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蛇床子总香豆素对成骨细胞产生NO,IL-1及IL-6的影响

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中国药学杂志 2003年第5期38卷 345-348页

作者：张巧艳秦路平田野苹郑汉臣黄宝康刘祖德黄矛第二军医大学药学院生药学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部免疫学教研室上海200433 第二军医大学长征医院骨科上海200003 第二军医大学基础医学部新药评价中心上海200433

目的　以新生大鼠颅盖骨成骨细胞为模型 ,观察蛇床子总香豆素对成骨细胞产生NO ,IL 1和IL 6的影响。方法　原代培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞 ,3 H 胸腺嘧啶掺入法测定成骨细胞的增殖 ;Griess试剂法、小鼠胸腺细胞增殖法和用B9细胞作为靶... 详细信息

目的　以新生大鼠颅盖骨成骨细胞为模型 ,观察蛇床子总香豆素对成骨细胞产生NO ,IL 1和IL 6的影响。方法　原代培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞 ,3 H 胸腺嘧啶掺入法测定成骨细胞的增殖 ;Griess试剂法、小鼠胸腺细胞增殖法和用B9细胞作为靶细胞的生物测定法 ,分别检测与蛇床子总香豆素共育的无刺激或受LPS及TNF等刺激的成骨细胞培养上清液中NO ,IL 1和IL 6的含量。结果　蛇床子总香豆素在 0 .0 2 5～ 2 .5mg·L-1的范围内抑制成骨细胞自发地或在LPS及细胞因子刺激下产生NO ,IL 1及IL 6。结论　蛇床子总香豆素的抗骨质疏松作用与其抑制成骨细胞产生NO ,IL 1和IL

关键词：蛇床子总香豆素成骨细胞 NO IL—1 IL—6 骨质疏松

氢分子对H_2O_2体外诱导氧化损伤大鼠脊髓神经元的保护作用

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第二军医大学学报 2014年第3期35卷 233-239页

作者：刘芳婷李建李向南徐盛眀向正华袁红斌第二军医大学长征医院麻醉科上海200003 第二军医大学长征医院骨科上海200003 第二军医大学基础部神经生物学教研室上海200433

目的证明氢分子对过氧化氢(H2O2)诱导氧化损伤的大鼠脊髓神经元具有保护效应,并初步探讨其相关机制。方法将纯化培养7d后的大鼠脊髓神经元分为4组:(1)常规培养液(NM)对照组:以NM培养;(2)富氢培养液(HM)组:以HM培养;(3)NM+H2O2组:以NM培... 详细信息

目的证明氢分子对过氧化氢(H2O2)诱导氧化损伤的大鼠脊髓神经元具有保护效应,并初步探讨其相关机制。方法将纯化培养7d后的大鼠脊髓神经元分为4组:(1)常规培养液(NM)对照组:以NM培养;(2)富氢培养液(HM)组:以HM培养;(3)NM+H2O2组:以NM培养2h后,加入100μmol/L H2O2和15μmol/L FeCl2继续培养;(4)HM+H2O2组:以HM培养2h后,加入100μmol/L H2O2和15μmol/L FeCl2继续培养。各组处理后每6h更换各自培养液及氧化剂,在12h后停止处理并检测神经元胞内活性氧(ROS)生成的水平、细胞凋亡情况,以及糖元合成激酶3β(GSK-3β)和p-GSK-3β的表达水平。结果与NM相比,HM可降低H2O2氧化损伤后神经元胞内ROS尤其是羟自由基(HO·)的生成(P分子对H2O2氧化损伤的神经元具有保护效应,其机制与降低神经元胞内ROS尤其是HO·的生成、减少神经元凋亡的数量和抑制凋亡信号通路的激活以及促进GSK-3β的磷酸化利于神经元生长有关。

关键词：氧化损伤过氧化氢活性氧氢神经元细胞凋亡糖原合成激酶3β

肌肉游离移植后MAFbx表达及肌肉功能实验研究

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中国修复重建外科杂志 2009年第8期23卷 969-973页

作者：刘安堂于大志张盈帆朱鴷陈欢任安经方超平蔡在龙江华第二军医大学长征医院整形外科上海200003 第二军医大学长征医院生物化学与分子生物学教研室上海200003 第二军医大学长征医院生理学教研室上海200003 第二军医大学长海医院中心实验室

