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反义DNA甲基转移酶1改变肝癌SMMC-7721细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的敏感性及其机理的研究

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中华肿瘤杂志 2003年第6期25卷 538-541页

作者：李小安房殿春张宏杨金亮司佩任张汝刚杨柳芹第三军医大学西南医院全军消化专科中心

目的　观察转入反义DNA甲基转移酶 1(DNMT1)基因片段后的肝癌SMMC 772 1细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)的敏感性改变 ,初步阐明其机理。方法　台盼蓝排斥实验检测活细胞率 ;TUNEL法检测细胞凋亡率 ;流式细胞仪检测bcl 2、... 详细信息

目的　观察转入反义DNA甲基转移酶 1(DNMT1)基因片段后的肝癌SMMC 772 1细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)的敏感性改变 ,初步阐明其机理。方法　台盼蓝排斥实验检测活细胞率 ;TUNEL法检测细胞凋亡率 ;流式细胞仪检测bcl 2、bax和bad蛋白的表达。结果　转入反义DNMT1基因片段的肝癌SMMC 772 1细胞与转入正义DNMT1基因片段和空载体的细胞相比 ,活细胞率显著降低 (P <0 .0 5,P <0 .0 1) ,凋亡率显著增高 (P <0 .0 5,P <0 .0 1)。流式细胞仪结果显示 ,转入反义DNMT1基因片段的SMMC 772 1细胞 ,其bax和bad表达 ,尤其是bax的表达 ,明显高于转入正义DNMT1基因片段和空载体的细胞 ,但对bcl 2的表达无影响。结论　转入反义DNMT1基因片段的肝癌SMMC 772 1细胞对TRAIL的敏感性明显增强。

关键词：反义DNA甲基转移酶1 肝癌 SMMC-7721细胞肿瘤坏死因子凋亡诱导配体敏感性

抑制肌动蛋白聚合对体外大鼠跟腱来源肌腱干细胞成脂分化的影响研究

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中国修复重建外科杂志 2015年第2期29卷 206-212页

作者：陈波唐康来张吉强郭宇鹏刘翔周施又兴第三军医大学西南医院骨科全军矫形外科中心重庆400038 第三军医大学神经生物教研室

目的探讨细胞骨架重塑对体外大鼠跟腱来源肌腱干细胞(tendon stem cells,TSCs)成脂分化的影响。方法取3周龄雄性SD大鼠跟腱组织,采用酶消化法分离、培养TSCs,取第3代细胞用于实验。将细胞分别以细胞松弛素D(cytochalasin D,CYD)终浓度为... 详细信息

目的探讨细胞骨架重塑对体外大鼠跟腱来源肌腱干细胞(tendon stem cells,TSCs)成脂分化的影响。方法取3周龄雄性SD大鼠跟腱组织,采用酶消化法分离、培养TSCs,取第3代细胞用于实验。将细胞分别以细胞松弛素D(cytochalasin D,CYD)终浓度为0、50、100、500、1 000 ng/m L的含15%FBS的DMEM培养基进行培养,倒置相差显微镜下观察细胞存活及形态变化,纤维肌动蛋白(fibros actin,F-actin)染色观察细胞骨架,Western blot检测F-actin/球状肌动蛋白(globular actin,G-actin)比值,根据结果选择CYD有效使用浓度进行后续实验。取TSCs分别采用成脂诱导培养基(诱导组)、含CYD的成脂诱导培养基(CYD+诱导组)以及普通培养基(普通组)、含CYD的普通培养基(CYD+普通组)培养3、7 d,收集各组细胞行实时荧光定量PCR检测成脂分化相关特异标志性基因表达,包括过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)、脂蛋白酯酶(1ipoprotein lipase,LPL)、脂肪酸结合蛋白(a P2),Western blot检测PPARγ、a P2蛋白表达。结果 CYD浓度为100 ng/m L时既能有效干扰TSCs细胞骨架F-actin的聚合,又不影响TSCs的存活,选择该浓度进行后续实验。实时荧光定量PCR及Western blot检测示,3、7 d时CYD+诱导组PPARγ、LPL和a P2基因及PPARγ、a P2蛋白表达均显著高于诱导组,比较差异有统计学意义(P<0.05)。3、7 d时CYD+普通组PPARγ、LPL和a P2基因表达也显著高于普通组,比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论细胞骨架重塑是TSCs成脂分化的一个先决条件,抑制F-actin聚合可促进TSCs的成脂分化,对肌腱病的发病机制研究具有重要意义。

