检索结果-南通市图书馆

人工锌指蛋白(ZFP)的设计及原核表达分析

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生物医学工程学杂志 2008年第3期25卷 662-667页

作者：魏勇应大君侯春丽朱楚洪崔晓萍邢艳郭洪峰第三军医大学解剖学教研室重庆市生物力学与组织工程重点实验室第三军医大学解剖学教研室重庆市生物力学与组织工程重点实验室重庆400038

本实验通过生物信息学手段人工设计了与A20基因启动子区特定靶序列特异作用的锌指蛋白结合域。首先对A20基因启动子进行了结构及功能分析,把经过分析获取的A20启动子区的目标序列提交Scrips研究院的ZF Tools在线服务器,经序列比较,成功... 详细信息

本实验通过生物信息学手段人工设计了与A20基因启动子区特定靶序列特异作用的锌指蛋白结合域。首先对A20基因启动子进行了结构及功能分析,把经过分析获取的A20启动子区的目标序列提交Scrips研究院的ZF Tools在线服务器,经序列比较,成功获取了A20启动子区特定的18bp靶序列及与这一靶序列特异性作用的锌指蛋白的氨基酸序列。进一步利用生物信息学手段对获取的锌指蛋白进行了序列特征分析及结构模建。把锌指蛋白的DNA优化序列重组于原核表达载体pTYB11上,并成功进行了原核表达。研究表明,利用生物信息学手段,人工设计特定的锌指蛋白可行,为进一步设计完整的人工转录因子,进而干预A20基因的表达奠定了基础。

关键词：锌指蛋白启动子生物信息学同源模建原核表达

TGFβ_1基因对血管内皮细胞细胞外基质表达及与基质黏附的影响

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生物医学工程学杂志 2005年第2期22卷 271-274页

作者：朱楚洪应大君糜建红董世武张伟魏勇第三军医大学解剖教研室生物力学与组织工程教育部重点实验室生物力学研究室重庆400038

了解TGFβ1基因对血管内皮细胞表达细胞外基质蛋白及与基质黏附力的影响。用DOTAP脂质体转染p MAMneo TGFβ1于原代培养的脐静脉内皮细胞,经G4 18筛选,TGFβ1表达经免疫荧光鉴定。Western blot确定型胶原、纤黏连蛋白的表达,微管吸吮... 详细信息

了解TGFβ1基因对血管内皮细胞表达细胞外基质蛋白及与基质黏附力的影响。用DOTAP脂质体转染p MAMneo TGFβ1于原代培养的脐静脉内皮细胞,经G4 18筛选,TGFβ1表达经免疫荧光鉴定。Western blot确定型胶原、纤黏连蛋白的表达,微管吸吮系统确定内皮细胞与基质的黏附力。结果表明生理情况下的内皮细胞能表达少量的TGFβ1及胶原、纤黏连蛋白。经G4 18筛选,外源性TGFβ1在血管内皮细胞中稳定表达,能显著提高胶原、纤黏连蛋白纤维的表达及细胞与基质的黏附。说明TGFβ1在血管组织工程中促进内皮细胞的黏附具有一定的应用价值。

关键词：转化生长因子β1 细胞外基质黏附血管内皮细胞黏附力的影响 TGFβ1 β1基因 Westernblot 纤黏连蛋白脐静脉内皮细胞

人血管平滑肌细胞种植构建工程生物血管的实验研究

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生物医学工程学杂志 2005年第4期22卷 695-697页

作者：朱楚洪应大君糜建红第三军医大学解剖教研室生物力学与组织工程教育部重点实验室生物力学研究室重庆400038

了解猪血管去细胞后平滑肌细胞种植情况,为猪血管用于血管组织工程提供资料。取猪颈动脉,生物酶预处理猪血管,在自行设计制作的新型动力性生物反应器中,用原代培养的人平滑肌细胞种植在去细胞血管基质材料内,HE染色及银染检测平滑肌细... 详细信息

了解猪血管去细胞后平滑肌细胞种植情况,为猪血管用于血管组织工程提供资料。取猪颈动脉,生物酶预处理猪血管,在自行设计制作的新型动力性生物反应器中,用原代培养的人平滑肌细胞种植在去细胞血管基质材料内,HE染色及银染检测平滑肌细胞种植效果。结果表明生物酶预处理血管后,HE染色及银染检测可见血管腔平滑肌细胞形态正常,沿血管长轴分布,提示经生物酶预处理的猪血管人平滑肌细胞能成功种植,可望构建实用的组织工程血管。

