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视神经损伤大鼠模型的建立

第二军医大学学报 2001年第4期22卷 394-395页

作者：丁汉明黄才国姜华魏善建上海市杨浦区卫生学校上海200093 第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433

视觉系统的一些疾病如视网膜色素变性、视神经炎、眼挫伤、青光眼等所引起的视神经萎缩和损伤目前仍无较好的治疗方法［1］，通过建立视神经损伤的动物模型并进行治疗，以寻求有效的药物，对于治疗上述疾病具有重要意义。目前国内尚无... 详细信息

视觉系统的一些疾病如视网膜色素变性、视神经炎、眼挫伤、青光眼等所引起的视神经萎缩和损伤目前仍无较好的治疗方法［1］，通过建立视神经损伤的动物模型并进行治疗，以寻求有效的药物，对于治疗上述疾病具有重要意义。目前国内尚无经典的视神经损伤模型可以直接应用于视神经药理实验。本实验利用二硫化碳(CS2)造成大鼠视神经损伤，并用电生理方法，记录CS2中毒前后大鼠的视觉诱发电位变化，以确定大鼠视神经损伤模型是否建立成功。

关键词：视神经损伤二硫化碳视觉诱发电位动物实验

小鼠胚胎干细胞NT3基因转染后移植对脊髓损伤的恢复作用

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第12期12卷 2263-2266页

作者：秦茂林杨卫兵李红丽李成仁刘建军解放军第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室重庆市400038 解放军第一八一医院皮肤科广西壮族自治区桂林市541002

目的：由胚胎干细胞分化的神经细胞移植能够在一定程度上恢复脊髓损伤模型动物的功能,此发现使胚胎干细胞成为一种用于移植学研究的重要工具。观察经NT3基因转染修饰的小鼠MESPU35（ES-NT3）胚胎干细胞株移植对脊髓损伤动物脊髓结构和... 详细信息

目的：由胚胎干细胞分化的神经细胞移植能够在一定程度上恢复脊髓损伤模型动物的功能,此发现使胚胎干细胞成为一种用于移植学研究的重要工具。观察经NT3基因转染修饰的小鼠MESPU35（ES-NT3）胚胎干细胞株移植对脊髓损伤动物脊髓结构和功能重建的恢复效果。方法：实验于2004-09/12在解放军第三军医大学组织胚胎学教研室实验室完成。①材料：清洁级成年Wistar大鼠36只,随机数字表法分为模型对照组、未转染细胞移植组、基因转染细胞移植组,12只/组,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。移植所用MESPU35细胞株和ES-NT3细胞株均由本室冻存。②实验方法：复苏MESPU35和ES-NT3细胞株,采用经典维甲酸4-/4＋法诱导两种胚胎干细胞神经定向分化,收集分化9d后的细胞,调整细胞终浓度至5×10^10L^-1备用。各组大鼠均建立L4脊髓损伤模型,在脊髓完全横断后10min内,基因转染细胞移植组分多点缓慢注入ES-NT3胚胎干细胞悬液,2μL/点,细胞总数约4×10^5个,注射位置为损伤区域白质与灰质交界处;未转染细胞移植组同法注射MESPU35胚胎干细胞悬液,模型对照组注射等量生理盐水。③实验评估：各组大鼠分别于术前、术后即刻、术后15d和30d进行后肢运动功能Tarlov评分检测,分数越低表示运动功能恢复越差。后肢运动功能检测30min后进行斜板实验,检测大鼠抓握和维持姿势能力。微型注射器将25%的辣根过氧化物酶2μL注入大鼠坐骨神经内,2d后取L1～L4脊髓常规冰冻切片,参照Mesulam法进行过氧化物酶逆行追踪。结果：因细菌感染,模型对照组、未转染细胞移植组、基因转染细胞移植组各死亡2只、1只、2只。①后肢运动功能检测：各组大鼠术后即刻后肢运动功能评分为0。术后15d,30d与模型对照组比较,未转染细胞移植组后肢运动功能评分升高（P〈0.01）,但未达到正常水平;基因转染细胞移植组恢复程度最高,后肢运动功能评分基本接近正常水平,明显高于未转染细胞移植组（P〈0.05）。②斜板试验：与后肢运动功能检测结果基本相似。③辣根过氧化物酶逆行追踪情况：模型对照组未见阳性神经元。术后30d基因转染细胞移植组阳性神经元增至最多,脊髓结构恢复情况优于未转染细胞移植组。结论：经NT3基因转染修饰的鼠MESPU35胚胎干细胞向神经定向诱导分化后,移植治疗脊髓损伤大鼠能更好地促进脊髓功能恢复和结构重建。

