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肾综合征出血热患者T_H1/T_H2、Tc1/Tc2亚群比例及有关细胞因子变化的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2002年第6期22卷 610-613页

作者：刘京梅刘雪松欧阳为明朱勇李琦曹云新金伯泉第四军医大学免疫学教研室西安710032

目的　探讨肾综合征出血热 (HFRS)患者TH1样和TH2样细胞平衡状态以及血清中细胞因子的变化。方法　收集HFRS患者和健康个体血清 ,采用夹心ELISA方法测定IFN γ、IL 4和TNF α的水平。分离PBMC ,采用三色流式细胞术分析HFRS患者CD4 + T... 详细信息

目的　探讨肾综合征出血热 (HFRS)患者TH1样和TH2样细胞平衡状态以及血清中细胞因子的变化。方法　收集HFRS患者和健康个体血清 ,采用夹心ELISA方法测定IFN γ、IL 4和TNF α的水平。分离PBMC ,采用三色流式细胞术分析HFRS患者CD4 + T细胞和CD8+ T细胞中IFN γ+ 和IL 4 + 细胞的百分率 ,观察HFRS患者TH1 TH2、Tc1 Tc2比例的变化 ,比较了不同病程和病情HFRS患者血清中上述指标的变化。结果　HFRS患者血清中TH1类和TH2类细胞因子水平均明显升高 ,其中IFN γ和IL 4的平均水平显著高于健康个体 (P =0 .0 16 ,P =0 .0 19)。HFRS患者PBMC中TH1、TH2、Tc1、Tc2细胞的平均百分率均高于健康个体 ,Tc细胞比例的改变较TH 细胞明显 ,TH1样细胞的比例较TH2样细胞变化明显。发热期患者血清中IFN γ、IL 4和TNF α的水平明显高于恢复期患者。发热期的重症患者的IFN γ水平升高较轻症明显。结论　HFRS患者血清中IFN γ和IL 4水平以及PBMC中TH1、TH2、Tc1和Tc2细胞的比例均有所升高 ,发热期的患者和重症HFRS患者上述参数变化更明显。

关键词：肾综合征出血热 TH1/TH2 Tc1/Tc2 细胞因子 HFRS 夹心ELISA法三色流式细胞术

4—14岁儿童比例推理及认知结构的发展研究

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心理学报 1991年第2期23卷 167-177页

作者：苗丹民第四军医大学心理教研室

本实验研究的主要目的是,探讨4——14岁儿童比例推理能力及内部认知结构发展的一般规律。结果:1.采用有序样本的聚类分析和因子分析,将其发展划分为七个阶段。2.发展的一般规律为:从单维、定性、加法推理到两维、定量、乘法操作;从比差... 详细信息

本实验研究的主要目的是,探讨4——14岁儿童比例推理能力及内部认知结构发展的一般规律。结果:1.采用有序样本的聚类分析和因子分析,将其发展划分为七个阶段。2.发展的一般规律为:从单维、定性、加法推理到两维、定量、乘法操作;从比差运算上的整合,到整倍数乘法运算上的整合,最终达到在命题运算水平上对非整倍数函数关系操作上的整合;其发展的核心是,四个结构关系由低向高逐渐构建和整合,由此提出四结构关系建构理论。3.小学高年级和中学低年级儿童比例概念基本形成,与加拿大同龄儿童比较,有显著差异,表明国内比例概念的教学是有成效的。

关键词：儿童比例推理认知结构

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MRP基因与肿瘤的多药耐药性

生物化学与生物物理进展 1997年第4期24卷 312-315页

作者：毕锋张学庸樊代明第四军医大学西京医院西安710032

在人肿瘤非典型性多药耐药机制的研究中发现了一个新的基因———多药耐药相关蛋白基因(MRP) .该基因位于人 1 6号染色体P1 3∶3,编码 1 531个氨基酸 .其产物为多药耐药相关蛋白(MRP) ,分子质量 1 90ku ,故又名 p1 90 .MRP属ABC超家族成... 详细信息

在人肿瘤非典型性多药耐药机制的研究中发现了一个新的基因———多药耐药相关蛋白基因(MRP) .该基因位于人 1 6号染色体P1 3∶3,编码 1 531个氨基酸 .其产物为多药耐药相关蛋白(MRP) ,分子质量 1 90ku ,故又名 p1 90 .MRP属ABC超家族成员 ,主要分布在细胞的质膜上 .MRP的功能可能是在能量依赖的外排系统中发挥作用 .除了一些肿瘤细胞系外 ,MRP基因的高表达还见于一些血液系肿瘤及乳腺癌等 .MRP基因的高表达还可能与某些肿瘤的复发和预后有关 .

