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去甲肾上腺素通过PI3K/Akt信号通路上调Sox4表达促进肝癌细胞增殖

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第三军医大学学报 2017年第9期39卷 821-826页

作者：杨大鹏宦洪波张亮温旭东吴黎雳夏锋第三军医大学西南医院全军肝胆外科研究所重庆400038

目的探讨去甲肾上腺素对肝癌细胞自我更新能力的影响及其分子机制。方法实时荧光定量PCR和Western blot检测去甲肾上腺素对肝癌细胞(Huh7、PLC)中CD133表达水平的影响;肿瘤细胞球形成实验以及克隆形成实验检测去甲肾上腺素和哌唑嗪对肝... 详细信息

目的探讨去甲肾上腺素对肝癌细胞自我更新能力的影响及其分子机制。方法实时荧光定量PCR和Western blot检测去甲肾上腺素对肝癌细胞(Huh7、PLC)中CD133表达水平的影响;肿瘤细胞球形成实验以及克隆形成实验检测去甲肾上腺素和哌唑嗪对肝癌细胞自我更新能力的作用;实时荧光定量PCR和Western blot检测去甲肾上腺素(10μmol/L)和哌唑嗪(5μmol/L)对肝癌细胞中干性相关基因表达的影响,并检测相关的信号通路。结果去甲肾上腺素使Huh7和PLC肝癌细胞中的CD133表达升高;去甲肾上腺素处理Huh7和PLC肝癌细胞后的成球率较对照组明显上升,哌唑嗪处理后明显降低(P<0.05);在克隆形成实验中,去甲肾上腺素处理Huh7和PLC肝癌细胞的后,克隆形成率高于哌唑嗪组和对照组(P<0.05);与对照组和哌唑嗪组相比,去甲肾上腺素组中Sox4基因表达明显升高,同时p-Akt表达相较于哌唑嗪和对照组相比也明显上调(P<0.05)。结论去甲肾上腺素激动肝癌细胞中α肾上腺素能受体,通过激活PI3K/Akt信号通路上调肝癌细胞中Sox4基因表达,从而提高肝癌细胞自我更新的能力。

关键词：肝癌细胞增殖去甲肾上腺素 Sox4 自我更新

胰十二指肠切除术后胰瘘的高危因素及胰体部平扫CT值对其预测价值的分析

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第三军医大学学报 2017年第11期39卷 1177-1182页

作者：杨美文邓永黄涛张雷达第三军医大学西南医院全军肝胆外科研究所重庆400038

目的探讨胰十二指肠切除术(pancreatoduodenectomy,PD)后胰瘘的高危因素及术前胰腺体部拟切除断面平扫期CT值(以下简称胰体部CT值)对PD术后胰瘘发生风险的预测价值。方法回顾性分析西南医院肝胆外科2013年1月至2015年12月期间收治的408... 详细信息

目的探讨胰十二指肠切除术(pancreatoduodenectomy,PD)后胰瘘的高危因素及术前胰腺体部拟切除断面平扫期CT值(以下简称胰体部CT值)对PD术后胰瘘发生风险的预测价值。方法回顾性分析西南医院肝胆外科2013年1月至2015年12月期间收治的408例住院行胰十二指肠切除术患者的完整病历资料,单因素分析采用Pearson卡方检验,多因素分析采用二分类Logistic回归分析,胰体部CT值与胰瘘之间的相关性采用简单线性相关分析,其对PD术后胰瘘的预测价值采用受试者工作特征(ROC)曲线下面积。结果 408例患者共发生胰瘘123例(30.14%),单因素分析显示BMI、术前γ-谷氨酰转肽酶、胰管直径、胰体部CT值、手术时间、胰腺质地软硬(术中判断)是PD术后胰瘘的危险因素;多因素分析显示BMI≥25 kg/m^2、胰管直径≤3 mm、胰体部CT值<40 Hu、胰腺质地软(术中判断)软为PD术后胰瘘发生的独立高危因素。不同胰瘘严重程度分级患者的胰体部CT值相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。胰瘘严重程度与胰体部CT值呈负相关。胰体部CT值ROC曲线下面积为0.714,对PD术后胰瘘具有中等预测价值。结论 BMI≥25 kg/m^2、胰管直径≤3 mm、胰体部CT值<40 Hu、胰腺质地软硬(术中判断)软为PD术后胰瘘发生的独立高危因素,胰体部CT值对PD术后胰瘘具有中等预测价值,可指导围手术期治疗方案。

关键词：胰十二指肠切除术胰瘘高危因素胰体部CT值

毒蕈碱型胆碱能受体M3调控肝癌细胞侵袭转移的研究

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第三军医大学学报 2017年第6期39卷 509-514页

