检索结果-南通市图书馆

不同机械牵伸条件对大鼠肌腱干细胞分化的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国修复重建外科杂志 2017年第4期31卷 481-488页

作者：李跑高尚周梅唐红穆米多张吉强唐康来第三军医大学西南医院骨科全军矫形外科中心重庆400038 第三军医大学神经生物教研室重庆400038

目的探讨不同机械牵伸条件对肌腱干细胞(tendon stem cells,TSCs)分化的影响,寻求TSCs成肌腱分化、成骨分化以及成脂肪分化的最佳单轴循环牵伸载荷。方法取8周龄雄性SD大鼠跟腱,采用酶消化法分离培养TSCs。取第3代TSCs,随机分为不同牵... 详细信息

目的探讨不同机械牵伸条件对肌腱干细胞(tendon stem cells,TSCs)分化的影响,寻求TSCs成肌腱分化、成骨分化以及成脂肪分化的最佳单轴循环牵伸载荷。方法取8周龄雄性SD大鼠跟腱,采用酶消化法分离培养TSCs。取第3代TSCs,随机分为不同牵拉条件组(实验组A^D组)及静态培养组(对照组E组),其中A组牵拉强度4%、频率1 Hz,B组牵拉强度4%、频率2 Hz,C组牵拉强度8%、频率1 Hz,D组牵拉强度8%、频率2 Hz。利用课题组自行研发的体外细胞单轴循环牵拉设备,沿培养皿长轴对A^D组细胞进行单轴循环机械牵伸,E组细胞行静态培养。分别处理12、24、48 h后收集各组细胞,采用实时荧光定量PCR检测成腱分化相关基因Scleraxis(SCX)、抗细胞黏合素C(Tenascin C,TNC),成脂肪分化相关基因CCAAT/增强子结合蛋白-α(CCAAT-enhancer-binding protein-α,CEBPα)、脂蛋白脂肪酶(lipoprteinlipase,LPL)及成骨分化相关基因RUNX2、远端缺失基因5(distal-less homeobox 5,DLX5)的表达;Western blot检测TNC、CEBPα及RUNX2蛋白表达。结果实时荧光定量PCR检测示:SCX、TNC m RNA相对表达量在B组牵拉24 h时显著高于其余各组,差异有统计学意义(P0.05)。结论机械力学刺激可以促进TSCs发生分化,而且不同条件的牵拉载荷会引起不同方向分化。4%、2 Hz牵拉24 h为成腱分化最佳条件,8%、1 Hz牵拉24 h为成骨分化最佳条件,8%、2 Hz牵拉48 h为成脂肪分化最佳条件。

关键词：机械牵拉肌腱干细胞分化大鼠

抑制肌动蛋白聚合对体外大鼠跟腱来源肌腱干细胞成脂分化的影响研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国修复重建外科杂志 2015年第2期29卷 206-212页

作者：陈波唐康来张吉强郭宇鹏刘翔周施又兴第三军医大学西南医院骨科全军矫形外科中心重庆400038 第三军医大学神经生物教研室

目的探讨细胞骨架重塑对体外大鼠跟腱来源肌腱干细胞(tendon stem cells,TSCs)成脂分化的影响。方法取3周龄雄性SD大鼠跟腱组织,采用酶消化法分离、培养TSCs,取第3代细胞用于实验。将细胞分别以细胞松弛素D(cytochalasin D,CYD)终浓度为... 详细信息

