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人肝细胞-肝非实质细胞的混合聚集培养

解放军医学杂志 1997年第4期22卷 307-308页

作者：王英杰李梦东王宇明第三军医大学西南医院全军传染病中心

人肝细胞┐肝非实质细胞的混合聚集培养①６３００３８重庆第三军医大学西南医院全军传染病中心王英杰李梦东王宇明关键词细胞培养；肝细胞；肝非实质细胞；聚集中国图书资料分类号Ｒ５７５肝细胞培养是肝脏病研究的常用方法，近年来，... 详细信息

人肝细胞┐肝非实质细胞的混合聚集培养①６３００３８重庆第三军医大学西南医院全军传染病中心王英杰李梦东王宇明关键词细胞培养；肝细胞；肝非实质细胞；聚集中国图书资料分类号Ｒ５７５肝细胞培养是肝脏病研究的常用方法，近年来，在生物人工肝研究领域作为其中的关键...

关键词：细胞培养肝细胞肝非实质细胞聚集

丙型肝炎病毒包膜糖蛋白高变区1多抗原肽设计及免疫原性的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2000年第2期14卷 141-144页

作者：王永刚郝飞黄燕萍王宇明第三军医大学西南医院全军传染病中心重庆400038

目的　应用多抗原肽 (MAP)研究丙型肝炎病毒包膜糖蛋白高变区 1(HVR1)的抗原性。方法　根据已经获得的HCV BJ株E2 /NS1区氨基酸序列 ,参照国内外学者所报道的HCVHVR1序列及抗原性参数 ,设计并合成含HCVHVR1390— 411aa序列 2 2个氨基酸... 详细信息

目的　应用多抗原肽 (MAP)研究丙型肝炎病毒包膜糖蛋白高变区 1(HVR1)的抗原性。方法　根据已经获得的HCV BJ株E2 /NS1区氨基酸序列 ,参照国内外学者所报道的HCVHVR1序列及抗原性参数 ,设计并合成含HCVHVR1390— 411aa序列 2 2个氨基酸的线性表位多肽 (以LP表示 )及MAP(对称 8分枝 ) ,分别以LP和MAP免疫Balb/C小鼠及家兔 ,比较其免疫原性。结果　MAP免疫原性明显强于LP ,抗体滴度 1∶40 96 0 ,而LP免疫组为 1∶12 80。结论　MAP的构型优势能明显提高HCVHVR1合成多肽抗原的免疫原性 ,提示MAP可用于HCV分子疫苗的设计。

关键词：病毒包膜蛋白质肽类免疫原性丙型肝炎病毒

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抗生素对核酶活性的影响及其意义

中国药理学通报 2000年第4期16卷 383-386页

作者：于乐成顾长海毛青李奇芬第三军医大学西南医院全军传染病专科中心重庆400038

抗生素可抑制或促进核酶的活性 ,其中以抑制作用更常见 ;根据它们能否与鸟苷竞争结合位点 ,又可分为竞争性抑制与非竞争性抑制。这些发现拓宽了人们对抗生素效用的认识 ,并有可能在抗病毒治疗。

关键词：抗生素催化性RNA 核酶病毒感染

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反义寡核苷酸对H1δ9细胞中了型肝炎病毒

中华肝脏病杂志 1999年第1期7卷 13-14页

作者：李宏文毛青李奇芬王升启朱宝珍郑红丁健第三军医大学西南医院全军传染病中重庆400038

在Ｈ-１δ９细胞中观察反义寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）及其硫代修饰物（Ｓ－ＡＳＯＤＮ）对丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）基因复制与表达的抑制作用。方法在分子水平证实互补于ＨＤＶ基因链核酶自裂位点和Ｓｔｅｍｌ区的ＡＳＯＤＮ可抑制核酶自... 详细信息

