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右美托咪定对于尾吊骨质疏松大鼠骨代谢调控作用及机制

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陆军军医大学学报 2025年

作者：郭云亮王灿张新雨颜泽栋温志鹏刘若冰刘鹏森河南省中医院麻醉科空军军医大学军事生物医学工程学系

目的研究右美托咪定对于尾吊大鼠骨丢失的作用效果，并初步探究其对于骨代谢的调控机制。方法 30只雄性大鼠按照随机数字表法分为对照组、尾吊组、尾吊+右美托咪定组，每组10只。尾吊大鼠行4周后肢悬吊处理，尾吊+右美托咪定组大鼠从... 详细信息

目的研究右美托咪定对于尾吊大鼠骨丢失的作用效果，并初步探究其对于骨代谢的调控机制。方法 30只雄性大鼠按照随机数字表法分为对照组、尾吊组、尾吊+右美托咪定组，每组10只。尾吊大鼠行4周后肢悬吊处理，尾吊+右美托咪定组大鼠从尾吊当天开始进行右美托咪定干预（10 μg/kg，隔天1次），通过骨组织学染色、生物力学三点弯曲测试、钙黄绿素/茜素红荧光双标评价作用效果。分离尾吊大鼠胫骨原代成骨细胞，进行右美托咪定干预（1 nmol/L），通过碱性磷酸酶染色、活性测试及成骨相关基因表达评价成骨活性功能。结果动物实验结果揭示，右美托咪定显著增加了尾吊大鼠胫骨骨小梁的面积占比（P学强度的降低（P<0.001），显著增加尾吊大鼠小梁骨矿化沉积率和新骨形成速率（P<0.001）。体外细胞实验结果表明，右美托咪定显著增加了尾吊大鼠体外原代成骨细胞碱性磷酸酶活性及碱性磷酸酶阳性成骨细胞数量（P<0.001），并上调了成骨分化相关基因（骨钙素、Runt相关转录因子2、Osterix蛋白、I型胶原蛋白）的表达水平（P<0.01）。结论右美托咪定能对抗尾吊大鼠骨丢失，刺激成骨细胞的骨形成可能是其作用机制。

关键词：右美托咪定成骨尾吊大鼠骨质疏松成骨细胞

SARS冠状病毒核衣壳蛋白的重组表达及其单克隆抗体的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第1期21卷 50-52页

作者：王平黄庆生薛小平雷迎峰王海涛任君萍丁天兵徐志凯第四军医大学微生物学教研室陕西西安710032

　目的: 表达SARS冠状病毒核衣壳蛋白(N蛋白),并以表达产物为免疫原制备特异性单克隆抗体 (mAb)。方法: 采用RT- PCR方法, 从灭活的病毒抗原标本中扩增编码N蛋白的基因。测序确认后, 再亚克隆至原核表达载体中。从SDS -PAGE凝胶中回收... 详细信息

　目的: 表达SARS冠状病毒核衣壳蛋白(N蛋白),并以表达产物为免疫原制备特异性单克隆抗体 (mAb)。方法: 采用RT- PCR方法, 从灭活的病毒抗原标本中扩增编码N蛋白的基因。测序确认后, 再亚克隆至原核表达载体中。从SDS -PAGE凝胶中回收原核表达产物后免疫BALB/c小鼠, 经融合、筛选制备特异性mAb。结果: 从标本中扩增出 1 269bp的DNA, 测序结果证实为N蛋白基因。将该基因克隆至原核表达载体中后, 在大肠杆菌中获得了较好的表达。表达产物经SDS- PAGE后, 在Mr约为 43 000处可见 1条明显的诱导表达带。Westernblot的结果表明, 该电泳带与SARS患者的恢复期血清呈特异的免疫反应。从SDS- PAGE凝胶中回收表达产物并免疫BALB/c小鼠, 制备出 3株抗N蛋白的mAb。这些mAb与SDS- PAGE凝胶上Mr约为 43 000的蛋白带也呈现很强的免疫反应。结论: 所获的重组N蛋白及特异性mAb, 将为进一步建立SARS病毒感染早期诊断的方法奠定了基础。

关键词： SARS冠状病毒核衣壳蛋白原核表达单克隆抗体

分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组卡介苗菌株的筛选

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中华结核和呼吸杂志 2005年第4期28卷 254-257页