目的探讨细胞骨架重塑对体外大鼠跟腱来源肌腱干细胞(tendon stem cells,TSCs)成脂分化的影响。方法取3周龄雄性SD大鼠跟腱组织,采用酶消化法分离、培养TSCs,取第3代细胞用于实验。将细胞分别以细胞松弛素D(cytochalasin D,CYD)终浓度为0、50、100、500、1 000 ng/m L的含15%FBS的DMEM培养基进行培养,倒置相差显微镜下观察细胞存活及形态变化,纤维肌动蛋白(fibros actin,F-actin)染色观察细胞骨架,Western blot检测F-actin/球状肌动蛋白(globular actin,G-actin)比值,根据结果选择CYD有效使用浓度进行后续实验。取TSCs分别采用成脂诱导培养基(诱导组)、含CYD的成脂诱导培养基(CYD+诱导组)以及普通培养基(普通组)、含CYD的普通培养基(CYD+普通组)培养3、7 d,收集各组细胞行实时荧光定量PCR检测成脂分化相关特异标志性基因表达,包括过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)、脂蛋白酯酶(1ipoprotein lipase,LPL)、脂肪酸结合蛋白(a P2),Western blot检测PPARγ、a P2蛋白表达。结果 CYD浓度为100 ng/m L时既能有效干扰TSCs细胞骨架F-actin的聚合,又不影响TSCs的存活,选择该浓度进行后续实验。实时荧光定量PCR及Western blot检测示,3、7 d时CYD+诱导组PPARγ、LPL和a P2基因及PPARγ、a P2蛋白表达均显著高于诱导组,比较差异有统计学意义(P<0.05)。3、7 d时CYD+普通组PPARγ、LPL和a P2基因表达也显著高于普通组,比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论细胞骨架重塑是TSCs成脂分化的一个先决条件,抑制F-actin聚合可促进TSCs的成脂分化,对肌腱病的发病机制研究具有重要意义。

关键词：肌腱干细胞成脂分化细胞松弛素D 肌动蛋白细胞骨架大鼠

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华肝脏病杂志 2006年第6期14卷 435-440页

作者：张汝钢房殿春罗元辉郭丽萍第三军医大学西南医院全军消化病专科中心重庆400038

目的研究人端粒酶逆转录酶(hTERT)干扰对肝癌．HepG2、SMMC-7221细胞生物学形为的影响和对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)诱导凋亡的影响。方法将HepG2细胞和SMMC-7721细胞分为转染组 (转染重组质粒真核表达载体)、对照组(转染... 详细信息

目的研究人端粒酶逆转录酶(hTERT)干扰对肝癌．HepG2、SMMC-7221细胞生物学形为的影响和对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)诱导凋亡的影响。方法将HepG2细胞和SMMC-7721细胞分为转染组 (转染重组质粒真核表达载体)、对照组(转染空载体质粒)和未转染组。采用聚合酶链反应方法检测hTERT干扰序列, 逆转录聚合酶链反应方法检测hTERT表达,HE染色、生长曲线和流式细胞术方法分别检测细胞形态、增殖情况和细胞周期,β-半乳糖苷酶染色方法检测细胞状态,Armexin V／PI染色流式细胞术检测细胞凋亡。结果转染组细胞内均存在hTERT干扰序列,HepG2和SMMC 7221细胞hTERT干扰率分别为100％和43．3％;与未转染组细胞相比, 转染细胞核质比明显缩小,增殖率下降差异有统计学意义(P<0．05),老化细胞和G2-M期细胞明显增加(P<0．05)。细胞老化率分别由未转染组的0增加到转染组的20．4％,由3．60%,增加到10．O％;G2-M期分别由未转染组的7．1％、6．9％增加到转染组的10．6％、7．9％。hTERT干扰显著增加肝癌细胞凋亡和TRAIL诱导凋亡敏感性(P<0．05)。两株肝癌细胞凋亡率分别由未转染组的3．5％、4．8％增至转染组的5．2%、7．9％;100 ng／ml TRAIL作用24 h后两株肝癌细胞凋亡率分别由未转染组的5．3％、13．9％增加到转染组的10．4％、77．2％,而对照组细胞各指标均无显著变化。结论 hTERT干扰明显影响肝癌细胞的生物学行为,显著增加细胞凋亡和TRAIL诱导凋亡的敏感性。

关键词：癌,肝细胞端粒,末端转移酶细胞凋亡肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体

胃癌亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性及其与微卫星不稳的关系

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华流行病学杂志 2005年第10期26卷 794-799页

作者：司佩任房殿春张浩杨柳芹罗元辉廖化禹第三军医大学西南医院全军消化专科中心

目的探讨胃癌亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性与微卫星不稳的关系。方法采用聚合酶链反应.限制性片段长度多态性技术检测122例胃癌和101名正常对照的MTHFR 基因C677T和A1298C多态性;采用PCR为基础的方法检测微卫星不稳定性(MSI)... 详细信息

