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二甲双胍对尼古丁诱导肺动脉平滑肌细胞增殖的影响及机制研究

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第三军医大学学报 2015年第7期37卷 623-628页

作者：涂洪波陈刘通孙丽廖晨白莉第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所全军呼吸病研究重点实验室重庆400037 第三军医大学西南医院体检中心重庆400038

目的明确二甲双胍(metformin)对尼古丁(nicotine)诱导肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增殖的影响,并探讨其机制。方法组织贴块法原代培养SD大鼠PASMCs,不同浓度的尼古丁分别刺激PASMCs,采用CCK-8法检测... 详细信息

目的明确二甲双胍(metformin)对尼古丁(nicotine)诱导肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增殖的影响,并探讨其机制。方法组织贴块法原代培养SD大鼠PASMCs,不同浓度的尼古丁分别刺激PASMCs,采用CCK-8法检测细胞增殖变化,确定尼古丁促PASMCs增殖的最佳作用浓度,并观察二甲双胍对尼古丁诱导PASMCs增殖的影响。ELISA法观察二甲双胍对尼古丁暴露下PASMCs IL-6、TNF-α表达水平的影响;流式细胞术检测二甲双胍对尼古丁暴露下PASMCs产生ROS水平变化;采用Western blot检测AMPK表达和活性变化。结果成功分离培养并鉴定PASMCs,α-actin蛋白在细胞质高表达并呈丝状分布。与对照组相比,0.1μmmol/L尼古丁处理48 h后可显著促进PASMCs增殖(P<0.05);2 mmol/L二甲双胍预处理后,尼古丁诱导的PASMCs增殖受到明显抑制。尼古丁处理组PASMCs细胞中IL-6、TNF-α和ROS水平明显升高(P<0.05);而二甲双胍干预后抑制尼古丁暴露下PASMCs中IL-6、TNF-α和ROS的产生(P<0.05)。尼古丁刺激PASMCs后可引起AMPK磷酸化水平(p-AMPK)表达一过性升高,而二甲双胍引起p-AMPK持续升高(P<0.05)。结论尼古丁刺激PASMCs引起IL-6、TNF-α水平增加,及ROS过度生成,促进PASMCs增殖;二甲双胍抑制上述炎症反应和氧化应激状态,及尼古丁诱导的PASMCs增殖,其机制可能依赖于AMPK的持续活化。

关键词：二甲双胍尼古丁肺动脉平滑肌细胞磷酸腺苷蛋白激酶细胞增殖

烧伤并发抑郁大鼠学习记忆能力与海马N-甲基天冬氨酸表达的关系

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中华烧伤杂志 2009年第1期25卷 46-48页

作者：何梅覃霞杨国愉冯正直杨宗城第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038 第三军医大学西南医院整形科重庆400038 第三军医大学心理健康教育中心

目的了解烧伤大鼠并发抑郁后的学习汜忆能力变化，探讨与海马N-甲基天冬氨酸（NMDA）表达的关系。方法按照简单随机化法将36只大鼠分为烧伤组、抑郁组、烧伤并发抑郁组，其中烧伤并发抑郁组采用30％TBSA深Ⅱ度烧伤及慢性不町预见中度刺... 详细信息

目的了解烧伤大鼠并发抑郁后的学习汜忆能力变化，探讨与海马N-甲基天冬氨酸（NMDA）表达的关系。方法按照简单随机化法将36只大鼠分为烧伤组、抑郁组、烧伤并发抑郁组，其中烧伤并发抑郁组采用30％TBSA深Ⅱ度烧伤及慢性不町预见中度刺激制作模型。观察各组大鼠在水迷宫实验训练5d中逃避潜伏期变化情况，利用免疫组织化学法分析海马CA1、CA3区及齿状回NMDA表达。另取10只大鼠作为健康对照组，检测指标同上。结果训练第2天，健康对照组大鼠水迷宫逃避潜伏期时间为（22±20）S，与烧伤组（38±31）S、抑郁组（41±36）S、烧伤并发抑郁组（42±33）s比较，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；训练至第4天时，烧伤并发抑郁组大鼠潜伏期时间与其他3组比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。大鼠海马CA1、CA3区NMDA表达在4个组之间比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。健康埘照组大鼠齿状回NMDA阳性细胞为（224±23）个，烧伤组（219±25）个，抑郁组（198±14）个，烧伤并发抑郁组（191±6）个；与健康对照组比较，后2组差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论烧伤大鼠并发抑郁后学习记忆能力降低，可能与海马齿状回NMDA减少有关。