关键词：胚胎干细胞 NT-3基因脊髓损伤大鼠

氢气在缺血再灌注损伤性疾病及器官移植中的研究进展

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解剖学报 2018年第3期49卷 406-411页

作者：黄俊隆刘文武孙学军第二军医大学海军医学系海军航空医学教研室第二军医大学海军医学系潜水医学教研室上海200433

在多种疾病的发生发展及器官移植的过程中,缺血再灌注损伤(I/R)是重要的病理生理学基础。氢气作为一种新的抗氧化剂,在多种器官缺血再灌注疾病和器官移植模型中的作用被广泛研究。这里,我们回顾与氢气治疗相关的缺血再灌注损伤性疾病及... 详细信息

在多种疾病的发生发展及器官移植的过程中,缺血再灌注损伤(I/R)是重要的病理生理学基础。氢气作为一种新的抗氧化剂,在多种器官缺血再灌注疾病和器官移植模型中的作用被广泛研究。这里,我们回顾与氢气治疗相关的缺血再灌注损伤性疾病及器官移植的研究进展,讨论氢气在器官缺血再灌注损伤中的保护效应和作用机制,并对未来研究进行展望。大量实验证据表明,氢气能够通过选择性抗氧化减少氧化应激,对抗炎症,减少凋亡,在不同的缺血再灌注疾病模型及器官移植中发挥显著的保护治疗作用。氢气对缺血再灌注损伤的作用研究为未来氢气医学临床应用奠定了基础,但相关机制和临床研究仍然需要进一步加强。

关键词：氢气缺血再灌注损伤器官移植

低浓度毒毛旋花子苷元的强心作用及其与心肌细胞膜Na~+,K~+-ATP酶的关系(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2003年第11期24卷 41-45+111页

作者：苏素文王永利李军霞梅和珊尹京湘河北医科大学基础医学院药理学教研室河北医科大学基础医学院药理学教研室石家庄 050017 中国

目的:观察低浓度的毒毛旋花子苷原(Strophanthidin,Str)对离体豚鼠心脏是否有强心作用,及其与心肌细胞膜Na~+,K~+-ATP酶活性的关系。方法:采用Langendorff离体灌流装置经主动脉逆行灌流心脏;八道生理记录仪记录心率(HR),左室内压(LVP)... 详细信息

目的:观察低浓度的毒毛旋花子苷原(Strophanthidin,Str)对离体豚鼠心脏是否有强心作用,及其与心肌细胞膜Na~+,K~+-ATP酶活性的关系。方法:采用Langendorff离体灌流装置经主动脉逆行灌流心脏;八道生理记录仪记录心率(HR),左室内压(LVP)及其最大变化速率(±dP/dtmax);无机磷法测定心肌细胞膜Na~+,K~+-ATP酶活性。结果:Str 0.1nmol/L可兴奋Na~+,K~+-ATP酶活性(P<0.05)但不影响心脏的收缩功能,Str 1nmol/L仅能升高+dP/dtmax(P<0.05)并兴奋Na~+,K~+-ATP酶活性(P<0.01),Str 10和100 nmol/L可升高LVP和+dP/dtmax(P<0.05或P<0.01),对Na~+,K~+-ATP酶活性无明显作用,Str 1-100μmol/L虽能短暂升高LVP和±dp/dtmax(P<0.01),但随后出现不规则收缩并使LVP和±dP/dtmax降低,其对Na~+,K~+-ATP酶活性则表现为剂量依赖性抑制作用(P<0.01)。结论:高浓度Str的正性肌力作用是通过抑制Na~+,K~+-ATP酶活性实现的,而低浓度Str的强心作用似与Na~+,K~+-ATP酶抑制作用无关。

