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肾综合征出血热病毒感染人血管内皮细胞的观察

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中华医学杂志 1989年第10期69卷 588-590页

作者：朱平杨为松第四军医大学西京医院传染科第四军医大学附属唐都医院传染科第四军医大学电镜室

用透射电镜观察肾综合征出血热(HFRS)病毒76-118株和SR-11株感染的人血管内皮细胞(HEC),发现感染细胞多有不同程度的病理改变,胞浆内可见病毒样颗粒及病毒包涵体。免疫电镜亦于受染细胞中检出酶染色阳性的病毒样颗料。提示HFRS病毒对血... 详细信息

用透射电镜观察肾综合征出血热(HFRS)病毒76-118株和SR-11株感染的人血管内皮细胞(HEC),发现感染细胞多有不同程度的病理改变,胞浆内可见病毒样颗粒及病毒包涵体。免疫电镜亦于受染细胞中检出酶染色阳性的病毒样颗料。提示HFRS病毒对血管内皮细胞的直接作用可能是造成HFRS广泛性血管损伤的一个重要因素。

关键词：出血热血管内皮电子显微镜病毒

针对Survivin基因的短发卡RNA诱导U251细胞凋亡

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中国肿瘤临床 2007年第4期34卷 186-189页

作者：甄海宁章翔白文涛杨彤涛付洛安章薇高大宽胡世颉潘灏第四军医大学西京医院全军神经外科研究所西安市710033 第四军医大学基础部微生物学教研室第四军医大学唐都医院全军骨科中心

目的:观察针对Survivin基因的短发卡RNA(shRNA)对人脑胶质母细胞瘤U251细胞在体外凋亡的影响。方法:对U251细胞,稳定转染Survivin基因shRNA真核表达载体pWH1-SR的U251-SR细胞,以及稳定转染空载体pWH1的U251-P细胞,分别采用相差显微镜、H... 详细信息

目的:观察针对Survivin基因的短发卡RNA(shRNA)对人脑胶质母细胞瘤U251细胞在体外凋亡的影响。方法:对U251细胞,稳定转染Survivin基因shRNA真核表达载体pWH1-SR的U251-SR细胞,以及稳定转染空载体pWH1的U251-P细胞,分别采用相差显微镜、HE染色、Hoechst染色、TUNEL染色以及透射电镜观察各组细胞的形态学特征;采用流式细胞术(FCM)定量测定各组细胞的凋亡细胞数量。结果:相差显微镜、HE染色、Hoechst染色、TUNEL染色以及透射电镜观察显示,U251-SR凋亡细胞明显增多,并呈现典型的细胞凋亡形态学改变;FCM定量分析凋亡细胞数量显示,与U251(2.1%)和U251-P(2.7%)相比,U251-SR凋亡细胞增加约6倍,达14.4%。结论:针对Survivin基因的shRNA能够在体外诱导U251细胞发生大量凋亡。

关键词： Survivin 短发卡RNA RNA干涉胶质瘤

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人脐静脉血管内皮细胞体外培养的方法研究

中国修复重建外科杂志 2011年第2期25卷 139-143页

作者：蔡维霞梁亮计鹏张万福张战凤张彦刚肖西峰白晓智朱华宇胡大海韩骅第四军医大学西京医院全军烧伤中心西安710032 第四军医大学医学遗传学与发育生物学教研室第四军医大学唐都医院妇产科

目的建立人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)体外高效稳定培养的方法,为组织工程及相关医学基础研究提供稳定的细胞来源。方法取自愿捐赠足月妊娠分娩的新生儿脐带,用自制空针软管静脉注入0.1%Ⅱ型... 详细信息

目的建立人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)体外高效稳定培养的方法,为组织工程及相关医学基础研究提供稳定的细胞来源。方法取自愿捐赠足月妊娠分娩的新生儿脐带,用自制空针软管静脉注入0.1%Ⅱ型胶原酶,置于37℃培养箱中,消化收集,采用含5%FBS及1%内皮细胞生长因子(endothelial cell growth factor,ECGS)的内皮细胞专用培养基进行培养。将消化前后的脐带标本行HE染色,观察HUVECs脱壁情况;流式细胞仪检测原代细胞纯度;细胞培养期间于倒置相差显微镜下观察细胞形态;取第3代HUVECs行免疫细胞化学染色观察、MTT检测细胞增殖情况,并将细胞接种于细胞外基质胶Matrigel上培养24 h,观察细胞管腔形成情况。结果经Ⅱ型胶原酶消化后的脐带内HUVECs大量脱落,细胞消化完全。经Ⅱ型胶原酶37℃培养箱中消化15 min后,可获得纯度为99.56%的HUVECs;原代HUVECs培养后2～3 d生长最快,呈典型的铺路石或鹅卵石样排列,4～6 d融合成片。MTT法检测显示第3代HUVECs培养后3～4 d细胞生长最快,5 d左右融合;免疫细胞化学染色显示内皮细胞Ⅷ因子相关抗原表达阳性,培养24 h后在细胞外基质胶Matrigel上可见类似于毛细血管的完整闭合管腔形成。结论经自制空针软管静脉注入0.1%Ⅱ型胶原酶,使静脉充分充盈,内皮消化完全,采用含5%FBS和1%ECGS的内皮细胞专用培养基,可迅速获取大量高纯度、高存活率的HUVECs。

