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热应激对畜禽肠道免疫功能的影响及其营养调控的研究进展

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动物营养学报 2025年

作者：刘慧敏罗烨瞿明仁许兰娇江西农业大学动物科学技术学院江西省动物营养重点实验室江西省营养饲料开发工程研究中心

热应激会导致畜禽肠道黏膜损伤、菌群失衡和免疫细胞失活等问题,进而影响畜禽的生长和健康。肠道黏膜免疫系统是调节免疫应答功能的一种,能维持免疫系统的平衡,促进机体健康。本文综述了热应激对畜禽肠道免疫功能的影响及近年来缓解热... 详细信息

热应激会导致畜禽肠道黏膜损伤、菌群失衡和免疫细胞失活等问题,进而影响畜禽的生长和健康。肠道黏膜免疫系统是调节免疫应答功能的一种,能维持免疫系统的平衡,促进机体健康。本文综述了热应激对畜禽肠道免疫功能的影响及近年来缓解热应激肠道免疫三类常用的饲料添加剂,即通过使用氨基酸、益生菌和抗氧化剂等营养调控措施改善热应激畜禽的肠道菌群,增强肠道屏障功能和提高免疫能力,旨在为缓解因热应激反应引起的畜禽肠道损伤提供参考。

关键词：热应激肠道免疫营养调控畜禽

抗人肝癌单克隆抗体嵌合Fab在巴氏毕赤酵母中的高效分泌表达

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第3期21卷 342-346页

作者：董红霖邢金良安家泽杨向民姚西英窦科峰陈志南第四军医大学西京医院肝胆外科陕西西安710032 第四军医大学基础部细胞工程研究中心陕西西安710032

目的:通过分步整合,用巴氏毕赤酵母表达抗人肝癌单克隆抗体(mAb)HAb18的嵌合Fab(cFab)片段。方法:将抗人肝癌mAbcFab/HAb18基因的原核表达载体pET32a/cFab中的CL和Fd段基因,分别亚克隆到酵母表达载体pPIC9K和pPICZαA中,构建重组质粒pPI... 详细信息

目的:通过分步整合,用巴氏毕赤酵母表达抗人肝癌单克隆抗体(mAb)HAb18的嵌合Fab(cFab)片段。方法:将抗人肝癌mAbcFab/HAb18基因的原核表达载体pET32a/cFab中的CL和Fd段基因,分别亚克隆到酵母表达载体pPIC9K和pPICZαA中,构建重组质粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd并测序鉴定。将重组质粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd分步整合到酵母菌GS115的染色体上,经G418和Zeocin筛选高拷贝的转化子及鉴定Mut表型后,用含5mL/L甲醇的培养基诱导表达。结果:成功地表达抗人肝癌mAbHAb18的cFab,表达水平为26mg/L。Westernblot鉴定证实,表达产物具有良好的与HAb18结合的活性和特异性。结论:cFab/HAb18在巴氏毕赤酵母获得表达,为对其进一步大规模的生产和临床应用奠定了基础。

关键词：肝癌单克隆抗体 cFab 毕赤酵母分泌表达

整合素结合序列N端Gly错义突变对重组胶原蛋白结构与功能的影响

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生物工程学报 2025年

作者：李斐侯宇曦饶犇刘晓艳王亚平邱一敏湖北省农业科学院湖北省生物农药工程研究中心湖北省农业科技创新中心生物农药分中心国家生物农药工程技术研究中心湖北大学生命科学学院

胶原蛋白作为动物体内多种组织和功能的重要基质蛋白，在生物材料领域应用广泛。而在I型胶原蛋白的三螺旋结构中，Gly-Xaa-Yaa三联体中Gly的错义突变是引发成骨不全症(osteogenesis imperfecta， OI)的重要原因，其临床表现从轻度到中... 详细信息