目的观察肌肉游离移植后泛素连接酶(MAFbx)mRNA和蛋白表达的变化,以及肌肉萎缩和肌肉功能的动态恢复情况,并探讨三者之间的关系。方法雌性SPF级SD大鼠36只,体重(250±25)g。随机选取一侧行股薄肌原位游离移植手术,作为实验侧;另一侧不... 详细信息

目的观察肌肉游离移植后泛素连接酶(MAFbx)mRNA和蛋白表达的变化,以及肌肉萎缩和肌肉功能的动态恢复情况,并探讨三者之间的关系。方法雌性SPF级SD大鼠36只,体重(250±25)g。随机选取一侧行股薄肌原位游离移植手术,作为实验侧;另一侧不行手术作为对照侧。术后观察大鼠一般情况,于术后1、2、4、10、15和30周,分别取6只大鼠测量实验侧和对照侧股薄肌肌肉收缩能力、肌湿重维持率,HE染色观察肌纤维横截面积,实时定量PCR检测MAFbx/Atrogin-1mRNA相对表达量,Western blot检测MAFbx蛋白表达。结果36只大鼠全部成活,切口愈合好,实验侧肢体功能无障碍。实验侧肌纤维横截面积、肌肉湿重维持率、肌肉最大单收缩力维持率和肌肉强直收缩力维持率均呈先降低(术后1～4周)后增加(术后4～30周)的趋势。MAFbxmRNA相对表达量术后2周最高,为对照侧7倍;术后15～30周逐渐下降,为对照侧1.1～1.5倍;各时间点实验侧与对照侧比较,差异均有统计学意义(P0.05)。肌湿重维持率、肌纤维横截面积恢复率分别与最大单收缩力维持率和最大强直收缩力维持率的相关系数为0.95、0.75和0.93、0.68(P0.05)、—0.72(P0.05)。结论移植肌肉功能降低与肌肉萎缩密切相关。MAFbxmRNA和蛋白表达增高,尤其在获得神经支配后4～15周仍持续升高,可能是肌肉萎缩引起肌肉功能降低的一个联系点。

关键词：肌肉游离移植泛素蛋白连接酶肌肉萎缩肌肉收缩大鼠

高滴度表达抑制转录因子的重组腺相关病毒的制备

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上海医学 2004年第12期27卷 898-901,F005页

作者：王桂芳杨丹榕修清玉施柯吴丹黎怀星孙树汉第二军医大学长征医院呼吸内科上海200003 第二军医大学医学遗传教研室

目的　获得表达小鼠抑制转录因子ROG(repressorofGATA -3)基因 ;构建表达ROG的重组腺相关病毒载体 ,制备腺相关病毒。方法　设计、合成引物 ,通过逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)从CTLL- 2细胞总RNA中扩增ROG基因 ,测序成功后 ,最终连接于... 详细信息

目的　获得表达小鼠抑制转录因子ROG(repressorofGATA -3)基因 ;构建表达ROG的重组腺相关病毒载体 ,制备腺相关病毒。方法　设计、合成引物 ,通过逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)从CTLL- 2细胞总RNA中扩增ROG基因 ,测序成功后 ,最终连接于pAAV- MCS ,双酶切、PCR鉴定阳性重组质粒 ,并在Hela细胞中表达 ;制备高滴度重组腺相关病毒。结果　成功扩增了小鼠ROG基因 ,构建表达ROG基因的重组腺相关病毒表达载体 ,并成功表达于Hela细胞。结论　本实验构建的小鼠ROG重组腺相关病毒将为哮喘的基因治疗研究奠定物质基础。

关键词：重组腺相关病毒表达载体小鼠基因转录因子 Hela细胞高滴度酶切测序总RNA

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瘢痕成纤维细胞三维培养的实验研究

中华整形烧伤外科杂志 1996年第1期12卷 2-5,3页

作者：杨松林何清濂林子豪王肖鹏第二军医大学长征医院第二军医大学长征医院生物学教研室

在细胞单层培养系统的基础上,将瘢痕组织来源的成纤维细胞培养在胶原凝胶中,形成了瘢痕成纤维细胞的三维培养系统。这一系统使细胞、细胞外基质以及各种调控因素共同构成了一个有机整体,成纤维细胞在这一整体中所表达的生物学行为更加... 详细信息