关键词：烧伤抑郁记忆障碍 N-甲基天冬氨酸海马

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严重烧伤早期全身预防性使用抗生素研究进展

中华烧伤杂志 2015年第3期31卷 233-235页

作者：詹日兴吴军彭毅志罗高兴第三军医大学西南医院全军烧伤研究所、创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

烧伤是一种平／战时均较为常见的损伤，严重烧伤的危害性大，病死率高。感染是烧伤患者最常见的并发症，发生率高达75％。严重感染是烧伤患者主要的死亡原因之一，研究显示，70％左右的烧伤死亡病例与感染相关。在烧伤，尤其是严重烧伤... 详细信息

烧伤是一种平／战时均较为常见的损伤，严重烧伤的危害性大，病死率高。感染是烧伤患者最常见的并发症，发生率高达75％。严重感染是烧伤患者主要的死亡原因之一，研究显示，70％左右的烧伤死亡病例与感染相关。在烧伤，尤其是严重烧伤早期，临床上习惯常规全身性使用抗生素预防后续感染的发生。但各救治中心在烧伤早期全身性使用抗生素的种类与强度上各有其特点，目前并无统一的认识与方案。

关键词：烧伤感染抗菌药抗生素预防

PAR-1激活对小鼠内皮祖细胞CXCR4 mRNA表达及细胞增殖与迁移的影响

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重庆医学 2013年第33期42卷 4056-4058,4061页

作者：代静澜潘波古平牟海刚白家驷解放军第三二四医院心血管内科重庆400020 第三军医大学西南医院全军肝病中心实验室重庆400038

目的研究蛋白酶激活受体-1(PAR-1)活化后对小鼠内皮祖细胞(EPCs)CXC型趋化因子受体4(CXCR4)mRNA表达及细胞增殖、迁移的影响。方法分离鉴定小鼠EPCs,分别以不同浓度PAR-1激活剂SFLLRN加入培养的EPCs中,以PAR-1小干扰RNA(siRNA)转染EPCs... 详细信息

目的研究蛋白酶激活受体-1(PAR-1)活化后对小鼠内皮祖细胞(EPCs)CXC型趋化因子受体4(CXCR4)mRNA表达及细胞增殖、迁移的影响。方法分离鉴定小鼠EPCs,分别以不同浓度PAR-1激活剂SFLLRN加入培养的EPCs中,以PAR-1小干扰RNA(siRNA)转染EPCs,并设立空白对照组。采用荧光定量实时聚合酶链反应(RT-PCR)分析各组细胞PAR-1、CXCR4mRNA表达;MTT法检测各组EPCs增殖情况;Transwell小室共培养分析各组EPCs的迁移能力。结果 SFLLRN激活组EPCs增殖率、迁移率及PAR-1、CXCR4mRNA表达均较空白对照组、PAR-1特异siRNA转染组增高,差异有统计学意义(P<0.05)。CXCR4mRNA与PAR-1mRNA表达呈明显正相关(r=0.991)。结论 PAR-1可能通过促使CXCR4的表达增加,从而促进EPCs的增殖和迁移。

关键词：内皮祖细胞蛋白酶激活受体-1 CXC型趋化因子受体4 细胞增殖迁移

神经干细胞与RPE细胞的线粒体交换及其对RPE细胞增生和能量代谢的影响

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中华实验眼科杂志 2015年第5期33卷 424-429页