关键词：毒毛旋花子苷元心肌收缩 Na~+-K~+-交换ATP酶豚鼠

缺氧性脑损伤对大鼠癫痫敏感性和脑内PSD-95表达的影响

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第三军医大学学报 2008年第14期30卷 1353-1356页

作者：陈秀吴万福胡长林蔡文琴杨忠重庆医科大学附属第二医院神经内科重庆400010 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的探讨缺氧性脑损伤后癫痫发作敏感性及其与PSD-95的关系。方法采用成年雄性SD大鼠,以8%氧氮混合气体建立大鼠缺氧性脑损伤模型,腹腔注射戊四唑(pentylenetetrazol,PTZ)10mg/(kg.5min)和35mg/(kg.2d)点燃大鼠,检测其癫痫敏感性的改变... 详细信息

目的探讨缺氧性脑损伤后癫痫发作敏感性及其与PSD-95的关系。方法采用成年雄性SD大鼠,以8%氧氮混合气体建立大鼠缺氧性脑损伤模型,腹腔注射戊四唑(pentylenetetrazol,PTZ)10mg/(kg.5min)和35mg/(kg.2d)点燃大鼠,检测其癫痫敏感性的改变。分别用免疫组织化学和免疫印迹方法观察大鼠颞叶皮层、海马和中脑神经元脱失的病理学改变以及脑内PSD-95表达的变化。结果缺氧损伤后大鼠癫痫敏感性明显增强。缺氧大鼠和缺氧后PTZ致痫大鼠海马CA1区、颞叶皮层和中脑神经元不同程度的脱失,缺氧大鼠脑内PSD-95表达明显降低。结论成年大鼠缺氧性脑损害后癫痫敏感性增强,可能与神经元脱失以及脑内PSD-95表达变化有关。

关键词：缺氧性脑损伤癫痫敏感性神经元脱失 PSD-95 戊四唑

救援官兵地震1周年后创伤后应激障碍发生率及相关因素

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中华行为医学与脑科学杂志 2010年第1期19卷 50-52页

作者：胡光涛李敏贺英李学成王国威李繁成都军区解放军第324医院精神卫生中心重庆400041 第三军医大学心理学教研室昆明陆军学院政工教研室

目的调查汶川地震1周年后救援官兵创伤后应激障碍（FFSD）的现患率。方法采用自编一般情况问卷、创伤后应激障碍（PTSD）症状清单平民版（PCL-C）、症状自评量表（SCL-90）、简易应对方式问卷（SCSQ）、艾森克个性问卷（EPQ）组成调查... 详细信息

目的调查汶川地震1周年后救援官兵创伤后应激障碍（FFSD）的现患率。方法采用自编一般情况问卷、创伤后应激障碍（PTSD）症状清单平民版（PCL-C）、症状自评量表（SCL-90）、简易应对方式问卷（SCSQ）、艾森克个性问卷（EPQ）组成调查表，于汶川地震1周年时对1176名参加抗震救灾部队官兵进行测试。以PCL—C、SCL-90部分因子作为心理健康状况评定指标，用t检验、相关分析探讨其相关影响因素。结果1周年后救援官兵PTSD现患率为3．45％。SCL-90量表中躯体化因子分[（1．43±0．57）分]、EPQ中内外向[（12．50±3．79）分]、SCSQ中积极应对[（2．05±0．71）分]分值均显著高于全军常模（P〈0．01或P〈0．05），SCL-90量表中焦虑、抑郁、EPQ中神经质、SCSQ中消极应对分值均显著低于全军常模（P〈0．01）。FrSD组情绪更不稳定、更多地采用消极的应对方式。PCL-C总分与SCL-90中躯体化、焦虑和抑郁因子分及EPQ中神经质因子和消极应对分值呈显著正相关（P〈0．01），与EPQ中内外向因子、积极应对分值呈显著负相关（P〈0．01）。结论汶川地震1周年后救援官兵PTSD现患率为3．45％，官兵整体心理健康状况良好；具有神经质、内向性的个体及低年资、低文化程度的救援军人是心理干预的重点人群。