目的探讨胃癌亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性与微卫星不稳的关系。方法采用聚合酶链反应.限制性片段长度多态性技术检测122例胃癌和101名正常对照的MTHFR 基因C677T和A1298C多态性;采用PCR为基础的方法检测微卫星不稳定性(MSI)。结果MTHFR C677T多态性可分为677CC、677CT和677TT三种类型。胃癌组3种基因型频率分别为47.5%、39.3%和13.1%;对照组分别为48.5%、42.6%和8.9%,两组相比差异无统计学意义(P> 0.05)。以677CC基因型做为参考,胃贲门癌677CT基因型OR值为0.38,95%CI:0.15-0.98;TT 基因型OR值为0.26,95%CI:0.03-2.18;677CT+TT基因型OR值为0.36,95%CI:0.07-0.98。胃体癌677TT基因型OR值为3.03,95%CI:1.07-8.65。MTHFR A1298C多态性可分为1298AA、1298AC和1298CC 3种类型。胃癌组3种基因型频率分别为59.8%、36.1%和4.1%;对照组分别为57.4%,37.6%和5.0%,两组相比差异无统计学意义(P>0.05)。以1298AA基因型的OR值为1.00,胃窦癌AC基因型的OR值为0.87,95%CI:0.42-1.82,CC基因型的OR值为0.41,95%CI: 0.05-3.72。MTHFR 677TT基因型胃癌与微卫星不稳显著相关(P0.05)。结论重庆地区人群中MTHFR C677T多态性是胃贲门癌的保护因素,是胃体癌的危险因素;MTHFR A1298C多态性可能是胃窦癌的保护因素;677TT基因型胃癌的发生可能涉及到MSI途径。

关键词：胃肿瘤亚甲基四氢叶酸还原酶微卫星不稳

反义DNA甲基转移酶1改变肝癌SMMC-7721细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的敏感性及其机理的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华肿瘤杂志 2003年第6期25卷 538-541页

作者：李小安房殿春张宏杨金亮司佩任张汝刚杨柳芹第三军医大学西南医院全军消化专科中心

目的　观察转入反义DNA甲基转移酶 1(DNMT1)基因片段后的肝癌SMMC 772 1细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)的敏感性改变 ,初步阐明其机理。方法　台盼蓝排斥实验检测活细胞率 ;TUNEL法检测细胞凋亡率 ;流式细胞仪检测bcl 2、... 详细信息

目的　观察转入反义DNA甲基转移酶 1(DNMT1)基因片段后的肝癌SMMC 772 1细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)的敏感性改变 ,初步阐明其机理。方法　台盼蓝排斥实验检测活细胞率 ;TUNEL法检测细胞凋亡率 ;流式细胞仪检测bcl 2、bax和bad蛋白的表达。结果　转入反义DNMT1基因片段的肝癌SMMC 772 1细胞与转入正义DNMT1基因片段和空载体的细胞相比 ,活细胞率显著降低 (P <0 .0 5,P <0 .0 1) ,凋亡率显著增高 (P <0 .0 5,P <0 .0 1)。流式细胞仪结果显示 ,转入反义DNMT1基因片段的SMMC 772 1细胞 ,其bax和bad表达 ,尤其是bax的表达 ,明显高于转入正义DNMT1基因片段和空载体的细胞 ,但对bcl 2的表达无影响。结论　转入反义DNMT1基因片段的肝癌SMMC 772 1细胞对TRAIL的敏感性明显增强。

关键词：反义DNA甲基转移酶1 肝癌 SMMC-7721细胞肿瘤坏死因子凋亡诱导配体敏感性

机械牵伸对体外大鼠肌腱干细胞RhoA/Rho相关蛋白激酶分子表达的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国修复重建外科杂志 2014年第5期28卷 639-643页

