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癌症 1989年第6期8卷 443-445页

作者：黎松张学庸陈敏陈希陶樊代明张素胤陈陵际张家骝第四军医大学西京医院消化病研究室中国科学院上海药物研究所

本文报道^(125)Ⅰ标记的胃癌单抗一葡聚糖T-40-丝裂霉素C(MMC)结合物在荷人胃癌裸鼠体内的定位及分布的研究结果。在结合物制备及碘标记过程中,抗体活性无明显丧失,结合物能较好地定位于肿瘤组织,其体内分布状态与游离单抗基本相同。

关键词：胃癌结合抗癌药单克隆抗体

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fFN与自发性早产的相关性研究

fFN与自发性早产的相关性研究

作者：杨芳第四军医大学

学位级别：硕士

背景早产占全球总出生率的6%0%，每年大约有1300万早产儿并且有100万早产儿死亡，准确的预测和诊断自发性早产是非常困难的[1,2]。早产仍是产科尚未解决的难题。在所有的新生儿中，早产儿的死亡率占到75%，50%长期患有神经障碍疾病的... 详细信息

背景早产占全球总出生率的6%0%，每年大约有1300万早产儿并且有100万早产儿死亡，准确的预测和诊断自发性早产是非常困难的[1,2]。早产仍是产科尚未解决的难题。在所有的新生儿中，早产儿的死亡率占到75%，50%长期患有神经障碍疾病的为早产儿[3]。早产是新生儿死亡和患病的重要因素，对新生儿以后的健康成长也产生了长期的不良影响，而且由于辅助生殖技术的运用和多胞胎的增加，早产率在全球范围都存在上升趋势。及早施行有目的的治疗，能很好的利用有效资源和避免不必要的干预。现今围产医学的发展并未降低早产的发生率，行之有效的预测和诊断早产的方法还有待进一步研究和建立。有效的风险评估因子可能通过有及早的治疗来改善预后，而且也可有效的利用资源并减少不必要的干预。胎儿纤维连接蛋白fFN检测在临床应用方面具有快速、成本低廉、操作简便等诸多优势。胎儿纤维连接蛋白(fetalFibronectin，fFN)是一种存在于羊膜、蜕膜和绒毛膜基质的糖蛋白，为胎盘和子宫的连接起支持作用。在正常情况下，fFN在宫颈阴道分泌物中含量很少，在怀孕22周以前，可以在宫颈阴道分泌物中检测到fFN，但是在孕22周到35周时，正常情况下是不能检测到fFN的，若在怀孕22周后，在阴道分泌物中测到fFN的含量＞50ng/ml,提示患者有很大的早产可能。说明绒毛膜和蜕膜面可能有剥离，孕妇有早产的可能。在临床上也进行了许多阴道分泌物fFN和发生早产相关性的研究.fFN在自发性早产中可能起到了重要调节作用，具体机制仍需进一步的研究和探索，但目前类似研究较少。因此，本实验拟通过探索fFN在自发性早产中的的作用，进一步阐明fFN在自发性早产中的分子机制，为自发性早产的治疗提供新的思路和方法。目的观察fFN、MMP-9、COX-2在自发性早产患者胎盘组织中的表达及意义，并分析fFN与MMP-9和COX-2之间的关系。研究fFN在自发性早产中的分子机制。方法 1.fFN、MMP-9、COX-2在胎盘组织中的表达和意义选择2012年12月至2013年6月在西京医院妇产科住院分娩的孕妇90例，分为自发性早产30例，足月顺产组30例，择期剖宫产30例。采取免疫组化法、RT-PCR法和Westernblot法检测自发性早产和正常妊娠妇女胎盘组织中的fFN、MMP-9、COX-2的表达。 2．胎盘绒毛组织的原代培养与鉴定收集采取足月产和自发性早产的胎盘，运用胰蛋白酶分离培养原代绒毛细胞。用免疫荧光方法对其鉴定。3fFN作用下绒毛细胞中MMP-9、COX-2的表达差异运用明胶亲和层析法提取足月产胎盘羊膜中的fFN,将fFN加入实验二培养的两组绒毛细胞，运用Elisa检测两组细胞中MMP-9、COX-2的变化结果 1．fFN、MMP-9、COX-2的阳性表达主要在滋养细胞胞浆中，fFN、MMP-9、COX-2在早产组的阳性表达率分别为(100%)、(90%)、(93.3%)，高于足月顺产组(76.7%)、(80%)、(46.7%);高于择期剖宫产组(56.7%)、(46.7%)、(50%)。fFNmRNA、MMP-9mRNA、COX-2mRNA在早产组中的表达水平高于足月顺产组、择期剖宫对照组(P均＜0.05)。fFN、MMP-9、COX-2在早产组中的蛋白表达水平高于足月顺产组、择期剖宫对照组(P均＜0.05)。 2．分离培养出纯度超过90%的符合后续实验要求的绒毛细胞。 3．足月产绒毛细胞中MMP-9、COX-2较未处理组表达升高，均有统计学意义。早产组绒毛细胞中MMP-9、COX-2较未处理组表达升高，均有统计学意义。早产组与足月产组绒毛细胞中MMP-9、COX-2升高表达差异无统计学意义结论 fFN、MMP-9、COX-2在早产中高表达，fFN不仅仅是早产预测因子，其在早产的发生发展中也起了重要的作用。