关键词：创伤后应激障碍危险因素军人

利用基因重组抗原研制人CD20单克隆抗体及其功能的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2002年第4期22卷 385-388页

作者：李爱玲孙瑛勋洪海燕于鸣赵法伋郭俊生沈倍奋第二军医大学军队卫生教研室上海200433 军事医学科学院基础医学研究所分子免疫室第二军医大学微生物学教研室

目的　利用基因重组抗原免疫小鼠 ,制备人CD2 0单克隆抗体 ,研究其特异性和功能。方法　用表达重组人CD2 0基因的细胞NIH 3T3免疫BALB c小鼠 ,取其脾细胞与Sp2 0细胞融合 ,以间接免疫荧光法筛选杂交瘤上清。免疫沉淀法及流式细胞术鉴... 详细信息

目的　利用基因重组抗原免疫小鼠 ,制备人CD2 0单克隆抗体 ,研究其特异性和功能。方法　用表达重组人CD2 0基因的细胞NIH 3T3免疫BALB c小鼠 ,取其脾细胞与Sp2 0细胞融合 ,以间接免疫荧光法筛选杂交瘤上清。免疫沉淀法及流式细胞术鉴定其识别抗原的相对分子质量 (Mr)和特异性 ;以MTT法、流式细胞术及形态学方法检测诱导细胞凋亡和抑制细胞增殖的功能。结果　利用杂交瘤技术获得了 1株抗人CD2 0的单克隆抗体 1 2 8,它具有CD2 0抗体特异的细胞反应谱 ,其识别的抗原Mr 为 33× 10 3 。MTT实验证实 1 2 8能显著抑制Daudi和Raji细胞生长。结论　利用基因重组抗原制备了 1株能够稳定分泌抗人CD2 0的单克隆抗体的杂交瘤细胞株 1 2 8,此单抗具有抑制CD2 0阳性细胞增殖和诱导其凋亡的功能。

关键词：基因重组抗原 CD20基因单克隆抗体细胞凋亡间接免疫荧光法免疫沉淀法流式细胞术抗体制备

肿瘤坏死因子α在血管内皮细胞向间质细胞转化中的作用

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中华烧伤杂志 2012年第1期28卷 19-24页

作者：代卉黄宏王莎莉徐祥简宇崔文慧张猛张波蒋建新重庆医科大学基础医学院神经科学研究中心 400016 重庆医科大学基础医学院生理教研室 400016 第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

目的观察TNF-α在血管内皮细胞向间质细胞转化中的作用,探讨纤维化疾病发生的机制. 方法取健康胎儿脐带,体外酶消化法分离培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,用免疫荧光法进行鉴定.取第3～5代对数生长期HUVEC分别接种于12孔板和6孔板中,... 详细信息

