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一氧化氮合酶的若干研究进展

生物化学与生物物理进展 1996年第4期23卷 293-297页

作者：陈晋文孙长凯黄远桂第四军医大学西京医院

一氧化氮合酶（ＮＯＳ）是一氧化氮（ＮＯ）生物学与医学研究的重要内容近年来，对ＮＯＳ酶本质及其生化与分子生物学特性甚至某些分子遗传学方面的认识都在迅速发展和深化研究表明，干预ＮＯＳ－ＮＯ途径的某些环节，如酶激活、ＮＯ合... 详细信息

一氧化氮合酶（ＮＯＳ）是一氧化氮（ＮＯ）生物学与医学研究的重要内容近年来，对ＮＯＳ酶本质及其生化与分子生物学特性甚至某些分子遗传学方面的认识都在迅速发展和深化研究表明，干预ＮＯＳ－ＮＯ途径的某些环节，如酶激活、ＮＯ合成、释放与转运甚至有关酶的编码基因及其表达，将为某些临床问题的解决提供新的思路和手段．

关键词：一氧化氮合酶一氧化氮生物化学

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一步法从人血浆中制备天然血管生成抑制素

生物化学与生物物理进展 2000年第3期27卷 325-327页

作者：李福洋何鹏刘新平张英起杨静华樊代明药立波 *** 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室西安710032 第四军医大学生物技术中心第四军医大学西京医院消化病研究所

血管生成抑制素 (angiostatin)能特异地抑制新生血管生成 ,有潜在的临床应用价值 .利用亲和层析从人血浆中纯化纤溶酶原 ,并在原位进行弹性蛋白酶有限消化产生angiostatin片段 ,经过洗涤 ,然后用 0 2mol/L 6 氨基己酸溶液将angiostati... 详细信息

血管生成抑制素 (angiostatin)能特异地抑制新生血管生成 ,有潜在的临床应用价值 .利用亲和层析从人血浆中纯化纤溶酶原 ,并在原位进行弹性蛋白酶有限消化产生angiostatin片段 ,经过洗涤 ,然后用 0 2mol/L 6 氨基己酸溶液将angiostatin特异性洗脱 .此改进使整个制备过程变得简单、快速和高效 .

关键词：血管生成抑制素抗肿瘤转移一步亲和层析血浆

一种用少量标本快速构建老年性白内障消减cDNA文库的方法

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生物化学与生物物理进展 2002年第6期29卷 952-954页

作者：刘燕周健刘新平药立波王吉村苏景宽惠延年第四军医大学西京医院眼科西安710032 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室西安710032 第四军医大学唐都医院医教部西安710032

为从少量标本中获得含较多大片段的、高质量的老年性白内障消减cDNA文库 ,利用磁珠分离、生物素标记的改良消减杂交法获得差异cDNA ,利用选择性PCR法扩增其中大片段差异cDNA ,从而成功构建老年性白内障消减cDNA文库 .在文库中随机挑取的... 详细信息

为从少量标本中获得含较多大片段的、高质量的老年性白内障消减cDNA文库 ,利用磁珠分离、生物素标记的改良消减杂交法获得差异cDNA ,利用选择性PCR法扩增其中大片段差异cDNA ,从而成功构建老年性白内障消减cDNA文库 .在文库中随机挑取的 2 2个克隆中 ,10 0 0bp以上的片段有 7个 ,占 31 8% ,75 0bp以上有 15个 ,占 6 8 2 % .所得cDNA片段较大 ,可以满足下一步研究需要 .

关键词：少量标本快速构建老年性白内障消减cDNA文库改良消减杂交法选择性PCR法

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MRP基因与肿瘤的多药耐药性

生物化学与生物物理进展 1997年第4期24卷 312-315页

作者：毕锋张学庸樊代明第四军医大学西京医院西安710032

在人肿瘤非典型性多药耐药机制的研究中发现了一个新的基因———多药耐药相关蛋白基因(MRP) .该基因位于人 1 6号染色体P1 3∶3,编码 1 531个氨基酸 .其产物为多药耐药相关蛋白(MRP) ,分子质量 1 90ku ,故又名 p1 90 .MRP属ABC超家族成... 详细信息

在人肿瘤非典型性多药耐药机制的研究中发现了一个新的基因———多药耐药相关蛋白基因(MRP) .该基因位于人 1 6号染色体P1 3∶3,编码 1 531个氨基酸 .其产物为多药耐药相关蛋白(MRP) ,分子质量 1 90ku ,故又名 p1 90 .MRP属ABC超家族成员 ,主要分布在细胞的质膜上 .MRP的功能可能是在能量依赖的外排系统中发挥作用 .除了一些肿瘤细胞系外 ,MRP基因的高表达还见于一些血液系肿瘤及乳腺癌等 .MRP基因的高表达还可能与某些肿瘤的复发和预后有关 .