作者：马林唐康来周兵华杨广华陈万穆米多袁成松第三军医大学西南医院骨科全军矫形外科中心重庆400038

目的探讨不同机械牵伸条件对大鼠肌腱干细胞（tendon stem cells，TSCs）RhoA/ Rho相关蛋白激酶（Rho associated protein kinases，ROCK）分子表达的影响。方法取2～3月龄雄性SD大鼠（体重200～250 g）跟腱组织，采用酶消化法分离培... 详细信息

目的探讨不同机械牵伸条件对大鼠肌腱干细胞（tendon stem cells，TSCs）RhoA/ Rho相关蛋白激酶（Rho associated protein kinases，ROCK）分子表达的影响。方法取2～3月龄雄性SD大鼠（体重200～250 g）跟腱组织，采用酶消化法分离培养TSCs。取第2～3代细胞接种于微沟槽培养皿中，分别以牵伸应变量4%、8%（4%牵伸组、8%牵伸组），牵伸频率1 Hz，牵伸时间4 h/d进行机械牵伸，倒置相差显微镜下观察细胞生长情况；牵伸1、2、3 d后收集细胞，采用实时定量 PCR、Western blot检测RhoA、ROCK基因及蛋白表达情况，应用细胞计数试剂盒8检测牵伸后细胞增殖情况。以未牵伸的TSCs作为对照组。结果第2代TSCs形态呈鹅卵石样，聚集生长；接种于微沟槽培养皿后呈杂乱生长；牵伸后细胞贴壁良好，无脱落，并沿受力方向排列。各时间点TSCs中RhoA、ROCK基因相对表达量随牵伸应变量的增加呈递增趋势，组间比较差异均有统计学意义（P 〈 0.05）。牵伸1 d时，4%、8%牵伸组与对照组相比RhoA、ROCK蛋白表达水平相似（P 〉 0.05）；2、3 d时，4%、8%牵伸组表达水平显著高于对照组，且随牵伸应变量增加呈递增趋势，组间比较差异均有统计学意义（P 〈 0.05）；各时间点，8%牵伸组细胞增殖显著低于4%牵伸组及对照组（P 〈 0.05）；4%牵伸组与对照组比较，差异无统计学意义（P 〉 0.05）。结论大鼠TSCs中RhoA、ROCK分子表达水平随牵伸应变量的增加而增加，RhoA/ROCK分子可能是TSCs机械牵伸后的重要效应分子。

关键词：肌腱干细胞肌腱病 RhoA Rho相关蛋白激酶大鼠

程序性细胞死亡因子4RNA干扰对胃癌细胞株MKN28凋亡的影响及其调控机制

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

胃肠病学 2009年第5期14卷 283-286页

作者：王伟强孙永刚王宏斌汪兴伟房殿春第三军医大学西南医院全军消化专科中心 400038

背景：程序性细胞死亡因子4（PDCD4）是-种新的抑癌基因，在肿瘤的发生、发展、治疗和预后中起重要作用。目的：探讨PDCD4RNA干扰对胃癌细胞株MKN28凋亡的影响及其调控机制。方法：设计PDCD4短发夹RNA（shRNA）干扰序列，构建干扰质粒... 详细信息

背景：程序性细胞死亡因子4（PDCD4）是-种新的抑癌基因，在肿瘤的发生、发展、治疗和预后中起重要作用。目的：探讨PDCD4RNA干扰对胃癌细胞株MKN28凋亡的影响及其调控机制。方法：设计PDCD4短发夹RNA（shRNA）干扰序列，构建干扰质粒并转染MKN28细胞，设立阴性对照组和空白对照组。以蛋白质印迹法检测PDCD4和凋亡相关蛋白FLIP、Caspase-8和Cleaved—Caspase-8的表达，以AnnexinV—FITC／PI双染法检测细胞凋亡。结果：PDCD4shRNA干扰质粒转染MKN28细胞后．获得稳定低表达PDCD4的细胞模型，干扰效率为86％。与阴性对照组和空白对照组相比，干扰组PDCD4蛋白表达显著降低（0．11±0．01对0．86±0．18和0．81±0．12．P〈0．01），MKN28细胞凋亡率亦显著降低（7．13％±0．86％对13．16％±2.35％和12．02％±2．11％，P〈O．05）。与空白对照组相比，干扰组FLIP表达显著增高（1．25±0．34对0．63±0．11，P〈0．01），而Caspase-8和Cleaved—Caspase-8表达显著降低（0．26±0．08对0．76±0．12，0．11±0．03对0．36±0．09，P〈0．01）。结论：干扰PDCD4表达可抑制胃癌细胞MKN28的凋亡，且这种抑制作用可能是由于干扰PDCD4促进抗凋亡蛋白FLIP的表达，从而抑制Caspase-8的活性引起的。