关键词：组织工程种子细胞人脐静脉血管内皮细胞细胞培养

免疫复合物引起实验动物组织细胞中脂褐素变化的电镜观察

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电子显微学报 2002年第5期21卷 557-559页

作者：黄晓峰刘彦仿戴晓汶李向党黄梅王春梅俞郦斌张远强第四军医大学电子显微镜中心陕西西安710032 第四军医大学病理学教研室陕西西安710032 第四军医大学组织学与胚胎学教研室陕西西安710032 解放军第一一七医院病理科浙江杭州310013

流行性出血热患者脑组织血管外常有大量含脂褐素颗粒的吞噬细胞，并发现流行性出血热患者脑组织的许多神经细胞和神经胶质细胞都含有脂褐素颗粒。我们用HFRS病毒抗原和相应抗体在体外制备成可溶性免疫复合物（IC），注射到正常BLAB/C小... 详细信息

流行性出血热患者脑组织血管外常有大量含脂褐素颗粒的吞噬细胞，并发现流行性出血热患者脑组织的许多神经细胞和神经胶质细胞都含有脂褐素颗粒。我们用HFRS病毒抗原和相应抗体在体外制备成可溶性免疫复合物（IC），注射到正常BLAB/C小鼠体内，已经证明可溶性IC对小鼠有致病变作用，但注射IC后，动物组织细胞中脂褐素颗粒的变化情况还未见报道。本实验采用电子显微镜观察了脂褐素在实验动物肝脏和肾脏的组织分布及其亚微结构改变。

关键词：免疫复合物实验动物组织细胞脂褐素电子显微镜流行性出血热

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头面颈部皮肤软组织缺损的显微外科修复

中华烧伤杂志 2010年第4期26卷 263-267页

作者：郑朝胡大海朱雄翔韩军涛王耀军李娜韩夫徐明达第四军医大学西京医院全军烧伤中心、烧伤与皮肤外科西安710032

目的总结探讨头面颈部皮肤软组织缺损的游离皮瓣修复方法 . 方法 2007年7月-2010年5月,笔者单位共收治此类患者31例,包括头皮缺损10例、面部皮肤软组织缺损4例、颈部皮肤软组织缺损17例.其中由外伤引起的皮肤软组织缺损20例,瘢痕挛缩... 详细信息

目的总结探讨头面颈部皮肤软组织缺损的游离皮瓣修复方法 . 方法 2007年7月-2010年5月,笔者单位共收治此类患者31例,包括头皮缺损10例、面部皮肤软组织缺损4例、颈部皮肤软组织缺损17例.其中由外伤引起的皮肤软组织缺损20例,瘢痕挛缩松解后继发缺损11例.采用游离皮瓣（背阔肌皮瓣13例、侧胸皮瓣3例、肩胛皮瓣5例、股前外侧皮瓣10例）修复创面,皮瓣面积8 cm×5 cm～25 cm × 18 cm. 结果皮瓣全部成活,创面均一次性愈合.患者平均住院时间为16.7 d.28例患者随访2个月,皮瓣外观、功能良好. 结论以显微外科为基础的游离皮瓣移植可一次性修复头面颈部皮肤软组织缺损创面,减轻患者痛苦、缩短住院时间.

关键词：显微外科手术皮肤软组织损伤外科皮瓣

胰岛素强化治疗对烫伤大鼠心肌细胞作用的初步研究

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中华危重病急救医学 2008年第12期20卷 -页

作者：吕根法侯宏义陈璧张万福朱雄翔董茂龙胡大海第四军医大学西京医院全军烧伤外科中心陕西西安710032

目的探讨胰岛素强化治疗对严重烫伤大鼠心肌的保护作用.方法将18只SD大鼠随机分为3组,每组6只.行右颈静脉插管以备液体复苏及药物输入.假伤组大鼠在37 C水中假烫伤后给予生理量液体复苏;烫伤组造成总体表面积(TBSA)30%Ⅱ度烫伤后,常... 详细信息

