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肝素酶基因修饰的树突状细胞疫苗对胃癌细胞的免疫效应研究

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中华医学杂志 2006年第44期86卷 3122-3127页

作者：蔡永国房殿春陈陵王东旭罗元辉汤旭东陈婷杨仕明第三军医大学西南医院全军消化病研究所重庆400038

目的研究肝素酶基因修饰的树突状细胞(DC)疫苗对胃癌细胞的免疫效应,探讨肝素酶疫苗在胃癌主动免疫治疗中的可行性。方法将含有肝素酶全长cDNA的重组肝素酶腺病毒感染人类白细胞抗原A2(HLA-A2)阳性健康志愿者外周血单个核细胞来源的DC,... 详细信息

目的研究肝素酶基因修饰的树突状细胞(DC)疫苗对胃癌细胞的免疫效应,探讨肝素酶疫苗在胃癌主动免疫治疗中的可行性。方法将含有肝素酶全长cDNA的重组肝素酶腺病毒感染人类白细胞抗原A2(HLA-A2)阳性健康志愿者外周血单个核细胞来源的DC,制备肝素酶基因修饰的DC疫苗,刺激同一来源的淋巴细胞,使其活化为肝素酶特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL),采用标准51Cr释放试验验证其对KATO-Ⅲ和SGC-7901胃癌细胞的体外免疫效应,肝素酶特异性的CTL与不同靶细胞共孵育后干扰素(IFN)-γ的释放采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法。结果经肝素酶重组腺病毒感染后该DC中肝素酶蛋白质的表达明显升高。肝素酶特异性的CTL在各效/靶比时对HLA-A2及肝素酶均阳性的KATO-Ⅲ胃癌细胞都有明显的免疫杀伤活性;相反,对肝素酶阳性但HLA-A2阴性的SGC-7901胃癌细胞不具有杀伤效应,即使在最高效/靶比时,其杀伤活性亦仅为11·1%±4·6%;进一步研究发现肝素酶特异性CTL对自体淋巴细胞亦不具有免疫杀伤作用,在最高效/靶比时,其杀伤活性为11·4%±7·9%。同时研究还发现,肝素酶修饰的DC刺激的效应细胞与KATO-Ⅲ共孵育后,其IFN-γ的表达明显高于空病毒修饰组以及IL-2刺激组(280pg/ml±24pg/mlvs121pg/ml±19pg/ml和60pg/ml±11pg/ml,P所检测的IFN-γ在各组间差异无统计学意义(均P>0·05)。结论肝素酶基因修饰的DC疫苗可以诱发特异性CTL,对HLA相匹配且肝素酶阳性的胃癌细胞具有良好的免疫杀伤活性,而对自体淋巴细胞不具有免疫杀伤作用,是一种安全有效的肿瘤免疫基因治疗的靶位。

关键词：肝素裂合酶癌症疫苗胃肿瘤免疫疗法

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复合皮的制作与临床应用

中国修复重建外科杂志 1997年第2期11卷 100-102页

作者：王旭王甲汉吴军赵阳兵赵雄飞第三军医大学西南医院烧伤研究所

为了寻找理想的烧伤创面覆盖物，利用新鲜尸体制成大的真皮组织，经乙酸提取胶原，ＮａＣｌ盐析纯化，冷冻干燥成固体胶原膜。该膜由胶原纤维构成立体网架，孔径在１８．４～７０μｍ之间。将异体表皮细胞和成纤维细胞分别种植在膜的两... 详细信息

为了寻找理想的烧伤创面覆盖物，利用新鲜尸体制成大的真皮组织，经乙酸提取胶原，ＮａＣｌ盐析纯化，冷冻干燥成固体胶原膜。该膜由胶原纤维构成立体网架，孔径在１８．４～７０μｍ之间。将异体表皮细胞和成纤维细胞分别种植在膜的两面，放入１０％ＣＯ２培养箱内常规培养后，移植于１０例深度烧伤创面，成活７例，随访一年效果满意。组织学检查证实，该复合皮具有促进表皮细胞贴附与生长，利于创面血管及非炎性结缔组织修复之特点。

关键词：复合皮烧伤创面修复

高浓度的糖刺激人肾小球内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白-1的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第4期20卷 450-453页

作者：丁涵露张建国朱妙珍罗向东梁光萍第三军医大学大坪医院野战外科研究所肾内科重庆400042 第三军医大学西南医院烧伤研究所重庆400038

目的 :探讨高浓度的糖对培养的人肾小球内皮细胞 (HUGEC)表达单核细胞趋化蛋白 1(MCP 1)的影响 ,以及HUGEC的条件培养基对单核细胞 (MC)的趋化作用及抗MCP 1抗体对MC迁移的影响。方法 :采用原位杂交技术和细胞ELISA法 ,观察MCP 1的表... 详细信息