在Ｈ-１δ９细胞中观察反义寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）及其硫代修饰物（Ｓ－ＡＳＯＤＮ）对丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）基因复制与表达的抑制作用。方法在分子水平证实互补于ＨＤＶ基因链核酶自裂位点和Ｓｔｅｍｌ区的ＡＳＯＤＮ可抑制核酶自裂的基础上，进一步台成针对该区６８４－６９８位核苷酸的１５聚ＡＳＯＤＮ及Ｓ－ＡＳＯＤＮ，在培养的ＨＩδ细胞中加人不同寡核苷酸，分别采用ＥＬＩＳＡ和斑点杂交法检测上清中ＨＤＡｇ及细胞中的ＨＤＶｃＤＮＡ。结果加人终浓度为６μｍｏｌ／Ｌ的Ｓ－ＡＳＯＤＮ后２４ｈＨ１δ９细胞中ＨＤＶＲＮＡ复制及ＨＤＡｇ分泌均受抑制，抑制率分别为８４５％和７６．１４％。Ｓ－ＡＳＯＤＮ的终浓度为２、４、６μｍｏｌ／Ｌ时，其抑制作用呈剂量依赖关系。在同等剂量时，ＡＳＯＤＮ与Ｓ－ＡＳＯＤＮ抑制作用相近。结论提示所用ＡＳＯＤＮ及Ｓ－ＡＳＯＤＮ均能有效抑制转基因细胞中ＨＤＶ基因的复制与表达，为进一步在动物体内研究Ｓ－ＡＳＯＤＮ抗ＨＤＶ的作用提供了实验依据。

关键词：反义寡核苷酸丁型肝炎病毒基因复制治疗

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体外生物人工肝支持系统的构建及其意义

中华内科杂志 1997年第10期36卷 665-668页

作者：王英杰王宇明李梦东初继庆陈国致周儒普重庆第三军医大学西南医院全军传染病中心新桥医院设备科

为建立理想的体外生物人工肝支持系统（ＥＢＬＳＳ），给肝衰竭患者提供新的治疗手段和措施，应用两步灌流技术分离人肝细胞，球形聚集法加以培养，同时使用中空纤维型生物反应器和血液透析仪改装的辅助循环系统，共同构成体外生物人工... 详细信息

为建立理想的体外生物人工肝支持系统（ＥＢＬＳＳ），给肝衰竭患者提供新的治疗手段和措施，应用两步灌流技术分离人肝细胞，球形聚集法加以培养，同时使用中空纤维型生物反应器和血液透析仪改装的辅助循环系统，共同构成体外生物人工肝支持系统，并以正常犬为对象进行体外实验。结果显示，分离所得肝细胞成活率为９４％，总产量达２×１０１０个以上，肝细胞在限制贴壁条件下形成球形聚集体悬浮生长，ＥＢＬＳＳ在实验犬体外运行５小时后，肝细胞仍保持较高的活性。实验过程犬生命征平稳，血清总蛋白和白蛋白增加。上述结果表明，所建ＥＢＬＳＳ已基本解决了生物人工肝的关键技术，系统安全、有效。为进一步开展肝衰竭的生物人工肝支持研究奠定了基础。

关键词：生物人工肝细胞培养肝细胞

人肝癌细胞系7721丙型肝炎病毒体外感染模型的建立

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中华传染病杂志 1999年第4期17卷 224-227页

作者：宋志强郝飞第三军医大学西南医院全军传染病专科中第三军医大学西南医院全军传染病专科中心

目的　建立接近体内自然感染状态并能稳定支持丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）体外长期复制的感染细胞模型。方法　将人肝癌细胞系７７２１与慢性丙型肝炎患者血清共温育８小时后，分别以逆转录聚合酶链反应、免疫组化、原位杂交检测细胞和... 详细信息

目的　建立接近体内自然感染状态并能稳定支持丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）体外长期复制的感染细胞模型。方法　将人肝癌细胞系７７２１与慢性丙型肝炎患者血清共温育８小时后，分别以逆转录聚合酶链反应、免疫组化、原位杂交检测细胞和／或培养上清中的ＨＣＶＲＮＡ、ＨＣＶ抗原表达及ＨＣＶＲＮＡ在感染细胞内的定位。结果　感染血清和细胞共同温育后的第２～６６天，从细胞内和培养上清中均可间断地检测出ＨＣＶ正、负链ＲＮＡ，即使其间细胞传代６次，ＨＣＶＮＳ３、ＮＳ５抗原在细胞内能稳定表达，原位杂交显示ＨＣＶＲＮＡ阳性物质多位于细胞浆。结论　７７２１细胞不但对ＨＣＶ易感，而且可以稳定地支持ＨＣＶ的体外长期复制，此模型可以用于ＨＣＶ感染、复制机制的研究、抗病毒药物的评价及保护性抗体／疫苗的初步筛选。