胶原蛋白作为动物体内多种组织和功能的重要基质蛋白，在生物材料领域应用广泛。而在I型胶原蛋白的三螺旋结构中，Gly-Xaa-Yaa三联体中Gly的错义突变是引发成骨不全症(osteogenesis imperfecta， OI)的重要原因，其临床表现从轻度到中度，甚至至围产期致死不等。本研究以重组胶原蛋白作为研究模型，旨在进一步明确发生在整合素结合序列GFPGER N端的Gly→Ala/Val突变是否会影响胶原蛋白的结构和功能，探讨错义突变对胶原蛋白生物学功能的影响机制。通过在GFPGER 序列N端的7个Gly位点分别引入Ala和Val突变，系统评估了氨基酸替换对重组胶原蛋白的三螺旋结构、热稳定性、整合素结合能力和细胞黏附能力的影响。研究发现，所有Gly错义突变体均能形成稳定的三螺旋结构，但热稳定性略有下降。通过胰蛋白酶酶解实验，发现Gly→Val替换导致重组胶原蛋白对胰蛋白酶的敏感性增加，表明突变位点周围可能存在局部的构象扰动。此外，Gly→Val突变体的整合素结合能力和HT1080细胞黏附能力均显著降低，且这种效应比Gly→Ala更为显著。这表明当Gly被更大体积的Val替代时，对胶原蛋白的结构和功能影响更为负面。本研究的发现为理解成骨不全症的分子机制提供了新见解，同时为胶原蛋白的序列设计和生物材料开发提供了重要的理论参考和实验基础。

关键词：重组胶原蛋白成骨不全症错义突变三螺旋结构整合素结合能力

用导向选择链更替技术建立抗肝癌抗原HAb18G的人源性Fab基因库

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第4期20卷 437-440页

作者：包国强马庆久邢金良杨向民陈志南第四军医大学唐都医院普通外科陕西西安710038 第四军医大学基础部细胞工程研究中心陕西西安710032

目的 :在嵌合HAb18 Fab抗体的基础上 ,利用载体pComb3X ,采用导向选择链更替技术建立全人源性Fab基因库。方法 :用RT PCR自肝癌患者外周血单个核细胞 (PBMC)中 ,扩增全套人抗体Fd基因片段和L链基因。首先 ,将Fd基因克隆入已含嵌合L链基... 详细信息

目的 :在嵌合HAb18 Fab抗体的基础上 ,利用载体pComb3X ,采用导向选择链更替技术建立全人源性Fab基因库。方法 :用RT PCR自肝癌患者外周血单个核细胞 (PBMC)中 ,扩增全套人抗体Fd基因片段和L链基因。首先 ,将Fd基因克隆入已含嵌合L链基因的展示载体pComb3X/CL中 ,建立人 -鼠杂合的Fab基因库 ,以原核表达的非融合HAb18G的胞外区片段为抗原 ,筛选杂合的Fab基因 ,以得到人Fd基因。然后应用筛选出的Fd基因与人L链基因库配对 ,建立全为人Fab的基因库 ,并筛选全人Fab基因。将IPTG诱导的表达菌裂解 ,取其上清对pⅢ Fab融合蛋白的功能进行分析 ,并对其编码基因进行测序。结果 :建立了库容为 2× 10 7的杂合Fab基因库 ,经 6轮筛选后得到 7株杂合Fab基因。利用筛选的人Fd基因建立了库容为 0 .8× 10 7的全人Fab基因库 ,经 4轮筛选得到 2株亲和力较高、特异性强的人Fab基因。测序结果显示 ,2株Fab基因具有相同的Fd基因序列 ,与亲本抗体同属IgG2亚类 ;L链基因为κ型 ,可变区均属于Vκ3家族。结论 :利用导向选择链更替技术 ,筛选出特异性较强、完全人源化的抗肝癌抗原HAb18G的Fab抗体 ,为进一步的工作打下了基础。

关键词：抗体基因库人源化肝癌 pComb3X 导向选择链更替

^(188)ReHAb18F(ab′)_2肝癌放射免疫显像的研究

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肿瘤 2000年第3期20卷 181-183,F003页

作者：边惠洁陈志南娄超米力汪静邓敬兰余晓玲第四军医大学基础部细胞工程研究中心西安710032 第四军医大学西京医院核医学科

目的　探讨1 88Re标记的肝癌单抗片段HAb18F(ab′) 2 在荷人肝癌移植瘤裸鼠体内的放免显像和生物学分布。方法　采用 2 巯基乙醇为还原剂的直接法标记肝癌单抗片段HAb18F(ab′) 2 ,Whatman 3mm纸层析法测 1 88Re HAb18F(ab′) 2 标记... 详细信息

