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杂交鲟海豚链球菌的分离、鉴定及药物敏感性

微生物学报 2014年第4期54卷 442-448页

作者：王小亮徐立蒲王静波王姝曹欢北京市水产技术推广站北京100021

【目的】2012年7月,北京市怀柔区一家养殖场的杂交鲟爆发疾病,陆续死鱼。为确定病原,【方法】从具有典型症状的患病鱼的肝、肾和脾中分离获得3株分离菌,编号HRS12718L、HRS12718K和HRS12718S。采用形态特征、理化特性、16S rDNA和海豚... 详细信息

【目的】2012年7月,北京市怀柔区一家养殖场的杂交鲟爆发疾病,陆续死鱼。为确定病原,【方法】从具有典型症状的患病鱼的肝、肾和脾中分离获得3株分离菌,编号HRS12718L、HRS12718K和HRS12718S。采用形态特征、理化特性、16S rDNA和海豚链球菌特异性基因逐步鉴定病原菌的种类。取HRS12718K分离株进行人工感染实验,确认病原菌的致病性。开展药物敏感性实验筛选分离株的敏感药物。【结果】结果显示3株分离菌的形态特征和理化特性与从中国其它鱼类分离的海豚链球菌一致。采用16S rDNA序列构建的进化树与海豚链球菌聚为一支,与海豚链球菌的同源性在99.1%以上。HRS12718K分离株对杂交鲟的半致死量LD50为4.42×105CFU/mL,试验感染鱼出现与自然发病鱼相似临床症状。分离株对诺氟沙星、嗯诺沙星、硫酸新霉素、盐酸多西环素和盐酸四环素敏感,尤其对嗯诺沙星敏感。【结论】最终确认引起该养殖场杂交鲟发病的病原为海豚链球菌,建议使用嗯诺沙星进行治疗。

关键词：杂交鲟海豚链球菌鉴定药物敏感性

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鲟致病性类志贺邻单胞菌的鉴定及药物敏感性

微生物学报 2013年第7期53卷 723-729页

作者：王小亮徐立蒲曹欢王静波王姝北京市水产技术推广站北京100021

【目的】2012年夏季北京地区多地养殖的鲟鱼发病,主要临床症状为肛门红肿、伴有黄色分泌物,腹腔内有大量腹水,腹腔内壁有出血点,肝脏点状出血,脾脏肿大等,累计死亡率达60%。本文目的为研究其病原。【方法】从具有临床症状的濒死鱼中分... 详细信息

【目的】2012年夏季北京地区多地养殖的鲟鱼发病,主要临床症状为肛门红肿、伴有黄色分泌物,腹腔内有大量腹水,腹腔内壁有出血点,肝脏点状出血,脾脏肿大等,累计死亡率达60%。本文目的为研究其病原。【方法】从具有临床症状的濒死鱼中分离病原菌,分析病原菌的形态特征、理化特性、分类地位及药物敏感性等特性,经过人工感染及引起的组织病理确认致病性。【结果】结果显示病原菌的16S rDNA序列构建的进化树,与类志贺邻单胞菌同源性最高,在99%以上;结合其生理生化特征和API细菌鉴定系统的结果,确认为类志贺邻单胞菌。该菌对鲟鱼的半致死量LD50为1.0×105.8CFU/mL,引起肝、肾和脾组织病变。胞外产物不具有淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶和明胶酶活性,也无溶血性,推测其毒性可能来源于内毒素。该菌对恩诺沙星、盐酸多西环素、氟苯尼考和甲枫霉素敏感,药物敏感浓度均小于2μg/mL;而对试验的其它抗菌药物不敏感。【结论】确认类志贺邻单胞菌是引起北京地区鲟鱼发生上述临床症状疾病的主要致病菌,可优选盐酸多西环素、氟苯尼考和恩诺沙星进行防治。

关键词：鲟鱼类志贺邻单胞菌致病性药敏

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超稀植稻田夏花养成鱼试验报告

渔业经济研究 1999年第6期 17-18页

作者：李国旗孙世德徐学伟绥滨县水产技术推广站

黑龙江省绥滨县地处黑、松两江下游,地势低洼,盛产水稻。稻田面积二十多万亩,发展稻田养鱼有着广阔的前景。但是,由于稻田养鱼比较费工费力,田间工程与插秧农忙时争嘴。因而影响了稻农发展稻田养鱼的积极性,以至使这项事业发展较为缓慢... 详细信息

黑龙江省绥滨县地处黑、松两江下游,地势低洼,盛产水稻。稻田面积二十多万亩,发展稻田养鱼有着广阔的前景。但是,由于稻田养鱼比较费工费力,田间工程与插秧农忙时争嘴。因而影响了稻农发展稻田养鱼的积极性,以至使这项事业发展较为缓慢。为了探索出一条投入少、收益高、易推广的稻田养鱼新方法,加速我县稻田养鱼发展。1999年,我们抓住我县采用推广水稻超稀植摆插新技术的机遇,搞了超稀植稻田不挖鱼沟鱼溜夏花养成鱼的试验。从6月10日放鱼到9月9日排水出鱼,经过90天的饲养管理,鱼稻双丰收,取得了预想的效果,并在生产中获得了切实可行的实践经验和理论依据。现将试验结果报告如下。一、条件与方法稻田条件:试验田选定在中兴乡中兴村种稻大户汪喜成的田块。试验面积为30亩。