关键词：自发性早产 fFN MMP-9 COX-2 机制

酪氨酸激酶抑制剂治疗慢性髓系白血病临床随访研究

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酪氨酸激酶抑制剂治疗慢性髓系白血病临床随访研究

作者：吴雯第四军医大学

学位级别：硕士

研究背景和目的:CML患者在2001年前的治疗多采用干扰素、羟基脲等药物,慢性期平均为4年,随后进入加速期,最终进入急变期导致患者死亡,预后较差,CML患者仅能通过异基因造血干细胞移植获得长期生存。2001年针对CML的发病机理,研发成功了... 详细信息

研究背景和目的:CML患者在2001年前的治疗多采用干扰素、羟基脲等药物,慢性期平均为4年,随后进入加速期,最终进入急变期导致患者死亡,预后较差,CML患者仅能通过异基因造血干细胞移植获得长期生存。2001年针对CML的发病机理,研发成功了靶向治疗药物——一代酪氨酸激酶抑制剂(甲磺酸伊马替尼)。通过十余年的临床实践,国、内外多中心临床随访研究显示,TKI明显提高了CML患者的总生存期和无进展生存期。随着发病机理及耐药机制研究的不断深入,一代、二代、三代TKI产品的问世,临床医师对CML患者一线药物的选择、疗效监控、不良反应及换药时机的等问题愈加重视。本课题随访研究67例成人及6例儿童CML的TKI疗效及不良反应,以期加深对CML治疗的整体认知,为CML患者的优选个体化治疗提供依据。研究方法:1.选取2006年3月1日至2014年12月31日第四军医大学附属西京医院门诊就诊的儿童或成人CML患者为研究对象,口服伊马替尼或尼罗替尼(美国诺华公司)治疗,随访治疗效果及相关副作用;2.根据《中国慢性髓系白血病诊疗监测规范》[29]定期门诊复诊,根据中国慢性髓系白血病诊疗监测规范(2013年版)及NCCN指南(2014年版)进行疗效监测及评估。3.根据NCI—CTC评估患者服药后的不良反应。研究结果:1.伊马替尼治疗儿童CML随访结果:儿童6例,中位年龄10.5岁,均为CML-CP,给予伊马替尼260mg/m2治疗,均达MMR,达MMR中位时间为12个月。不良反应多为Ⅰ-Ⅱ级,耐受可,仅有2例患儿出现明显发育延迟。2.伊马替尼治疗成人CML随访结果:43例患者中,其中一线组32例患者中3、6、12月的CCy R率分别为9.4%、59.4%、65.6%,达CCy R中位时间为6个月;二线组11例患者中3、6、12月的CCy R率分别为0%、54.5%、81.8%,达CCy R中位时间为6个月。截止2014年12月31日,累计MMR率为62.8%。不良反应:43例CML患者中,血液学毒性有Ⅲ-Ⅳ级为14.0%;非血液学毒性Ⅲ-Ⅳ级皮炎2.3%,其余均为Ⅰ-Ⅱ级,耐受可;14%患者因较重不良反应不耐受。3.尼罗替尼治疗成人CML随访结果:一线治疗9例,8例患者达到CCy R(88.9%),达CCy R中位时间为4.5个月;8例患者达MMR(88.9%),达MMR中位时间为10个月。二线治疗15例,12例患者达CCy R,有效率为80%,达CCy R中位时间为6个月;8例患者达MMR(53.3%),达MMR中位时间为12个月。副作用多为Ⅰ-Ⅱ级,Q-T间期延长1例,高血糖3例。老年患者给予较低剂量尼罗替尼治疗(200mg 2/日)即可达MMR。结论:1.本研究中儿童CML患者接受伊马替尼治疗均达MMR,已获4年PFS;目前在国内鲜少见伊马替尼治疗儿童CML及对儿童身高发育影响相关报道;2.伊马替尼治疗CML患者疗效好,随访8年结果显示,72.1%的患者可达CCy R,62.8%患者达MMR,其中一线早期治疗效果优于二线治疗。3.尼罗替尼治疗CML患者,相比与伊马替尼能更快、更早达到CCy R及MMR;伊马替尼耐药或不耐受的患者给予二线尼罗替尼治疗效果好,对于伊马替尼不耐受或老年患者给予较低剂量(200mg 2/日)即可达MMR。

