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重组人白细胞介素10在毕赤酵母中的表达及生物学活性测定

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第9期25卷 773-776页

作者：井申荣邹全明曾韦锟毛旭虎刘开云第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室

目的在毕赤酵母中分泌表达具有生物学活性的重组人白细胞介素10(rhIL-10),用于IL-10的生理功能研究和动物试验。方法通过PCR扩增IL-10基因,插入到重组质粒α/pUC18的α因子信号序列的XhoⅠ和EcoRⅠ酶切位点处,再将融合基因αIL-10重组... 详细信息

目的在毕赤酵母中分泌表达具有生物学活性的重组人白细胞介素10(rhIL-10),用于IL-10的生理功能研究和动物试验。方法通过PCR扩增IL-10基因,插入到重组质粒α/pUC18的α因子信号序列的XhoⅠ和EcoRⅠ酶切位点处,再将融合基因αIL-10重组到表达质粒pPIC9K的BamHⅠ和EcoRⅠ之间,SalⅠ酶切线性化重组质粒IL-10/pPIC9K,电穿孔转化毕赤酵母,营养缺陷型培养基MD和G418筛选含高拷贝表达盒的酵母转化子,PCR鉴定是否含有目的基因IL-10,甲醇诱导rhIL-10的表达,SDS-PAGE和Westernblot鉴定目的蛋白,用ELISA定量测定及MC/9细胞分析IL-10生物学活性。结果成功构建了重组表达质粒IL-10/pPIC9K,获得了4个含IL-10基因的高拷贝毕赤酵母转化子,甲醇诱导后,在摇瓶水平的IL-10表达量为(0.627±0.09)mg/L,比活性为1.5×105U/mg。结论毕赤酵母分泌表达的IL-10具有良好的生物学活性。

关键词：白细胞介素10 毕赤酵母分泌表达生物学活性重组人白细胞介素10 生物学活性测定毕赤酵母 IL-10基因质粒pPIC9K SDS-PAGE rhIL-10 Western EcoRⅠ

白细胞介素-10基因多拷贝表达盒的构建及在毕赤酵母中的表达

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中国生物制品学杂志 2007年第2期20卷 81-86页

作者：井申荣邹全明洪愉郭刚毛旭虎第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室

目的构建白细胞介素-10(IL-10)基因多拷贝表达盒,提高IL-10在毕赤酵母中的表达水平。方法体外构建重组表达载体αIL-10/pAO815,BamHⅠ和BglⅡ双酶切获得目的基因表达盒(AOX-αIL-10),再连接到BglⅡ酶切位点处,依次构建多拷贝重组载体n(A... 详细信息

目的构建白细胞介素-10(IL-10)基因多拷贝表达盒,提高IL-10在毕赤酵母中的表达水平。方法体外构建重组表达载体αIL-10/pAO815,BamHⅠ和BglⅡ双酶切获得目的基因表达盒(AOX-αIL-10),再连接到BglⅡ酶切位点处,依次构建多拷贝重组载体n(AOX-αIL-10)/pAO815。从质粒pPIC9K上用NdeⅠ和SalⅠ双酶切获得Kan抗性基因,重组到多拷贝表达载体n(AOX-αIL-10)/pAO815上。重组载体n(AOX-αIL-10)/pAO815电转化毕赤酵母,PCR筛选含有IL-10基因的酵母转化子,甲醇诱导表达,对表达量高的转化子再次经重组载体n(AOX-αIL-10)/pAO815-Kan电转化,高浓度G418抗性筛选二次酵母转化子,使用甲醇诱导表达。ELISA测定IL-10含量,MC/9细胞测定IL-10活性。结果所构建的8拷贝表达盒的重组载体8(AOX-αIL-10)/pAO815和4拷贝表达盒4(AOX-αIL-10)/pAO815-Kan,转化子分泌表达IL-10水平最高,为(8.25±1.65)mg/L,比活性为1.465×105U/mg。结论已成功构建了高拷贝表达盒,并提高了IL-10在毕赤酵母中的表达水平。

关键词：白细胞介素-10 毕赤酵母多拷贝表达盒

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RGD肽在肿瘤治疗中的研究进展

中国肿瘤临床 2005年第19期32卷 1135-1137页

作者：肖斌朱永红邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫教研室重庆市400038

RGD肽是一类含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp)的短肽,作为整合素和其配体相互作用的识别位点,介导细胞与细胞外基质及细胞之间的相互作用。肿瘤细胞或者新生血管可以特异表达某些整合素如αvβ3,能以一定的亲和力结合RGD肽,成... 详细信息

RGD肽是一类含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp)的短肽,作为整合素和其配体相互作用的识别位点,介导细胞与细胞外基质及细胞之间的相互作用。肿瘤细胞或者新生血管可以特异表达某些整合素如αvβ3,能以一定的亲和力结合RGD肽,成为肿瘤治疗的新靶点。因此,RGD肽在肿瘤治疗中的应用已成为研究热点。放射性核素标记的RGD肽是一类很有前景的肿瘤显像剂。此外RGD肽可以诱导肿瘤细胞凋亡且作为载体在肿瘤靶向治疗中发挥重要作用。