关键词：稻田养鱼超稀植养成鱼田间工程水稻夏花绥滨县黑龙江省饲养管理积极性

山瑞鳖细菌性败血症病原菌的分离鉴定及其毒力基因检测

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水产学报 2017年第9期41卷 1443-1454页

作者：韩书煜梁静真覃志彪黄艳华韦慕兰蒙兰丽黄维胡大胜黄钧广西水产技术推广总站广西大学动物科学技术学院钦州市水产技术推广站广西水生动物病害诊断实验室都安瑶族自治县水产技术推广站田东县水产技术推广站

查明广西南宁、贵港和桂平养殖山瑞鳖细菌性败血症的病原菌及其6种毒力基因的携带情况,为有效防控山瑞鳖细菌性败血症提供参考。本研究以常规方法从患病山瑞鳖的心脏和肝脏取样、分离细菌,人工感染方法确定分离菌株的致病性,细菌鉴定采... 详细信息

查明广西南宁、贵港和桂平养殖山瑞鳖细菌性败血症的病原菌及其6种毒力基因的携带情况,为有效防控山瑞鳖细菌性败血症提供参考。本研究以常规方法从患病山瑞鳖的心脏和肝脏取样、分离细菌,人工感染方法确定分离菌株的致病性,细菌鉴定采用API 20NE生化鉴定和16S rRNA分子鉴定相结合的方法进行,PCR扩增法对菌株的溶血素基因(hemolysin gene,hly)、气溶素基因(aerolysin gene,Aer)、细胞兴奋性肠毒素基因(cytotonic enterotoxin gene,Alt)、细胞毒性肠毒素基因(cytotoxic enterotoxin gene,Act)、黏附素基因(major adhesin gene,ahal)和丝氨酸蛋白酶基因(serine protease gene,ahp)6种毒力基因进行检测。结果显示,从患病山瑞鳖心脏和肝脏中共分离到4株优势菌SRB125、SRB142、SRB143和SRB345,对健康山瑞鳖的平均致死率为97.50%~100.00%,是引起山瑞鳖细菌性败血症的病原菌;生化和分子鉴定结果显示,4株分离菌均为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila),与*** L3-5(KP716701)菌株的亲缘关系最近,同源相似性均达到99.9%;6种毒力基因共包含2种毒力基因型,在4株菌株中的分布为hly~+Aer~+Alt~+Act~+ahal~+ahp~+和hly~+Aer~+Alt~+Act~+ahal~+ahp~–各2株,来源于南宁的SRB143和桂平的SRB345菌株均缺失ahp基因。

关键词：山瑞鳖细菌性败血症嗜水气单胞菌毒力基因

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池塘驯化培育日本锦鲫鱼种的试验报告

黑龙江水产 2001年第1期20卷 35-36页

作者：徐学伟李国旗孙世德牛立国邰永芬绥滨县水产技术推广站

受市场大环境的影响,养殖鱼类的价格持续低迷,为摆脱这种局面,合理调整池塘养殖品种的结构,寻找新的渔业经济增长点,依据旅游、观光、垂钓等休闲渔业的需要,今年我县从山东引进耐低温、耐低氧,具有观赏和游钓价值的日本锦鲫乌仔4万尾,... 详细信息

受市场大环境的影响,养殖鱼类的价格持续低迷,为摆脱这种局面,合理调整池塘养殖品种的结构,寻找新的渔业经济增长点,依据旅游、观光、垂钓等休闲渔业的需要,今年我县从山东引进耐低温、耐低氧,具有观赏和游钓价值的日本锦鲫乌仔4万尾,在连生乡靠山渔场用0.7hm^2鱼池,经105天的驯化饲养。

关键词：日本锦鲫池塘养殖驯化鱼种培育颗粒饲料

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尼龙袋充氧密封远距离陆运鱼苗技术措施

黑龙江水产 1995年第4期14卷 19-21页

作者：孙世德牛立国邰永芬绥滨县水产技术推广站

我县地处祖国的东北边疆,交通不便,给鱼苗运输带来一定困难,长期以来,鱼苗运输一直由佳木斯、鹤岗水产局从南方用飞机空运。由于从鱼曲产地到佳木斯无直航班机,只能利用空军的小型运输机运输。