关键词：慢性粒细胞白血病儿童生长发育伊马替尼尼罗替尼

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肾移植围手术期补液监控(英文)

中国组织工程研究与临床康复 2008年第31期12卷 6169-6172页

作者：张更王禾孟俊华武国军秦卫军于磊李欣张运涛刘贺亮袁建林解放军第四军医大学西京医院泌尿外科陕西省西安市710032

背景：多尿期肾移植患者围手术期的水及糖电解质的平衡与及时的营养支持治疗对移植肾脏的功能恢复至关重要。目的：探讨。肾移植围手术期的水电解质平衡维护及营养支持的方法和时机。设计、时间及地点：回顾性临床分析，于2003-06／2007... 详细信息

背景：多尿期肾移植患者围手术期的水及糖电解质的平衡与及时的营养支持治疗对移植肾脏的功能恢复至关重要。目的：探讨。肾移植围手术期的水电解质平衡维护及营养支持的方法和时机。设计、时间及地点：回顾性临床分析，于2003-06／2007-06在解放军第四军医大学西京医院泌尿外科完成。对象：接受同种异体。肾移植的慢性肾功能衰竭患者96例，男59例，女37例，年龄17～67岁，平均35．7岁。方法：以移植肾动、静脉血流开放时间为分界点，总结患者围手术期的生理特点。术前维持患者生命体征平稳，手术开始时即开始匀速输血，移植动、静脉血管开放前积极补充清蛋白，开始排尿且尿量大于每小时100mL，即开始循环补循环补液配方，简化的肾移植术后多尿期输液。主要观察指标：术后1d检测患者血肌酐、尿素氮、电解质、血糖和尿液。结果：术后最初12～16h。患者尿量在260～1200mldh，平均520mL／h。术后测血常规显示，8例出现轻度低钠血症，占8.3％。3例出现高钾，于肾功能恢复后正常，1例发生低钾，补钾治疗及肾功能恢复后正常。血氯无异常变化。21例血糖高于正常，占21．9％，激素冲击结束后恢复正常。其他患者电解质、血糖均正常，无低钙、镁者。尿比重均在1．010～1．015之间。结论：移植。肾动、静脉血流开放前的输液应以胶体如浓缩红细胞、血浆及清蛋白为主，多尿期应规律及时的补充水及电解质，适当的营养支持有助于吻合口愈合，尿量稳定后应预防代谢性酸中毒。

关键词：肾移植围手术期电解质平衡

髋臼发育不良成年人行髋臼周围截骨术后并发症的护理

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中华现代护理杂志 2011年第10期17卷 1195-1196页

作者：贾瑛第四军医大学西京医院全军骨科研究所西安710032

髋臼发育不良在国内发病率很高,是髋关节继发性骨性关节炎的重要原因之一.因其发病年龄低,如果不及时治疗,将会导致严重的髋关节骨性关节炎,晚期需要人工髋关节置换术[1].早期的手术干预,可以延缓骨性关节炎的进展,避免人工关节置换手... 详细信息

髋臼发育不良在国内发病率很高,是髋关节继发性骨性关节炎的重要原因之一.因其发病年龄低,如果不及时治疗,将会导致严重的髋关节骨性关节炎,晚期需要人工髋关节置换术[1].早期的手术干预,可以延缓骨性关节炎的进展,避免人工关节置换手术或推迟关节置换术的时间.