目的 :探讨高浓度的糖对培养的人肾小球内皮细胞 (HUGEC)表达单核细胞趋化蛋白 1(MCP 1)的影响 ,以及HUGEC的条件培养基对单核细胞 (MC)的趋化作用及抗MCP 1抗体对MC迁移的影响。方法 :采用原位杂交技术和细胞ELISA法 ,观察MCP 1的表达 ;用改良的Boyden小室微孔滤膜法 ,测定高浓度的糖刺激HUGEC后的条件培养基 ,对MC的趋化作用 ,以及抗MCP 1抗体对MC迁移的影响。结果 :(1)在低浓度的糖(含 5 .5mmol/LD 葡萄糖 )条件下培养的HUGECMCP 1mRNA呈弱表达。高浓度的糖 (含 2 5mmol/LD 葡萄糖 )刺激后 ,8h即出现MCP 1表达增强 ,于 16h达高峰。(2 )高浓度的糖刺激HUGEC后的条件培养基 ,对MC具有明显的趋化作用 ;抗MCP 1抗体可抑制其作用。结论 :在高浓度的糖诱导下 ,人HUGECMCP 1的表达增强 ,其条件培养基对MC具有趋化作用 ,从而可能招引单核细胞迁入内皮下间隙。

关键词：肾小球内皮细胞单核细胞单核细胞趋化蛋白-1

诺帝对人恶性胶质瘤细胞甲酰化肽受体表达及其活化后促增殖和血管生成因子产生的影响

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中华医学杂志 2007年第7期87卷 479-484页

作者：姚小红平轶芳卞修武陈剑鸿王清良蒋雪峰第三军医大学西南医院病理学研究所重庆400038

目的观测自行研制的脂氧化酶抑制剂诺帝(Nordy)对人恶性胶质瘤细胞系 U87中甲酰化肽受体(FPR)的表达和激活后功能活性的影响。方法采用间接免疫荧光标记、激光共聚焦扫描显微术观测诺帝对 U87系人恶性胶质瘤细胞 FPR 表达的影响;FPR 激... 详细信息

目的观测自行研制的脂氧化酶抑制剂诺帝(Nordy)对人恶性胶质瘤细胞系 U87中甲酰化肽受体(FPR)的表达和激活后功能活性的影响。方法采用间接免疫荧光标记、激光共聚焦扫描显微术观测诺帝对 U87系人恶性胶质瘤细胞 FPR 表达的影响;FPR 激动剂 N-甲酰化的甲硫酰-亮氨酸-苯丙氨酰胺(fMLF)激活 FPR 后加入诺帝,实验分为以下3组:①对照组,②fMLF 刺激组,③诺帝处理组,分别采用四甲基偶氮唑盐(MTY)法、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和双抗夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测诺帝对 FPR 活化后引起的细胞增殖及细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)和白细胞介素8(IL-8)的作用。结果诺帝(100 μmol/L)明显抑制 U87细胞 FPR 受体的表达,同时对FPR 激动剂 fMLF(100 nmol/L)诱导的 U87细胞增殖和血管生成因子 VEGF、IL-8 mRNA 表达和蛋白的分泌具有明显的抑制作用。对照组 U87细胞分泌一定量的 VEGF 和 IL-8,分别为(4.14±0.28)ng/ml 和(4.03±0.59)ng/ml;fMLF 作用于 U87细胞36 h 后,VEGF 和 IL-8蛋白水平均显著高于对照组(P<0.05),分别为(6.46±0.33)ng/ml 和(7.54±0.73)ng/ml;诺帝作用于 U87细胞12 h后加入 fMLF 共同处理36 h 后,VEGF 和 IL-8蛋白水平分别为(3.59±0.33)ng/ml 和(3.13±0.48)ng/ml,均显著低于对照组(P<0.05)。结论诺帝对人恶性胶质瘤细胞的 FPR 表达和该受体活化后的促瘤细胞增殖及促血管生成因子 VEGF、IL-8 mRNA 表达和蛋白的分泌具有抑制作用,提示诺帝具有抑制肿瘤生长和抗血管生成的作用。

关键词：神经胶质瘤脂氧化酶抑制剂白细胞介素8 内皮,血管内皮生长因子

人胎肝非实质间充质干细胞体外诱导分化为类肝细胞

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中华肝脏病杂志 2007年第3期15卷 164-169页