作者：孙荣莎徐海伟阴正勤第三军医大学西南医院全军眼科中心重庆市视觉损伤与再生修复重点实验室重庆400038

背景研究表明,干细胞可通过与损害靶细胞进行线粒体交换的方式修复受损细胞.视网膜色素变性疾病是以视网膜色素上皮（RPE）细胞凋亡为病理基础的眼病,干细胞是否能够通过上述机制进行治疗尚不清楚. 目的研究神经干细胞（NSCs）能否通... 详细信息

背景研究表明,干细胞可通过与损害靶细胞进行线粒体交换的方式修复受损细胞.视网膜色素变性疾病是以视网膜色素上皮（RPE）细胞凋亡为病理基础的眼病,干细胞是否能够通过上述机制进行治疗尚不清楚. 目的研究神经干细胞（NSCs）能否通过线粒体交换机制改善RPE细胞的增生和能量代谢功能.方法分离Long-Evans大鼠的视网膜进行RPE细胞的培养和传代,取第3代细胞用于实验,采用荧光显微镜检测RPE细胞中RPE65和Bestrophin蛋白的表达.小鼠NSCs C17.2细胞系和带绿色荧光蛋白（GFP）的C17.2细胞（GFP-C17.2细胞）进行培养和传代.分别采用线粒体特异性染色剂Mitotracker-green和Mitotracker-red标记RPE细胞和NSCs线粒体.将RPE细胞与小鼠NSCs进行共培养,用麦胚凝集素（WGA）标记隧道纳米管（TNT）,于激光扫描共焦显微镜下观察共培养的RPE细胞与小鼠NSCs间TNT中线粒体交换方式;采用流式细胞术检测RPE细胞与NSCs共培养前后的细胞周期改变;采用高效液相色谱（HPLC）技术检测共培养前后RPE细胞中ATP、ADP和AMP的质量分数. 结果培养的第3代RPE细胞生长良好,RPE65和Bestrophin表达阳性细胞均＞85％.NSCs和RPE细胞中线粒体对Mitotracker-red标记的阳性率均＞95％.2种细胞共培养后24 h可见RPE细胞与NSCs间形成的膜性TNT结构,WGA染色呈蓝色荧光.随着时间的推移,NSCs中呈红色荧光的线粒体通过TNT进入呈绿色荧光的RPE细胞中.接受TNT线粒体后,处于G1期的RPE细胞比例较未进行线粒体交换的RPE细胞明显下降,差异有统计学意义（P=0.016）,S期细胞和G2/M期细胞比例分别增加了5％和2％,差异均无统计学意义（P=0.114、0.189）.HPLC检测结果显示,与NSCs共培养后,RPE细胞中ATP、ADP和AMP质量分数分别为（8.77 ±3.68）、（2.76±0.92）和（1.07±0.65） μg/mg,较共培养前的（11.29±2.29）、（3.12±0.95）和（1.59±1.22） μg/mg均有所下降,但差异均无统计学意义（P=0.370、0.668、0.553）.结论 NSCs通过建立的TNT能将线粒体单向传递给共培养的RPE细胞,线粒体交换可能是NSCs改善RPE细胞增生和代谢能力的机制之一.

关键词：干细胞眼色素上皮/细胞学视网膜变性/治疗细胞培养共培养技术线粒体/代谢隧道纳米管动物

正常猕猴与人的视网膜电图及视觉诱发电位对比研究

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第三军医大学学报 2016年第12期38卷 1437-1441页

作者：刘闻一戴加满赵从健李世迎阴正勤第三军医大学西南医院全军眼科中心视觉损伤与再生修复重庆市重点实验室重庆400038

目的研究正常猕猴与人视网膜电图(FERG,PERG)及视觉诱发电位(FVEP,PVEP)的异同。方法选取通过眼底照相及光学相干断层扫描(OCT)等眼科相关检查确定眼部没有明显异常的正常成年猕猴3只(6眼)及健康成年人8例(16眼),对其FERG、PERG、FVEP、... 详细信息