关键词：髋臼周围截骨髋臼发育不良护理

老龄豚鼠耳蜗血管纹NOS活性与电生理关系研究

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基础医学与临床 1998年第6期18卷 42-46,41页

作者：姜鸿彦刘顺利黄维国邱建华王锦玲第四军医大学西京医院耳鼻咽喉科

本文采用ＮＡＤＰＨｄ组织化学、图象分析及听觉电生理技术，研究豚鼠衰老过程中血管纹一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性的变化与蜗内电位（ＥＰ）及复合动作电位（ＣＡＰ）的关系，探讨ＮＯＳ在老年性聋发病过程中的可能作用。结果发现，... 详细信息

本文采用ＮＡＤＰＨｄ组织化学、图象分析及听觉电生理技术，研究豚鼠衰老过程中血管纹一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性的变化与蜗内电位（ＥＰ）及复合动作电位（ＣＡＰ）的关系，探讨ＮＯＳ在老年性聋发病过程中的可能作用。结果发现，３月龄豚鼠ＥＰ值最大，为８６３２±３２４ｍＶ，随着豚鼠的衰老ＥＰ值逐渐下降，ＣＡＰＮ１波振幅的变化规律与ＥＰ的变化规律一致。ＣＡＰＮ１波潜伏期有逐渐延长的趋势。组织化学染色表明，ＮＯＳ阳性反应主要位于血管纹边缘细胞的胞浆内，随着豚鼠的衰老，血管纹ＮＯＳ阳性反应逐渐减弱，除２周龄组外，ＮＯＳ活性与ＥＰ及ＣＡＰＮ１波振幅有正相关趋势。结果提示，耳蜗血管纹ＮＯＳ可能参与内耳微循环及微环境稳定的调节。

关键词：老年性耳聋一氧化氮合酶血管纹电生理耳蜗

人脐血中CD133^+血管内皮祖细胞的分离培养和生物学特性

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第7期11卷 1287-1289,F0003页

作者：谢松涛陈璧陶克解放军第四军医大学西京医院烧伤科陕西省西安市710032

目的:观察免疫磁珠法分离得到的CD133+血管内皮祖细胞的细胞表面标记及生物学特性。方法:实验于2002-11/2003-08在解放军第四军医大学西京医院烧伤外科实验室完成。①选取正常顺产或剖腹产人胎盘(解放军第四军医大学西京医院妇产科提供... 详细信息