关键词：猪血管平滑肌细胞组织工程血管平滑肌血管组织工程生物血管细胞种植实验研组织工程血管酶预处理

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A2 0基因在血管内皮细胞的表达研究

解剖学报 2003年第1期34卷 49-52页

作者：朱楚洪应大君第三军医大学解剖学教研室国家教育部生物力学与组织工程重点实验室生物力学室重庆400038

目的　探讨外源性A2 0基因在内皮细胞获得稳定表达的可行性。　方法　将N 末端标记E tag的HA2 0cDNA重组于pCAGGS真核表达载体 ,构建了pCAGGSEHA2 0真核表达重组体。DOTAP脂质体介导的pCAGGSEHA2 0和pMAMneo基因转染 ,经G4 18筛选阳性克... 详细信息

目的　探讨外源性A2 0基因在内皮细胞获得稳定表达的可行性。　方法　将N 末端标记E tag的HA2 0cDNA重组于pCAGGS真核表达载体 ,构建了pCAGGSEHA2 0真核表达重组体。DOTAP脂质体介导的pCAGGSEHA2 0和pMAMneo基因转染 ,经G4 18筛选阳性克隆 ,再用免疫荧光及分子原位杂交检测A2 0基因的表达。　结果　成功构建了pCAGGSEHA2 0真核表达重组体 ,A2 0基因在经G4 18筛选后的内皮细胞中得到有效表达。　结论　在DOTAP脂质体介导下 ,A2

关键词：基因表达转基因 A20基因内皮细胞

血流切应力对动脉内皮细胞凋亡影响的在体研究

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生物医学工程学杂志 2002年第3期19卷 392-394页

作者：陈卫军应大君第三军医大学解剖教研室国家教育部生物力学与组织工程重点实验室生物力学研究室重庆400038

探讨动脉血流受阻后壁切应力 (WSS)变化对动脉内皮细胞 (AEC)凋亡的影响。用 6 0只实验兔建立动脉血流减少模型 ,在术后 0～ 30 d 8个不同时点 ,AEC铺片 Tunel原位末端标记法 ,计量 AEC的凋亡率。结果发现 :在 WSS降低后 1～ 7d,AEC凋... 详细信息

探讨动脉血流受阻后壁切应力 (WSS)变化对动脉内皮细胞 (AEC)凋亡的影响。用 6 0只实验兔建立动脉血流减少模型 ,在术后 0～ 30 d 8个不同时点 ,AEC铺片 Tunel原位末端标记法 ,计量 AEC的凋亡率。结果发现 :在 WSS降低后 1～ 7d,AEC凋亡率显著增高 ,3d达到峰值。随着 WSS的递增 ,术后 14、30 d AEC的凋亡率又恢复至正常对照水平。提示 WSS的变化可显著影响 AEC的凋亡状况 ,其中

关键词：细胞凋亡在体研究切应力内皮细胞 Tunel原位末端标记法动脉血流生物力学

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血流切应力影响动脉内皮形态重建的在体研究

解剖学报 2002年第3期33卷 274-277页

作者：陈卫军应大君第三军医大学解剖学教研室国家教育部生物力学与组织工程重点实验室生物力学研究室重庆400038

目的　探讨动脉血流受阻后壁切应力 (WSS)变化对内皮细胞形态适应性重建的影响。　方法　 6 0只实验兔建立颈总动脉血流减小模型 ,在术后 0～ 30d 8个不同时相点 ,制作血流减小后的颈总动脉铺片 ,应用银染及荧光素标记的鬼笔环肽特染方... 详细信息

目的　探讨动脉血流受阻后壁切应力 (WSS)变化对内皮细胞形态适应性重建的影响。　方法　 6 0只实验兔建立颈总动脉血流减小模型 ,在术后 0～ 30d 8个不同时相点 ,制作血流减小后的颈总动脉铺片 ,应用银染及荧光素标记的鬼笔环肽特染方法 ,显微镜及共聚焦激光扫描显微镜下观察动脉内皮细胞 (AEC)的形状及骨架纤维肌动蛋白 (F actin)的变化 ,计量AEC结构参数。　结果　WSS减小后 12h即导致AEC张力纤维的减少或消失 ,形状由棱形变为椭圆形 ,计量显示 ,AEC形状指数、长宽比分别较正常对照显著增大、减小 (P 部分细胞可见张力纤维 ,AEC形状指数在逐渐减小 ,长宽比增大。　结论　AEC的形态随WSS的动态变化而改变 ,提示WSS是导致AEC形态结构重建的主要因素。