目的研究正常猕猴与人视网膜电图(FERG,PERG)及视觉诱发电位(FVEP,PVEP)的异同。方法选取通过眼底照相及光学相干断层扫描(OCT)等眼科相关检查确定眼部没有明显异常的正常成年猕猴3只(6眼)及健康成年人8例(16眼),对其FERG、PERG、FVEP、PVEP进行检测和记录,导出数据后运用SPSS 13.0软件行统计学分析。结果暗适应0.01ERG的b波及暗适应3.0ERG的a波,b波猕猴与人相比峰时明显较短,振幅明显较低(P<0.05)。暗适应Ops的OS2波猕猴与人相比振幅明显较低(P<0.05)。明适应3.0ERG的a波,b波峰时和振幅,明适应30 Hz震荡电位振幅两者差异无统计学意义。FVEP的P2波猕猴与人相比峰时明显较短,振幅明显较高(P<0.05)。PERG猕猴与人相比P50及N95波振幅明显较低(P<0.05)。PVEP的P100波峰时猕猴与人差异无统计学意义,P100波振幅猕猴与人相比较低(P<0.05)。结论视网膜电图及视觉诱发电位可对猕猴行视功能评价,作为评估人视网膜功能的参照。

关键词：猕猴视网膜电图视觉诱发电位光学相干断层扫描

3T3-fGFP细胞摄取神经干细胞胞外泌囊泡的途径

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第三军医大学学报 2015年第12期37卷 1193-1199页

作者：陈曦赵从健阴正勤第三军医大学西南医院全军眼科中心视觉损伤与再生修复重庆市重点实验室重庆400038

目的以超速离心方案提取胞外囊泡的鉴定为基础,初步探求小鼠神经干细胞C17.2胞外囊泡与小鼠胚胎成纤维细胞3T3-fGFP细胞之间的通讯交流通路。方法分别用超速离心法获得胞外囊泡（EV）和Total Exosome Isolation Kit试剂盒获得外泌体（EX... 详细信息

目的以超速离心方案提取胞外囊泡的鉴定为基础,初步探求小鼠神经干细胞C17.2胞外囊泡与小鼠胚胎成纤维细胞3T3-fGFP细胞之间的通讯交流通路。方法分别用超速离心法获得胞外囊泡（EV）和Total Exosome Isolation Kit试剂盒获得外泌体（EXO）;用透射电镜和原子力显微镜分别对两种样品进行形态学比较;用SDS-PAGE和Western blot分别对两种样品进行生物化学比较;用染料标记超速离心法获得胞外囊泡;将标记的胞外囊泡与3T3-fGFP细胞共孵育,对3T3-fGFP细胞摄取胞外囊泡进行研究;通过药理实验筛选3T3-fGFP细胞摄取胞外囊泡的主要通路。结果 C17.2细胞生长良好,形态规则未出现明显分化现象。在透射电镜下两种样品均观察到圆形双层膜结构和＂杯状＂外形的囊泡,直径分布多集中在300 nm以内,并且发现胞外囊泡的平均直径大于外泌体。原子力显微镜的结果显示,两种样品的高度分布多集中在2~20 nm以内,直径分布多集中在300 nm以内,并且外泌体的平均高度和平均直径均大于胞外囊泡。SDS-PAGE结果显示两种样品所含蛋白种类、表达丰度接近。在相同上样量下HSP70的表达强度两者接近,但CD63、CD9和CD81 3种蛋白在胞外囊泡中表达更强。摄取实验表明C17.2细胞胞外囊泡可以被3T3-fGFP细胞内化,被包裹在囊泡内,转运到细胞核周围的区域,并且摄取数量随着时间延长而增加（P〈0.05）。通过药理实验确定网格蛋白（Clathrin）介导的内吞通路为3T3-f GFP细胞摄取C17.2细胞胞外囊泡的主要通路。结论小鼠神经干细胞外泌体可能主要经网格蛋白介导的通路参与了神经干细胞与3T3-fGFP细胞的通讯。

