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siRNA沉默α-TAT1对肝肺综合征中内皮细胞迁移行为的影响

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陆军军医大学学报 2024年第3期46卷 215-224页

作者：刘畅朱佳熙刘亚楠徐木陈璟莉华中科技大学同济医学院附属武汉市中心医院麻醉科武汉431600 湖北省分子诊断重点实验室武汉431600

目的探究siRNA沉默微管乙酰化转移酶1(alpha tubulin acetyltransferase 1,α-TAT1)对肝肺综合征(hepatopulmonary syndrome,HPS)中内皮细胞迁移行为的影响。方法通过在线数据库Tabula Muris分析肺组织各细胞亚群α-TAT1的表达。24只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为对照组(Sham组,n=6)、胆管结扎组(HPS组,n=18)。造模后在第2、4周分别取材HPS组大鼠,通过免疫荧光共定位检测2周和4周HPS大鼠肺血管内皮细胞中α-TAT1表达水平变化。收集Sham和HPS大鼠血清处理人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs) 12 h和24 h,之后进行小分子RNA(small interfering RNA,siRNA)干扰实验,分为Sham血清+siRNA NC组、Sham血清+siRNA α-TAT1组、HPS血清+siRNA NC组、HPS血清+siRNA α-TAT1组。Western blot检测各组HUVECs中α-TAT1、Ace-α-tubulin表达水平变化。免疫荧光观察各组诺考达唑(10μmol/L)预处理后HUVECs中α-Tubulin微管聚合水平,评估微管的结构稳定性;细胞划痕实验联合细胞免疫荧光观察HUVECs的细胞迁移能力和高尔基体的定位。体外成血管实验检测HUVECs成血管能力。结果体内及体外实验表明HPS中肺血管内皮细胞α-TAT1表达显著增加(P<0.01)。siRNA α-TAT1干扰组中α-TAT1和Ace-α-tubulin表达量均显著下调,且微管稳定性减弱(P<0.01)。另外,siRNA α-TAT1干扰组中GM130标记的高尔基体在核周细胞突出段方向的分布比例降低,且迁移能力下降(P<0.01)。同时,成血管长度及网络水平显著减弱(P<0.01)。结论沉默α-TAT1可减弱HPS中内皮细胞迁移和成血管能力,其机制与减弱微管稳定性有关。

关键词：肝肺综合征内皮细胞病理性血管新生 α-TAT1 迁移极性

定量RT-PCR测定冠心病患者外周血Siglec-1(CD169)的基因表达水平

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第二军医大学学报 2008年第11期29卷 1307-1310页

作者：熊怡淞王皓吴炜霖周运恒梁艳杨再兴荣光华仲人前第二军医大学长征医院实验诊断科全军医学免疫诊断中心全军临床免疫重点实验室上海200003

目的:建立检测人Siglec-1(sialic acid-binding immunoglobulin-like lectins,唾液酸结合的免疫球蛋白样凝集素1,CD169)mRNA含量的实时荧光定量RT-PCR的方法,并用来测定冠心病患者外周血单个核细胞(PBMCs)中Siglec-1的基因表达水平,探讨Siglec-1基因表达水平与冠状动脉粥样硬化发生发展的关系。方法:基于SYBR Green荧光标记技术,建立实时荧光相对定量RT-PCR方法,在ABI PRISM 7000荧光定量PCR仪上测定了57例冠状动脉粥样硬化性心脏病患者和38例健康对照者外周血中Siglec-1 mRNA的含量。生化常规测定所有入选者血脂水平。结果:冠心病组Siglec-1 mR-NA的平均拷贝数显著高于健康对照组,为健康对照组的3.23(1.28～8.11)倍(P免疫炎症反应在冠心病发生发展过程中起重要作用。

关键词：冠状动脉硬化 Siglec-1 逆转录聚合酶链反应

氧化型低密度脂蛋白对RAW264．7细胞Siglec-1表达及分泌细胞因子的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第1期30卷 51-55页