关键词：肌腱干细胞成脂分化细胞松弛素D 肌动蛋白细胞骨架大鼠

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荧光偏振法检测肺表面活性物质功能

中华结核和呼吸杂志 1996年第3期19卷 184-185页

作者：谢尔凡苟俊杨宗城黎鳌第三军医大学西南医院烧伤研究所第三军医大学中心实验室

荧光偏振法检测肺表面活性物质功能谢尔凡苟俊杨宗城黎鳌我们以１，６－二苯基－１，３，５－己三烯（ＤＰＨ）为荧光探针，检测了支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中肺表面活性物质（ＰＳ）的荧光偏振参数，以反映ＰＳ功能，并与其表面张... 详细信息

荧光偏振法检测肺表面活性物质功能谢尔凡苟俊杨宗城黎鳌我们以１，６－二苯基－１，３，５－己三烯（ＤＰＨ）为荧光探针，检测了支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中肺表面活性物质（ＰＳ）的荧光偏振参数，以反映ＰＳ功能，并与其表面张力特性进行相关分析。试剂：用四氢呋...

关键词：表面活性物质荧光偏振法支气管肺泡肺疾病

不同强度跑台训练对大鼠跟腱微损伤修复影响的实验研究

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中国修复重建外科杂志 2017年第5期31卷 574-581页

作者：高尚唐康来张吉强李跑杨志金崔海峰杨明宇唐红周梅第三军医大学西南医院骨科全军矫形外科中心重庆400038 第三军医大学神经生物教研室重庆400038

目的探讨不同强度跑台训练对胶原酶诱导的大鼠跟腱微损伤修复的影响。方法取8周龄雄性SD大鼠72只,体质量200~250 g,经适应性跑台训练1周后,于双侧跟腱各注射30μL浓度为10 mg/mL的Ⅰ型胶原酶溶液,制备胶原酶诱导的跟腱微损伤模型。饲养... 详细信息

目的探讨不同强度跑台训练对胶原酶诱导的大鼠跟腱微损伤修复的影响。方法取8周龄雄性SD大鼠72只,体质量200~250 g,经适应性跑台训练1周后,于双侧跟腱各注射30μL浓度为10 mg/mL的Ⅰ型胶原酶溶液,制备胶原酶诱导的跟腱微损伤模型。饲养1周后随机分为对照组(n=24)、低强度组(n=24)、高强度组(n=24);对照组大鼠可自由活动;低、高强度组采用计算机控制动物实验跑台对大鼠进行被动跑台训练,其中低强度组跑台强度为13 m/min、20 min/d,高强度组跑台强度为17 m/min、60 min/d。于训练开始即刻及1、4周,每组各取8只大鼠双侧跟腱,行大体观察、组织学观察并半定量评分以及生物力学测试。结果训练开始即刻,各组跟腱标本大体观察、组织学观察及半定量评分以及生物力学测试比较,差异均无统计学意义(P>0.05),提示各组跟腱微损伤模型损伤程度相似,具有可比性。大体观察示,1周时,各组腱旁结缔组织增生、肌腱组织缺乏光泽;4周时,低强度组腱旁增生组织较对照组明显减少,而高强度组腱旁结缔组织较多,并且有大量新生血管形成。组织学观察示,1周时各组间总分比较差异无统计学意义(P>0.05);低、高强度组仅新生血管量评分与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。4周时,低强度组最终应力及抗拉强度较对照组明显升高(P0.05)。结论低强度跑台训练能够促进胶原酶诱导的大鼠跟腱微损伤的修复。

