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抗人HAb18G分子单链抗体基因的构建及在大肠杆菌中的分泌表达

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中国免疫学杂志 2003年第7期19卷 479-482页

作者：邢金良杨向民王永庆姚西英陈志南第四军医大学基础部细胞工程研究中心西安710032

目的 :构建抗人HAb18G分子单链抗体基因 ,并在大肠杆菌中进行分泌表达。方法 :通过连接肽 (Gly4Ser) 3基因序列将已成功克隆的抗人肝癌单抗HAb18轻、重链可变区基因拼接成单链抗体 (ScFv)基因 ,并在 5′和 3′端引入相应的酶切位点 ,克... 详细信息

目的 :构建抗人HAb18G分子单链抗体基因 ,并在大肠杆菌中进行分泌表达。方法 :通过连接肽 (Gly4Ser) 3基因序列将已成功克隆的抗人肝癌单抗HAb18轻、重链可变区基因拼接成单链抗体 (ScFv)基因 ,并在 5′和 3′端引入相应的酶切位点 ,克隆至改造的分泌性表达载体pCANTAB 5His之中 ,转化到E coliHB2 15 1中进行诱导表达。亲和层析纯化表达蛋白后 ,以SDS PAGE电泳、Westernblot及ELISA等方法分析检测表达产物。结果 :经限制性酶切鉴定及DNA测序分析 ,证实基因构建正确。SDS PAGE电泳和Westernblot分析表明ScFv基因在大肠杆菌中成功表达。表达产物的相对分子质量 (Mr)为 31kD ,与理论预期值相符 ,并且可与相应的抗原特异结合。结论 :成功实现了抗人HAb18G分子单链抗体的原核分泌表达 ,为其在人肝癌诊治中的进一步应用奠定了基础。

关键词：抗人HAbl8G分子单链抗体基因大肠杆菌分泌表达

BSA-Y-DOTA免疫噬菌体Fab抗体库的构建及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第5期19卷 476-479页

作者：宋斐邢金良张思河杨向民陈志南第四军医大学细胞工程研究中心陕西西安710032

目的 :构建钇十二烷四乙酸 (Y DOTA)免疫噬菌体Fab抗体库。方法 :将牛血清白蛋白 (BSA)与DOTA交联 ,并与金属Y鳌合制备成BSA Y DOTA ,用其免疫BALB/c小鼠。检测抗血清的滴度后 ,分离抗体阳性的小鼠脾淋巴细胞 ,提取总RNA。利用RT PCR... 详细信息

目的 :构建钇十二烷四乙酸 (Y DOTA)免疫噬菌体Fab抗体库。方法 :将牛血清白蛋白 (BSA)与DOTA交联 ,并与金属Y鳌合制备成BSA Y DOTA ,用其免疫BALB/c小鼠。检测抗血清的滴度后 ,分离抗体阳性的小鼠脾淋巴细胞 ,提取总RNA。利用RT PCR扩增全套重链Fd和轻链基因 ,依次插入经改造的噬菌体载体pComb3M的相应酶切位点 ,构建成Fab噬菌体抗体库。用酶切、序列测定及ELISA等方法 ,对重组率、多样性及Fab的展示情况进行鉴定。结果 :成功得制备了BSA Y DOTA交联物 ,并获得较好的免疫效果。免疫小鼠的全套重链Fd片段和轻链均得到正确扩增 ;Fd片断和轻链基因均插入到载体pComb3M中 ;Fab抗体库的库容量达 8× 10 7;重组率约为90 % ,且具有良好的抗体基因多样性。另外 ,Fab片段也被展示于噬菌体表面。结论 :成功地构建了半抗原Y DOTA的Fab噬菌体抗体库 ,为筛选Y

关键词：钇-十二烷四乙酸噬菌体展示 Fab 抗体库

CD147反义RNA表达质粒的构建及克隆鉴定

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肿瘤 2002年第3期22卷 194-196,F003页