作者：张亮宦宏波温旭东杨大鹏吴黎雳夏锋第三军医大学西南医院全军肝胆外科研究所重庆400038

目的探讨毒蕈碱型胆碱能受体M3(muscarinic cholinergic receptors 3,ChRM3)活化对人肝癌细胞侵袭、转移能力的影响及其分子机制。方法 Western blot检测两种人肝癌细胞株Hep G2和SMMC-7721中ChRM3受体的表达;采用氯贝胆碱(Beth)及达菲... 详细信息

目的探讨毒蕈碱型胆碱能受体M3(muscarinic cholinergic receptors 3,ChRM3)活化对人肝癌细胞侵袭、转移能力的影响及其分子机制。方法 Western blot检测两种人肝癌细胞株Hep G2和SMMC-7721中ChRM3受体的表达;采用氯贝胆碱(Beth)及达菲那新(UK88525)处理肝癌Hep G2和SMMC-7721细胞,分为空白对照组、Beth组、Beth+UK88525组、UK88525组,经处理48 h后,Transwell实验检测两种肝癌细胞经不同分组处理后侵袭、迁移能力的变化,Western blot检测各组细胞中上皮-间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)标志蛋白的表达及下游信号通路PI3K/Akt的变化;采用shRNA干扰质粒经Lipofectamine 2000TM转染肝癌细胞Hep G2以沉默ChRM3,分为空白对照组、Beth组、Beth+sh ChRM3组、sh ChRM3组,分别检测细胞的侵袭、转移能力及EMT、下游PI3K/Akt的改变。结果 Hep G2和SMMC-7721两种肝癌细胞中均有ChRM3受体的表达;Transwell实验显示:Beth单独处理组对肝癌细胞的迁移和侵袭有明显的促进作用,而UK88525能够抑制Beth对肝癌细胞迁移侵袭能力的促进作用(P<0.05);Western blot结果显示:Beth单独处理组能够上调EMT标志蛋白N-Cadherin和Vimentin,下调E-Cadherin的表达,UK88525处理后能够明显抑制Beth促进Hep G2细胞EMT的过程(解除Beth对Hep G2细胞EMT的促进过程),同时也能够抑制PI3K/Akt的活化(P<0.05);干扰质粒沉默ChRM3受体同样能够抑制Beth促肝癌细胞迁移、侵袭的作用,并且抑制Beth诱导的EMT和下游PI3K/Akt的活化(P<0.05)。结论 ChRM3活化能够通过PI3K/Akt信号通路促进肝癌细胞的侵袭和转移。

关键词：肝细胞癌毒蕈碱型胆碱能受体M3 侵袭转移上皮-间质转化

LncRNA RNU12上调热休克蛋白72抑制重组人TRAIL蛋白诱导肝癌细胞凋亡

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第三军医大学学报 2017年第9期39卷 833-839页

作者：陈施翰邓青松蒋家云邹孟达谭运华马宽生第三军医大学西南医院全军肝胆外科研究所重庆400038

目的探讨46~50℃时抑制重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)蛋白促肝癌细胞凋亡相关分子机制。方法建立肝癌细胞亚致死性热温度模型,在不同温度(43、46、50℃)条件下... 详细信息

目的探讨46~50℃时抑制重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)蛋白促肝癌细胞凋亡相关分子机制。方法建立肝癌细胞亚致死性热温度模型,在不同温度(43、46、50℃)条件下分别处理10 min,Annexin-V/PI染色检测重组人TRAIL蛋白对肝癌细胞凋亡率的影响,以常温37℃作为对照组。根据前期肝癌细胞Agilent Human lnc RNA+mRNA Array V4.0芯片表达谱数据,选定50℃时特异性高表达的LncRNA RNU12作为研究对象。构建LncRNA RNU12-sh RNA慢病毒干扰载体,转染MHCC97-H细胞。qRT-PCR及Western blot检测感染前后不同温度组中热休克蛋白72(heat shock protein 72,HSP72)mRNA和蛋白的表达变化。利用流式细胞技术检测LncRNA RNU12慢病毒干扰载体对TRAIL蛋白诱导细胞凋亡的影响。采用荧光原位杂交(FISH)技术检测LncRNA RNU12亚细胞定位情况。结果温度在43℃时促进重组人TRAIL蛋白诱导肝癌细胞凋亡的功能,46~50℃时抑制重组人TRAIL蛋白诱导肝癌细胞凋亡的功能。HSP72 mRNA在4个温度组中的表达均较干扰前明显降低(P<0.01);在蛋白水平,37、46、50℃组较干扰前显著降低(P<0.05)。转染后,46、50℃条件下TRAIL蛋白诱导MHCC97-H细胞凋亡分别上升7.36%、8.84%(P<0.01)。利用RNA-FISH技术确定50℃时LncRNA RNU12主要在MHCC97-H细胞细胞核中表达。结论 LncRNA RNU12在转录水平上调HSP72表达可能是46~50℃时抑制重组人TRAIL蛋白促肝癌细胞凋亡分子机制之一。