关键词：肌腱病肌腱微损伤跑台训练跟腱大鼠

不同机械牵伸条件对大鼠肌腱干细胞分化的影响

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中国修复重建外科杂志 2017年第4期31卷 481-488页

作者：李跑高尚周梅唐红穆米多张吉强唐康来第三军医大学西南医院骨科全军矫形外科中心重庆400038 第三军医大学神经生物教研室重庆400038

目的探讨不同机械牵伸条件对肌腱干细胞(tendon stem cells,TSCs)分化的影响,寻求TSCs成肌腱分化、成骨分化以及成脂肪分化的最佳单轴循环牵伸载荷。方法取8周龄雄性SD大鼠跟腱,采用酶消化法分离培养TSCs。取第3代TSCs,随机分为不同牵... 详细信息

目的探讨不同机械牵伸条件对肌腱干细胞(tendon stem cells,TSCs)分化的影响,寻求TSCs成肌腱分化、成骨分化以及成脂肪分化的最佳单轴循环牵伸载荷。方法取8周龄雄性SD大鼠跟腱,采用酶消化法分离培养TSCs。取第3代TSCs,随机分为不同牵拉条件组(实验组A^D组)及静态培养组(对照组E组),其中A组牵拉强度4%、频率1 Hz,B组牵拉强度4%、频率2 Hz,C组牵拉强度8%、频率1 Hz,D组牵拉强度8%、频率2 Hz。利用课题组自行研发的体外细胞单轴循环牵拉设备,沿培养皿长轴对A^D组细胞进行单轴循环机械牵伸,E组细胞行静态培养。分别处理12、24、48 h后收集各组细胞,采用实时荧光定量PCR检测成腱分化相关基因Scleraxis(SCX)、抗细胞黏合素C(Tenascin C,TNC),成脂肪分化相关基因CCAAT/增强子结合蛋白-α(CCAAT-enhancer-binding protein-α,CEBPα)、脂蛋白脂肪酶(lipoprteinlipase,LPL)及成骨分化相关基因RUNX2、远端缺失基因5(distal-less homeobox 5,DLX5)的表达;Western blot检测TNC、CEBPα及RUNX2蛋白表达。结果实时荧光定量PCR检测示:SCX、TNC m RNA相对表达量在B组牵拉24 h时显著高于其余各组,差异有统计学意义(P0.05)。结论机械力学刺激可以促进TSCs发生分化,而且不同条件的牵拉载荷会引起不同方向分化。4%、2 Hz牵拉24 h为成腱分化最佳条件,8%、1 Hz牵拉24 h为成骨分化最佳条件,8%、2 Hz牵拉48 h为成脂肪分化最佳条件。

关键词：机械牵拉肌腱干细胞分化大鼠

循环牵拉对大鼠跟腱来源肌腱干细胞c-fos基因表达的影响

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中国修复重建外科杂志 2017年第1期31卷 85-90页

作者：高尚唐康来张吉强杨志金崔海峰李跑唐红周梅第三军医大学西南医院骨科全军矫形外科中心重庆400038 第三军医大学神经生物教研室重庆400038

目的探讨机械刺激对大鼠跟腱来源肌腱干细胞(tendon stem cells,TSCs)立早基因c-fos表达的影响。方法取8周龄雄性SD大鼠跟腱组织,用酶消化法分离、培养TSCs,取第3代细胞用于实验。利用单拉循环牵伸载荷模型在1 Hz条件下,分别用4%和8%牵... 详细信息