目的观察TNF-α在血管内皮细胞向间质细胞转化中的作用,探讨纤维化疾病发生的机制. 方法取健康胎儿脐带,体外酶消化法分离培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,用免疫荧光法进行鉴定.取第3～5代对数生长期HUVEC分别接种于12孔板和6孔板中,均按随机数字表法分为6组：对照组,培养液中不加任何刺激因素；5、10、25、50、100 ng/mL TNF-α组,分别在培养液中添加相应终浓度TNF-α,每组3个样本.培养72 h后倒置相差显微镜下观察各组细胞形态；免疫荧光法检测12孔板中各组细胞凝血因子Ⅷ和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,计算2种因子双阳性细胞数比值及吸光度值比值；RT-PCR检测6孔板中各组细胞钙黏蛋白、α-SMA和Ⅰ型胶原mRNA的表达（以灰度值比值表示）.对数据行单因素方差分析及LSD检验. 结果（1）原代培养HUVEC为圆形、短梭形或扁平形,传代后细胞呈铺路石样旺盛生长.经第1、2、3、4、5次传代后HUVEC凝血因子Ⅷ阳性表达率分别为（85.5±1.8）％、（88 1±5 0）％、（93.6±3.7）％、（92.9±4 8）％、（89.5±1.1）％,明显高于原代培养HUVEC的（81.4±3.8）％,F值均为7.481,P值均小于0.05.（2）对照组细胞呈圆形、短梭形或扁平形,细胞间连接紧密；5、10、25、50、100 ng/mL TNF-α组随着TNF-α浓度的增加,细胞形态逐渐向长梭形转变,细胞间连接减少、间隙变大.（3）对照组中凝血因子Ⅷ、α-SMA双阳性细胞数比值和吸光度值比值分别为0.055±0 015、0.078±0 017,均显著低于5、10、25、50、100 ng/mL TNF-α组的0 257±0.106、0 280±0.129、0.505±0 059、0.817±0.035、0.929±0.101和0.437±0 040、0 456±0.097、0 496±0.082、0.787±0 131、0.885±0 087,F值分别为45 009、50.099,P值均小于0.01.（4）5、10、25、50、100 ng/mL TNF-α组细胞中钙黏蛋白mRNA水平分别为0.70±0.05、0.63±0 06、0 60±0.10、0.45±0.16、0 26±0.14,后4组显著低于对照组的0 83±0.03,F值均为11.593,P ＜0.05或P＜0.01.5、10、25、50、100 ng/mL TNF-α组细胞α-SMA和Ⅰ型胶原mRNA水平分别为0.45±0.10、0.51±0.16、0.49±0 12、0.60±0.09、0 76±0.03和0.38±0.18、0.45±0.15、0 52±0 12、0 66±0.17、0.76±0.20,后3组2项指标水平显著高于对照组的0.37±0.14、0 31±0 12,F值分别为7.839、2.898,P ＜0.05或P＜0.01. 结论 TNF-α呈明显浓度依赖性促进HUVEC向间质细胞转化,可能是瘢痕形成中纤维化组织内肌成纤维细胞的又一重要来源.

关键词：肿瘤坏死因子α 内皮细胞间质细胞细胞转分化肌成纤维细胞

双萘酰亚胺类化合物诱导SMMC-7721细胞凋亡的研究

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中华肝脏病杂志 2008年第8期16卷 608-611页

作者：刘健孙强陈英杰孙抒大连大学医学院病理学教研室 116622 大连大学附属中山医院延边大学医学部基础医学院病理学教研室

目的观察双萘酰亚胺类化合物（C8）对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的作用。方法四甲基偶氮唑盐法检测C8对SMMC-7721细胞的抑制情况；流式细胞术检测细胞周期和凋亡率；Western blot检测Bcl-2蛋白表达量；流式细胞术分析细胞内Bcl-2蛋白量... 详细信息

目的观察双萘酰亚胺类化合物（C8）对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的作用。方法四甲基偶氮唑盐法检测C8对SMMC-7721细胞的抑制情况；流式细胞术检测细胞周期和凋亡率；Western blot检测Bcl-2蛋白表达量；流式细胞术分析细胞内Bcl-2蛋白量；酶联免疫法检测Caspase 9和Caspase 3表达量。结果C8抑制SMMC-7721细胞增殖，半数抑制浓度为15μmol／L。C8作用浓度在10、15、20μmol／L时，SMMC-7721细胞的凋亡比例分别为16.8％、29．4％和35．8％，对照组为2．1％，SMMC-7721细胞的凋亡率明显高于对照组，P〈0．01。细胞内Bcl-2蛋白表达水平下降。酶联免疫检测结果表明Caspase 9和Caspase 3被活化。结论C8可诱导人肝癌SMMC-7721细胞的凋亡，为抗肿瘤药物的研究提供新的化合物。

关键词：癌,肝细胞细胞凋亡萘酰亚胺 SMMC-7721细胞