关键词：丙型肝炎病毒 7721细胞系细胞培养肝癌

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丙型肝炎病毒体外感染原代人胎肝细胞的研究

中华微生物学和免疫学杂志 2000年第5期20卷 427-430页

作者：宋志强郝飞王英杰刘国栋第三军医大学西南医院皮肤科全军传染病专科中心

目的　研究丙型肝炎病毒 (HCV)体外细胞培养方法。方法　原代人胎肝细胞与HCV感染血清共孵育后 ,用逆转录聚合酶链反应、原位杂交、免疫组化分别检测细胞和培养上清中的HCVRNA和HCV抗原表达。结果　从感染血清和细胞共同孵育后的 2～ ... 详细信息

目的　研究丙型肝炎病毒 (HCV)体外细胞培养方法。方法　原代人胎肝细胞与HCV感染血清共孵育后 ,用逆转录聚合酶链反应、原位杂交、免疫组化分别检测细胞和培养上清中的HCVRNA和HCV抗原表达。结果　从感染血清和细胞共同孵育后的 2～ 2 5d ,细胞内和 /或培养上清中可间断检出HCV正、负链RNA ;HCVNS3抗原在细胞内能稳定表达 ;原位杂交显示HCV负链RNA阳性物质多位于细胞浆。结论　原代人胎肝细胞对HCV易感。

关键词：丙型肝炎病毒人胎肝细胞细胞培养细胞模型

丁型肝炎患者肝组织中Bcl-2、Bax和肝细胞凋亡表达

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中华肝脏病杂志 2001年第2期9卷 81-83页

作者：顾小红李奇芬王宇明第三军医大学西南医院全军传染病专科中心

目的　探讨ｂｃｌ－２、ｂａｘ及肝细胞凋亡在丁型肝炎发病机理中的作用。方法　采用免疫组织化学单、双标记染色和ＴＵＮＥＬ技术，检测７７例丁型肝炎患者肝组织ＨＤＡｇ、ｂｃｌ－２、ｂａｘ及肝细胞凋亡表达，以６７例乙型肝炎作对... 详细信息

目的　探讨ｂｃｌ－２、ｂａｘ及肝细胞凋亡在丁型肝炎发病机理中的作用。方法　采用免疫组织化学单、双标记染色和ＴＵＮＥＬ技术，检测７７例丁型肝炎患者肝组织ＨＤＡｇ、ｂｃｌ－２、ｂａｘ及肝细胞凋亡表达，以６７例乙型肝炎作对照。结果　ｂｃｌ－２和ｂａｘ均以肝细胞浆表达为主。ＨＤＡｇ以肝细胞核表达为主。ＨＤＡｇ和Ｂａｘ与凋亡细胞表达及分布有相关性，三成分在各型肝炎中的表达强度差异有显著意义（Ｐ＜０．０５）。结论ＨＤＡｇ、ｂａｘ和肝细胞凋亡表达强度和阳性细胞分布均与肝组织炎症活动及病理损害程度相关，ＨＤＶ感染可诱导肝细胞表达ｂａｘ，增强肝细胞凋亡，这一机制在丁型肝炎发病机理中可能有一定重要作用。

关键词：丁型肝炎脱噬作用 bcl-2 bax 细胞凋亡

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O157∶H7大肠杆菌感染

中华传染病杂志 1999年第2期17卷 139-141页

作者：聂青和李梦东第三军医大学西南医院传染病中心

大肠杆菌是寄居肠道的优势菌丛之一，大多数对人体无害，但人们很早就发现大肠杆菌如远离肠道，侵入其他组织和血液，就可引起化脓性炎症或败血症。相比而言，其肠道致病性的认识较晚，直到四十年代发现某些血清型大肠杆菌是爆发婴儿腹... 详细信息

大肠杆菌是寄居肠道的优势菌丛之一，大多数对人体无害，但人们很早就发现大肠杆菌如远离肠道，侵入其他组织和血液，就可引起化脓性炎症或败血症。相比而言，其肠道致病性的认识较晚，直到四十年代发现某些血清型大肠杆菌是爆发婴儿腹泻的病因后，各方面的研究才取得了较...

关键词：大肠杆菌感染 O157:H7 诊断治疗流行病学