关键词：肿瘤多药耐药相关蛋白基因多药耐药性

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组胺受体家族新成员:组胺H_4受体

生理科学进展 2003年第1期34卷 53-54页

作者：李明凯罗晓星谢建军第四军医大学药理学教研室西安710032

组胺H4 受体是最近在基因库内筛选寻找新的G蛋白偶联受体时发现的 ,其cDNA序列与组胺H1、H2 受体的同源性很低 ,与组胺H3 受体有很高的同源性。很多组胺受体的配体与组胺H4受体有亲和性 ,但该受体表现出独特的药理学性质。组胺H4 受体... 详细信息

组胺H4 受体是最近在基因库内筛选寻找新的G蛋白偶联受体时发现的 ,其cDNA序列与组胺H1、H2 受体的同源性很低 ,与组胺H3 受体有很高的同源性。很多组胺受体的配体与组胺H4受体有亲和性 ,但该受体表现出独特的药理学性质。组胺H4 受体激动后可影响细胞内Ca2 +浓度和cAMP的生成 ,推测其与Gi或Go蛋白相偶联。组胺H4 受体主要分布于骨髓、肺、脾脏、小肠和中枢 ,可能与机体的免疫反应和精神活动有关。

关键词：组胺组胺H4受体 Ca^2+ G蛋白

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电离辐射对小鼠小肠和结肠细胞凋亡的影响

辐射研究与辐射工艺学报 2000年第1期18卷 63-67页

作者：丁桂荣郭国祯田芙蓉王晋张李燕郭鹞第四军医大学放射医学教研室西安710032

观察不同剂量ｒ射线照射对小鼠小肠和结肠细胞凋亡水平的影响。６０Ｃｏｒ射线全身照射ＢＡＬＢ／ｃ小鼠；剂量分别为１、６、１２Ｇｙ，于照射后２４ｈ内分批取材，常规石蜡包埋，ＨＥ染色，Ｏｌｙｍｐｕｓ显微镜下观察辐射... 详细信息

观察不同剂量ｒ射线照射对小鼠小肠和结肠细胞凋亡水平的影响。６０Ｃｏｒ射线全身照射ＢＡＬＢ／ｃ小鼠；剂量分别为１、６、１２Ｇｙ，于照射后２４ｈ内分批取材，常规石蜡包埋，ＨＥ染色，Ｏｌｙｍｐｕｓ显微镜下观察辐射诱导小肠和结肠细胞凋亡的情况。结果表明：正常小鼠小肠细胞有自发的凋亡现象，平均每个隐窝的凋亡细胞数为０．０３８±０．０５９个，结肠在正常情况下没有细胞凋亡发生；不同剂量ｒ射线照射后小肠隐窝细胞凋亡数目明显增加（ｐ＜０．０５），其中１Ｇｙ照射组凋亡峰在照射后１２ｈ明显，６Ｇｙ和１２Ｇｙ组分别在照射后２４ｈ和６ｈ凋亡细胞最多。结肠未见或偶见凋亡细胞；各照射剂量组及照射后不同时间（照射后６、１２、２４ｈ）组小肠隐窝细胞凋亡数较相应结肠组显著增加（ｐ＜０．０５）。说明在电离辐射的情况下，小肠较结肠能更有效的清除辐射损伤的细胞，而后者在体内的蓄积可能与以后的肿瘤发生有关。

关键词：辐射小肠结肠细胞凋亡小鼠肿瘤

超抗原SEA对Tc1和Tc2细胞分化和增殖的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第4期24卷 300-303页