目的探讨机械刺激对大鼠跟腱来源肌腱干细胞(tendon stem cells,TSCs)立早基因c-fos表达的影响。方法取8周龄雄性SD大鼠跟腱组织,用酶消化法分离、培养TSCs,取第3代细胞用于实验。利用单拉循环牵伸载荷模型在1 Hz条件下,分别用4%和8%牵拉强度牵拉细胞,并在牵拉0、5、15、30、60、120 min后收集细胞进行实时荧光定量PCR检测,观察c-fos m RNA相对表达量随牵拉时间的变化,并找到表达最高时间点Tmax。然后分别用2%、4%、6%、8%和12%的牵拉强度,在牵拉Tmax时收集细胞,观察c-fos m RNA相对表达量随牵拉强度的变化。接着分别用2%、4%、6%、8%和12%的牵拉强度,对TSCs经0、5、15 min短时间牵拉后静置至Tmax,观察c-fos m RNA相对表达量经短时刺激后的变化情况。最后分别用4%和8%牵拉强度牵拉细胞0、Tmax、120 min,检测成肌腱分化标志基因Ⅰ型胶原、腱调蛋白(tenomodulin,TNMD),成骨分化标志基因Runx2、远端缺失基因5(distal-less homeobox 5,Dlx5),成脂肪分化标志基因脂肪酸结合蛋白4(fatty acid binding protein 4,FABP4)的表达情况。结果与0 min相比,在4%和8%牵拉强度下,c-fos m RNA相对表达量在牵拉15 min时显著升高(P0.05);故Tmax为30 min。牵拉30 min时,2%的牵拉强度即可使c-fos m RNA相对表达量升高,且6%、8%和12%牵拉强度较2%、4%牵拉强度进一步升高,差异均有统计学意义(P0.05);而8%牵拉强度下,在牵拉30 min时,Runx2基因相对表达量显著升高,在牵拉120 min时,Ⅰ型胶原、TNMD、Dlx5、Runx2等基因相对表达量均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论循环牵拉能够影响大鼠跟腱来源TSCs立早基因c-fos的m RNA表达,并且呈时间和强度依赖性;提示机械刺激的时间和强度可能在作用早期即对TSCs的分化产生影响,对进一步研究TSCs机械-细胞内信号耦联机制具有重要意义。

关键词：肌腱干细胞循环牵拉立早基因 c—fos 大鼠

肼苯哒嗪与三苯氧胺协同抗雌激素受体α阴性乳腺癌的研究

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中华实验外科杂志 2005年第5期22卷 538-540,i001页

作者：唐波彭志红姜军第三军医大学西南医院乳腺中心第三军医大学西南医院全军消化专科中心

目的观察肼苯哒嗪对雌激素受体(ER)α阴性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MDA-MB-435ERα基因诱导表达作用;肼苯哒嗪联合三苯氧胺(TAM)对ERα阴性乳腺癌细胞的体外抑制作用。方法肼苯哒嗪处理ERα阴性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MDA-MB-435... 详细信息

目的观察肼苯哒嗪对雌激素受体(ER)α阴性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MDA-MB-435ERα基因诱导表达作用;肼苯哒嗪联合三苯氧胺(TAM)对ERα阴性乳腺癌细胞的体外抑制作用。方法肼苯哒嗪处理ERα阴性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MDA-MB-435,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测ERαmRNA表达;肼苯哒嗪、TAM分别或联合作用于MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞,噻唑蓝(MTT)比色法分析细胞生长抑制作用,流式细胞仪测定细胞周期分布和凋亡率,透射电镜观察细胞超微结构。结果肼苯哒嗪能诱导MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞表达ERαmRNA。当肼苯哒嗪浓度≥10μmol/L可抑制MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞生长、阻滞细胞周期于G0/G1期,诱导这两种细胞凋亡,凋亡率分别为11.20%和8.71%;TAM对MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞生长、细胞周期无影响;联合用药组显著抑制细胞生长,诱导这两种细胞凋亡,凋亡率分别为48.8%和53.1%。对照组和TAM组细胞形态较好;肼苯哒嗪作用组细胞变性改变多见;联合用药组主要表现为细胞坏死,但未发现有凋亡小体的存在。结论肼苯哒嗪能诱导ERα阴性乳腺癌表达ERαmRNA,恢复ERα阴性乳腺癌细胞对TAM的敏感性,联合TAM能协同抑制ERα阴性乳腺癌细胞生长,诱导细胞凋亡,从而为ERα阴性乳腺癌开辟新的内分泌治疗途径提供实?