关键词：技术措施尼龙袋鱼苗运输鲤鱼苗运输操作运输密度远距离水产良种场佳木斯水产技术

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半咸水人工湿地净化越冬养殖循环水的效果

农业工程学报 2012年第24期28卷 179-187页

作者：施永海张根玉刘建忠徐嘉波谢永德朱晓东朱建明上海市水产研究所上海市水产技术推广站上海200433

为拓展人工湿地在水产养殖上的应用,该文研究了半咸水人工湿地的循环水越冬系统中暗纹东方鲀越冬养殖效果和净化效能。结果表明,经过166d越冬养殖,暗纹东方鲀越冬成活率(76.94±13.87)%,饵料系数5.49±1.77。在无任何外源能源加温的情况... 详细信息

为拓展人工湿地在水产养殖上的应用,该文研究了半咸水人工湿地的循环水越冬系统中暗纹东方鲀越冬养殖效果和净化效能。结果表明,经过166d越冬养殖,暗纹东方鲀越冬成活率(76.94±13.87)%,饵料系数5.49±1.77。在无任何外源能源加温的情况下,系统水温保持在暗纹东方鲀幼鱼的生存最低温度以上。在半咸水环境下(7.6‰～9.9‰),人工湿地对养殖水有良好的净化效果:总氮去除率为30.5%、总氨氮为69.6%、亚硝酸盐为96.1%、硝酸盐为9.7%、总磷为18.4%、COD为38.8%、总悬浮物为79.7%,循环水经过人工湿地后水质符合国家渔业用水标准;越冬期间,越冬养殖池水质状况良好;除TN和NO3-N在越冬期间的去除率比在夏季的明显低外,其他主要污染物的去除率与夏季比较没有明显变化。在试验负载范围内,系统去除量随进水污染负载量的增加而增加;通过建立预测模型预测出湿地养殖面积比值0.36～0.97,与实际值1.26相比,养殖密度尚有提高的空间。因此,人工湿地能持续有效地去除暗纹东方鲀越冬循环水养殖系统中的主要污染物,说明该系统能在越冬养殖生产实际应用。

关键词：废水湿地养殖循环水越冬系统暗纹东方鲀去除率

鲤浮肿病毒和锦鲤疱疹病毒双重实时荧光定量PCR检测方法的建立

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病毒学报 2018年第6期34卷 889-895页

作者：张文徐立蒲吕晓楠王小亮曹欢王姝王静波北京市水产技术推广站

为了建立可同时检测鲤浮肿病毒(Carp edema virus,CEV)和锦鲤疱疹病毒(Kio herpesvirus,KHV)的检测方法,本研究根据CEV P4a基因保守序列,对英国环境、渔业水产养殖研究中心(Center for Environment,Fisheries and Aquaculture Science,CEFAS)设计合成的引物序列进行优化,合成1对特异性引物和1条用FAM荧光基团标记的TaqMan探针;根据KHV ORF7基因保守序列,设计筛选1对特异性引物和1条用VIC荧光基团标记的TaqMan探针。优化反应条件,建立了CEV和KHV双重实时荧光定量PCR检测方法。结果显示该方法特异性强,与其它水生动物病毒无交叉反应;灵敏度高,对CEV和KHV的检测限均为15拷贝数/μL;组内重复与组间重复的平均变异系数小于3%。本研究建立的方法具有快速、特异、敏感等优点,可用于CEV和KHV的快速检测。

关键词：鲤浮肿病毒(CEV) 锦鲤疱疹病毒(KHV) 双重实时荧光定量PCR

我国北方地区鲤浮肿病毒的流行情况调查与监测分析

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水生生物学报 2018年第5期42卷 935-941页

作者：徐立蒲王小亮李清王立新曹欢王姝张文潘勇王静波北京市水产技术推广站北京100176 全国水产技术推广总站北京100125

为进一步确认及掌握鲤浮肿病毒(Carp Edema Virus,CEV)目前的流行现状和流行特点,于2017年重点调查了我国北方地区5省市26个正发生或曾经发生"鲤急性烂鳃病"的养殖场,随机监测了9个省市的97家鲤和锦鲤养殖场。样品采用实时荧光定量PCR(Q... 详细信息

为进一步确认及掌握鲤浮肿病毒(Carp Edema Virus,CEV)目前的流行现状和流行特点,于2017年重点调查了我国北方地区5省市26个正发生或曾经发生"鲤急性烂鳃病"的养殖场,随机监测了9个省市的97家鲤和锦鲤养殖场。样品采用实时荧光定量PCR(Quantitative real time PCR,q PCR)法和套式PCR(Nest PCR)方法进行检测,nest PCR法扩增出的产物进行测序和基因分析。结果重点调查的26家养殖场中有20个为CEV阳性,1个为锦鲤疱疹病毒(Koi Herpes Virus,KHV)阳性,1个为孢子虫感染。随机调查的97家养殖场中有50家为CEV检测阳性,阳性率高达52%;可测序的CEV毒株均属于GenogroupⅡa型;样品按不同地区、不同采样水温、不同品种、不同规格鱼等划分,各组均有CEV阳性检出,但检出率均无显著差异。以上结果表明CEV感染是多省市"鲤急性烂鳃病"暴发的主要病因。另外,该病毒病的流行水温在12—27℃。

关键词：鲤锦鲤鲤浮肿病毒流行情况监测