作者：韩卫宁张赟曹云新李琦庄然刘雪松金伯泉第四军医大学免疫学教研室西安710032

目的　探讨超抗原SEA对Tc1和Tc2亚群细胞增殖的不同影响。方法　以SEA刺激PBMC ,以免疫荧光染色结合流式细胞术比较刺激与未刺激的PBMC中T细胞各亚群比例的变化 ;从PBMC中分离CD8+T细胞 ,定向诱导为Tc1和Tc2细胞系 ,3 H TdR掺入法检测Tc... 详细信息

目的　探讨超抗原SEA对Tc1和Tc2亚群细胞增殖的不同影响。方法　以SEA刺激PBMC ,以免疫荧光染色结合流式细胞术比较刺激与未刺激的PBMC中T细胞各亚群比例的变化 ;从PBMC中分离CD8+T细胞 ,定向诱导为Tc1和Tc2细胞系 ,3 H TdR掺入法检测Tc1和Tc2细胞对SEA刺激的反应 ,用免疫荧光染色和流式细胞术检测CD2 5的表达。结果　经SEA刺激后 ,PBMC中的Tc0 /TH0增殖并向Ⅰ型或Ⅱ型分化 ,但SEA所诱导PBMC中的Tc2 /TH2的比例远高于Tc1/TH1;SEA在体外能更有效地促进Tc2亚群细胞的增殖 ;经SEA刺激的Tc2细胞系CD2 5的表达也高于Tc1。结论　SEA优先诱导PBMC中的Tc2 /TH2的分化。

关键词：金黄色葡萄球菌外毒素A 细胞毒性T细胞超抗原细胞分化流式细胞术免疫荧光染色法

人CD226(PTA1)分子胞膜外区截短体真核表达载体的构建、表达及其识别结构域的分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2003年第1期23卷 9-13页

作者：贾卫刘雪松张新海朱勇张贇李琦杨琨欧阳为明宁双飞金伯泉第四军医大学免疫学教研室西安710032

目的　确定一套CD2 2 6单克隆抗体 (McAb)识别CD2 2 6分子胞膜外区结构域的部位。方法　应用计算机软件分析CD2 2 6分子蛋白质序列疏水性 ,确定其亲水性区域。采用PCR方法扩增CD2 2 6分子基因序列 ,分别缺失相应亲水性区域 ,构建CD2 2 ... 详细信息

目的　确定一套CD2 2 6单克隆抗体 (McAb)识别CD2 2 6分子胞膜外区结构域的部位。方法　应用计算机软件分析CD2 2 6分子蛋白质序列疏水性 ,确定其亲水性区域。采用PCR方法扩增CD2 2 6分子基因序列 ,分别缺失相应亲水性区域 ,构建CD2 2 6截短体重组真核细胞表达载体pcDNA3 PTA1T1和pcDNA3 PTA1T2。测序正确后 ,转染COS7细胞 ,抗CD2 2 6分子多克隆抗体间接免疫荧光染色 ,流式细胞术检测CD2 2 6分子截短体的表达。表达成功后 ,采用间接免疫荧光染色和流式细胞术分析 ,用一套CD2 2 6McAb检测与截短突变体的免疫反应性 ,从而确定CD2 2 6McAb识别CD2 2 6分子结构域的部位。结果　PCR扩增出CD2 2 6分子相应目的片段序列 ,定向克隆入pcDNA3真核表达载体 ,DNA序列测定正确。转染COS7细胞后 ,流式细胞术检测CD2 2 6截短体分子有较高水平的表达。CD2 2 6McAbLeoA1、NewE1和FMU1～ 7均可识别CD2 2 6全长分子 ;LeoA1、NewE1、FMU1、FMU2、FMU4和FMU5与截短突变体PTA1T1和PTA1T2均无反应性 ;FMU3可结合PTA1T1分子 ,不结合PTA1T2分子 ;FMU6和FMU7均可结合PTA1T1及PTA1T2分子。结论　CD2 2 6McAbLeoA1、NewE1、FMU1、FMU2、FMU3、FMU4和FMU5识别CD2 2 6分子胞膜外区D1结构域 ,其中FMU3识别的位点位于V1和V2环之间 ;FMU6?