目的　探讨1 88Re标记的肝癌单抗片段HAb18F(ab′) 2 在荷人肝癌移植瘤裸鼠体内的放免显像和生物学分布。方法　采用 2 巯基乙醇为还原剂的直接法标记肝癌单抗片段HAb18F(ab′) 2 ,Whatman 3mm纸层析法测 1 88Re HAb18F(ab′) 2 标记率 ,活细胞放射免疫结合法测标记物的免疫活性。放免显像实验时 ,于荷肝癌裸鼠尾静脉注射标记物 11 1MBq ,SPECT低能通用型准直器显像。生物学分布实验中每只荷肝癌裸鼠尾静脉注射标记物 1 85～ 2 5 9MBq ,分别于注射后不同时间点各处死一组 ,取血及主要组织 ,称重 ,测放射性计数。结果　最佳标记率为 91 7% ,免疫活性分数为 0 78。低能通用型准直器可缓解1 88Re显像时边界模糊的问题。在显像观察中 ,3h时右下肢肿瘤区已有放射性聚集 ,19h～ 30h时肿瘤显影清晰、明确 ,45h以后整体放射性均趋于减弱。生物学分布表明 ,标记物除在肿瘤中有特异性聚集外 ,在其他正常组织中无特异性浓聚 ,尤其在血液中清除较快 ,肿瘤最佳显像时间可确定为 2 0～ 30h。结论　1 88Re HAb18F(ab′) 2 在荷人肝癌裸鼠体内可明确地定位于肿瘤部位。

关键词：肝肿瘤放射性核显像 ^188Re-HAb18F(ab')2

^(188)Re-HAb18F(ab′)_2对荷肝癌动物的实验研究

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中华核医学杂志 2000年第6期20卷 280-281页

作者：边惠洁陈志南汪静冯强米力余晓玲邓敬兰第四军医大学基础部细胞工程研究中心西安710032 第四军医大学西京医院核医学科

目的探讨慢性硬膜下血肿(CSDH)液中纤维蛋白溶解特征及其与再出血的关系. 方法将31例CSDH患者按照CT表现分为等、低、混合性和分层状密度4类,采用电泳法和免疫染色法对血肿液中纤维蛋白原、纤维蛋白单体和D-二聚体进行测定. 结果纤... 详细信息

目的探讨慢性硬膜下血肿(CSDH)液中纤维蛋白溶解特征及其与再出血的关系. 方法将31例CSDH患者按照CT表现分为等、低、混合性和分层状密度4类,采用电泳法和免疫染色法对血肿液中纤维蛋白原、纤维蛋白单体和D-二聚体进行测定. 结果纤维蛋白原浓度在等密度血肿中为(78±14) mg/L,低密度中为(14±6) mg/L,混合性密度中为(160±36) mg/L,分层状密度中为(159±29) mg/L;纤维蛋白单体在4类血肿中的浓度分别为(780±240), (180±80),(1 820±460)???????????????????

关键词：肝癌 ^188Re-HAb18F(ab′)2 放射疗法

肝脏类器官在肝脏疾病模型与移植治疗中的应用潜力

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中国组织工程研究 2025年第8期29卷 1684-1692页

作者：袁维勃刘婵余丽梅遵义医科大学附属医院贵州省细胞工程重点实验室贵州省遵义市563003 遵义医科大学教育部省部共建组织损伤修复与再生医学协同创新中心贵州省遵义市563000 遵义医科大学附属医院贵州省干细胞临床应用与新药研发工程研究中心贵州省遵义市563003 遵义医科大学附属医院贵州省生物治疗人才基地贵州省遵义市563003 遵义医科大学附属医院遵义市干细胞与再生医学工程研究中心贵州省遵义市563003

背景:肝脏类器官对阐明肝脏疾病的确切病理机制及对肝脏疾病的治疗具有重要的意义。目的:总结目前国内外该领域的基础研究,回顾以往肝脏类器官的构建、疾病建模和移植治疗的重要研究进展,探讨肝脏类器官联合组织工程技术的应用前景。方... 详细信息