目的:观察免疫磁珠法分离得到的CD133+血管内皮祖细胞的细胞表面标记及生物学特性。方法:实验于2002-11/2003-08在解放军第四军医大学西京医院烧伤外科实验室完成。①选取正常顺产或剖腹产人胎盘(解放军第四军医大学西京医院妇产科提供,产妇均知情同意)作为CD133+血管内皮祖细胞的标本来源。②人胎盘脐血ACD-B抗凝,稀释后取7mL脐血缓慢加入淋巴细胞分离液3mL,2100r/min离心30min,取棕黄色层低密度单个核细胞,洗涤去血小板。免疫磁珠与FITC-CD133单抗室温孵育30min,洗去多余单抗,将包被FITC-CD133的免疫磁珠加入到单个核细胞中,室温孵育30min,置于磁场中1min,吸弃细胞悬液,加入磁珠-细胞分离液从免疫磁珠上释放出CD133+血管内皮祖细胞。加入EGM-2MV培养基,接种于包被I型胶原的培养瓶中,24h换液除去未贴壁细胞,3d后半量换液,培养3～4周。③观察CD133+血管内皮细胞经免疫磁珠分离后的形态变化;采用流式细胞仪分析CD133+血管内皮祖细胞在脐血单个核细胞的比例及免疫磁珠的分离效率;免疫荧光及酶组织化学检测CD133+血管内皮祖细胞体外培养不同时期的表形变化;透射电镜观察成熟血管内皮细胞W-P小体的形成情况。结果:①CD133+血管内皮祖细胞体外培养形态观察:贴壁小细胞团在4～5d可见伪足伸出,7d后呈克隆状迅速生长,2～3周后密集区细胞呈“鹅卵石”样,培养4周融合后的细胞呈梭形。②CD133+血管内皮祖细胞分离率检测结果:CD133+血管内皮祖细胞在脐血单个核细胞中的比例为0.91%,经免疫磁珠分离后比例为85.52%。③CD133+血管内皮祖细胞体外培养不同时期的免疫表形变化:培养第5天极少数细胞CD133染色阳性,大部分细胞CD34及vWF染色阳性;第10天所有细胞CD133染色均呈阴性,大部分细胞CD34、vWF染色呈阳性。④成熟血管内皮细胞W-P小体的形成情况:透射电镜下培养第10天可见成熟血管内皮细胞所特有的W-P小体。结论:采用免疫磁珠法可以有效地从人脐血中分离纯化CD133+血管内皮祖细胞,不同培养时期通过CD133,CD34,vWF单抗以及透射电镜进行鉴定,证明其具有分化为成熟血管内皮细胞的能力。

关键词：造血干细胞血管抗原 CD34/遗传学内皮生长因子免疫磁化分离胎血

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眼科住院患者全身系统性危重疾病的临床分析

国际眼科杂志 2012年第8期12卷 1587-1589页

作者：惠玲张自峰师晓莉王雨生北方医院眼科中国陕西省西安市710043 第四军医大学西京医院眼科全军眼科研究所中国陕西省西安市710032

目的:通过分析眼科住院患者中全身系统性疾病的发生情况,掌握眼病患者全身危重疾病的特点,为医疗安全提供保障。方法:对2007-06/2010-12在西安北方医院眼科住院的2016例眼病患者中发生全身系统性危重病变(包括急性新发病变和慢性疾病急... 详细信息

目的:通过分析眼科住院患者中全身系统性疾病的发生情况,掌握眼病患者全身危重疾病的特点,为医疗安全提供保障。方法:对2007-06/2010-12在西安北方医院眼科住院的2016例眼病患者中发生全身系统性危重病变(包括急性新发病变和慢性疾病急性发作)的病历资料进行回顾性分析。结果:既往有全身系统性疾病史者1644例(81.55%)。住院期间发生全身危重病变者36例(1.79%),包括循环系统疾病24例(高血压急性发病致高血压危象19例、急性心肌梗塞3例、急性低血压2例)、神经系统疾病4例(脑出血2例、急性脑梗塞2例)、消化系统疾病3例(急性胃肠炎2例、急性消化道出血1例)、泌尿系统疾病2例(尿路结石致急腹症2例)以及重症药物过敏3例。所有患者经及时治疗后全身病情好转,眼病病情稳定。结论:眼科住院患者中老年人居多,既往有全身系统性疾病史者比例高,易发生以循环系统和神经系统为主的全身危重疾病。只有高度重视对系统性危重疾病全面评估,早期诊断,妥善治疗,才能安全有效地完成眼病治疗。

关键词：全身系统性疾病危重病变眼科回顾性系列病例研究

白三烯受体拮抗剂在变应性咳嗽中的辅助治疗及相关炎症机制研究

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白三烯受体拮抗剂在变应性咳嗽中的辅助治疗及相关炎症机制研究

作者：向东第四军医大学

学位级别：硕士

慢性咳嗽(Chronic cough,CC)是呼吸内科常见的呼吸道疾病之一,我国一项前瞻性多中心流行病学研究显示[1],慢性咳嗽排名前四的疾病分别是:咳嗽变异性哮喘(CVA)、上气道咳嗽综合症(UACS)、嗜酸粒细胞性支气管炎(EB)及变应性咳嗽(AC)。随... 详细信息