关键词：程序性细胞死亡因子4 RNA干扰细胞凋亡胃肿瘤

肝素酶mRNA在胃癌组织中的表达及其与c-met表达的关系

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

中华医学杂志 2004年第12期84卷 974-978页

作者：蔡永国房殿春杨仕明罗元辉杨孟华王东旭第三军医大学西南医院全军消化专科中心重庆400038

目的　研究胃癌组织中肝素酶mRNA的表达与胃癌临床病理特征及肿瘤微血管密度之间的关系 ,并探讨胃癌组织中的肝素酶表达增高的机制。方法　采用逆转录 -聚合酶链反应(RT PCR)法检测 4 7例手术切除的胃癌组织及癌旁组织中肝素酶mRNA的表... 详细信息

目的　研究胃癌组织中肝素酶mRNA的表达与胃癌临床病理特征及肿瘤微血管密度之间的关系 ,并探讨胃癌组织中的肝素酶表达增高的机制。方法　采用逆转录 -聚合酶链反应(RT PCR)法检测 4 7例手术切除的胃癌组织及癌旁组织中肝素酶mRNA的表达 ,免疫组织化学法检测c met在胃癌组织中的表达 ,CD34免疫组织化学染色 ,计数肿瘤微血管密度。结果　胃癌组织中肝素酶表达阳性率明显高于相应的癌旁组织 (74 5 %vs 19 1% ,P <0 0 1)。肝素酶表达阳性组的胃癌组织 ,其微血管密度显著高于阴性组 (5 1± 15vs 31± 10 ,P <0 0 1)。肝素酶mRNA的表达与胃癌患者的肿瘤直径、淋巴结转移、浸润深度以及TNM分期有关 ,与胃癌患者的年龄、性别、分化程度及有无远处转移无关。胃癌组织中c met阳性率为 85 1% ,与肝素酶mRNA表达之间的相关系数为 0 714 (P <0 0 1)。结论　胃癌组织中肝素酶mRNA表达水平增高 ,肿瘤微血管密度增高 ,促进了胃癌的生长、浸润及转移 ,与胃癌预后不良的临床病理特征有关。c met癌基因可能参与了肝素酶的表达调控。

关键词：肝素酶mRNA 胃癌组织基因表达 c-met表达癌细胞

腹水脱落细胞中肝素酶的表达对良恶性腹水鉴别诊断的价值

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华肝脏病杂志 2005年第5期13卷 390-391页

作者：蔡永国房殿春杨仕明罗元辉陈陵杨孟华王东旭第三军医大学西南医院全军消化专科中心重庆400038

肝素酶是近年来发现的能够降解基底膜及细胞外基质的关键酶,具有促进肿瘤细胞向周围组织间隙侵袭的作用.我们前期研究表明,肝素酶在胃癌组织中高表达,能够促进胃癌的血管生成、浸润与转移,是胃癌患者预后不良的一个指标[1].在腹水脱落... 详细信息

肝素酶是近年来发现的能够降解基底膜及细胞外基质的关键酶,具有促进肿瘤细胞向周围组织间隙侵袭的作用.我们前期研究表明,肝素酶在胃癌组织中高表达,能够促进胃癌的血管生成、浸润与转移,是胃癌患者预后不良的一个指标[1].在腹水脱落细胞中肝素酶是否表达,能否用于鉴别腹水的性质鲜见报道.我们采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肝素酶在腹水脱落细胞中的表达,探讨肝素酶在良恶性腹水鉴别诊断中的意义.

关键词：腹水脱落细胞肝素酶基因表达恶性腹水良性腹水胃癌组织