作者：熊怡淞朱烨陆慧琦李畅韩志君仲人前第二军医大学长征医院实验诊断科全军医学免疫诊断中心全军临床免疫重点实验室上海200003

目的通过氧化型低密度脂蛋白（oxidized low—density lipoprotein，ox-LDL）活化巨噬细胞系对Siglec-1（sialic acid—binding immunoglobulin-like lectin 1，唾液酸黏附素）表达及细胞因子分泌的影响探讨对动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）发病的可能作用。方法制备ox—LDL，并用不同浓度ox-LDL刺激小鼠巨噬细胞株RAW264．7，48h后收集细胞和上清，分别用流式细胞仪和RT—PCR检测不同浓度ox-LDL刺激后细胞表面Siglec-1蛋白和基因表达水平，并测定培养上清液中巨噬细胞炎性蛋白-1α（MIP-1α）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和IL-8的浓度。结果与对照组相比，ox—LDL能刺激RAW264．7细胞表面Siglec-1蛋白和mRNA表达升高（P〈0．01），培养上清液中MIP-1α、MCP-1和IL-8的表达升高（P〈0．01），并呈浓度依赖性。结论ox—LDL可呈剂量依赖性刺激RAW264．7巨噬细胞诱导Siglec-1表达及分泌炎性细胞因子增加，在动脉粥样硬化的发生发展中可能起一定作用。

关键词：动脉粥样硬化氧化型低密度脂蛋白 Siglec-1 RAW264.7

原发性胆汁性肝硬化患者血清中Th17相关细胞因子的表达

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第二军医大学学报 2009年第6期30卷 703-705页

作者：周运恒荣光华熊怡淞朱烨耿红莲杨再兴仲人前第二军医大学长征医院实验诊断科全军医学免疫诊断中心全军临床免疫重点实验室上海200003

目的:观察原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者血清中Th17分化相关细胞因子(IL-1β、IL-6、IL-17、IL-23、TGF-β)的变化,探讨Th17细胞在PBC发病过程中的作用。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法比较PBC患者(n=... 详细信息

目的:观察原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者血清中Th17分化相关细胞因子(IL-1β、IL-6、IL-17、IL-23、TGF-β)的变化,探讨Th17细胞在PBC发病过程中的作用。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法比较PBC患者(n=78)、乙型肝炎后肝硬化患者(PHC,n=30),健康对照(HC,n=60)血清中Th17分化相关细胞因子含量。结果:与HC组相比,PBC患者血清IL-1β、IL-6、IL-17A和IL-23水平显著升高(P<0.05),而TGF-β水平差异无统计学意义;与PHC组相比,PBC患者血清IL-1β、IL-6和TGF-β水平显著降低,而IL-17和IL-23水平显著升高(P<0.05)。结论:PBC患者处于慢性炎症状态,Th17细胞可能在PBC的发病和发展过程中发挥着重要的作用。

关键词：原发性胆汁性肝硬化 Th17细胞细胞因子

氧化型低密度脂蛋白对单核巨噬细胞株U937表达Siglec-1蛋白及分泌细胞因子的影响

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第二军医大学学报 2010年第1期31卷 33-36页

作者：熊怡淞吴韦霖张玲珍周运恒韩志君仲人前第二军医大学长征医院实验诊断科全军医学免疫诊断中心全军临床免疫重点实验室上海200003

目的探讨氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的致动脉粥样硬化(AS)作用是否通过上调单核巨噬细胞表面Siglec-1的表达发挥作用。方法制备ox-LDL并用不同浓度刺激人巨噬细胞株U937,48h后收集细胞和培养上清液,分别用流式细胞仪和RT-PCR检测不同浓... 详细信息

目的探讨氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的致动脉粥样硬化(AS)作用是否通过上调单核巨噬细胞表面Siglec-1的表达发挥作用。方法制备ox-LDL并用不同浓度刺激人巨噬细胞株U937,48h后收集细胞和培养上清液,分别用流式细胞仪和RT-PCR检测不同浓度ox-LDL刺激后Siglec-1蛋白和Siglec-1mRNA的表达水平,并用ELISA试剂盒测定培养上清液中MIP-1α、MCP-1和IL-8的浓度。结果与对照组相比,ox-LDL能刺激U937细胞表面Siglec-1蛋白和Siglec-1mRNA表达升高(P<0.01),培养上清液中MIP-1α、MCP-1和IL-8的表达升高(P<0.01),并呈浓度依赖性。结论ox-LDL的致AS作用可能部分是通过上调单核巨噬细胞表面Siglec-1蛋白表达而活化巨噬细胞,分泌细胞因子和趋化因子诱导更多巨噬细胞和淋巴细胞的活化参与粥样斑块中的炎症反应。

