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影响中期保存的角膜供体内皮细胞活力的相关因素分析

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眼科研究 2008年第8期26卷 564-567页

作者：邵应峰胡诞宁刘雪花陈家祺眼科学国家重点实验室中山大学中山眼科中心广州510060 10003 美国纽约眼耳医院组织培养研究中心

目的探讨影响中期保存的供体角膜内皮细胞活性的相关因素。方法对保存液中的角膜内皮细胞进行培养和评分,并与供体年龄、供体保存与死亡时间间隔、供体采集与死亡间隔、是否曾在常温下长时间暴露等因素进行相关分析。结果细胞培养评分... 详细信息

目的探讨影响中期保存的供体角膜内皮细胞活性的相关因素。方法对保存液中的角膜内皮细胞进行培养和评分,并与供体年龄、供体保存与死亡时间间隔、供体采集与死亡间隔、是否曾在常温下长时间暴露等因素进行相关分析。结果细胞培养评分与供体年龄呈负相关,与供体保存时间呈负相关,与是否在常温下过夜呈负相关。结论供体的年龄、植片的保存时间及是否在常温下长时间暴露均是影响供体角膜内皮细胞活力和功能的关键因素。

关键词：角膜保存角膜内皮细胞细胞培养

多巴胺D2受体和腺苷A2A受体在人视网膜色素上皮细胞表达的研究

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中华眼科杂志 2007年第12期43卷 1110-1113页

作者：董枫安建宏任岳萍闫东升周翔天吕帆胡诞宁陈江帆瞿佳浙江大学医学院杭州310006 温州医学院眼视光学院温州医学院近视研究所纽约医学院纽约眼耳鼻喉科医院组织培养中心温州医学院神经药物研究所

目的探讨正常人眼视网膜色素上皮（RPE）细胞多巴胺D2受体和腺苷A2A受体表达情况。方法采用已建立的RPE细胞的分离和培养方法建立细胞株。取传3—4代生长良好的细胞，应用逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）、细胞免疫组化方法检测培养的... 详细信息

目的探讨正常人眼视网膜色素上皮（RPE）细胞多巴胺D2受体和腺苷A2A受体表达情况。方法采用已建立的RPE细胞的分离和培养方法建立细胞株。取传3—4代生长良好的细胞，应用逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）、细胞免疫组化方法检测培养的RPE细胞中多巴胺D2受体和腺苷A2A受体的表达情况。结果培养的RPE细胞呈多边形，平均分裂时间为2—3d，细胞内含有棕黄色色素颗粒，随着细胞分裂，细胞内的色素颗粒稀释和变少。RT—PCR和细胞免疫组化检测，显示体外培养的人RPE细胞两种受体均有表达。结论人RPE细胞有多巴胺D2受体和腺苷A2A受体的分布。

关键词：近视受体多巴胺D2 受体腺苷A2A 色素上皮眼

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人负重关节软骨细胞的体外分离与培养

临床骨科杂志 2004年第2期7卷 209-212页

作者：周新社戴尅戎汤亭亭胡诞宁上海第二医科大学附属第九人民医院骨科上海200011 纽约大学眼耳医院组织培养中心美国纽约10003

目的　研究人负重关节软骨细胞的分离培养技术。方法　对 10例手术切除的负重关节软骨进行0 2 %Ⅱ型胶原酶分离、10 %DMEM中培养 ,观察软骨细胞获得率、贴壁率、增殖状况及形态学改变。结果　① 0 2 %Ⅱ型胶原酶消化尽 2 0 0～ 70 0m... 详细信息

目的　研究人负重关节软骨细胞的分离培养技术。方法　对 10例手术切除的负重关节软骨进行0 2 %Ⅱ型胶原酶分离、10 %DMEM中培养 ,观察软骨细胞获得率、贴壁率、增殖状况及形态学改变。结果　① 0 2 %Ⅱ型胶原酶消化尽 2 0 0～ 70 0mg软骨标本需 4～ 14h ,细胞获得率 (1 82± 0 5 7)× 10 6/g ,存活率(79 4± 9 9) %。②细胞可传 6～ 12代 ,前 4代培养时间平均 (33± 10 )d ,生长倍数平均 198倍 ,倍增时间(4 13± 1 34)d。③第 3、4代细胞呈多角形、部分梭形 ,8、9代后细胞梭状铺平。结论　 30 0～ 5 0 0mg软骨标本 ,经该方法培养 3～ 4周后可达第 4代 ,细胞数可达 (0 6～ 1 0 )× 10 8个 ,可满足临床上修复 15～ 2 5cm2软骨缺损的需要。