关键词： RGD肽整合素αvβ3 肿瘤治疗

幽门螺杆菌超声处理菌液口服免疫BALB/c小鼠的实验研究

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第三军医大学学报 2002年第8期24卷 941-943页

作者：于长青邹全明王缚鲲张卫军曾浩第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室重庆400038

目的　从细胞和分子水平探讨小鼠口服免疫幽门螺杆菌超声处理菌液后的粘膜免疫应答。方法　Hp菌超声上清和粘膜佐剂大肠杆菌不耐热肠毒素 (LT)口服免疫小鼠 ,ELISPOT分析胃粘膜、派伊尔结 (Payer’spatchPP)抗原特异性抗体分泌细胞(ASC)... 详细信息

目的　从细胞和分子水平探讨小鼠口服免疫幽门螺杆菌超声处理菌液后的粘膜免疫应答。方法　Hp菌超声上清和粘膜佐剂大肠杆菌不耐热肠毒素 (LT)口服免疫小鼠 ,ELISPOT分析胃粘膜、派伊尔结 (Payer’spatchPP)抗原特异性抗体分泌细胞(ASC)、RT PCR分析肠粘膜免疫主要诱导部位PPT细胞因子mRNA表达水平。结果　①结合佐剂口服免疫可诱导胃粘膜、PP大量抗原特异性抗体分泌细胞 (ASC) ,尤以sIgA ASC型居多。②单纯抗原免疫小鼠PPT细胞 ,早期高表达IL 4,晚期高表达IFN γ。③抗原 +LT免疫小鼠PPT细胞 ,早期高表达IFN γ ,晚期高表达IL 4。结论　单纯抗原口服免疫诱导的抗体分泌细胞数量尤其是sIgA型明显低于联合应用佐剂组 ,PP体外抗原刺激后先表现为Th2 型优势应答 ,后转为Th1型优势应答 ,而结合LT免疫 ,PP则先表现为Th1型优势应答 ,后转为Th2 型优势应答。

关键词：幽门螺杆菌超声处理菌液幽门螺杆菌口服免疫抗体分泌细胞 Th1/Th2细胞肠粘膜免疫应答

幽门螺杆菌粘附素与大肠杆菌LtB融合疫苗的口服免疫与预防试验

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中国人兽共患病杂志 2004年第7期20卷 577-581页

作者：刘正祥邹全明洪愉郭桐生郭鹰曾韦锟第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室重庆400038

目的　观察幽门螺杆菌粘附素HpaA与大肠杆菌LtB融合蛋白质经口服免疫BALB/c小鼠后机体产生的免疫应答和蒙古沙鼠免疫预防作用。方法　用PCR方法扩增HpaA和LtB目的基因片段 ,将LtB与 pPIM质粒连接后 ,再与HpaA基因连接 ,转化大肠杆菌DH5... 详细信息

目的　观察幽门螺杆菌粘附素HpaA与大肠杆菌LtB融合蛋白质经口服免疫BALB/c小鼠后机体产生的免疫应答和蒙古沙鼠免疫预防作用。方法　用PCR方法扩增HpaA和LtB目的基因片段 ,将LtB与 pPIM质粒连接后 ,再与HpaA基因连接 ,转化大肠杆菌DH5α ,经酶切获得含有ltB -hpaA的pPIM -ltB/hpaA融合质粒。将重组质粒转化E coliBL2 1(DE3) ,筛选获得重组工程菌 ,经发酵、包涵体提取 ,复性 ,纯化获得LtB -HpaA。BABL/c小鼠设正常对照组、单独rHpaA对照组、CT +HpaA实验组、融合蛋白LtB -HpaA组和rLtB +rHpaA实验组 ,免疫 4周后检测血清抗原特异性IgG、IgA和胃冲洗液、肠冲洗液中sIgA。蒙古沙鼠分 3个实验组 ,正常对照 (PBS)组 ,单独HpaA免疫组和LtB -HpaA组 ,免疫 4周 ,于末次免疫后 14天灌活力良好的H pyloriSS1活菌 ,1个月处死动物 ,采集标本 ,用细菌培养和病理切片检查评价蒙古沙鼠的免疫保护作用。结果　融合蛋白LtB -HpaA组及将CT和LtB作为外粘膜佐剂的CT +HpaA组和LtB +HpaA组中血清IgA和IgG、胃冲洗液和肠冲洗液中sIgA含量明显高于单独HpaA组和对照组 ,差异非常显著 (P <0 0 0 1)。蒙古沙鼠融合蛋白rLtB-HpaA组比单纯rHpaA组效果明显 (rLtB -HpaA组保护率为 80 % ,单独rHpaA为 2 0 % )。

