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氯化铈法显示中性粒细胞的过氧化氢反应

第一军医大学学报 1991年第4期11卷 320-322页

作者：高玉民朴英杰胡雯北京东直门内中国中医研究院基础理论研究所细胞室 100700 第一军医大学电子显微镜室

将糖原诱出的小鼠腹腔中性粒细胞与酵母聚糖(Zymosan A)在体外按一定比例孵育,中性粒细胞显示出活跃的吞噬Zymosan A的特性。用氯化铈法在透射电子显微镜下能清楚地显示出中性粒细胞吞噬Zymosan A后所产生的强烈H_2O_2反应。H_2O_2反应... 详细信息

将糖原诱出的小鼠腹腔中性粒细胞与酵母聚糖(Zymosan A)在体外按一定比例孵育,中性粒细胞显示出活跃的吞噬Zymosan A的特性。用氯化铈法在透射电子显微镜下能清楚地显示出中性粒细胞吞噬Zymosan A后所产生的强烈H_2O_2反应。H_2O_2反应的部位位于中性粒细胞与Zymosan A接触的质膜上,以及吞噬体的质膜上。

关键词：中性粒细胞呼吸爆发氯化铈

小鼠腹腔巨噬细胞的conA受体分布及受体介导内吞

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第一军医大学学报 1991年第4期11卷 313-316页

作者：高玉民朴英杰胡雯周翼模北京中国中医研究院基础所细胞室 100700 第一军医大学电子显微镜室

本实验利用辣根过氧化物酶(HRP)、胶体金标记法显示小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ)表面膜刀豆素A(conA)受体的分布及conA受体介导的吞噬活动。结果显示,conA受体在Mφ膜表面呈均匀分布。随着conA凝集素与Mφ膜表面conA受体作用时间的延长,conA... 详细信息

本实验利用辣根过氧化物酶(HRP)、胶体金标记法显示小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ)表面膜刀豆素A(conA)受体的分布及conA受体介导的吞噬活动。结果显示,conA受体在Mφ膜表面呈均匀分布。随着conA凝集素与Mφ膜表面conA受体作用时间的延长,conA受体介导的内吞活性增强。

关键词：巨噬细胞吞噬作用胶体金 ConA

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益妇宁软胶囊提取工艺与成型工艺研究

益妇宁软胶囊提取工艺与成型工艺研究

作者：邓子华第一军医大学

学位级别：硕士

背景与研究目的: 绝经期妇女由于卵巢功能衰退,雌激素水平下降而出现一系列生理、病理性变化,如绝经期综合证(CS)、脂代谢紊乱、高血压、骨质疏松、生殖器官萎缩等。中医认为,血由精气化生,在正常情况下有濡养机体的作用。绝经期前后,... 详细信息