关键词：肝癌细胞凋亡长链非编码RNA 亚致死性热温度 HSP72

胆管癌MICA/B的异常表达对NK细胞杀伤作用的影响

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第三军医大学学报 2017年第10期39卷 977-982页

作者：邓翔田峰赵鑫王曙光第三军医大学西南医院全军肝胆外科研究所重庆400038

目的研究胆管癌中主要组织相容复合体Ⅰ类分子相关蛋白A/B(majer histocompatibility cemplex classⅠmolecule associated protein A/B,MICA/B)的表达改变对胆管癌细胞逃逸NK细胞杀伤的影响。方法收集89例胆管癌组织标本,采用免疫组织... 详细信息

目的研究胆管癌中主要组织相容复合体Ⅰ类分子相关蛋白A/B(majer histocompatibility cemplex classⅠmolecule associated protein A/B,MICA/B)的表达改变对胆管癌细胞逃逸NK细胞杀伤的影响。方法收集89例胆管癌组织标本,采用免疫组织化学染色检测MICA/B的表达,分析其与临床病理特征、预后的相关性。体外胆管癌细胞与NK细胞(自然杀伤细胞)共培养,通过转染干预癌细胞中MICA/B的表达,观察NK细胞的杀伤作用。结果免疫组化提示MICA在61.8%(55/89)胆管癌组织中呈低表达,而57.3%(51/89)胆管癌中MICB呈低表达。MICA、MICB低表达分别与胆管癌的分化程度(P=0.019,P=0.024)、T分级(P=0.000,P=0.026)、淋巴结转移(P=0.028,P=0.017),以及TNM分期(P=0.007,P=0.008)显著相关,提示MICA/B低表达与肿瘤侵袭转移特性显著相关。Kaplan-Meier分析提示MICA/B的表达水平与无瘤生存时间(P=0.002 6,P=0.005)、总生存时间(P=0.000 7,P=0.000 3)显著相关。体外胆管癌细胞与NK细胞共培养,癌细胞中MICA/B过表达显著增加NK细胞对癌细胞的杀伤作用,而干扰MICA/B的表达可以减弱NK细胞的杀伤作用。结论胆管癌中MICA/B低表达与侵袭转移病理特性显著相关,胆管癌细胞可通过下调MICA/B逃逸NK细胞的杀伤。

关键词：胆管癌主要组织相容复合体Ⅰ类分子相关蛋白A/B 自然杀伤细胞

早期拔除腹腔引流管减少胰十二指肠切除术后胰瘘的回顾性研究

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第三军医大学学报 2017年第10期39卷 1019-1024页

作者：黄涛杨美文张雷达第三军医大学西南医院全军肝胆外科研究所重庆400038

目的探讨胰十二指肠切除手术(pancreaticoduodenectomy,PD)后早期拔除腹腔引流管能否减少术后胰瘘发生。方法回顾性分析西南医院肝胆外科2013年1月至2015年10月收治并依据纳入排除标准归入研究对象的305例PD手术患者的临床资料,按术后... 详细信息

目的探讨胰十二指肠切除手术(pancreaticoduodenectomy,PD)后早期拔除腹腔引流管能否减少术后胰瘘发生。方法回顾性分析西南医院肝胆外科2013年1月至2015年10月收治并依据纳入排除标准归入研究对象的305例PD手术患者的临床资料,按术后腹腔引流管拔除时间分为:A组,术后≤5 d拔除;B组,术后>5 d拔除。比较两组患者术后并发症等发生情况,对胰瘘发生的相关因素进行单因素和多因素分析。结果术后胰瘘(3.1%vs 12.1%)、腹腔感染(9.2%vs 20.3%)以及总并发症(24.5%vs 42.0%)发生率A组均显著低于B组(P5 d,P5 d为胰瘘发生的独立危险因素(OR=4.424,2.369,3.874,5.028,P<0.05)。结论对于PD术后早期无胰瘘发生的患者,术后5 d内拔除腹腔引流管能够显著减少术后胰瘘、腹腔感染等并发症,延长腹腔引流管留置时间会增加术后胰瘘发生率。

关键词：胰十二指肠切除手术胰瘘腹腔引流

经头侧入路腹腔镜解剖性左半肝切除术7例分析

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中国实用外科杂志 2017年第5期37卷 552-554页