关键词：阴性乳腺癌肼苯哒嗪人乳腺癌细胞株MDA-MB-231 三苯氧胺雌激素受体α MDA-MB-435细胞协同逆转录一聚合酶链反应体外抑制作用 mRNA表达生长抑制作用细胞周期分布细胞超微结构透射电镜观察诱导细胞凋亡 ERα TAM

异体耳廓移植后局部淋巴结MIP-3β的含量变化及趋化活性的研究

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第三军医大学学报 2003年第9期25卷 789-791页

作者：曹川李世荣郑红孙志成雷晓王珍祥吴军吴军第三军医大学附属西南医院整形外科，重庆400038 第三军医大学附属西南医院中心实验室，重庆400038 第三军医大学附属西南医院全军烧伤研究所，重庆400038

目的　研究异体耳廓移植后局部淋巴结内趋化因子MIP 3 β的含量变化及对树突状细胞的趋化作用。方法　进行吻合血管的大鼠同种异体耳廓移植 ,ELISA法测定术后局部淋巴结MIP 3 β的含量变化趋势 ,应用改良Boyden小室进行淋巴结组织液对... 详细信息

目的　研究异体耳廓移植后局部淋巴结内趋化因子MIP 3 β的含量变化及对树突状细胞的趋化作用。方法　进行吻合血管的大鼠同种异体耳廓移植 ,ELISA法测定术后局部淋巴结MIP 3 β的含量变化趋势 ,应用改良Boyden小室进行淋巴结组织液对体外培养树突状细胞的趋化实验。结果　同系移植组术后局部淋巴结MIP 3 β含量升高 ,持续至术后第 2天 ,以后恢复至正常水平 ;异系移植组MIP 3 β含量持续上升 ,后期显著高于正常淋巴结内的表达水平 ,其对体外培养树突状细胞的趋化作用增强 ,这种趋化作用可被MIP 3 β抗体所阻断。结论　器官移植后局部引流淋巴结内MIP 3 β表达增高 ,促进树突状细胞的迁移运动。

关键词：趋化因子树突状细胞异体移植引流淋巴结

张力负荷状态对膀胱逼尿肌细胞表型及生物力学特性的影响

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中华外科杂志 2003年第12期41卷 901-905页

作者：龚宇宋波金锡御熊恩庆第三军医大学西南医院全军泌尿专科中心重庆400038

目的　探讨周期性张力作用下的逼尿肌细胞表型转化与其生物力学特性改变的关系。方法　在特殊的培养皿上分离培养Wistar大鼠膀胱逼尿肌细胞 ,对其施加周期性牵拉后 ,分别采用免疫荧光、氚标胸腺嘧啶核苷掺入实验、流式细胞仪等测定逼尿... 详细信息

目的　探讨周期性张力作用下的逼尿肌细胞表型转化与其生物力学特性改变的关系。方法　在特殊的培养皿上分离培养Wistar大鼠膀胱逼尿肌细胞 ,对其施加周期性牵拉后 ,分别采用免疫荧光、氚标胸腺嘧啶核苷掺入实验、流式细胞仪等测定逼尿肌细胞表型标志如SM α actin、细胞增殖状况等 ,评价逼尿肌细胞的表型转化状况 ;利用图像采集及分析系统、微管吸吮技术分别测定单个逼尿肌细胞收缩力及黏弹性 ,反映张力条件下其生物力学特性的改变。　结果　未施加张力组与实验组之间差异显著 ;周期性牵拉导致逼尿肌细胞出现由“收缩型”向“合成型”的表型转化 ,总体上表现为actin表达降低且排列趋于紊乱、细胞增殖活跃 ;功能上出现单细胞收缩力减弱、黏弹性下降。结论　对培养逼尿肌细胞施加周期性张力负荷作用是在细胞水平模拟膀胱出口梗阻的有效方法 ;逼尿肌细胞表型转化正是其生物力学特性发生改变的结构基础。

关键词：张力负荷状态膀胱逼尿肌细胞表型生物力学特性周期性牵拉免疫荧光膀胱颈梗阻