背景与研究目的: 绝经期妇女由于卵巢功能衰退,雌激素水平下降而出现一系列生理、病理性变化,如绝经期综合证(CS)、脂代谢紊乱、高血压、骨质疏松、生殖器官萎缩等。中医认为,血由精气化生,在正常情况下有濡养机体的作用。绝经期前后,由于肾虚而引起其它脏腑功能失调,出现种种错杂证候,在治疗上以补肾为主。中医药对绝经期综合征及相关疾病的治疗有独特的优势,可有效缓解更年期出现的烦热、失眠、盗汗、心悸等症状。益妇宁软胶囊(YFN)是在多年的临床应用基础上,经处方筛选和论证及剂型选择制成的软胶囊剂。YFN以哈蟆油和莪术来补肾益精、调和气血,攻补兼治,标本同治。前期的临床及实验研究均已证实,YFN可以有效改善生殖内分泌系统的功能,提高体内雌二醇E水平;同时还可以调节免疫系统,改善下丘脑—垂体—性腺轴的激素分泌失调,提高神经递质含量,稳定机体内环境,缓解更年期综合证的各种症状;调节去势大鼠血清性激素、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,防治绝经后心血管疾病的发生。另外,YFN对绝经期骨质疏松症(PMO)也有较好的治疗作用。其机制不仅是通过增加体内雌激素水平,还可调节体内微量元素、增加骨组织内的雌激素受体含量,影响复杂的骨转换机制以达到治疗目的。软胶囊(Soft Gelatin Capsule)系指将一定量的药物、药材提取物加适宜的辅料密封于球形、椭圆形或其它形状的软质囊材中制成的剂型。该剂型外观光洁、美观,可掩盖药物不良气味,便于服用。对光敏感的药物、遇湿热不稳定的药物,如维生素、抗生素等,可装入不透光的胶囊中,保护药物不受湿气、空气中的氧以及光线的影响,从而提高其稳定性。软胶囊剂的可塑性强、弹性大,这取决于软胶囊囊材的组成,即明胶、增塑剂和水三者的比例。本制剂用药时间较长,日服用量小,可选择制成胶囊剂既兼顾药效又方便患者。处方中含有挥发性成分,故制成软胶囊剂,既可较好的保存有效成分,降低药材的用量,又可掩盖不良气味,改善口感。本课题旨在研究开发一种治疗此类疾病安全、有效、方便的药物,对其提取工艺、成型工艺进行深入研究。主要内容包括: 1哈蟆油的鉴定;2不同粒径的哈蟆油定性比较;3益妇宁软胶囊提取工艺实验研究;4益妇宁软胶囊成型工艺实验研究。方法: 1对哈蟆油进行性状、显微、膨胀度的鉴别、比较。利用感观方面的一些动作,如看、摸、闻、尝、水试等方法,根据完整药材或饮片的外观性状特征,如形状、大小、色泽、表面特征、质地、横断面特征及遇水膨胀现象和气味等进行鉴定。选择合适的有代表性的供试品,利用电子显微镜对样品进行制片(组织切片)、观察、摄影等,配合性状鉴别解决哈蟆油的鉴定问题。性状、膨胀度的鉴别比较可查阅中国药典2000版或2005版,显微鉴别则依赖相关文献报道。 2对哈蟆油药材进行常规粉碎和超微粉碎,用显微鉴别法与薄层色谱法对其粒径、溶出成分进行比较。 3运用水蒸气蒸馏法提取挥发油,提取挥发油后的水提液与之进行药效实验,比较莪术挥发油、提取挥发油后的莪术水提液的药效作用。采用正交试验法优选莪术油提取工艺条件和哈蟆油粉碎条件。莪术的提取工艺中,考察莪术粉碎度(饮片,＞8目颗粒,粗粉),加水量(6倍,8倍,10倍),蒸馏时间(3h,5h,7h),确定最佳提取工艺。 4根据软胶囊剂型特点,对内容物辅料进行筛选。结果: 1哈蟆油样品呈不规则块状,弯曲而重叠,长1.5～2cm,厚1.5～5mm。表面黄白色,呈脂肪样光泽,偶有带灰白色薄膜状干皮。摸之有滑腻感,在温水中浸泡体积可膨胀。气腥,味微甘,嚼之有黏滑感。膨胀度检查为115。显微镜下观察呈金黄色,横切面呈卵圆形或阔卵圆形。小叶径向排列于管腔周围,呈长条形,腺体细胞呈梯状填充在小叶内;核明显,呈分枝状、星状或多角形,多偏向于结缔组织支架的一侧。输卵管内壁腺上皮细胞呈类卵形,数个为一组,切向排成一列。管腔呈三角形或四棱形,向角端延伸呈狭缝状或呈分枝状。哈蟆油与常见伪品中华大蟾蜍输卵管在显微鉴别上存在较大差异,最明显的差异是哈蟆油的细胞核大而明显,中华大蟾蜍输卵管的细胞核小而不明显。样品鉴定为哈蟆油。 2薄层鉴别中,200目药材的斑点明显比80目和120目的颜色加深,超微粉的斑点较常规粉体的明显。 3血瘀模型组大鼠与正常对照组大鼠比较,全血高、中、低切粘度,血浆粘度升高(P=0.000,0.001,0.006,0.000),均有显著性差异,说明造模成功。莪术挥发油大剂量组可降低血瘀大鼠的全血高、中、低切粘度,血浆粘度(P=0.000,0.041,0.001,0.000),均有显著性差异,小剂量只有降低趋势,而莪术提取挥发油后的水提物无论大小剂量组与模型组比较都无显著性意义,说明后者没有改善血瘀大鼠血液流变学的作用,即活血化瘀的作用。故从减少服用

关键词：益妇宁软胶囊哈蟆油莪术提取工艺成型工艺挥发油

用于基因治疗的磁性脂质体-DNA复合物的制备与初步评价

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中国药学杂志 2008年第13期43卷 998-1003页

作者：郑肖利吴轶娜陆建平熊阳陈建明第二军医大学药学院药剂教研室上海200433 第二军医大学长海医院放射科上海200433 浙江中医药大学杭州310053

目的制备用于基因治疗的磁性脂质体-DNA复合物并对其进行初步评价。方法以二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)和3β-[N-(N′,N′-二甲氨基乙基)]氨甲酰基-胆固醇(DC-Chol)为脂质材料,采用逆相蒸发法制备得到磁性脂质体,并在此基础上制得磁性脂质... 详细信息