作者：李建伟郑树国王小军曹利第三军医大学西南医院全军肝胆外科研究所重庆400038

目的探讨经头侧入路腹腔镜解剖性左半肝切除术的可行性。方法回顾性分析2014年1月至2016年12月第三军医大学西南医院全军肝胆外科研究所7例行经头侧入路腹腔镜解剖性左半肝切除术病人的临床资料。结果 7例病人中男性3例,女性4例;年龄47... 详细信息

目的探讨经头侧入路腹腔镜解剖性左半肝切除术的可行性。方法回顾性分析2014年1月至2016年12月第三军医大学西南医院全军肝胆外科研究所7例行经头侧入路腹腔镜解剖性左半肝切除术病人的临床资料。结果 7例病人中男性3例,女性4例;年龄47~72岁;术前诊断左肝内胆管结石5例,左肝肝细胞癌2例。7例病人均顺利完成手术。手术时间180(160~230)min,术中失血量200(100~350)mL。术后无胆漏、出血等并发症发生,1例病人出现胃排空障碍,予以保守治疗治愈出院。术后住院时间4~26 d。结论经头侧入路进行腹腔镜解剖性左半肝切除安全、可行。

关键词：头侧入路腹腔镜左半肝切除

中度肝外胆管扩张且Oddi括约肌功能正常的肝胆管结石病的两种术式的疗效对比分析

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第三军医大学学报 2017年第12期39卷 1275-1279页

作者：祝宇明田峰陈志宇何宇李智华王曙光别平李大江第三军医大学西南医院全军肝胆外科研究所重庆400038

目的对比肝外胆管切开取石术与胆肠吻合术(Roux-en-Y吻合术)治疗中度肝外胆管扩张合并Oddi括约肌功能正常的肝胆管结石病的疗效差异。方法回顾性分析我院2008-2013年收治的188例中度肝外胆管扩张合并Oddi括约肌功能正常的肝胆管结石病... 详细信息

目的对比肝外胆管切开取石术与胆肠吻合术(Roux-en-Y吻合术)治疗中度肝外胆管扩张合并Oddi括约肌功能正常的肝胆管结石病的疗效差异。方法回顾性分析我院2008-2013年收治的188例中度肝外胆管扩张合并Oddi括约肌功能正常的肝胆管结石病并行手术治疗的患者病例,96例患者行肝外胆管切开取石术(胆管切开取石术组),92例行胆肠Roux-en-Y吻合术(胆肠吻合术组)。患者均经过3年以上的随访,观察近期疗效(手术并发症)和远期预后(胆管炎、胆管狭窄、结石复发、癌变)情况。结果两组患者术前临床病理特征差异无统计学意义。胆管切开取石术组的手术时间、住院时间优于胆肠吻合术组(P肝胆管结石病,肝外胆管切开取石术在胆管积气、反流性胆管炎、胆管狭窄发生率等方面优于Roux-en-Y吻合术。

关键词：胆结石肝外胆管切开取石术 Roux—en-Y吻合术

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腹腔镜肝切除术肝静脉系统出血处理策略

中国实用外科杂志 2017年第5期37卷 485-489页

作者：郑树国第三军医大学西南医院全军肝胆外科研究所重庆400038

肝静脉系统出血是腹腔镜肝切除术面临的难题之一,其处理重在预防,通过精确术前影像学评估和精细规范的术中镜下操作主动防范出血,尽可能避免出血后的被动处理。强化麻醉管理,采用控制性低中心静脉压技术,加强气腹条件下对CO_2气体栓塞... 详细信息

肝静脉系统出血是腹腔镜肝切除术面临的难题之一,其处理重在预防,通过精确术前影像学评估和精细规范的术中镜下操作主动防范出血,尽可能避免出血后的被动处理。强化麻醉管理,采用控制性低中心静脉压技术,加强气腹条件下对CO_2气体栓塞的认知、预防和紧急处理。术中若遭遇肝静脉血管破裂出血,应及时准确判断严重程度及出血是否在可控范围内。在控制、减少出血条件下,显露确认出血的来源血管,及其管径、走行,破裂口位置、大小等,根据静脉血管损伤的类型及严重程度,采取相应措施进行迅速有效止血,必要时及时果断中转开腹处理。近年来,随着对肝脏影像及镜下解剖认识的深入、腹腔镜技术水平的提高、手术经验的积累及手术器械的不断更新,腹腔镜肝切除术肝中静脉系统出血的控制和处理水平及手术安全性已得到明显提升。

关键词：腹腔镜肝切除术出血肝静脉