检索结果-南通市图书馆

中华儿科杂志 2001年第12期39卷 753-754页

作者：王雪峰王永梅刘芳郑菲魏克伦中国医科大学第二临床学院沈阳110005 辽宁中医学院附属医院

小儿病毒性心肌炎发病率的逐年增高,越来越受到专家学者的关注.关于病毒性心肌炎的发病机制及药物防治等基础性与应用性研究都需要一个可靠而稳定的动物模型[1].我们以质粒克隆测定BALB/c心肌炎模型小鼠的心肌组织中CVB3m序列,对测序结... 详细信息

小儿病毒性心肌炎发病率的逐年增高,越来越受到专家学者的关注.关于病毒性心肌炎的发病机制及药物防治等基础性与应用性研究都需要一个可靠而稳定的动物模型[1].我们以质粒克隆测定BALB/c心肌炎模型小鼠的心肌组织中CVB3m序列,对测序结果与已知CVB3m cDNA全序列进行了比较,并配合病理观察,鉴定小鼠心肌炎模型.材料与方法1. 材料:(1)病毒:CVB3m(上海第二军医大学沈茜教授惠赠),Hela细胞传代,TCID50为3.67×10-4.(2)动物:70只BALB/c小鼠,5～6周龄,雄性,体重18 g左右(中国医科大学动物中心提供,SPF级).(3)仪器:DNA测序仪(ABI PRISMTM 377X)、蛋白核酸分析仪(美国Beckman DU-600)、PCR仪(美国PE-9600),倒置显微镜(德国LEICA)、超薄切片机(LKB-V)、电子显微镜(日本HITACHI H-600)、低温高速离心机(德国Heraeus Biofuge 28RS)、电泳仪(上海天能EPS-300);CMIAS医学图像分析管理系统、天能凝胶分析系统.(4)试剂:TRIZOL总RNA提取试剂(GIBCO公司)、RT-PCR试剂盒(大连宝生物工程有限公司)、AmpliTaq DNA聚合酶循环反应试剂盒(PE公司).(5)引物:CVB3m特异引物为软件设计所得,CVB3m上游引物(2458-2476)为 5＇- GTG GAA GAC GCG ATA ACA - 3＇,下游引物(3286-3269)为5＇- CAT TGT AGT GAT GCT TTG - 3＇,扩增片段计828 bp;测序用引物F(M13-47)与引物R(RV-M),分别为 5＇- CGC CAG GGT TTT CCC AGT CAC GAC- 3＇与5＇- GAG CGG ATA ACA ATT TCA CAC AGG - 3＇.引物由宝生物工程(大连)有限公司合成.2.实验方法:(1)分组与小鼠CVB3m急性心肌炎模型的建立:70只小鼠按体重随机分为对照组(A组)与模型组(B组).B组经腹腔注射接种0.2 ml含TCID50的CVB3m.A组予以等量不含病毒的Hela 细胞培养上清液.(2)取材:各组分别于感染后3、5、7、10、14 d随机活杀6只鼠,取心肌组织,分别用于克隆测序及病理组织学检查.(3) RT-PCR:①提取总RNA:取心肌组织加TROZOL制成匀浆,经超声破碎、提取,氯仿、异丙醇等分离、沉淀,最后用适量的无RNase水溶解RNA沉淀.②合成 cDNA:将总RNA 反转录合成第一条cDNA .条件:65℃ 1 min、30 ℃ 5 min、15～30 min内匀速升温至 65 ℃、65 ℃ 15～30 min、98 ℃ 5 min、5 ℃ 5 min.③PCR扩增:将反转录的cDNA进一步扩增,扩增参数:94℃ 3 min,94 ℃ 30 s、56 ℃ 30 s、72℃ 1 min,30个循环后72 ℃ 5 min.④产物测定:选取模型组CVB3m引物RT-PCR扩增产物,再次扩增,以蛋白核酸分析仪测吸光度A值(曾称光密度)并计算DNA产量.⑤ RT-PCR产物检测: 5 V/cm电压电泳45 min,确定目标DNA,以天能凝胶分析系统拍摄、分析.(4) RT-PCR扩增产物克隆与测定序列:①回收目的DNA:切取目的DNA片段,加入Nacl溶液,加热融化,缓冲液反复洗,离心,回收上清液即得.②连接与转化:将DNA、载体(pMD18)及连接酶混匀, 16℃恒温1 h;与JM109感受态细胞冰浴1 h;加葡萄糖和SOB,37 ℃摇床1 h;取20 μl涂平板,培养过夜.③质粒扩增与纯化:将培养的质粒再次扩增,并用碱裂解法提取质粒,限制性内切酶切割,得到纯化的质粒.(5)序列测定与比较:应用DNA测序仪测定克隆序列,将测定序列结果与已知CVB3m cDNA全序列比较[2].

关键词：急性心肌炎柯萨奇病毒B3m BALB/c小鼠克隆测序

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创伤性休克急救复苏新技术临床应用中国专家共识(2019)

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中华卫生应急电子杂志 2019年第1期5卷 1-6页

作者：中国研究型医院学会卫生应急学专业委员会中国研究型医院学会心肺复苏学专业委员会河南省医院协会心肺复苏专业委员会张思森岳茂兴王立祥不详河南中医药大学人民医院郑州人民医院河南郑州450003 南方医科大学第二临床医学院广东广州510282 解放军第三〇六医院特种医学中心北京100101 江苏大学附属武进医院急诊医学科江苏常州213017 解放军总医院第三医学中心北京100039

创伤性休克是严重威胁人类生命健康的一种急症,是创伤因素造成的有效循环血容量减少,引起细胞缺氧,进而导致多脏器功能不全或衰竭的一种综合征。高渗晶胶复合液可通过渗透压梯度将肿胀细胞的细胞内液和组织间液转移至血管内,以自体输液... 详细信息

创伤性休克是严重威胁人类生命健康的一种急症,是创伤因素造成的有效循环血容量减少,引起细胞缺氧,进而导致多脏器功能不全或衰竭的一种综合征。高渗晶胶复合液可通过渗透压梯度将肿胀细胞的细胞内液和组织间液转移至血管内,以自体输液的形式快速主动扩充血容量,霍姆复合液作为其典型代表,具有用量少、起效快,且不增加机体负荷等特点而被应用于创伤性休克的临床治疗。

关键词：创伤性休克胸外按压腹部皮肤 CPR 心脏骤停创伤患者肋骨骨折液体复苏胶体渗透压

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COVID-19疫情期间创伤性休克与心搏骤停急救复苏创新技术临床应用专家共识(2020)

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中华卫生应急电子杂志 2020年第6期6卷 321-331页

作者：中国研究型医院学会卫生应急学专业委员会中国研究型医院学会心肺复苏学专业委员会河南省医院协会心肺复苏专业分会张思森岳茂兴王立祥不详河南中医药大学人民医院南方医科大学附属郑州人民医院河南郑州450003 南方医科大学第二临床医学院广东广州510282 解放军第三〇六医院特种医学中心北京100101 江苏大学附属武进医院急诊医学科江苏常州213002 解放军总医院第三医学中心北京100039

2019年12月出现了2019新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)所引起的肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)患者,通过对患者样本进行无偏测序,首次发现了以前未知的P冠状病毒[1]。有证据表明[2],自2019年12月中旬以来,在亲密接触者之间已经发生了人与人之间的传播。主要通过呼吸道飞沫和接触传播,也可能通过气溶胶和消化道粪-口等途径传播[3]。

关键词：心搏骤停创伤性休克冠状病毒急救复苏接触传播 ID

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