关键词：肿瘤多药耐药相关蛋白基因多药耐药性

人杀菌/通透性增强蛋白活性片段基因在CHO细胞中的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第5期23卷 416-419页

作者：刘家云龙铟马越云丁振若于文彬苏明权郝晓柯第四军医大学西京医院临床分子生物学研究中心陕西西安710032 第四军医大学西京医院中医科陕西西安710032

目的获得人杀菌/通透性增强蛋白(bactericidal/permeability-increasing protein,BPI)N端活性片段蛋白,为BPI结构和功能的研究提供有力的工具。方法提取人外周血多形核白细胞(PMN)总RNA进行逆转录反应,经套式PCR扩增出BPIN端基因片段,... 详细信息

目的获得人杀菌/通透性增强蛋白(bactericidal/permeability-increasing protein,BPI)N端活性片段蛋白,为BPI结构和功能的研究提供有力的工具。方法提取人外周血多形核白细胞(PMN)总RNA进行逆转录反应,经套式PCR扩增出BPIN端基因片段,将其克隆入pUC19载体中并进行酶切鉴定和序列测定,然后亚克隆入质粒pcDNA3构建真核表达载体pcDNA-BPI;重组载体通过脂质体转染CHO细胞并筛选阳性克隆,免疫荧光法鉴定重组BPI的表达和免疫学活性。结果酶切鉴定和序列分析证实重组质粒含有包括信号肽在内的BPI活性片段编码序列,与文献报道的序列相比,有6个核苷酸差异。转染筛选的阳性CHO细胞克隆表达产物能够被抗BPI的单克隆抗体所识别。结论BPI活性片段表达载体的构建及真核表达成功,为BPI功能的研究奠定了基础。

关键词：杀菌/通透性增强蛋白逆转录PCR 真核表达

人骨保护素(OPG)重组腺病毒的制备及其生物活性研究

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生物工程学报 2003年第1期19卷 35-40页

作者：刘继中纪宗玲胡蕴玉陈苏民朱帮福杨彤涛第四军医大学西京医院全军骨科研究所第四军医大学生物化学与分子生物学教研室第四军医大学唐都医院骨科西安710032

采用RT PCR法得到人OPG的编码区cDNA ,克隆至穿梭质粒pShuttle,构建重组有OPG编码区cDNA的腺病毒DNA ,经PacI酶切线性化 ,在脂质体介导下转染HEK2 93细胞 ,制备重组腺病毒并测定病毒滴度约为 5× 10 6 ～1 5× 10 7pfu mL。体外感染小... 详细信息

采用RT PCR法得到人OPG的编码区cDNA ,克隆至穿梭质粒pShuttle,构建重组有OPG编码区cDNA的腺病毒DNA ,经PacI酶切线性化 ,在脂质体介导下转染HEK2 93细胞 ,制备重组腺病毒并测定病毒滴度约为 5× 10 6 ～1 5× 10 7pfu mL。体外感染小鼠成肌细胞C2C12 ,Westernblot及ELISA检测证实有OPG蛋白的表达 ,并可在细胞培养上清中持续表达 6周。感染OPG重组腺病毒的C2C12细胞生长状态良好、细胞周期无明显变化。将重组腺病毒加入体外培养的小鼠骨髓细胞的培养基中 ,诱导形成的破骨细胞数量及在象牙片上形成的吸收陷窝的数量显著减少 (P <0 0 1)。

关键词：人骨保护素 OPG 重组腺病毒制备生物活性破骨细胞

天花粉蛋白的聚乙二醇定点修饰及其性质的初步研究

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高等学校化学学报 2009年第8期30卷 1586-1591页

作者：安群星雷迎峰杨敬黎志东穆士杰徐志凯第四军医大学西京医院输血科西安710032 第四军医大学微生物学教研室西安710033

用聚乙二醇(PEG)定点修饰天花粉蛋白(TCS),并比较了修饰前后TCS的生物活性、免疫原性及药代动力学等诸多性质.选择TCS分子上可能的抗原决定簇位点KR173-174进行定点突变,并将所构建的突变体TCSKR173-174CG在大肠杆菌中表达及纯化.通过... 详细信息

用聚乙二醇(PEG)定点修饰天花粉蛋白(TCS),并比较了修饰前后TCS的生物活性、免疫原性及药代动力学等诸多性质.选择TCS分子上可能的抗原决定簇位点KR173-174进行定点突变,并将所构建的突变体TCSKR173-174CG在大肠杆菌中表达及纯化.通过该突变体第173位引入的半胱氨酸残基进行PEG定点修饰.通过比较研究,分析所构建的PEG修饰型TCS的DNA酶活性、致核糖体失活活性、免疫原性、急性毒性以及药代动力学性质,研究结果表明,所构建的突变型TCS(mTCS)的活性与野生型TCS(wTCS)活性几乎相当,而免疫原性已显著降低.PEG修饰型TCS虽有活性下降,但其免疫原性、急性毒性以及药代动力学性质得到显著提升.表明通过基因工程及化学修饰方法改造TCS是可行的,所构建的突变型及PEG修饰型TCS值得进一步研究.