关键词：动脉粥样硬化氧化型低密度脂蛋白 Siglec-1 细胞因子类单核巨噬细胞

乙型肝炎病毒核心颗粒展示新型冠状病毒刺突蛋白B细胞线性表位及其免疫原性分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第3期44卷 234-240页

作者：陈小美袁雯婕王世杰王建荣杭小锋万延民王勇翔复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032 海军军医大学长征医院感染科上海200003 复旦大学附属华山医院感染科上海市传染病与生物安全应急响应重点实验室国家传染病医学中心上海200040

目的获得展示新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)刺突蛋白B细胞线性表位的乙型肝炎病毒衣壳样颗粒(capsid-like particles,CLPs)并评价其免疫原性。方法将SARS-CoV-2的4条B细胞线性表位(M1、S1-57、S14P5和S21P2)置换乙型肝炎病毒核心蛋白(hepatitis B virus core protein,HBc)第80位丙氨酸。在大肠埃希菌BL21 Star(DE3)中诱导表达这4种线性表位和HBc的重组融合蛋白(M1-HBc、S1-57-HBc、S14P5-HBc和S21P2-HBc)。SDS-PAGE、Western blot和非变性琼脂糖凝胶电泳(native agarose gel electrophoresis,NAGE)鉴定表达产物。蔗糖密度梯度超速离心纯化CLPs并经Western blot验证其抗原性。用纯化的CLPs免疫BALB/c小鼠,通过ELISA测定血清中的抗体滴度。结果重组融合蛋白M1-HBc和S1-57-HBc自组装成M1-CLP和S1-57-CLP,S1-57-CLP免疫小鼠后靶向S1-57多肽的抗体滴度高达1∶1000000。结论在原核系统中成功表达了展示SARS-CoV-2 M1或S1-57线性表位的乙型肝炎病毒CLPs,S1-57-CLP具有良好的免疫原性,为研制SARS-CoV-2新型诊断试剂和疫苗提供了新思路。

关键词：免疫原性新型冠状病毒 B细胞线性表位衣壳样颗粒抗体

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞趋化因子受体的表达及临床意义

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第二军医大学学报 2009年第2期30卷 142-146页

作者：韩志君吴传勇蒋廷旺唐裕杰周晔陈燕谷明莉邓安梅仲人前第二军医大学长征医院实验诊断科全军医学免疫诊断中心全军临床免疫重点实验室上海200003

目的:初步探讨趋化因子受体(chemokine receptor)与原发性胆汁性肝硬化(PBC,primary biliary cirrhosis)发生发展的关系。方法:采用实时荧光定量PCR和流式细胞术,分别从基因转录和蛋白表达水平检测60例PBC、60例乙型肝炎肝硬化患者(疾... 详细信息

目的:初步探讨趋化因子受体(chemokine receptor)与原发性胆汁性肝硬化(PBC,primary biliary cirrhosis)发生发展的关系。方法:采用实时荧光定量PCR和流式细胞术,分别从基因转录和蛋白表达水平检测60例PBC、60例乙型肝炎肝硬化患者(疾病对照)和60例健康对照者的外周血单个核细胞(PBMCs)中CCR1、CCR3和CCR5的表达;生化常规测定PBC患者和健康对照者的总胆红素(TBIL)、γ-谷氨酰基转移酶(γ-GT)水平,分析它们与趋化因子之间的相关性。结果:PBC患者PBMCs中的CCR1、CCR3、CCR5的mRNA和蛋白表达均明显低于健康对照组和疾病对照组(P0.05);PBC患者Ⅲ、Ⅳ期PBMCs中的CCR1、CCR3、CCR5的mRNA和蛋白表达较Ⅰ、Ⅱ期明显降低(P0.05);CCR3蛋白表达水平与TBIL水平无线性相关关系(r=-0.173,P>0.05),与γ-GT水平负相关(r=-0.295,P诊断和预防提供了新线索。