作者：师长宏徐志凯朱德生李元柏银兰薛莹第四军医大学基础部微生物学教研室西安710033

目的筛选获得分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组卡介苗(BCG)菌株。方法采用多聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌毒株H37Rv中扩增出热休克蛋白60(Hsp60)基因及其信号肽序列αss,将测序正确的hsp60和αss基因分别克隆入大肠杆菌(***.... 详细信息

目的筛选获得分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组卡介苗(BCG)菌株。方法采用多聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌毒株H37Rv中扩增出热休克蛋白60(Hsp60)基因及其信号肽序列αss,将测序正确的hsp60和αss基因分别克隆入大肠杆菌(***.)BCG穿梭载体pOLYG中,构建分枝杆菌分泌表达载体pDE22,按相应的酶切位点将ag85b和esat6按照不同的连接方式联合克隆入pDE22载体,分别命名为pDE22Ag85B ESAT6和pDE22ESAT6Ag85B,将纯化的重组质粒电穿入BCG,经潮霉素抗性筛选和PCR的方法鉴定出含目的基因的重组BCG阳性克隆。收集重组BCG的培养上清液,经浓缩和透析后,进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)和固相化蛋白质免疫学测定(Western blot法)分析。结果两株重组BCG菌株的培养上清液分泌表达相对分子质量约37000的蛋白,且分别可与抗Ag85B和抗ESAT6蛋白免疫小鼠的血清有相应的结合条带。结论分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组BCG菌株构建成功,有望为结核病的预防提供有效的疫苗。

关键词： Ag85B 融合蛋白十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳重组卡介苗 Western-blot法菌株聚合酶链反应(PCR) 卡介苗(BCG) 重组BCG ESAT6蛋白培养上清液结核分枝杆菌分泌表达载体相对分子质量信号肽序列热休克蛋白 H37Rv

汉滩病毒囊膜糖蛋白G2与核蛋白氨基端在昆虫细胞中的融合表达

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第3期19卷 215-217页

作者：刘勇徐志凯张芳琳罗雯吴兴安白文涛胡刚第四军医大学微生物学教研室陕西西安710032

目的 :在Bac to Bac杆状病毒表达系统中 ,融合表达汉滩病毒的囊膜糖蛋白G2与核蛋白氨基端。方法 :构建含有汉滩病毒G2S0 .7嵌合基因的表达载体 pFBDHTa G2S0 .7,并转化DH10Bac感受态菌。利用其含有的细菌Tn7转座系统 ,将嵌合基因重组至... 详细信息

目的 :在Bac to Bac杆状病毒表达系统中 ,融合表达汉滩病毒的囊膜糖蛋白G2与核蛋白氨基端。方法 :构建含有汉滩病毒G2S0 .7嵌合基因的表达载体 pFBDHTa G2S0 .7,并转化DH10Bac感受态菌。利用其含有的细菌Tn7转座系统 ,将嵌合基因重组至杆状病毒穿梭质粒bacmid中 ,并筛选含有G2S0 .7嵌合基因的重组杆状病毒 ,在昆虫细胞中表达该融合蛋白。对表达产物用间接免疫荧光、ELISA和免疫印迹进行检测。结果 :构建了的含G2S0 .7嵌合基因的重组杆状病毒 ,感染昆虫细胞后 ,可表达相应大小的融合蛋白。该蛋白可被抗汉滩病毒核蛋白及糖蛋白G2的特异性单克隆抗体 (mAb)所识别。结论 :利用杆状病毒表达系统 ,成功地表达同时具有核蛋白及糖蛋白G2生物学活性的融合蛋白G2S0 .7。

关键词：汉滩病毒杆状病毒昆虫细胞核蛋白糖蛋白融合表达

HCV核心蛋白在HepG2细胞中对COX-2表达的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第3期22卷 343-345页

作者：刘艳丽闫岩白文涛张芳琳吕欣张伟徐志凯第四军医大学微生物学教研室陕西西安710032

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白是否影响环氧化酶-2(COX-2)的表达。方法用PCR从含HCVH77株全长基因组序列质粒中扩增HCV核心蛋白基因,并克隆至pcDNA3.1载体中,构建HCV核心蛋白基因的真核表达载体HCV-C/pcDNA3.1。用HCV-C/pcDNA3.1和... 详细信息

