋晓霞邵建宏沙才华黄海超赵福振陈轩罗宝正拱北海关技术中心广东珠海519015

将重组酶介导等温扩增技术(RAA)与成簇的规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白12a(CRISPR-Cas12a)检测系统相结合,针对白斑综合征病毒(WSSV)建立快速、灵敏、特异的DNA内切酶靶向CRISPR反式报告(DETECTR)检测系统。针对WSSV保守基因设计... 详细信息

将重组酶介导等温扩增技术(RAA)与成簇的规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白12a(CRISPR-Cas12a)检测系统相结合,针对白斑综合征病毒(WSSV)建立快速、灵敏、特异的DNA内切酶靶向CRISPR反式报告(DETECTR)检测系统。针对WSSV保守基因设计RAA引物与crRNA,通过实验筛选最优组合和最佳反应条件,构建WSSV DETECTR检测系统。对该系统进行灵敏度与特异性测试,与WOAH推荐的Real-timePCR和NestedPCR检测方法比较。结果显示,WSSV DETECTR检测系统最低检出限为10copies/μL,灵敏度与Real-time PCR、Nested PCR检测方法相当(均为3.34×10^(1)copies/μL),与其他病原之间无交叉反应,与Real-time PCR、Nested PCR对临床样本的检测结果相一致。结果表明,建立的WSSV DETECTR检测系统具有快速简单、灵敏、特异等优点,为白斑综合征病毒的快速检测提供了新的方法。

关键词：重组酶介导等温扩增技术(RAA) CRISPR-Cas12a 白斑综合征病毒快速检测

基于多壁碳纳米管作为吸附剂的分散固相萃取/GC-MS对食用植物油中16种多环芳烃的快速测定

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中国油脂 2024年第10期49卷 129-136页

作者：王思源何婷婷张琴舒圣元冯悦齐冬琴张平王静静新疆农业大学食品科学与药学学院乌鲁木齐830052 乌鲁木齐海关技术中心乌鲁木齐830000 喀什海关技术中心新疆喀什844000

为了快速检测食用植物油中的16种多环芳烃(PAHs),以氨基化多壁碳纳米管(NH2-MWCNTs)作为样品前处理的吸附剂,采用分散固相萃取(d-SPE)/气相色谱-质谱联用(GCMS)同时测定食用植物油中的16种PAHs。通过单因素实验对样品前处理条件(吸附剂... 详细信息

为了快速检测食用植物油中的16种多环芳烃(PAHs),以氨基化多壁碳纳米管(NH2-MWCNTs)作为样品前处理的吸附剂,采用分散固相萃取(d-SPE)/气相色谱-质谱联用(GCMS)同时测定食用植物油中的16种PAHs。通过单因素实验对样品前处理条件(吸附剂用量、吸附时间、洗脱剂类型及用量、洗脱时间)进行了优化,对所建立的方法进行了方法学考察,并与已有检测方法进行了对比分析,同时采用所建立的方法对实际样品进行了测定。结果表明:样品前处理最优条件为吸附剂用量15mg(样品食用植物油质量1.0g)、吸附时间1min、洗脱剂甲苯、洗脱剂用量500μL、洗脱时间5min;16种PAHs在1~200μg/kg范围内线性关系良好,方法的检出限在0.05~0.43μg/kg之间,定量限在0.17~1.42μg/kg,加标回收率和相对标准偏差分别为70.67%~101.83%和1.34%~9.32%;与已有前处理方法相比,d-SPE高效、简便,且最大程度地减少了有机溶剂的消耗;6种市售食用植物油中苯并[a]芘含量均小于2μg/kg。综上,所建立的方法适用于食用植物油中16种PAHs的测定。

关键词：多环芳烃食用植物油多壁碳纳米管气相色谱-质谱联用

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基于加速萃取的仿真饰品中镍释放量快速预报方法

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理化检验（化学分册） 2024年第6期60卷 566-569页

作者：刘崇华丁志勇申珊玉袁军平田勇涂红雨广州海关技术中心广州510623 重庆海关技术中心重庆401147 广州番禺职业技术学院广州511483

针对饰品中镍释放量标准方法测试周期长等问题,对标准方法中迁移温度、迁移时间、模拟汗液酸度、迁移液体积等关键迁移条件,以及不同迁移温度和时间下镍释放规律进行研究,提出了基于加速萃取的适用于不同基质仿真饰品中镍释放量测定的... 详细信息

针对饰品中镍释放量标准方法测试周期长等问题,对标准方法中迁移温度、迁移时间、模拟汗液酸度、迁移液体积等关键迁移条件,以及不同迁移温度和时间下镍释放规律进行研究,提出了基于加速萃取的适用于不同基质仿真饰品中镍释放量测定的快速预报方法。采用面积为2.7 cm2的仿真饰品样品,悬挂于测试容器中,按样品测试面积(cm2)和模拟汗液体积(mL)比约1∶1加入2.7 mL模拟汗液,完全浸没样品,密封后于50℃静置31 h。加入1 mL 5%(体积分数)硝酸溶液,用模拟汗液定容至5 mL,采用电感耦合等离子体原子发射光谱法进行测定。结果显示:迁移温度相较其他迁移条件对镍释放量影响大,于30,40,50℃迁移24,48,72,168,240 h时50℃下镍释放量和相对镍释放率(上述方法和标准EN1811:2015镍释放量的比值)均较大;50℃下相对镍释放率与迁移时间的回归模型为幂函数,100%相对镍释放率下迁移时间为31 h,远低于标准EN1811:2015所用的168 h。方法应用于铜合金、镍合金、不锈钢和铜锌合金样品(仿真饰品)的分析,所得结果和EN1811:2015的一致,测定值的相对标准偏差(n=5)小于6.0%。