慢性咳嗽(Chronic cough,CC)是呼吸内科常见的呼吸道疾病之一,我国一项前瞻性多中心流行病学研究显示[1],慢性咳嗽排名前四的疾病分别是:咳嗽变异性哮喘(CVA)、上气道咳嗽综合症(UACS)、嗜酸粒细胞性支气管炎(EB)及变应性咳嗽(AC)。随着环境污染加剧,我国雾霾天气增多,变应性咳嗽发病率逐年上升,目前占慢性咳嗽疾病的13.2%。AC早期临床表现与上呼吸道感染难以鉴别,致使多数患者误诊误治。AC的病因尚不明确,目前认为嗜酸性粒细胞炎症、咳嗽敏感性增高、Th1/Th2免疫失衡等是主要发病机制。LT是花生四烯酸的代谢产物,参与多种变应性疾病的炎症反应,能增加血管壁通透性,刺激支气管粘液分泌,增加气道阻力,此外还能改善与气道有关的神经通路活性,增加咳嗽敏感性等。因此推测LT可能参与AC的炎症反应,阻断LT与LTR结合所产生的炎症反应,将对AC的治疗有益。本实验通过获取AC患者诱导痰上清液,用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测其LT水平与健康成人有无差异,并回顾性分析西京医院LTRA辅助治疗AC的疗效性。目的:完善AC相关炎症机制,并为LTRA在AC中的应用提供临床依据。方法:对入组的23例AC患者及20例健康成人,通过ELISA检测诱导痰中白三烯C4(LTC4)、白三烯D4(LTD4),比较两组诱导痰LT水平有无差异。并回顾性分析西京医院2014年12月至2016年11月使用LTRA治疗AC的疗效性。结果:AC患者组23例,男性12例(52%),女性11例(48%),年龄(44.9±12.8)岁,BMI(21.84±1.66)kg/m2,FENO(22.26±7.85)ppb,61%AC患者有过敏史,74%AC患者总IgE>200IU/ml,30.4%AC患者有吸烟史。日间咳嗽积分1(1),夜间咳嗽积分1(1),LCQ生理评分(4.77±0.83),LCQ心理评分(4.30±0.79),LCQ社会评分(5.05±0.74),LCQ总得分(14.12±1.87),LTC4(637.62±402.89)pg/ml,LTD4(142.32±58.82)pg/ml。健康对照组20例,其中男性11例(55%),女性9例(45%),年龄(37.95±10.15)岁,BMI(21.11±1.76)kg/m2,LTC4(149.86±119.20)pg/ml,LTD4(113.56±70.54)pg/ml。AC患者组LTC4水平较健康对照组显著增高(P0.05)。AC患者组LCQ评分在生理评分、心理评分、社会评分均显著低于健康对照组(P研究显示:抗组胺药治疗AC的有效率为48%;抗组胺药联合LTRA治疗AC的有效率为88.2%;糖皮质激素治疗AC的有效率为97.2%。糖皮质激素组及抗组胺联合LTRA组疗效明显高于抗组胺组,且差异具有统计学意义(P0.05)。结论:AC患者组诱导痰中LTC4水平较健康对照组显著增高,而LTD4水平较健康对照组无统计学差异,提示LT可能是AC的炎症机制之一。糖皮质激素及抗组胺药联合LTRA治疗AC疗效优于抗组胺药单药,而抗组胺药联合LTRA治疗AC的疗效与糖皮质激素相当。

关键词：变应性咳嗽白三烯白三烯受体拮抗剂

应用实时荧光定量PCR检测乳腺癌组织中人乳头状瘤病毒的研究

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应用实时荧光定量PCR检测乳腺癌组织中人乳头状瘤病毒的研究

作者：常鹏第四军医大学

学位级别：硕士

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,死亡率居大城市女性恶性肿瘤第三位。乳腺癌的发生发展与多种因素有关,例如家族遗传、激素因素、外界环境因素等。而已知的这些致癌因素只能解释约20–50%的病例,这启发我们去寻找新的乳腺癌致癌因素... 详细信息