目的探讨胰岛素强化治疗对严重烫伤大鼠心肌的保护作用.方法将18只SD大鼠随机分为3组,每组6只.行右颈静脉插管以备液体复苏及药物输入.假伤组大鼠在37 C水中假烫伤后给予生理量液体复苏;烫伤组造成总体表面积(TBSA)30%Ⅱ度烫伤后,常规予以生理盐水复苏;强化组于烫伤后给予胰岛素强化治疗,液体总量同烫伤组.于烫伤前后不同时间点经尾静脉采血测定血糖.伤后6 h处死动物,心脏取血测定心肌酶谱;取左心室组织,观察组织病理学变化;用蛋白质免疫印迹法检测活化的Akt(p-Akt)表达.结果与假伤组比较,烫伤组伤后血糖及心肌酶谱水平均明显升高,伤后各时间点之间比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).强化组经胰岛素强化治疗后,伤后各时间点血糖水平均显著低于烫伤组(4.5～5.2 mmol/L比7.6～8.4 mmol/L,P<0.05或P<0.01);心肌酶水平也显著降低[乳酸脱氢酶(LDH):(2 369.3±178.9)U/L比(2 684.1±335.0)U/L,P<0.05;α-羟丁酸脱氢酶(α-HBD):(576.7±219.2)U/L比(1 002.0±347.1)U/L,P<0.01;心肌激酶(CK):(1 041.9±623.2)U/L比(2 447.1±1 183.7)U/L,P<0.01].镜下组织病理学观察均显示.强化组心肌细胞损伤和结构的改变明显减轻,并能显著上调P-Akt表达(1.18±0.43比0.24±0.11,P<0.01).结论胰岛素强化治疗对严重烫伤大鼠心肌具有明显的保护作用,此作用可能与增强Akt活化、抑制心肌细胞损伤有关.

关键词：烧伤胰岛素强化治疗心肌细胞大鼠

没药提取物对人成纤维细胞增殖与胶原mRNA表达影响的实验研究

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中华烧伤杂志 2012年第2期28卷 130-133页

作者：白晓智胡大海白丽刘洋苏映军汤朝武第四军医大学西京医院全军烧伤中心烧伤与皮肤外科西安710032

目的观察没药提取物对人皮肤Fh生物学特性的影响，探讨其促进创面愈合的可能机制。方法从人正常包皮组织中分离并培养Fb，取第3-5代细胞用于实验。（1）将Fh接种至96孔板，按随机数字表法分为对照组，1×10-4、1×10 1、1×10-3、1×1... 详细信息

目的观察没药提取物对人皮肤Fh生物学特性的影响，探讨其促进创面愈合的可能机制。方法从人正常包皮组织中分离并培养Fb，取第3-5代细胞用于实验。（1）将Fh接种至96孔板，按随机数字表法分为对照组，1×10-4、1×10 1、1×10-3、1×10-21、1、10、1×102 g/L没药水提取物组以及上述7种浓度的没药醇提取物组。对照组用含体积分数0. 25%小牛血清的DMEM培养液（简称低浓度血清培养液）培养，各浓度没药水及没药醇提取物组分别用含相应终浓度2种没药提取物的低浓度血清培养液培养。培养48 h，用倒置相差显微镜观察细胞形态，噻唑蓝法测定各组Fh增殖活性（以吸光度值表示）。（2）将Fh分别接种于培养瓶和培养皿中，均按随机数字表法分为2组：1 g/L没药水提取物组，用含终浓度1 g/L没药水提取物的低浓度血清培养液培养；对照组，采用低浓度血清培养液培养。培养72 h，分别采用流式细胞仪、实时荧光定量PCR法检测Fb周期与I、Ⅲ型胶原mRNA的表达。对数据进行LSD-t检验。结果（1）各组细胞均呈长梭形生长，1 g/L没药水提取物组细胞融合较对照组更显著。1×10-3、1×10-2、1×10-11，1、10 g/L没药水提取物组Fb吸光度值分别为0. 378±0.032、0.402±0.007、0.390±0.038、0.453±0.036、0.390±0.037，均高于对照组的0. 332±0.044，t值分别为2.24、2.93、2.69、5.73、2.71，P值均小于0.05。1×10-3、1×10-2 g/L没药水提取物组吸光度值分别为0.312±0.048、0.154±0.009，前者与对照组比较，差异无统计学意义（t=2.84，P〉0.05）；后者显著低于对照组（t=7. 17，P〈0.05）。1×10。3、1×10。1、1、10、1×102 g/L没药醇提取物组Fh吸光度值显著低于对照组（z值为2.30 24. 79，P值均小于0. 05）。（2）1 g/L没药水提取物组CO/G1期细胞百分比为（74.3±6.3）%，明显少于对照组的（82.2 ±7.9）010，z=6.77，P〈0.05；S期及G2/M期细胞百分比分别为（16.6±3.4）%、（9.1±1.6）%，明显多于对照组的（13.3±2.3）%、（4.5±0.8）%，t值分别为7. 53、6.34，P值均小于0.05。1g/L没荮水提取物组Fb中I型胶原mRNA相对表达量（0.89 ±0.08）与对照组（1.00 ±0.06）比较，差异无统计学意义（t=1.17，P〉0.05）；Ⅲ型胶原mRNA相对表达量（1.38±0.12）显著高于对照组（1. 00±0.05，t=3.81，P〈0.01）。结论没药水提取物能显著促进Fb增殖，加快Fb细胞周期进程，上调Fb中Ⅲ型胶原mRNA表达，可能与其促进创面愈合的机制相关。

关键词：没药属成纤维细胞细胞增殖胶原伤口愈合