关键词：幽门螺杆菌粘附素大肠杆菌 LtB融合疫苗口服免疫预防试验免疫应答

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树突状细胞在调节性T细胞产生中的作用

中国免疫学杂志 2007年第1期23卷 85-88页

作者：肖斌朱永红邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室重庆400038

树突状细胞(Dendritic cells,DCs)是一类重要的专职抗原提呈细胞,虽在体内的数量较少,但具有超强的抗原提呈能力,而且能够活化初始T细胞(Naive T cells),在免疫应答的诱导中具有独特的地位。DCs既能诱导有效的免疫应答,同时在诱导免疫... 详细信息

树突状细胞(Dendritic cells,DCs)是一类重要的专职抗原提呈细胞,虽在体内的数量较少,但具有超强的抗原提呈能力,而且能够活化初始T细胞(Naive T cells),在免疫应答的诱导中具有独特的地位。DCs既能诱导有效的免疫应答,同时在诱导免疫耐受中也十分重要。在中枢耐受中,胸腺内的DCs可以通过阴性选择清除自身反应性T细胞。近年来,越来越多的证据表明,DCs在外周耐受中也起着关键性的作用,可以通过诱导效应性CD4^+T或者CD8^+T细胞的无能,促进调节性T细胞(T regulatory cells,Treg)的分化来调控针对自身抗原的外周耐受。DCs的来源、表型和成熟状态都具有多样性和异质性,DCs的耐受功能可能依赖于其某一成熟阶段或者是某一亚群。本文就DCs在诱导产生Treg中的作用和应用进展做一简要综述。[第一段]

关键词：调节性T细胞树突状细胞专职抗原提呈细胞自身反应性T细胞 CD8^+T细胞 cells 抗原提呈能力免疫耐受

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幽门螺杆菌持续性感染机理

中国人兽共患病杂志 2005年第10期21卷 910-913页

作者：朱永红第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室重庆400038

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）是人体专性寄生菌。主要定植在人胃腔，与慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌及粘膜相关淋巴组织（MALT）淋巴瘤的发生密切相关。脚在全球人群的感染率超过50％，未经治疗的Hp感染常常持续终生。研究显示... 详细信息

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）是人体专性寄生菌。主要定植在人胃腔，与慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌及粘膜相关淋巴组织（MALT）淋巴瘤的发生密切相关。脚在全球人群的感染率超过50％，未经治疗的Hp感染常常持续终生。研究显示，Hp是人类的古老定居者。Hp能在人体特殊的复杂多变的胃环境中长期定居，导致人体持续性感染．与其具有的特殊生物学特性及免疫逃避等机制密切相关，现将这方面的有关研究综述如下。

关键词：幽门螺杆菌细菌感染持续性感染免疫逃避

重组幽门螺杆菌粘附素工程菌高密度发酵条件的研究

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第三军医大学学报 2004年第15期26卷 1375-1377页

作者：刘正祥邹全明洪愉朱永红第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室重庆400038

目的　研究重组幽门螺杆菌粘附素基因工程菌的发酵工艺。方法　采用德国B .Brau公司C 10型 15L发酵罐发酵 ,对影响工程菌生长和目的蛋白的表达条件进行了优化。结果　在优化的条件下 ,15L发酵罐发酵工程菌 ,菌体收获量可达 48.2g L ,目... 详细信息

目的　研究重组幽门螺杆菌粘附素基因工程菌的发酵工艺。方法　采用德国B .Brau公司C 10型 15L发酵罐发酵 ,对影响工程菌生长和目的蛋白的表达条件进行了优化。结果　在优化的条件下 ,15L发酵罐发酵工程菌 ,菌体收获量可达 48.2g L ,目的蛋白表达量约占总蛋白的 3 1.5 %。

关键词：幽门螺杆菌粘附素发酵大肠杆菌

重组LTB-UreB融合基因工程菌发酵工艺研究

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第三军医大学学报 2002年第12期24卷 1430-1432页

作者：袁小澎邹全明曾浩王宁张卫军第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室重庆400038

目的　研究大肠杆菌表达重组人幽门螺杆菌尿素酶B亚单位和大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 (LTB UreB)融合基因工程菌BL2 1的发酵工艺。方法　采用德国B Brau公司C 10型 15L发酵罐发酵 ,对影响工程菌生长和目的蛋白的表达条件进行了优化。... 详细信息

目的　研究大肠杆菌表达重组人幽门螺杆菌尿素酶B亚单位和大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 (LTB UreB)融合基因工程菌BL2 1的发酵工艺。方法　采用德国B Brau公司C 10型 15L发酵罐发酵 ,对影响工程菌生长和目的蛋白的表达条件进行了优化。结果　在优化的条件下 ,15L发酵罐发酵工程菌 ,菌体收获量可达 5 2 2g L ,目的蛋白表达量约占总蛋白的 2 7%。结论　此发酵工艺可以提高工程菌收获和目的蛋白的表达。

关键词：幽门螺杆菌尿素酶大肠杆菌不耐热肠毒素发酵大肠杆菌