作者：何念海赵文利王宇明 400038 重庆第三军医大学西南医院全军感染病研究所

目的体外诱导人胎肝非实质间充质干细胞（NPMSCs）分化为类肝细胞，对类肝细胞进行分子生物学及功能鉴定。方法采用体外细胞培养技术，分离培养人胎肝NPMSCs，在1％基质胶作基质，2．5mmol／L氮胞苷预处理10～12h，肝细胞生长因子10μg... 详细信息

目的体外诱导人胎肝非实质间充质干细胞（NPMSCs）分化为类肝细胞，对类肝细胞进行分子生物学及功能鉴定。方法采用体外细胞培养技术，分离培养人胎肝NPMSCs，在1％基质胶作基质，2．5mmol／L氮胞苷预处理10～12h，肝细胞生长因子10μg／L加成纤维细胞生长因子410μg／L加肝细胞生长培养基中诱导。用显微摄像和四甲基偶氮唑盐研究细胞增殖及生长特征，用流式细胞仪、免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应鉴定细胞表型。采用酶联免疫吸附法检测培养上清液中人Alb水平，过碘酸希夫试验进行糖原染色。结果从人胎肝获得贴壁细胞种植后生长分裂良好，连续传10代后，每份人胎肝NPMSCs可扩增达100个细胞。NPMSCs表型为CD166阳性，CD34阴性。在添加成纤维细胞生长因子4和肝细胞生长因子的基质胶上诱导培养的NPMSCs在21～28d时，形态由长梭形变为三角形、多角形或类圆形。细胞转圆率为40％，双核细胞比率5％。免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应检测显示未诱导培养的NPMSCs中，有较少的细胞表达甲胎蛋白及其mRNA，未见其他肝脏特有的转录因子或者细胞质蛋白标志。诱导早期可见较多细胞表达GATA4、甲胎蛋白和CK18及其mRNA，至诱导后期表达下降，而Alb、CK18、谷胱甘肽S转移酶-π和肝细胞核因子1α表达逐渐上升。Alb、CK18阳性细胞比例达60％。未诱导分化的NPMSCs不分泌Alb，诱导分化的NPMSCs以时间依赖方式产生Alb。NPMSCs诱导14d时首先见到部分细胞出现红紫色染色的糖原积聚物，28d后阳性染色细胞数量增多。结论在本实验诱导条件下可获得在复制及翻译各环节肝细胞标志阳性的类肝细胞。诱导后NPMSCs已具备肝细胞特有的功能性特征。

关键词：干细胞细胞分化类肝细胞

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地雷爆炸伤动物实验模型的建立

解放军医学杂志 2014年第1期39卷 61-64页

作者：张森韩庚奋叶广函赖西南王爱民王丽丽第三军医大学大坪医院骨科重庆400042 第三军医大学大坪医院野战外科研究所

目的建立一种地雷爆炸伤的动物模型。方法健康新西兰大白兔15只,体重1.9～2.4kg,采用点爆源模拟反步兵地雷,远距离电引爆,造成实验兔直立状态下单后肢触雷爆炸伤,记录伤前及伤后12h内不同时间点(5、15、30、45min及1、2、3、6、9、12h)... 详细信息

目的建立一种地雷爆炸伤的动物模型。方法健康新西兰大白兔15只,体重1.9～2.4kg,采用点爆源模拟反步兵地雷,远距离电引爆,造成实验兔直立状态下单后肢触雷爆炸伤,记录伤前及伤后12h内不同时间点(5、15、30、45min及1、2、3、6、9、12h)的生命体征。死亡动物立即解剖,存活动物伤后6h和12h活杀解剖,记录伤肢局部组织和远处脏器大体及显微病理损伤情况。随机数字表法产生15个成人随机体重,模拟M14反步兵地雷(爆炸当量约为29g TNT),比较实验动物与随机成人当量体重比的差异。结果实验兔致伤前后各时间点股动脉压变化不明显,伤肢小腿局部组织大体上呈现为扫把样改变,分区及病理表现符合典型地雷爆炸致肢体损伤特点,远处脏器出现不同程度的损伤,主要脏器损伤情况符合相关文献报道情况。实验动物的当量体重比(0.50±0.04g TNT/kg)与随机成人(0.51±0.05g TNT/kg)比较差异无统计学意义。结论该动物模型能较好地模拟地雷爆炸致伤效果,可用于地雷爆炸伤研究。