在细胞单层培养系统的基础上,将瘢痕组织来源的成纤维细胞培养在胶原凝胶中,形成了瘢痕成纤维细胞的三维培养系统。这一系统使细胞、细胞外基质以及各种调控因素共同构成了一个有机整体,成纤维细胞在这一整体中所表达的生物学行为更加接近于它们在活体瘢痕组织中的行为。运用成纤维细胞三维培养系统不仅可以观察和研究细胞的形态、生长增殖和物质代谢,还可以研究细胞在组织收缩方面的细胞生理学功能,是创伤愈合和瘢痕形成研究领域里一个新的和更为科学的方法。

关键词：瘢痕成纤维细胞细胞培养三维培养实验

***标记ICOS-Ab荧光示踪技术评估小鼠心脏移植术后急性排斥反应

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第二军医大学学报 2012年第7期33卷 721-726页

作者：阳揭宇傅宏王全兴刘芳施晓敏郭闻渊宋少华李瑞东傅志仁丁国善第二军医大学长征医院器官移植科上海200003 第二军医大学基础部免疫学教研室上海200433

目的探讨以T细胞活化表达的可诱导共刺激分子(inducible co-stimulatory molecule,ICOS)为基础的荧光示踪技术无创诊断小鼠心脏移植后急性排斥反应的可行性。方法以小鼠颈部异位心脏移植为模型,分为同系移植、同种移植、同种移植+他克莫... 详细信息

目的探讨以T细胞活化表达的可诱导共刺激分子(inducible co-stimulatory molecule,ICOS)为基础的荧光示踪技术无创诊断小鼠心脏移植后急性排斥反应的可行性。方法以小鼠颈部异位心脏移植为模型,分为同系移植、同种移植、同种移植+他克莫司(tacrolimus,FK506)治疗(同种移植治疗组)及同种移植治疗后停药组,分别在移植术后1、3、5、7d,采用荧光染料***标记抗小鼠ICOS抗体(***-ICOS-Ab)经尾静脉注入移植小鼠,用荧光实时显像仪观察移植物荧光图像变化;同时用流式细胞仪检测各组小鼠脾脏T细胞表面ICOS表达,H-E染色分析心脏移植物病理改变。结果同系移植及同种移植治疗组小鼠移植术后各时间点基本不显影;同种移植术后1d,移植物荧光图像无明显变化,但术后3、5、7d荧光逐渐增强,术后7d时荧光强度最明显;同种移植治疗后停药组停药3d移植物荧光强度逐渐增强,停药5、7d后强度明显增强。H-E染色表明:各时间点同系移植及同种移植治疗组小鼠心脏移植物无明显排斥反应;同种移植及同种移植治疗后停药组在术后(或停药后)1d移植物无明显排斥反应,术后3、5、7d排斥反应逐渐出现并加重。流式细胞仪检测显示:术后1d,各组脾脏T细胞表达ICOS水平无明显差异;同系移植及同种移植治疗组在各时间点基本不表达ICOS,但同种移植及同种移植治疗后停药组在术后(或停药后)3、5、7dICOS表达逐渐增加(P<0.05)。结论 ICOS表达强度与心脏移植后排斥反应强度有关,荧光标记的ICOS抗体可能有助于无创评估移植术后急性排斥反应的发生及程度。

关键词：心脏移植可诱导共刺激分子移植物排斥他克莫司荧光抗体技术

乙型肝炎病毒转基因小鼠C57-TgN(adr2.0)SMMU品系的免疫病理研究

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第2期21卷 210-212页

作者：徐军何金訾小渊余宏宇刘惠敏李玉莉胡以平第二军医大学长征医院病理科上海200003 第二军医大学长征医院细胞生物学教研室上海200433 第二军医大学细胞生物学教研室上海200433

　目的: 研究乙型肝炎病毒 (HBV)转基因小鼠C57 TgN(adr2. 0型)SMMU品系的免疫病理学特征, 并与临床人慢性乙肝相比较。方法: 以 20只SPF级肝脏有明显病变的HBV转基因小鼠为研究对象, 用间接免疫荧光法通过流式细胞仪, 分别检测转基因... 详细信息