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白是否影响环氧化酶-2(COX-2)的表达。方法用PCR从含HCVH77株全长基因组序列质粒中扩增HCV核心蛋白基因,并克隆至pcDNA3.1载体中,构建HCV核心蛋白基因的真核表达载体HCV-C/pcDNA3.1。用HCV-C/pcDNA3.1和含COX-2启动子的荧光素酶报告载体COX2pro1.5kb/luc瞬时共转染HepG2细胞,测定萤火虫荧光素酶的活性,并用Westernblot检测COX-2蛋白的表达水平。结果成功地构建了HCV-C/pcD-NA3.1重组质粒。瞬时转染后的HepG2细胞中,COX2启动子荧光素酶的活性显著增强。Westernblot检测,发现COX-2的表达明显升高。结论HCV核心蛋白在HepG2细胞中激活COX-2启动子,并且明显诱导COX-2的表达,为进一步研究COX-2与HCV致病性的关系提供了新的实验依据。

关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白环氧化酶-2

分枝杆菌胞壁融合表达Ag85B-ESAT-6穿梭质粒的构建

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中华结核和呼吸杂志 2004年第4期27卷 249-252页

作者：师长宏范雄林史皆然徐志凯李元柏银兰薛莹第四军医大学基础部微生物学教研室西安710033

目的　构建E coli BCG(BacilleCalmette Guerin)穿梭载体 ,在母牛分枝杆菌细胞壁融合表达结核分枝杆菌 (MTB)的分泌蛋白Ag85B ESAT 6。方法　用聚合酶链反应 (PCR)从MTB毒株H3 7Rv基因中扩增出结核分枝杆菌 190 0 0抗原 ( 19 ss)胞壁... 详细信息

目的　构建E coli BCG(BacilleCalmette Guerin)穿梭载体 ,在母牛分枝杆菌细胞壁融合表达结核分枝杆菌 (MTB)的分泌蛋白Ag85B ESAT 6。方法　用聚合酶链反应 (PCR)从MTB毒株H3 7Rv基因中扩增出结核分枝杆菌 190 0 0抗原 ( 19 ss)胞壁区及其上游调控元件基因 ,克隆入E coli BCG穿梭载体 pOLYG中 ,构建表达蛋白能嵌入细胞壁中的E coli BCG穿梭载体。用间接免疫荧光染色法观察该载体携带所构建的结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B和ESAT 6基因在母牛分枝杆菌宿主中的融合表达。结果　经测序证实所克隆的 19 ss基因序列正确 ,所构建的E coli BCG穿梭载体 (pCW )能完成在大肠杆菌和母牛分枝杆菌细胞之间的穿梭 ,经免疫荧光检查外源基因Ag85B ESAT 6可融合表达于分枝杆菌宿主表面。结论　本方法可成功构建能够在分枝杆菌胞壁融合表达MTB分泌蛋白Ag85B ESAT 6的E coli

关键词：结核分枝杆菌细菌抗原 DNA疫苗基因融合

结核分枝杆菌Rv2450蛋白诱导小鼠免疫应答的实验研究

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第10期23卷 921-922,931页

作者：薛莹柏银兰高辉王丽梅徐志凯第四军医大学微生物学教研室陕西西安710032

目的:以原核表达的结核分枝杆菌Rv2450蛋白在小鼠体内诱导体液和细胞免疫应答。方法:采用皮下包埋的方法,以预先转移到硝酸纤维素膜上的原核表达的Rv2450蛋白免疫小鼠(10只)3次,每次间隔2周。用间接ELISA法检测免疫小鼠血清特异性抗体... 详细信息

目的:以原核表达的结核分枝杆菌Rv2450蛋白在小鼠体内诱导体液和细胞免疫应答。方法:采用皮下包埋的方法,以预先转移到硝酸纤维素膜上的原核表达的Rv2450蛋白免疫小鼠(10只)3次,每次间隔2周。用间接ELISA法检测免疫小鼠血清特异性抗体的滴度。末次免疫完成后4周,处死3只免疫小鼠并分离脾淋巴细胞,体外经PPD(2μg/孔)刺激后,用MTT比色法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖指数。用ELISA法检测脾淋巴细胞悬液中IFN-γ、IL-10及IL-12的水平。结果:Rv2450蛋白免疫小鼠血清特异性抗体的滴度为1∶3200,淋巴细胞增殖指数为3.76±0.19。免疫小鼠脾淋巴细胞培养液中IFN-γ、IL-10及IL-12的含量,分别为(1740±19)ng/L、(678±15)ng/L、(469±13)ng/L,均高于各组的生理盐水对照组(P<0.05)。结论:Rv2450有可能作为新型结核疫苗的候选组分。