目的制备用于基因治疗的磁性脂质体-DNA复合物并对其进行初步评价。方法以二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)和3β-[N-(N′,N′-二甲氨基乙基)]氨甲酰基-胆固醇(DC-Chol)为脂质材料,采用逆相蒸发法制备得到磁性脂质体,并在此基础上制得磁性脂质体-DNA复合物。用邻菲啰啉法测定复合物中铁含量;用透射电子显微镜观察复合物的形态并对其进行能谱分析;用纳米粒度及电位分析仪测定复合物的粒径大小及Zeta电位;对复合物进行琼脂糖凝胶电泳考察形成稳定复合物所需的最低(DC-Chol)-DNA质量比值;并考察(DC-chol)-DNA质量比对磁性脂质体-DNA复合物的粒径、Zeta电位以及DNA包封率的影响;还初步考察了复合物的体外磁场响应性能。结果制得的复合物形态较为圆整,粒径分布均匀,复合物内含有磁性物质,且具有良好的磁场响应性能。(DC-Chol)-DNA质量比值对复合物的粒径、Zeta电位及DNA包封率的影响均呈现一定趋势。结论本实验制备得到的复合物具有高包封率、稳定性好且具有磁场响应性能等特点。且当(DC-Chol)-DNA质量比值在9左右时,复合物具有粒径较小、Zeta电位较高且包封率高的特点。

关键词：基因治疗磁性脂质体复合物粒径 Zeta电位包封率

VEGF诱导肝癌细胞恶性表型及p38MAPK信号通路的调控作用

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VEGF诱导肝癌细胞恶性表型及p38MAPK信号通路的调控作用

人胎盘绒毛5-羟色胺受体的显微亚微定位及定量研究

2000全国肿瘤学术大会

作者：毛华袁爱力赖卓胜张振书张亚力周殿元第一军医大学南方医院全军消化疾病研究所第一军医大学南方医院全军消化疾病研究所第一军医大学南方医院全军消化疾病研究所第一军医大学南方医院全军消化疾病研究所第一军医大学南方医院全军消化疾病研究所第一军医大学南方医院全军消化疾病研究所

目的:观察血管内皮细胞生长因子（VEGF）诱导肝癌细胞转移时 p38MAPK 信号传导通路对细胞恶性表型的调控作用。方法: 将肝癌细胞分为对照组、VEGF 组和 VEGF+SB 三组,采用3H-TdR、 Wwsterm blot、扫描电子显微镜、激光扫描共聚焦显微镜...

目的:观察血管内皮细胞生长因子（VEGF）诱导肝癌细胞转移时 p38MAPK 信号传导通路对细胞恶性表型的调控作用。方法: 将肝癌细胞分为对照组、VEGF 组和 VEGF+SB 三组,采用3H-TdR、 Wwsterm blot、扫描电子显微镜、激光扫描共聚焦显微镜等方法,观察 p38MAPK 信号通路对 VEGF 诱导的肝癌细胞恶性表型的影响。结果:5ng/ml VEGF 能够明显诱导肝癌细胞增殖,与对照组比较差异有非常显著性,P＜0.01。阻断 p38MAPK 信号传导通路,并不能抑制 VEGF 对肝癌细胞的诱导增殖作用。5ng/ml VEGF 诱导肝癌细胞后于5,15min 肝癌细胞内 p38MAPK 活性开始增高,30,60min 明显增高, 120min 后达高峰,300min 接近基础水平。阻断 p38MAPK 信号传导通路,5ng/ml VEGF 诱导肝癌细胞5、15,30,60,120min,肝癌细胞 p38MAPK 活性与对照组相比无明显变化,P＞0.05。扫描电镜观察肝癌细胞呈梭型,细胞表面丝状伪足细而短,5ng/ml VEGF 诱导2小时后,肝癌细胞呈椭圆形,表面出现大量变粗而长的丝状伪足,有的可见二级分叉及末端膨大的结构。阻断 p38MAPK 信号传导通路后,则可抑制 VEGF 诱导肝癌细胞表面粗而长丝状伪足的形成,还可使肝癌细胞之间粘附作用增加,细胞间出现融合现象。用激光扫描共聚焦显微镜（Confocal）观察对照组肝癌细胞微丝骨架重组结果表明,肝癌 HepG2细胞微丝骨架破坏,应力纤维减少。5ng/ml VEGF 诱导肝癌细胞2小时后,细胞微丝骨架破坏,应力纤维几乎消失;阻断 p38MAPK 信号传导通路后,可以抑制5ng/ml VEGF 诱导肝癌细胞微丝骨架破坏,细胞内微丝形成束状纤维,粗壮而密集,纵横交错贯穿整个胞质区形成网络,排列相对规整。结论:1 VEGF 能够激活 p38MAPK 信号传导通路2 VEGF 能够诱导肝癌细胞的增殖,但不是通过 p38MAPK 信号传导通路途径。