　目的: 研究乙型肝炎病毒 (HBV)转基因小鼠C57 TgN(adr2. 0型)SMMU品系的免疫病理学特征, 并与临床人慢性乙肝相比较。方法: 以 20只SPF级肝脏有明显病变的HBV转基因小鼠为研究对象, 用间接免疫荧光法通过流式细胞仪, 分别检测转基因小鼠及正常C57BL/6小鼠外周血淋巴细胞表面CD3、CD4和CD8表达的水平, 同时取其肝组织和5例本院病理科存档确诊为慢性中度乙型肝炎患者的肝组织石蜡标本, 用EnVision免疫组化染色法检查肝组织内T细胞亚群的分布。结果: 转基因小鼠外周血淋巴细胞表面CD3、CD4和CD8表达的水平低于正常对照组小鼠; 肝组织内浸润的单个核细胞多数为CD3+ CD4+细胞, 未发现CD57+、CD8+细胞。慢性乙型肝炎患者的肝组织内浸润的单个核细胞主要为CD3+ CD4+或CD3+ CD8+细胞和少量CD57+细胞。结论: C57 TgN(adr2. 0型 )SMMU的HBV转基因小鼠外周血及肝组织中CD的表达与人慢性乙肝患者的外周血及肝组织有明显不同。

关键词：乙型肝炎病毒转基因小鼠免疫病理学 T细胞亚群

B细胞淋巴瘤因子6高表达对大鼠肝细胞凋亡的抑制作用

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第二军医大学学报 2012年第4期33卷 349-354页

作者：潘传涌杨生生傅海龙缪明永焦炳华第二军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室上海200433 第二军医大学长征医院麻醉科上海200003

目的克隆大鼠B细胞淋巴瘤因子6(B-cell lymphoma 6,Bcl6)基因,构建绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-Bcl6,初步探讨大鼠Bcl6转录因子在大鼠肝细胞中的生物学作用。方法首先提取大鼠肝脏总RNA,经反转录和巢式PCR扩增Bcl6编码区的CDS序列后... 详细信息

目的克隆大鼠B细胞淋巴瘤因子6(B-cell lymphoma 6,Bcl6)基因,构建绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-Bcl6,初步探讨大鼠Bcl6转录因子在大鼠肝细胞中的生物学作用。方法首先提取大鼠肝脏总RNA,经反转录和巢式PCR扩增Bcl6编码区的CDS序列后,通过基因重组的方法构建pEGFP-Bcl6重组质粒并鉴定;然后利用脂质体转染法将重组质粒转入大鼠肝细胞BRL-3A中,利用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测其表达;最后应用流式细胞术分析转染融合表达质粒后肝细胞的凋亡,采用MTT法检测肝细胞的增殖情况。结果 PCR法和测序法鉴定重组质粒pEGFP-Bcl6构建成功,实时定量PCR法和蛋白质印迹法鉴定重组质粒瞬时转染成功,流式细胞术证实Bcl6具有抑制肝细胞凋亡的作用,MTT法证实Bcl6具有促进肝细胞增殖的作用。结论成功克隆了大鼠Bcl6基因,构建了Bcl6绿色荧光蛋白表达载体,在大鼠肝细胞中初步证明Bcl6具有促进肝细胞增殖和抑制凋亡的作用。

关键词：肝细胞 Bcl6 细胞增殖细胞凋亡

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TIM家族成员的免疫调控作用研究进展

第二军医大学学报 2010年第5期31卷 537-540页

作者：肖亮董家勇刘芳王全兴丁国善傅志仁第二军医大学长征医院肝移植科上海200003 第二军医大学基础部免疫学教研室上海200433

T细胞免疫球蛋白黏蛋白(T-cell immunoglobulin and mucin,TIM)基因被发现表达于小鼠染色体11B1.1。TIM分子广泛存在于多种免疫细胞特别是抗原呈递细胞表面,可参与天然免疫和获得性免疫;某些TIM分子存在着多种配体,对T细胞具有双重作用;... 详细信息

T细胞免疫球蛋白黏蛋白(T-cell immunoglobulin and mucin,TIM)基因被发现表达于小鼠染色体11B1.1。TIM分子广泛存在于多种免疫细胞特别是抗原呈递细胞表面,可参与天然免疫和获得性免疫;某些TIM分子存在着多种配体,对T细胞具有双重作用;TIM的异常表达与多种疾病发生有关,可能作为药物治疗的新靶点;TIM与调节性T细胞(Tregs)相关性研究为移植免疫耐受诱导提供了新思路。因此,本文就TIM家族成员的免疫调节功能作一综述。

关键词： T细胞免疫球蛋白粘蛋白免疫调控抗原呈递细胞 T淋巴细胞