关键词：切应力动脉内皮细胞形态重建

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血流切应力对动脉内皮增殖影响的在体研究

中国病理生理杂志 2002年第2期18卷 128-130页

作者：陈卫军应大君第三军医大学解剖教研室国家教育部生物力学与组织工程重点实验室生物力学研究室重庆400038

目的 :探讨动脉血流受阻后壁切应力 (WSS)变化对动脉内皮细胞 (AEC)增殖的影响。方法 :60只实验兔建立颈总动脉血流减小模型 ,在术后 0至 3 0d 8个不同时点 ,应用增殖细胞核抗原 (PCNA)、5 -溴 - 2 -脱氧尿嘧啶核苷 (BrdU)免疫组化ABC方... 详细信息

目的 :探讨动脉血流受阻后壁切应力 (WSS)变化对动脉内皮细胞 (AEC)增殖的影响。方法 :60只实验兔建立颈总动脉血流减小模型 ,在术后 0至 3 0d 8个不同时点 ,应用增殖细胞核抗原 (PCNA)、5 -溴 - 2 -脱氧尿嘧啶核苷 (BrdU)免疫组化ABC方法 ,计量AEC的增殖率。结果 :结果显示 ,PCNA、BrdU的表达是同步的 ,在WSS显著降低阶段后期 (术后 7d) ,致使AEC增殖率显著增高 ;而在WSS递增阶段 (术后 14d、3 0d) ,AEC的增殖率达到峰值。结论 :WSS的变化可显著影响AEC的增殖活性。

关键词：血液动力学内皮细胞增殖细胞核抗原切应力

生物血管主要组织相容性复合体抗原表达及内皮化的实验研究

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生物医学工程学杂志 2004年第1期21卷 51-53页

作者：朱楚洪应大君糜建红孙建森张伟第三军医大学解剖教研室生物力学与组织工程教育部重点实验室生物力学研究室重庆400038

为了解胰蛋白酶处理前后版纳微型猪近交系血管的主要组织相容性复合体 (Major histocom patibilitycomplex,MHC)表达及去细胞后重新内皮化情况 ,为异种移植及猪血管用于血管组织工程提供资料 ,取猪颈动脉 ,胰蛋白酶预处理猪血管前后 Wes... 详细信息

为了解胰蛋白酶处理前后版纳微型猪近交系血管的主要组织相容性复合体 (Major histocom patibilitycomplex,MHC)表达及去细胞后重新内皮化情况 ,为异种移植及猪血管用于血管组织工程提供资料 ,取猪颈动脉 ,胰蛋白酶预处理猪血管前后 Western Blot法检测 MHC抗原表达 ,在自行设计制作的新型动力性生物反应器中 ,用原代培养的内皮细胞种植在去细胞血管基质材料表面 ,扫描电镜检测内皮化效果。结果表明 ,胰蛋白酶预处理血管后 ,未见 MHC抗原表达 ,扫描电镜可见血管腔内皮细胞形态正常 ,沿血管长轴分布 ,提示经胰蛋白酶预处理的猪血管 MHC抗原大大降低 ,人内皮细胞能成功内皮化。

关键词：生物血管组织相容性复合体抗原抗原表达内皮化胰蛋白酶 MHC 手术

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锌指蛋白基因对内毒素诱导选择素表达的影响

解剖学报 2004年第5期35卷 548-550页

作者：糜建红朱楚洪应大君第三军医大学解剖学教研室生物力学与组织工程学教育部重点实验室生物力学研究室重庆400038

目的　探讨外源性A2 0基因对内毒素诱导的内皮细胞E 选择素表达的影响。　方法　DOTAP脂质体介导的pCNDA3 1EHA2 0基因转染人脐静脉内皮细胞 ,经G4 18筛选阳性克隆 ,免疫荧光检测A2 0基因的表达 ,原位杂交、免疫荧光及Westernblot分别... 详细信息

目的　探讨外源性A2 0基因对内毒素诱导的内皮细胞E 选择素表达的影响。　方法　DOTAP脂质体介导的pCNDA3 1EHA2 0基因转染人脐静脉内皮细胞 ,经G4 18筛选阳性克隆 ,免疫荧光检测A2 0基因的表达 ,原位杂交、免疫荧光及Westernblot分别检测内皮细胞E 选择素的表达。　结果　A2 0基因在经G4 18筛选后的内皮细胞中有高表达 ;内毒素能诱导人内皮细胞E 选择素表达 ;A2 0基因能抑制内毒素诱导的内皮细胞 90 %的E 选择素表达 ,两者间相差显著 (P <0 0 5 )。　结论　A2 0基因能够显著抑制内毒素诱导的内皮细胞活化 ,有助于创伤的治疗。

关键词： A20基因 E-选择素内毒素