关键词：地雷爆炸伤模型动物

特普他林对大鼠烟雾吸入伤后肺泡液体清除功能的影响

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中国药理学通报 2000年第1期16卷 67-69页

作者：陶军杨宗城刘志远何保斌黎鳌第三军医大学新桥医院麻醉科重庆400037 第三军医大学西南医院烧伤研究所重庆400038

目的　观察特普他林对大鼠烟雾吸入伤后肺泡上皮液体清除能力变化的影响。方法　采用大鼠烟雾吸入性损伤模型。伤后 2 4h经气管滴注特普他林 ( 10 -4 mol·L-1)溶液 5ml·kg-1;1h后检测肺泡内液体清除率 (ALC)、总肺水量 (TLW )、肺血... 详细信息

目的　观察特普他林对大鼠烟雾吸入伤后肺泡上皮液体清除能力变化的影响。方法　采用大鼠烟雾吸入性损伤模型。伤后 2 4h经气管滴注特普他林 ( 10 -4 mol·L-1)溶液 5ml·kg-1;1h后检测肺泡内液体清除率 (ALC)、总肺水量 (TLW )、肺血管外肺水量 (EVLW)和动脉血气指标。结果　大鼠伤后 2 4hALC降低 46 8% ,TLW和EVLW明显增加 ,出现严重的低氧血症。特普他林组ALC增高 5 7 6 % ,TLW和EVLW显著减少 ,低氧血症明显改善。钠转运特异性抑制剂阿咪洛利或哇巴因能部分抑制特普他林刺激肺泡内液体清除的作用。结论　特普他林通过上调钠主动转运机能 ,促进肺水肿液的吸收 ,从而改善换气功能。

关键词：烟雾吸入烧伤肺水肿特普他林药物疗法

Roles of NHE-1 in the proliferation and apoptosis of pulmonary artery smooth muscle cells in rats

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Chinese Medical Journal 2002年第1期115卷 107-109,152-153页

作者：姚伟钱桂生杨晓静第三军医大学新桥医院呼吸研究所重庆400037

Objective To evaluate the roles of Na +/H + exchanger-1 (NHE-1)in the proliferation and apoptosis of pulmonary artery smooth muscle cells in rats. Methods Twenty Wistar rats were randomized into control group and 3-week hypoxic group. Intracellular pH (pHi) of the smooth muscle was determined with fluorescence measurement of the pH-sensitive dye BCECF-AM, and the expression of NHE-1 mRNA was detected by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). Primary culture of pulmonary artery smooth muscle cells in vitro was performed. In situ cell death detection kit (TUNEL) was used for studying the effect of specific NHE-1 inhibitor-dimethyl amiloride (DMA) on the apoptosis of muscle cells which had intracellular acidification. Results pHi value and NHE-1 mRNA expression of pulmonary artery smooth muscle cells were significantly higher in the hypoxic group than in the control group (P<0.01, P<0.001). DMA elevated the apoptotic ratio remarkably. The effect was enhanced when DMA concentration increased and the time *** With the function of adjusting pHi, NHE-1 may play an important role in the proliferation and apoptosis of pulmonary artery smooth muscle cells.

关键词： sodium hydrogen exchanger · pulmonary hypertension · vascular smooth muscle · proliferation · apoptosis

帕金森病轻度认知功能障碍:基于体素的全脑灰质形态学研究

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中国医学影像技术 2013年第1期29卷 24-29页

作者：胡晓飞张久权张艳玲吴娅陈利华王健第三军医大学西南医院放射科重庆400038 第三军医大学西南医院神经内科重庆400038

目的采用基于体素的形态学测量方法,分析帕金森病(PD)伴轻度认知功能损害(MCI)患者全脑灰质结构的变化。方法利用3.0T MR仪对22例伴MCI的PD患者(PD伴MCI组)、21例认知功能正常的PD患者(单纯PD组)及20名健康对照(NC组)进行T1W扫描。采用S... 详细信息

目的采用基于体素的形态学测量方法,分析帕金森病(PD)伴轻度认知功能损害(MCI)患者全脑灰质结构的变化。方法利用3.0T MR仪对22例伴MCI的PD患者(PD伴MCI组)、21例认知功能正常的PD患者(单纯PD组)及20名健康对照(NC组)进行T1W扫描。采用SPM8为基础的VBM8工具箱进行数据处理。结果与NC组比较,PD伴MCI组脑灰质萎缩见于双侧额叶、左侧颞叶、双侧枕叶、双侧小脑、左侧后扣带回及左侧海马区域;单纯PD组脑灰质萎缩集中出现于左侧额叶、颞叶。与单纯PD组相比,PD伴MCI组左侧颞中回和海马旁回出现灰质萎缩。结论伴有MCI的PD患者的脑灰质结构改变范围比不伴MCI者更广,提示PD患者认知功能改变存在脑形态结构水平的异常。

关键词：帕金森病认知障碍基于体素的形态学分析