关键词：

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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科学通报 1998年第3期43卷 233-239页

作者：黄威权张崇理遆新宇孙岚第四军医大学基础部组织胚胎学教研室西安710032 中国科学院动物研究所生殖生物学开放实验室北京100080

用免疫组织化学和原位杂交法对人胎盘绒毛 5_HT受体进行显微亚微定位及定量研究 .结果显示 ,胎盘绒毛两层滋养层细胞 ,绒毛中轴毛细血管内的白细胞既呈 5_HT受体免疫反应阳性又有 5_HT1A受体mR NA杂交信号 .绒毛毛细血管内皮细胞及基质... 详细信息

用免疫组织化学和原位杂交法对人胎盘绒毛 5_HT受体进行显微亚微定位及定量研究 .结果显示 ,胎盘绒毛两层滋养层细胞 ,绒毛中轴毛细血管内的白细胞既呈 5_HT受体免疫反应阳性又有 5_HT1A受体mR NA杂交信号 .绒毛毛细血管内皮细胞及基质细胞呈 5_HT受体免疫反应阳性但未见可检的 5_HT1A受体mRNA杂交信号 .提示绒毛两层滋养层细胞能合成 5_HT1A受体可能也能合成 5_HT2 受体 .绒毛基质细胞和毛细血管内皮细胞可能只能合成 5_HT2 受体 .电子显微镜观察显示 ,滋养层细胞内扁平的囊泡及有致密核心的大囊泡呈 5_HT受体阳性 ,提示这可能是 5_HT受体介导 5_HT作用的过程中内化及转运的结果 .原位定量的结果显示 ,妊娠第 6周 ,胎盘绒毛 5_HT受体的含量较高 ,妊娠第 7,8周相对减少 ,第 9周出现第二个峰值 ,第 10 ,2 0 ,4 0周又呈逐渐减少趋势 . 5_HT受体含量的周龄变化和我们先前研究的 5_HT含量的周龄变化相平行 ,提示 5_HT可能是胎盘进行自调节的重要生物活性物质之一 .

关键词： 5-羟色胺受体定位定量人胎盘绒毛

ESR和CLSM技术用于促渗剂作用机制及亲水性大分子跨鼻黏膜转运途径的研究

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药学学报 2007年第11期42卷 1195-1200页

作者：张玉杰张强杨洁孙明杰王筱亮陈明霞汪祺姜昊北京中医药大学中药学院北京100102 北京大学药学院北京100083 中国中医科学院基础理论研究所北京100700

采用电子自旋共振(ESR)和共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)技术研究促渗剂作用机制及促渗剂对亲水性大分子跨鼻黏膜转运途径的影响。比较重组水蛭素-2(rHV2)与促渗剂联合鼻腔用药前后大鼠的生物利用度;采用以5-噁唑烷氮氧自由基硬脂酸、16-... 详细信息

采用电子自旋共振(ESR)和共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)技术研究促渗剂作用机制及促渗剂对亲水性大分子跨鼻黏膜转运途径的影响。比较重组水蛭素-2(rHV2)与促渗剂联合鼻腔用药前后大鼠的生物利用度;采用以5-噁唑烷氮氧自由基硬脂酸、16-噁唑烷氮氧自由基硬脂酸和马来酰亚胺作为自旋标记物的电子自旋共振技术,考察促渗剂对家兔鼻黏膜脂质和蛋白的影响;采用共聚焦显微镜光学切片结合荧光探针标记技术探讨促渗剂对大鼠鼻黏膜上皮细胞骨架肌动蛋白的作用,同时观察在各种促渗剂作用下rHV2的转运途径。壳聚糖(chitosan,CS),羟丙基-β-环糊精(hydroxyl-propyl-beta-cyclodextrin,HP-β-CD),甘草酸单胺盐(ammonium glycyrrhizinate,AMGZ)均能显著改善rHV2的鼻黏膜吸收;CS主要通过细胞旁路途径增加rHV2鼻黏膜转运,这一结果可能与其对细胞骨架肌动蛋白微丝的影响从而打开细胞间紧密连接有关;HP-β-CD可同时增加跨细胞和经细胞旁路两种途径的转运,可能与其既能改变膜质流动性又能影响膜蛋白构象的特性有关;AMGZ主要增加亲水性大分子跨细胞途径的转运,实验观察到其对膜蛋白有作用,但未观察到其对膜质的作用,确切的机制尚有待研究。本实验可为促渗剂及亲水大分子跨细胞膜转运途径的研究提供借鉴。