作者：杨红陈志南郑维国辛晓燕第四军医大学西京医院妇产科西安710033 第四军医大学细胞工程研究中心

目的　构建CD14 7反义RNA表达质粒载体。方法　用DNA重组技术将人CD14 7基因反向克隆到真核表达质粒PCD NA3.1中 ,构建成CD14 7反义RNA表达质粒PCDNAasCD14 7。用阳离子脂质体介导转染人卵巢癌细胞系 8910 ,经G4 18筛选后获得的克隆进... 详细信息

目的　构建CD14 7反义RNA表达质粒载体。方法　用DNA重组技术将人CD14 7基因反向克隆到真核表达质粒PCD NA3.1中 ,构建成CD14 7反义RNA表达质粒PCDNAasCD14 7。用阳离子脂质体介导转染人卵巢癌细胞系 8910 ,经G4 18筛选后获得的克隆进行鉴定。结果　CD14 7反义RNA表达质粒载体PCDNAasCD14 7经限制性酶切及部分序列分析证明基因插入正确。流式细胞仪及免疫组化SP法染色均证实 :转染细胞 8910 /PCDNAasCD14 7,与亲本细胞相比 ,CD14 7的表达明显下降。结论　成功构建了CD14 7反义RNA表达质粒载体PCDNAasCD14 7,此实验结果为进一步研究CD14 7蛋白分子的生物学功能以及为卵巢癌的基因治疗研究奠定了基础。

关键词： CD147 反义RNA 表达质粒构建克隆鉴定卵巢肿瘤表达载体

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海洋硫酸多糖的免疫调节活性研究进展

食品工业科技 2025年第1期46卷 413-423页

作者：陈秋宇赵然孟美杉窦欣雨陈碧漪赵前程李莹大连海洋大学食品科学与工程学院辽宁大连116023 辽宁省海洋健康食品工程研究中心辽宁大连116023

随着现代生活方式的改变,免疫力低下成为了越来越多人面临的健康问题,开发具有免疫调节活性的天然活性产物成为当前研究的热点问题之一。海洋硫酸多糖是从海洋生物中提取分离的一种富含硫酸基团的天然活性产物,其结构独特,在免疫调节活... 详细信息

随着现代生活方式的改变,免疫力低下成为了越来越多人面临的健康问题,开发具有免疫调节活性的天然活性产物成为当前研究的热点问题之一。海洋硫酸多糖是从海洋生物中提取分离的一种富含硫酸基团的天然活性产物,其结构独特,在免疫调节活性方面展现了巨大潜力。为了更好地研究海洋硫酸多糖对免疫调节活性的影响及机制,本文对目前有关海洋硫酸多糖的研究文献进行分析和总结,根据结构及来源对海洋硫酸多糖的种类进行概述,重点从调节巨噬细胞、自然杀伤细胞、T/B淋巴细胞、补体系统和肠道微生物功能五个方面,综述海洋硫酸多糖发挥免疫调节活性的作用及机制。本文为海洋硫酸多糖的免疫调节活性及作用机制等后续研究提供理论基础,为开发新型海洋硫酸多糖免疫增强剂提供新思路,未来有望开发基于海洋硫酸多糖的针对免疫力低下、肿瘤和自身免疫性疾病的功能性食品或特殊医学用途食品,对食品行业的发展和人类的健康起到积极推动作用。

关键词：海洋硫酸多糖免疫调节机制肠道微生物

βig-h_3基因的真核表达及其对人7721肝癌细胞基质金属蛋白酶表达水平的影响

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中国生物工程杂志 2006年第9期26卷 1-4页

作者：唐娟蒋建利周宏伟熊华杨向民陈志南第四军医大学基础部细胞工程研究中心西安710032

目的:构建βig-h3基因真核表达载体pEGFP-C2/βig-h3并转染人7721肝癌细胞,检测转染后细胞MMPs表达水平的变化。方法:用RT-PCR方法获得βig-h3基因,以pEGFP-C2为载体,构建重组表达质粒pEGFP-C2/βig-h3。重组质粒用脂质体转染人7721肝... 详细信息