关键词：天花粉蛋白聚乙二醇定点修饰免疫原性药代动力学人类免疫缺陷病毒

抗血管内皮生长因子发夹状核酶基因抑制卵巢癌移植瘤生长的实验研究

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中华妇产科杂志 2002年第11期37卷 683-686页

作者：严瑞兰辛晓燕金明惠宏襄王健王德堂第四军医大学西京医院妇产科西安710032 第四军医大学西京医院生物化学与分子生物学教研室西安710032

目的　采用抗血管内皮生长因子 (VEGF)发夹状核酶基因 ,阻断卵巢癌中VEGF的自分泌和 (或 )旁分泌通路 ,以检测抗VEGF发夹状核酶基因对卵巢癌细胞VEGF表达及其肿瘤生长的影响。方法　采用脂质体介导的方法 ,将自行设计和构建的抗VEGF发... 详细信息

目的　采用抗血管内皮生长因子 (VEGF)发夹状核酶基因 ,阻断卵巢癌中VEGF的自分泌和 (或 )旁分泌通路 ,以检测抗VEGF发夹状核酶基因对卵巢癌细胞VEGF表达及其肿瘤生长的影响。方法　采用脂质体介导的方法 ,将自行设计和构建的抗VEGF发夹状核酶基因真核表达载体转染人卵巢癌细胞SKOV3,采用氨基糖甙庆大霉素 (G418)筛选获得阳性克隆 ;RNA斑点杂交检测核酶基因在卵巢癌细胞中的表达 ;逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测转染前后卵巢癌细胞中VEGF的表达 ;透射电子显微镜观察卵巢癌细胞超微结构改变 ;观察裸鼠皮下成瘤实验检测转染前后细胞的致瘤能力的变化。结果　转染核酶基因后的卵巢癌细胞VEGFmRNA表达明显降低 ;透射电子显微镜观察出现凋亡细胞 ;裸鼠致瘤能力减弱 ,肿瘤组织中VEGF表达及血管形成减少。结论　抗VEGF发夹状核酶基因可显著抑制卵巢癌细胞VEGF表达 ,通过减少血管形成抑制肿瘤生长 ,为进一步开展肿瘤血管靶向基因治疗。

关键词：实验研究内皮生长因子淋巴因子催化RNA 卵巢肿瘤实验性肿瘤

异种同源钙激活Cl^-通道DNA疫苗抑制哮喘小鼠气道黏液高分泌的研究

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中华医学杂志 2004年第4期84卷 329-333页

作者：宋立强李妍戚好文刘新平王吉村第四军医大学西京医院呼吸内科西安710032 第四军医大学西京医院心脏内科西安710032 第四军医大学生物化学和分子生物学教研室

目的　钙激活Cl-通道 (CLCA)家族中小鼠mCLCA3与人hCLCA1是异种同源蛋白 ,两者表达于气道上皮杯状细胞。拟探讨hCLCA1DNA疫苗对哮喘小鼠气道黏液高分泌状况的影响。方法　构建重组真核表达质粒pSecTag2B/hCLCA1,将其作为疫苗肌注法接种... 详细信息

目的　钙激活Cl-通道 (CLCA)家族中小鼠mCLCA3与人hCLCA1是异种同源蛋白 ,两者表达于气道上皮杯状细胞。拟探讨hCLCA1DNA疫苗对哮喘小鼠气道黏液高分泌状况的影响。方法　构建重组真核表达质粒pSecTag2B/hCLCA1,将其作为疫苗肌注法接种给BALB/c小鼠 (隔 2周 1次 ,共4次 )。当酶联免疫吸附法 (ELISA)证实血清中有能结合mCLCA3胞外肽段 (ED)的抗体产生时 ,卵蛋白致敏法制备接种小鼠的哮喘模型。引喘 5d后 ,PAS特染黏蛋白法观察气道杯状细胞数量及分泌功能 ,逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)法检测黏蛋白MUC5ACmRNA水平的变化。设接种pSecTag2B/mCLCA3、空载体pSecTag2B和生理盐水为对照组。结果　ELISA证实疫苗接种 3次后的小鼠血清抗体 ,能有效结合mCLCA3的 3个ED。其中抗体与N 端和C 端ED的结合滴度大于与中间ED的结合滴度。与同样被诱发哮喘的对照组相比 ,疫苗接种组小鼠气道的杯状细胞数量和黏液分泌量明显减少 ,MUC5ACmRNA转录水平下降。结论　hCLCA1DNA疫苗能诱导小鼠产生结合自身mCLCA3胞外肽段的抗体 ,并因此有效减轻了哮喘气道黏液高分泌。

关键词：钙激活Cl^-通道 DNA疫苗哮喘小鼠气道黏液气道上皮杯状细胞