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,死亡率居大城市女性恶性肿瘤第三位。乳腺癌的发生发展与多种因素有关,例如家族遗传、激素因素、外界环境因素等。而已知的这些致癌因素只能解释约20–50%的病例,这启发我们去寻找新的乳腺癌致癌因素。最近,关于病毒等微生物感染导致乳腺癌的话题,受到广泛关注。例如:EB病毒,鼠乳腺癌病毒(MMTV)、人乳头状瘤病毒(HPV)等均发现与乳腺癌有关。其中,HPV与乳腺癌的关系更成为研究的热点。HPV与其他肿瘤(宫颈癌、肛门生殖器癌、皮肤癌)的关系已经得到深入研究,人们发现:约99.7%的宫颈及子宫癌变中能够检测到HPV的存在,同时,HPV疫苗已经在欧美地区用于预防宫颈癌变的发生,而HPV与乳腺癌的关系至今未能得到明确结论。回顾国内外文献,我们发现在这一研究领域仍然有许多问题尚待解决:首先,HPV与宫颈癌的关系已经得到证实,那么,同样是女性高发的乳腺癌是否也与HPV感染相关呢?其次,HPV的传播方式主要以性接触为主,乳腺的开放导管是否也存在被感染的机会?再次,此方面研究在世界范围内尚处于探索阶段,且争议较大,我们也许有机会作出自己的贡献。所以,我们设计以下实验,选取HPV病毒作为我课题组系统检测乳腺癌相关病毒的先期探索。结合我科临床优势,我课题组筛选出60例乳腺癌患者,60例乳腺良性肿瘤患者(其中30例乳腺纤维腺瘤,20例乳腺导管内乳头状瘤,10例乳腺腺病),取肿瘤组织学标本,在无菌新鲜状态下送检,应用灵敏度及特异度均较高的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法进行检测,再应用原位杂交,透射电镜等同时检测,对实验结果进行验证。本文的具体工作及结果如下: 1根据我国西北地区HPV流行病学特点,选择HPV16、18型作为检测目标,应用实时荧光定量PCR方法,对60例乳腺癌患者,60例乳腺良性肿瘤患者(其中30例乳腺纤维腺瘤,20例乳腺导管内乳头状瘤,10例乳腺腺病)取新鲜组织学标本进行检测,参考国内外文献,设计检出率较高的HPV16、18型E6、E7区探针,并选择HPV16、18全长质粒及已知HPV阳性的宫颈癌组织标本作为阳性对照。结果表明:应用实时荧光定量PCR在乳腺癌组织中未能检测到16、18型HPV病毒。 2肿瘤组织DNA经PCR定向扩增后,将扩增产物应用琼脂糖凝胶电泳,同时选择HPV16、18全长质粒及已知HPV阳性的宫颈癌DNA扩增产物作为阳性对照。结果表明:应用琼脂糖凝胶电泳方法在乳腺癌组织PCR扩增产物中,未发现与HPV16、18型病毒相同分子量的电泳条带。 3取肿瘤组织切片进行原为杂交检测,杂交探针设计为HPV16、18型,选择已知HPV阳性的宫颈癌组织标本作为阳性对照,并应用显微镜进行观察,结果表明:应用原位杂交方法在乳腺癌组织细胞核内未能发现阳性染色的棕褐色颗粒。 4取部分肿瘤组织标本送基础部电镜中心进行电镜样本制备及透射电镜观察,结果表明:透射电镜下没有观测到病毒样物质,只观察到致密颗粒,颗粒的性质有待进一步研究证实。除此之外,我课题组筛选及保存大量标本资料,建立了保存完整、取材全面、资料完善、随访完备的乳腺癌标本库,随时取材调用,为进一步研究打下坚实基础。HPV病毒作为先期检测的乳腺癌相关病毒,在检测方法上为下一步检测乳腺癌中其它可能存在病毒提供有益的借鉴。同时也增加了我们对于病毒特性的了解。实验期间,和西安交通大学第二附属医院检验科,西京医院临床检验科,第四军医大学基础部电镜实验中心合作,并得到德国癌症研究中心Dr.zurHausen教授的帮助及指导,搭建了与国内外同行沟通、交流、合作的平台。

关键词：乳腺癌实时荧光定量PCR 人乳头状瘤病毒临床检测