目的:构建βig-h3基因真核表达载体pEGFP-C2/βig-h3并转染人7721肝癌细胞,检测转染后细胞MMPs表达水平的变化。方法:用RT-PCR方法获得βig-h3基因,以pEGFP-C2为载体,构建重组表达质粒pEGFP-C2/βig-h3。重组质粒用脂质体转染人7721肝癌细胞,明胶酶谱法检测转染后细胞MMPs表达水平的变化。结果:正确构建了pEGFP-C2/βig-h3重组质粒,并且在人7721肝癌细胞达到高转染效率,转染后细胞MMPs表达水平明显升高。结论:成功构建了pEGFP-C2/βig-h3真核表达质粒,βig-h3促进人7721肝癌细胞分泌MMPs,提示βig-h3与肝癌的侵袭和转移密切相关。

关键词： βig-h 基质金属蛋白酶肝癌细胞真核表达

高效表达肝癌相关抗原HAb18G的CHO细胞株的建立

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肿瘤 2001年第1期21卷 4-7页

作者：邢金良陈志南米力李郁冯强第四军医大学基础部细胞工程研究中心西安710032

目的　获得高效表达肝癌相关抗原 HAb18G的CHO细胞株。方法　构建含有肝癌相关抗原 HAb18G基因的真核表达载体并经限制性酶切及部分序列分析证明插入是否正确。用阳离子脂质体介导转染 CHO细胞经 G418筛选 ,稳定表达 ,间接免疫荧光染色... 详细信息

目的　获得高效表达肝癌相关抗原 HAb18G的CHO细胞株。方法　构建含有肝癌相关抗原 HAb18G基因的真核表达载体并经限制性酶切及部分序列分析证明插入是否正确。用阳离子脂质体介导转染 CHO细胞经 G418筛选 ,稳定表达 ,间接免疫荧光染色证实蛋白表达情况。用有限稀释法将筛选的细胞进行单克隆化 ,通过流式细胞仪筛选高效表达株。结果　成功构建了真核表达载体 pc DNA- 3/HAb18G并经限制性酶切及部分序列分析证明基因插入正确。间接免疫荧光染色证实 :HAb18G高效表达于转染细胞的胞膜上。流式细胞仪筛选获得了 1株高效表达的 CHO细胞。结论　实验结果为

关键词：肝肿瘤膜蛋白质类转染肿瘤细胞培养的病理

HAb18G/CD147拮抗肽对体内血管生成的影响

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中国药理学通报 2003年第3期19卷 355-357页

作者：商澎骞爱荣胡佩珍马福成朱平陈志南第四军医大学细胞工程研究中心西安710033 第四军医大学病理学教研室西安710033 第四军医大学西京医院临床免疫科西安710033

肿瘤的侵袭、转移过程是多因素、多步骤的过程 ,一般涉及肿瘤细胞黏附、运动 ,细胞外基质降解 ,肿瘤新生血管生成等多个环节[1] 。抗肿瘤血管生成是目前抗肿瘤转移药物研究的重要靶环节之一[2 ] 。ＣＤ14 7是新近命名的ＣＤ分子[3 ] ,... 详细信息

肿瘤的侵袭、转移过程是多因素、多步骤的过程 ,一般涉及肿瘤细胞黏附、运动 ,细胞外基质降解 ,肿瘤新生血管生成等多个环节[1] 。抗肿瘤血管生成是目前抗肿瘤转移药物研究的重要靶环节之一[2 ] 。ＣＤ14 7是新近命名的ＣＤ分子[3 ] ,又称为Ｅｍｍｐｒｉｎ ,其主要功能是诱导基质金属蛋白酶 (ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ,ＭＭＰｓ)的产生 ,促进肿瘤的侵袭和转移[4] 。ＨＡｂ18Ｇ是本研究中心利用ＨＡｂ18单克隆抗体筛选获得的相关抗原分子 ,与ＣＤ14 7分子高度同源[5] ,具有促进肿瘤转移的作用[6,7] 。ＨＡｂ18Ｇ/ＣＤ14 7分子拮抗多肽 (ａｎｔａｇｏ