关键词：关节软骨软骨细胞分离细胞培养

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单层培养的人关节软骨细胞生物学行为研究

解剖与临床 2006年第1期11卷 14-17页

作者：周新社戴尅戎汤亭亭胡诞宁上海第二医科大学附属第九人民医院骨科上海200011 美国纽约大学眼耳医院组织培养中心

目的:研究单层培养的人关节软骨细胞生物学行为的改变。方法:对来自8例手术切除负重关节非负重区的软骨细胞在10%DMEM中进行单层传代培养,观察细胞形态学、增殖细胞倍增时间(DT)、细胞Ⅱ型胶原免疫组织化学染色以及流式细胞分析细胞增... 详细信息

目的:研究单层培养的人关节软骨细胞生物学行为的改变。方法:对来自8例手术切除负重关节非负重区的软骨细胞在10%DMEM中进行单层传代培养,观察细胞形态学、增殖细胞倍增时间(DT)、细胞Ⅱ型胶原免疫组织化学染色以及流式细胞分析细胞增殖指数(PI)和细胞凋亡。结果:随着传代次数的增加,(1)细胞形态由原代的多角形转变为第3、4代的短梭形、第8、9代的成纤维细胞形态;(2)DT在逐渐延长,PI在逐渐减小;(3)细胞分泌的Ⅱ型胶原逐渐减少;(4)细胞凋亡指数未见明显的改变(P>0.05)。结论:体外单层培养的关节软骨细胞存在着失分化和老化,但第3、4代能较好地保持软骨细胞的生物学行为,可作为种子细胞的来源。

关键词：软骨细胞单层培养增殖表型凋亡

有色光对视网膜色素上皮细胞分泌TGF-β的影响

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中国眼耳鼻喉科杂志 2004年第2期4卷 86-88页

作者：陈冬红褚仁远周国民胡诞宁复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科上海200031 复旦大学上海医学院组织胚胎教研组美国纽约医学院眼耳医院组织培养中心

目的研究不同色光对RPE细胞分泌生长因子的影响,从细胞生物学和分子生物学水平探讨RPE细胞在有色光信号传导中的作用.方法将第二代RPE细胞以每孔5×104的密度接种于4个6孔板,培养3 d后,将培养液换为含1%胎牛血清的F12培养液,置于各种色... 详细信息

目的研究不同色光对RPE细胞分泌生长因子的影响,从细胞生物学和分子生物学水平探讨RPE细胞在有色光信号传导中的作用.方法将第二代RPE细胞以每孔5×104的密度接种于4个6孔板,培养3 d后,将培养液换为含1%胎牛血清的F12培养液,置于各种色光下培养,分别于4、8、12、24、48h后收集培养液,采用酶联免疫吸附实验(enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA),测定TCF-β的量;将置于红色、黄色和蓝色光下照射24h后的细胞取出,采用Trizol一步法提取RPE细胞总RNA,通过RT-PCR检测不同色光照射后RPE细胞TGF-β的mRNA表达水平.结果 ELISA结果显示人胚RPE细胞可分泌TGF-β,在受到不同波长的光照射后,不同时段TGF-β的分泌量也不一样,数据采用两因素方差分析,差异有统计学意义;RT-PCR结果显示不同色光照射24h后RPE细胞TGF-β的mRNA表达水平不同.结论有色光线可能引起RPE细胞蛋白质合成功能受阻,进而对眼球的生长发育产生作用.

关键词：有色光视网膜色素上皮细胞 TGF-β 近视信号传导酶联免疫吸附实验生长因子

国际间合作遏制青光眼：2008年3月6日第一届“世界青光眼日”

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眼科 2008年第1期17卷 10-11页

作者： Buys Y Goldberg I Lambrou GN Ritch R 李建军王爽加拿大多伦多大学眼科澳大利亚悉尼大学眼科美国纽约眼耳医院Einhom临床研究中心

众所周知,青光眼是全球第二位可治疗的致盲性眼病。作为不可逆盲的重要原因,其防治已成为重要的公共卫生问题,其在世界各国致盲眼病的排名不断攀升。尽管在发展中国家及发达国家,白内障和年龄相关性黄斑变性分别是首位的致盲原因，

关键词：青光眼国际间合作世界年龄相关性黄斑变性致盲性眼病公共卫生问题发展中国家致盲眼病

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bFGF对人关节软骨细胞增殖和凋亡的影响

解剖与临床 2004年第4期9卷 235-237页

作者：周新社戴尅戎汤亭亭胡诞宁周建生肖玉周蚌埠医学院附属医院骨科安徽蚌埠233004 上海第二医科大学附属第九人民医院骨科美国纽约大学眼耳医院组织培养中心

目的 :观察碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对体外单层培养的人负重关节软骨细胞的增殖和凋亡的影响。方法 :对 8例来自人负重关节软骨细胞系进行体外单层传代培养 ,从第 2代起试验组培养液中加入bFGF ,观察细胞的倍增时间 (DT)、流式细... 详细信息