关键词：胆汁性肝硬化趋化因子受体流式细胞术单个核细胞

B细胞激活因子受体家族基因表达与原发性胆汁性肝硬化相关性研究

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中华医学杂志 2007年第2期87卷 128-130页

作者：梁艳杨再兴朱烨王燕曾贤铭邓安梅仲人前第二军医大学附属长征医院实验诊断科全军临床免疫中心上海200003

目的探讨 B 细胞激活因子(BAFF)受体家族基因表达水平与原发性胆汁性肝硬化(PBC)的相关性。方法以18S rRNA 为内参基因,通过靶基因与内参基因循环阈值之差,建立实时荧光逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)相对定量方法,检测30例正常人和30例... 详细信息

目的探讨 B 细胞激活因子(BAFF)受体家族基因表达水平与原发性胆汁性肝硬化(PBC)的相关性。方法以18S rRNA 为内参基因,通过靶基因与内参基因循环阈值之差,建立实时荧光逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)相对定量方法,检测30例正常人和30例 PBC 患者外周血单个核细胞 B 细胞成熟抗原(BCMA),穿膜蛋白活化物(TACI)及 B 细胞激活因子受体(BAFF-R)基因的相对表达量,并分析其与免疫球蛋白 IgM、碱性磷酸酶(ALP)及γ-谷氨酰转肽酶(GGT)的相关性。结果 PBC 患者外周血单个核细胞 BCMA mRNA 是正常对照组的8.6倍,差异有统计学意义(P0.05)。BCMA 的△Ct 值与 IgM、GGT 和 ALP 有相关性(P0.05);BAFF-R 与IgM、GGT 和 ALP 均无相关性(均 P>0.05)。结论 PBC 患者外周血单个核细胞 BCMA mRNA 表达水平显著升高,TACI 基因表达明显降低,提示 PBC 发病机制与体液免疫增强、免疫耐受打破有关,且BCMA 可能与 PBC 的疾病进程有关。

关键词：胆汁性肝硬化聚合酶链反应 B细胞激活因子受体

细胞因子基因多态性与中国人原发性胆汁性肝硬化的相关性

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中国医学科学院学报 2004年第5期26卷 505-509页

作者：范列英朱烨仲人前屠小卿叶伟民陈曲波曾万杰孔宪涛第二军医大学附属长征医院实验诊断科全军临床免疫中心上海200003

目的探讨IL-1、IL-6、IL-10基因多态性与中国人原发性胆汁性肝硬化(PBC)发病的相关性。方法采用限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)和序列特异性PCR(SSP)法,分析77例PBC患者及160例健康对照者外周血单核细胞基因组DNAIL-1(+3953)、IL-... 详细信息

目的探讨IL-1、IL-6、IL-10基因多态性与中国人原发性胆汁性肝硬化(PBC)发病的相关性。方法采用限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)和序列特异性PCR(SSP)法,分析77例PBC患者及160例健康对照者外周血单核细胞基因组DNAIL-1(+3953)、IL-1受体拮抗剂(IL-1RN)、IL-6启动子(-174)、IL-10启动子(-592、-819、-1082)基因多态性,并进行对比分析。结果PBC组IL-1RN1熏1等位基因携带率明显高于对照组(90.9%vs79.4%熏P=0.026),IL-1RN1熏2等位基因携带率明显低于对照组(6.5%vs18.8%熏P=0.013),IL-1RN觹2等位基因携带率与对照组相比差异无显著性(P=0.06)。160例健康对照者IL-6-174等位基因全部为GG纯合子;PBC患者中有4例为GC杂合子,其余73例均为GG纯合子穴P=0.0036雪;C等位基因频率显著高于正常对照组(P=0.0038)。IL-1+3953及IL-10启动子-1082、-819和-592基因多态性与正常对照组差异无显著性。结论IL-1RN和IL-6-174基因多态性可能与中国人PBC的易感性相关,而IL-1(+3953)及IL-10启动子基因多态性与之不相关。

关键词：原发性胆汁性肝硬化IL-1 IL-6 IL-10基因多态性