关键词： HAb18G CD147 拮抗肽血管生成

长链非编码RNA TP53TG1促进根尖牙乳头干细胞成牙本质及成骨分化

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中国组织工程研究 2025年

作者：黎庭悦郭倩何文喜吴家媛遵义医科大学口腔医学院军事口腔医学国家重点实验室陕西省口腔医学重点实验室空军军医大学第三附属医院牙体牙髓病科空军军医大学特色医学中心口腔科

背景：长链非编码RNA TP53TG1(lncRNA TP53TG1)参与调控多种癌症细胞的增殖、迁移、侵袭、凋亡，但在其他细胞中的作用报道甚少。目的：探讨lncRNA TP53TG1对人根尖牙乳头干细胞增殖和分化的影响及途径。方法：分离、培养人根尖牙乳头... 详细信息

背景：长链非编码RNA TP53TG1(lncRNA TP53TG1)参与调控多种癌症细胞的增殖、迁移、侵袭、凋亡，但在其他细胞中的作用报道甚少。目的：探讨lncRNA TP53TG1对人根尖牙乳头干细胞增殖和分化的影响及途径。方法：分离、培养人根尖牙乳头干细胞，转染lncRNA TP53TG1过表达慢病毒，RT-qPCR检测lncRNA TP53TG1的过表达效率，Western blot检测PI3K、AKT、ERK、P38、Smad3及其磷酸化蛋白的相对表达量。将人根尖牙乳头干细胞分为慢病毒空载体组和过表达lncRNA TP53TG1组，采用CCK-8法检测细胞增殖情况；成骨诱导第5天采用碱性磷酸酶染色检测碱性磷酸酶活性，成骨诱导第21天采用茜素红染色检测矿化结节形成情况；成骨诱导第3,7,14天采用RT-qPCR检测牙本质涎磷蛋白、Runt相关转录因子2、牙本质基质蛋白1、骨涎蛋白的mRNA表达水平；成骨诱导第3,7,14天采用Western blot检测牙本质涎磷蛋白和Runt相关转录因子2的蛋白表达水平。结果与结论：(1)RT-qPCR检测结果显示慢病毒成功整合到根尖牙乳头干细胞基因组中，Western blot检测结果显示，过表达lncRNA TP53TG1上调了p-PI3K、p-AKT的蛋白水平而不影响其他通路磷酸化蛋白的表达；(2)从细胞培养第3天开始，过表达lncRNA TP53TG1显著促进根尖牙乳头干细胞的增殖；(3)在诱导根尖牙乳头干细胞牙源性分化过程中，过表达lncRNA TP53TG1促进成牙本质及成骨分化相关基因和蛋白的表达，碱性磷酸酶活性和矿化结节形成显著增加；(4)结果表明：lncRNA TP53TG1可能通过激活PI3K/AKT信号通路促进根尖牙乳头干细胞成牙本质及成骨分化。

关键词：根尖牙乳头干细胞长链非编码RNA lncRNA TP53TG1 病毒转染成牙本质向分化 PI3K/AKT信号通路工程化干细胞

人肝癌细胞系HHCC中CD147和MMP-2共存的免疫组织化学研究

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中国组织化学与细胞化学杂志 2001年第3期10卷 270-272页

作者：王贤辉陈志南贺书云王贤卿第四军医大学细胞工程研究中心

应用免疫组织化学 ABC法结合激光共聚焦显微镜观察了 CD147分子和 MMP- 2在人肝癌 HHCC细胞系中的表达。结果表明在 HHCC细胞中 CD147分子和 MMP- 2均呈免疫反应阳性 ,CD147反应位于核膜和核周胞质 ,MMP-

关键词：人肝癌细胞系HHCC CD147 MMP-2共免疫组织化学