关键词：结核分枝杆菌 Rv2450蛋白疫苗

结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B-ESAT6的融合表达及纯化

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中华结核和呼吸杂志 2004年第2期27卷 89-92页

作者：师长宏范雄林徐志凯李元柏银兰薛莹第四军医大学基础部微生物学教研室西安710033

目的　融合表达结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B ESAT6 ,为结核病的预防提供有效亚单位疫苗。方法　设计含不同酶切位点的Ag85B和ESAT6引物 ,采用聚合酶链反应 (polymerasechainreaction ,PCR)的方法从结核分枝杆菌毒株H3 7Rv DNA中分别扩增... 详细信息

目的　融合表达结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B ESAT6 ,为结核病的预防提供有效亚单位疫苗。方法　设计含不同酶切位点的Ag85B和ESAT6引物 ,采用聚合酶链反应 (polymerasechainreaction ,PCR)的方法从结核分枝杆菌毒株H3 7Rv DNA中分别扩增出相应大小的DNA片段 ,将片段分别与PGEM T easy载体连接测序。将测序正确的Ag85B和ESAT6按照不同的酶切位点克隆入PPROEXHT表达载体 ,挑选出阳性克隆 ,将诱导的表达产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)分析 ,同时与含6个组氨酸 (histidine 6×his)的单克隆抗体 (monoclonalantibody ,mAb)进行固定化蛋白质免疫学测定(Western blot) ,将用含Ni+鳌合剂的Ni NTA亲合柱纯化的表达产物免疫小鼠 ,用结核分枝杆菌培养上清滤液蛋白 (culturefiltrateproteins ,CFP)作为抗原 ,酶联免疫吸附试验 (enzyme linkedimmunosorbentassay ,ELISA)测定免疫小鼠血清特异性抗体的滴度。结果　PCR获得的Ag85B和ESAT6序列与基因文库 (GenBank)报道的完全一致。两者在大肠杆菌DH5α株中融合表达的产物约为 370 0 0 ,与预计大小相吻合。Western blot结果显示 ,在相对分子量约 370 0 0处有表达产物与 6×hismAb特异性结合带。表达产物为包涵体 ,通过Ni NTA纯化系统 ,可得到纯化的目的蛋白。

关键词：结核分枝杆菌 Ag85B-ESAT6 融合表达纯化结核病预防

抗单纯疱疹病毒单克隆抗体CHA9靶基因的定位

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第3期19卷 272-274页

作者：黎志东杨乔欣任君萍马文煜吕欣陈峥第四军医大学微生物学教研室陕西西安710032

目的 :获得单纯疱疹病毒 (HSV)新糖蛋白 g30K的部分特征氨基酸信息 ,以期对该蛋白基因的准确定位有所帮助。方法 :将针对HSV新糖蛋白 g30K的单克隆抗体 (mAb)CHA9生物素化后 ,淘筛噬菌体随机 12肽库 ,经 3轮筛选后进行ELISA检测。随机挑... 详细信息

目的 :获得单纯疱疹病毒 (HSV)新糖蛋白 g30K的部分特征氨基酸信息 ,以期对该蛋白基因的准确定位有所帮助。方法 :将针对HSV新糖蛋白 g30K的单克隆抗体 (mAb)CHA9生物素化后 ,淘筛噬菌体随机 12肽库 ,经 3轮筛选后进行ELISA检测。随机挑取 10个阳性克隆进行DNA测序 ,并进行序列比较以得到保守序列 ,然后对其疏水性进行预测。结果 :得到的保守氨基酸序列 (motif)为 PH/KHXHXGS 。携有此短肽的噬菌体可与CHA9特异结合而不与其它IgG出现交叉反应。疏水性分析证明其可能构成一个表位。结论 :筛选到一段具有含mAbCHA9靶抗原 HSV新糖蛋白 g30K部分氨基酸特征的短肽 ,为新基因的预测提供了参考依据。

关键词：单纯疱疹病毒糖蛋白随机肽库基因定位