目的 :观察碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对体外单层培养的人负重关节软骨细胞的增殖和凋亡的影响。方法 :对 8例来自人负重关节软骨细胞系进行体外单层传代培养 ,从第 2代起试验组培养液中加入bFGF ,观察细胞的倍增时间 (DT)、流式细胞分析细胞增殖周期和凋亡指数 ,并与无bFGF组相比较。结果 :与未加bFGF相比较 ,加用 10 μg/mlbFGF后 ,DT缩短 ,S期细胞数升高 ,细胞凋亡无变化。结论 :bFGF能促进培养的人关节软骨细胞生长 ,不引起细胞凋亡。

关键词：关节软骨细胞增殖细胞凋亡碱性成纤维细胞生长因子软骨细胞

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中国人常染色体遗传的病理性近视基因定位

中华眼科杂志 2007年第3期43卷 233-238页

作者：于志强李月彬黄传新褚仁远胡诞宁申宗侯黄薇复旦大学附属眼耳鼻喉科医院 200031 复旦大学生物化学教研室国家人类基因组南方研究中心美国纽约医学院眼耳医院眼科

目的在中国人群中进行病理性近视致病基因的定位。方法1个12人的病理性近视家系（患者7名）经过研究人员告知，同意参加本研究。从每个家系成员静脉血中提取DNA，选取覆盖全基因组的330对高度杂合的微卫星DNA引物，进行基因组扫描；以... 详细信息

目的在中国人群中进行病理性近视致病基因的定位。方法1个12人的病理性近视家系（患者7名）经过研究人员告知，同意参加本研究。从每个家系成员静脉血中提取DNA，选取覆盖全基因组的330对高度杂合的微卫星DNA引物，进行基因组扫描；以常染色体显性遗传为模式，基因频率0．0133和外显率100％的条件下，运用Linkage软件进行二点连锁分析，运用Genehunter软件进行多点连锁分析。标记位点之间的遗传距离根据Genethon连锁图谱来确定。基于最低重组率原则，用cyanic软件构建单倍型。结果二点连锁分析发现15号染色体长臂上存在与病理性近视密切连锁的位点。在重组率为0的情况下，最大对数优势记分（LOD）值1．76出现在D15S1010，D15S1007和D15S1042位点；多点连锁分析也支持这个区域内存在连锁，最大NIL值为5．16。单倍型分析把这个近视眼位点局限在15q12-13上D15S1019和D15S146之间大约12cM的区间内。在已知的近视眼相关位点，包括18p11．31，12q21-23，7q36，17q21-22，4q22-q27，2q37．1，15q15-21，12q13．11-13．2，6p21．3，1q21-31，1p21和21q22．3，均没有发现明确的连锁证据。结论在15q12-13可能存在一个新的近视眼基因位点。在这个区域内至少有94个已知的基因，因此有必要对此区域进行测序寻找致病基因，这个新的基因位点的发现也证实了病理性近视存在很强的遗传异质性。

关键词：近视连锁(遗传学) 染色体图

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不同波长有色光对豚鼠眼球生长发育的影响

眼视光学杂志 2003年第3期5卷 144-146页

作者：陈冬红褚仁远周国民胡诞宁复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科上海200031 复旦大学医学院组胚教研室上海200031 纽约眼耳鼻喉科医院组织培养中心

目的:探讨不同波长的有色光线对眼球生长发育的影响,并进一步分析动物模型中RPE细胞在有色光信号传导中的作用。方法:选用出生2w、体重为100～150g的幼年健康有色豚鼠,将36只豚鼠随机分为4组,A组8只,为红光照射组;B组9只,为黄光照射组;C... 详细信息

目的:探讨不同波长的有色光线对眼球生长发育的影响,并进一步分析动物模型中RPE细胞在有色光信号传导中的作用。方法:选用出生2w、体重为100～150g的幼年健康有色豚鼠,将36只豚鼠随机分为4组,A组8只,为红光照射组;B组9只,为黄光照射组;C组10只,为蓝光照射组;D组9只,为正常对照组,置于各箱中饲养。4w后测定眼轴长度,每组中各随机选取3只动物,摘除双眼球做冷冻切片,进行原位杂交检测视网膜中TGF-β的mRNA表达。结果:红光照射组眼轴长度的变化与对照组相比差异有统计学意义,双眼眼轴分别延长了(0.99±0.02)mm和(1.01±0.01)mm,P眼球的生长发育是一个错综复杂的过程,可能受多种因素调控,RPE细胞在眼球生长发育中的作用机制尚不可知,但其接受不同波长的有色光信号后所产生的生长因子不同,有可能是其在眼球生长发育中产生作用的一个重要环节。

关键词：豚鼠眼球生长发育波长有色光近视