关键词：小鼠神经干细胞胞外囊泡 3T3-fGFP细胞网格蛋白介导通路

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膜诱导技术治疗胫骨创伤后骨髓炎

中华创伤杂志 2015年第4期31卷 299-302页

作者：汪小华傅景曙沈杰谢肇第三军医大学西南医院骨科、全军矫形外科中心重庆400038

目的探讨膜诱导技术治疗胫骨创伤后骨髓炎的临床疗效。方法回顾性分析2011年8月-2012年10月收治的17例胫骨创伤后骨髓炎患者，其中男13例，女4例；年龄19．67岁，平均40．9岁。I期清创后平均骨缺损长度6．7cm（2．0—18．5cm），在骨缺... 详细信息

目的探讨膜诱导技术治疗胫骨创伤后骨髓炎的临床疗效。方法回顾性分析2011年8月-2012年10月收治的17例胫骨创伤后骨髓炎患者，其中男13例，女4例；年龄19．67岁，平均40．9岁。I期清创后平均骨缺损长度6．7cm（2．0—18．5cm），在骨缺损处填塞抗生素骨水泥诱导生物膜形成，Ⅱ期在膜内植骨重建骨缺损，观察膜诱导技术治疗胫骨创伤后骨髓炎的临床疗效。结果17例患者随访24-32个月（平均27个月），均获得临床骨愈合。术后4～6个月均获得影像学骨愈合。其中2例I期术后感染复发，再次清创后，1例发生外固定架近端钉道感染，拆除外固定钢板螺钉并局部换药处理后控制感染；2例出现功能障碍，1例足内翻畸形，1例踝关节僵直，1例出现金属排斥反应。结论膜诱导技术治疗胫骨创伤后骨髓炎可取得良好疗效，尤其在大段骨缺损的修复重建中具有显著的优势。治疗过程中应加强关注患肢功能性并发症的预防。

关键词：骨髓炎胫骨骨折膜诱导技术

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蚕蚀性角膜溃疡组织病理学的观察

第三军医大学学报 2005年第23期27卷 2366-2369页

作者：赵长霖谢汉平陈代伦第三军医大学西南医院全军眼科中心重庆400038 第三军医大学中心实验室重庆400038

目的观察蚕蚀性角膜溃疡角膜、邻近球结膜的组织病理和超微病理特点。方法将手术切下的角膜缘角膜、进行缘角膜、邻近球结膜组织制备成石蜡切片和超薄切片,分别在光镜和透射电镜下观察组织病理变化和超微结构变化。以Terrien角膜边缘变... 详细信息

目的观察蚕蚀性角膜溃疡角膜、邻近球结膜的组织病理和超微病理特点。方法将手术切下的角膜缘角膜、进行缘角膜、邻近球结膜组织制备成石蜡切片和超薄切片,分别在光镜和透射电镜下观察组织病理变化和超微结构变化。以Terrien角膜边缘变性的角结膜组织、细菌性角膜溃疡的角膜组织作对照。结果蚕蚀性角膜溃疡的球结膜、巩膜中存在以淋巴细胞、浆细胞浸润为主的慢性免疫炎症反应;角膜缘处角膜上皮、前弹力膜、前基质层、邻近表层巩膜溶解消失,残存的基质层胶原结构紊乱;溃疡进行缘的角膜上皮基底膜结构破坏消失。Terrien角膜边缘变性的球结膜及角膜上皮内可见淋巴细胞浸润;角膜上皮基底膜正常;前弹力层自下向上破坏变薄。在细菌性角膜溃疡病变与正常组织交界处,基底膜未见改变。结论蚕蚀性角膜溃疡的球结膜可能起着局部淋巴结作用。溃疡进行缘的角膜上皮基底膜首先被侵蚀,提示患者的基底膜可能存在异常,需要进一步研究。

关键词：角膜溃疡组织病理学超微结构石蜡切片超薄切片