背景:肝脏类器官对阐明肝脏疾病的确切病理机制及对肝脏疾病的治疗具有重要的意义。目的:总结目前国内外该领域的基础研究,回顾以往肝脏类器官的构建、疾病建模和移植治疗的重要研究进展,探讨肝脏类器官联合组织工程技术的应用前景。方法:检索PubMed数据库及中国知网数据库收录的相关文献,英文检索词为“liver,organoids,liver diseases”,中文检索词为“肝,类器官,肝脏疾病”,主要检索时限为2018年4月至2024年4月,通过人工阅读排除重复文献等,最终纳入94篇文献进行归纳分析。结果与结论:①肝脏类器官构建的种子细胞主要集中于成体细胞和多能干细胞,通过辅助各种细胞因子参与信号引导作用和细胞外基质提供3D微环境,促进类器官的产生,但是整体成熟度不高,有望通过结合组织工程技术改善这一问题;②体外疾病建模方面主要在简单疾病和单基因遗传病领域研究较多,类器官高度保留患者遗传特性,有望通过结合CRISPR-Cas9基因矫正和其他新兴技术模拟更复杂的肝脏疾病并阐明更深层次的病理机制;③体内移植治疗方面,肝脏类器官能够安全有效的植入,表现出惊人的肝功能替代潜力及组织再生能力,并且还可能通过与其他组织工程材料结合达到治疗目的。

关键词：肝脏类器官干细胞种子细胞肝脏疾病疾病建模体内移植综述

βig-h3基因4段高度保守序列定位、克隆及原核表达载体的构建

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空军军医大学学报 2009年第1期30卷 3-6页

作者：戴竞耀唐娟蒋建利窦科峰陈志南第四军医大学细胞工程研究中心第四军医大学西京医院肝胆外科

目的:确定βig-h3基因4段高度保守序列的序列位置,克隆βig-h3全长及4段高度保守序列的基因,分别构建原核表达载体.方法:用RT-PCR方法获得βig-h3全长及4段高度保守序列的基因,以pRSET-A为载体,分别构建重组原核表达质粒.结果:测序结果... 详细信息

目的:确定βig-h3基因4段高度保守序列的序列位置,克隆βig-h3全长及4段高度保守序列的基因,分别构建原核表达载体.方法:用RT-PCR方法获得βig-h3全长及4段高度保守序列的基因,以pRSET-A为载体,分别构建重组原核表达质粒.结果:测序结果证实获得βig-h3全长及4段高度保守序列的基因,其序列与GenBank中报道完全一致.分别正确连入pRSET-A载体中,读码框正确.结论:成功构建βig-h3基因全长及4段高度保守序列的原核表达载体,为进行结构与功能相关性研究奠定了基础.

关键词： βig-h3 高度保守序列原核表达载体

治疗性肝癌单克隆抗体HAb18生产用种子细胞的质量控制

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中国生物制品学杂志 2005年第6期18卷 507-510页

作者：李玲米力刘蓉汪莉徐力青冯强田蓉陈志南第四军医大学细胞工程研究中心西安710032

目的进行治疗性肝癌单克隆抗体HAb18生产用种子细胞的质量控制研究.方法用细胞计数、ELISA和FCM分别检测细胞生长、抗体生成速度和抗原结合活性;冻存细胞复苏后及体外传代3个月,检测抗体分泌稳定性和克隆阳性率;进行无菌检查、细胞核型... 详细信息

目的进行治疗性肝癌单克隆抗体HAb18生产用种子细胞的质量控制研究.方法用细胞计数、ELISA和FCM分别检测细胞生长、抗体生成速度和抗原结合活性;冻存细胞复苏后及体外传代3个月,检测抗体分泌稳定性和克隆阳性率;进行无菌检查、细胞核型和同工酶谱分析,了解细胞遗传稳定性、外源因子污染和细胞间交叉污染情况.结果肝癌单克隆抗体HAb18生产用种子细胞的细胞生长和抗体生成速度分别为0.047～0.052/h和1.1～1.4 pg/cell·h,与靶细胞FHCC98结合的阳性率达99%,平均荧光强度在200以上.冻存细胞复苏后及体外连续传代3个月后,其特异性抗体生成速度维持在1.0 pg/cell·h以上,培养上清抗体效价仍为1:1000.不同批次的生成细胞核型均符合杂交瘤细胞特征,外源因子检查阴性,无细胞间交叉污染.结论HAb18生产用种子细胞的细胞生长和抗体生成速率、抗体稳定性和特异性均符合已建立的规模化放大培养的种子细胞质控标准.

关键词：治疗性肝癌单克隆抗体 HAb18 种子细胞质量控制细胞培养细胞生长