关键词：仿真首饰镍释放量迁移规律快速预报

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中国与菲律宾水产品中重金属限量对比分析

标准科学 2024年第6期 130-135页

作者：曾子毅周莹李冠斯席静魏霜李志勇林春贵汕头海关汕头海关技术中心广州海关技术中心

中国和菲律宾均为水产大国,为了解两国水产品中重金属最大残留限量标准现状,促进两国水产品进出口贸易。该篇论文通过研究中国标准GB 2762-2022《食品安全国家标准食品中污染物限量》和菲律宾标准GSCTFF《食品和饲料中污染物和毒素通用... 详细信息

中国和菲律宾均为水产大国,为了解两国水产品中重金属最大残留限量标准现状,促进两国水产品进出口贸易。该篇论文通过研究中国标准GB 2762-2022《食品安全国家标准食品中污染物限量》和菲律宾标准GSCTFF《食品和饲料中污染物和毒素通用标准》,得知中菲两国在重金属限量标准设定上存在以下3点差异:(1)重金属种类和数量不同,我国比菲律宾多了砷、铬、锡3个指标;(2)涵盖的水产品种类不同;(3)重金属的限量标准数值不同。最后从细化分类、完善修订的科学依据等方面提出完善我国水产品中重金属限量标准的对策建议。

关键词：中国菲律宾水产品重金属限量标准对比分析

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顶空-气相色谱法测定橄榄油中6种卤化溶剂残留

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色谱 2024年第4期42卷 387-392页

作者：雷春妮王波顾强张欢张晓美李建科兰州海关技术中心甘肃兰州730010 张家港海关综合技术中心江苏张家港215600 陇南市祥宇油橄榄开发有限责任公司甘肃陇南746000

卤化溶剂残留量是评价橄榄油质量的重要指标之一。国家橄榄油质量标准GB/T 23347-2021中规定了橄榄油中每种卤化溶剂残留量≤0.1 mg/kg、卤化溶剂残留量总和≤0.2 mg/kg,其检验方法是国际油橄榄理事会发布的COI/T.20/*** 8-1990标准方法... 详细信息

卤化溶剂残留量是评价橄榄油质量的重要指标之一。国家橄榄油质量标准GB/T 23347-2021中规定了橄榄油中每种卤化溶剂残留量≤0.1 mg/kg、卤化溶剂残留量总和≤0.2 mg/kg,其检验方法是国际油橄榄理事会发布的COI/T.20/*** 8-1990标准方法,该方法操作繁琐、重复性差、自动化程度低,不适于大批量橄榄油样品中卤化溶剂残留量的测定,而目前国家尚未制定橄榄油中卤化溶剂残留量测定的标准方法。该文建立了橄榄油中氯仿、四氯化碳、1,1,1-三氯乙烷、二溴氯甲烷、四氯乙烯和溴仿6种卤化溶剂残留量的顶空-气相色谱法。将橄榄油试样摇匀后,称取2.00 g(精确至0.01 g)于顶空瓶中,立即封盖待顶空-气相色谱仪分析,采用空白初榨橄榄油配制标准工作液,外标法定量。考察了顶空进样器的进样时间、平衡温度、平衡时间对6种卤化溶剂残留量检测的影响,在进样时间3 s、平衡温度90℃、平衡时间30 min时6种卤化溶剂的分析效果较好。结果表明:6种卤化溶剂在0.002~0.200 mg/kg范围内线性关系良好,相关系数≥0.9991,检出限为0.0003~0.0006 mg/kg,定量限为0.001~0.002 mg/kg,不同加标水平下的平均回收率为85.53%~115.93%,相对标准偏差(n=6)为1.11%~8.48%。该方法的6种卤化溶剂定量限显著低于COI/T.20/*** 8-1990标准方法的定量限(0.02 mg/kg),且操作时间短,精密度高,准确性好,自动化程度高,适合大批量橄榄油样品中6种卤化溶剂残留量的测定分析。

关键词：顶空-气相色谱法卤化溶剂残留橄榄油

SARS-CoV-2 Omicron变异株多重微滴式数字PCR定量方法的建立及应用

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生物技术通报 2024年第2期40卷 80-89页

作者：郑巧林华徐浩安微薛昌华张婧韩国全成都海关技术中心成都610000 四川农业大学食品学院雅安625014 深圳海关动植物检验检疫技术中心深圳518045

【目的】为建立精准、高效的多重微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量分析检测方法,开发可同时鉴别新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)ORF1ab基因、N基因、E基因以及Omicron变异株S基因的检测体系,提高病毒性传染疾病的诊断效率及传播风险监测能力。【方法】通过筛选保守基因序列并设计特异性引物与探针,优化反应体系和扩增程序,对该方法的特异性、灵敏度及稳定性进行评价。以临床样本为实验材料,利用建立的ddPCR方法进行检测和验证,确定阳性检出率。【结果】多重ddPCR反应体系中,各对引物探针对目的片段均能有效扩增,SARS-CoV-2 ORF1ab基因、N基因、E基因以及Omicron变异株S基因灵敏度检测下限分别为0.59、0.68、1.44、1.03 copies/μL。在20份临床样本的核酸检测中,共检出16份阳性样本,阳性率达80%(16/20),经荧光定量PCR方法复测符合率一致。【结论】研究建立的多重ddPCR方法特异性强、灵敏度高,可实现对临床样本中微量新冠病毒的精确定量检测。

关键词：微滴式数字PCR 新型冠状病毒 Omicron变异株定量