关键词： CD226 PTA1 截短体基因表达亲水性区域

苦参碱对K562细胞增殖及凋亡相关分子表达的影响

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中国医学科学院学报 2001年第4期23卷 333-336页

作者：张永清黄高昇王哲郭英张海雁第四军医大学病理学教研室西安710032

目的研究苦参碱对人白血病细胞K562增殖、凋亡的影响及其机制。方法苦参碱（0．2 mg/ml）作用于K562细胞，每日计数白细胞、计算抑制率；流式细胞分析仪检测苦参碱对K562细胞周期的改变及凋亡的影响；电子显微镜观察凋亡细胞形态；Wes... 详细信息

目的研究苦参碱对人白血病细胞K562增殖、凋亡的影响及其机制。方法苦参碱（0．2 mg/ml）作用于K562细胞，每日计数白细胞、计算抑制率；流式细胞分析仪检测苦参碱对K562细胞周期的改变及凋亡的影响；电子显微镜观察凋亡细胞形态；Western blot检测BCL-6及增殖细胞核抗原（PCNA）表达情况。结果苦参碱对K562细胞有明显的抑制作用，用药72 h的细胞增殖抑制率达69%；用药5 d后，G1期细胞明显增多，高达58．5%，68%的细胞发生凋亡。电子显微镜可观察到苦参碱诱导的早、中、晚期K562凋亡细胞；BCL-6表达增强，PCNA表达下降。结论苦参碱能显著抑制K562细胞增殖、促进其凋亡，其机制可能与细胞增殖周期受阻及PCNA表达下降、BCL-6表达增加有关。

关键词：苦参碱 K562细胞凋亡增殖

血小板/T 细胞活化抗原1(PTA1)胞膜外区基因片段的克隆及其融合蛋白的表达

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中华微生物学和免疫学杂志 1999年第5期19卷 377-381页

作者：孙凯金伯泉冯琦田芳朱勇杨琨刘雪松第四军医大学免疫学教研室西安710032

目的　克隆血小板／Ｔ细胞活化抗原１（ｐｌａｔｅｌｅｔａｎｄＴｃｅｌｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｎｔｉｇｅｎ１，ＰＴＡ１）胞膜外区基因片段，构建、表达、纯化ＰＴＡ１胞膜外区与ＩｇＧＦｃ融合蛋白，用于Ｐ... 详细信息

目的　克隆血小板／Ｔ细胞活化抗原１（ｐｌａｔｅｌｅｔａｎｄＴｃｅｌｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｎｔｉｇｅｎ１，ＰＴＡ１）胞膜外区基因片段，构建、表达、纯化ＰＴＡ１胞膜外区与ＩｇＧＦｃ融合蛋白，用于ＰＴＡ１配体鉴定的研究。方法　针对人ＰＴＡ１ｃＤＮＡ设计引物，通过反转录、半套式ＰＣＲ从ＴＰＡ活化的Ｊｕｒｋａｔ细胞中扩增ＰＴＡ１胞膜外区基因片段，并进行序列测定，而后将其进一步克隆入融合蛋白表达载体ｐＩＧ中，构建重组表达载体ｐＰＴＡ１／Ｉｇ，经ＤＥＡＥ Ｄｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ７细胞后通过亲和层析纯化，融合蛋白经ＳＤＳ ＰＡＧＥ、夹心ＥＬＩＳＡ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定。结果　获得７９３ｂｐＰＴＡ１胞膜外区基因片段，构建成功ＰＴＡ１／Ｉｇ融合蛋白表达载体，制备了可用于纯化ＰＴＡ１／Ｉｇ的亲和层析柱，建立了检测融合蛋白的夹心ＥＬＩＳＡ方法。经ＳＤＳ ＰＡＧＥ、夹心ＥＬＩＳＡ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实融合蛋白在ＣＯＳ７细胞中获得表达，相对分子质量为８３ ×１０３，表达效率约为１．３ｍｇ／ ?

关键词：血小板 T细胞活化抗原1 融合蛋白基因表达