关键词：促渗剂亲水性大分子电子自旋共振共聚焦激光扫描显微镜促渗机制鼻黏膜转运途径

双氢青蒿素与头孢呋辛对大肠杆菌的协同抗菌作用及机制研究

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中国中药杂志 2020年第12期45卷 2975-2981页

作者：黄梅罗俊沈建英中国中医科学院中药研究所北京100700 贵州医科大学基础医学院贵州贵阳550000

该实验用双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)与头孢呋辛(cefuroxime,CFX)或氨苄青霉素联用,探讨其对大肠杆菌的协同抗菌作用及其机制。采用微量肉汤稀释法和2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyl-2H-tetrazolium chloride,TTC)法确定出DHA、CFX和氨苄青霉素的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)分别为300,25,25μmol·L^-1,头孢呋辛的最低杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC)为25μmol·L^-1,DHA的MBC>600μmol·L^-1;采用棋盘稀释确定出DHA与头孢呋辛或与氨苄青霉素联合的分级抑菌浓度指数(fractional inhibitory concentration index,FICI)分别为0.375和0.75,表现为协同作用或加和作用。从时效曲线可以得出两药联用后对大肠杆菌的作用明显强于DHA和CFX各自单用的,说明DHA联用后,可以减少CFX的使用量。继而研究了DHA与头孢呋辛协同抗菌的机制:聚丙烯凝胶电泳结果显示,两药联用的条带比各自单用的更浅,有的谱带甚至消失,说明两药联用后对总蛋白谱带具有明显的抑制作用;电导率法结果显示,两药联用后菌液的电导率值明显增高;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)检测显示,联用组碱性磷酸酶渗漏最为明显,提示菌体完整性可能受到破坏;扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)结果显示,两药联用后对大肠杆菌形态的破坏作用比单独用药组强;荧光定量PCR结果显示,两药联用能抑制大肠杆菌超氧压力反应相关基因(soxS)的表达。结果证明双氢青蒿素与头孢呋辛联用具有协同作用。

关键词：双氢青蒿素头孢呋辛协同作用大肠杆菌

黄芪囊泡样纳米颗粒通过调节肠道菌群降低db/db糖尿病小鼠血糖的作用机制分析

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中国实验方剂学杂志 2021年第14期27卷 111-118页

作者：高文静侯敏陈潇潇王攀任钧国刘建勋中国中医科学院西苑医院基础医学研究所中药药理北京市重点实验室北京100091 北京中医药大学北京100029

目的:研究黄芪水煎液中囊泡样纳米颗粒(VLNs)的提取方法及特性,探讨黄芪VLNs通过调节db/db小鼠肠道菌群来降低血糖的作用机制。方法:采用超速离心法和尺寸排阻色谱法分别富集黄芪水煎液中的VLNs,通过透射电子显微镜、纳米颗粒跟踪分析... 详细信息

目的:研究黄芪水煎液中囊泡样纳米颗粒(VLNs)的提取方法及特性,探讨黄芪VLNs通过调节db/db小鼠肠道菌群来降低血糖的作用机制。方法:采用超速离心法和尺寸排阻色谱法分别富集黄芪水煎液中的VLNs,通过透射电子显微镜、纳米颗粒跟踪分析仪分析黄芪水煎液中VLNs的形态、粒径、浓度。选用db/db糖尿病小鼠,按血糖值随机分为模型组,黄芪VLNs高、中、低剂量(21.1,10.6,5.3 g·kg^(-1))组和二甲双胍组(0.25 g·kg^(-1)),每组7只,另设7只C57BL/6小鼠作为正常组,灌胃给药3周(每日1次),每周观察小鼠空腹血糖变化;苏木素-伊红(HE)染色观察糖尿病小鼠肝脏和胰腺病理形态情况;采集小鼠粪便进行肠道微生物16S rRNA多样性检测。结果:2种方法所得纳米颗粒粒径均在200 nm左右,超速离心法提取的黄芪VLNs具有典型的茶托状,其浓度为3.0×10^(11)个/mL;尺寸排阻色谱法所得黄芪VLNs形态相对较差,其浓度为2.2×10^(11)个/mL。给药3周后,与模型组比较,黄芪VLNs高、中、低剂量组均能显著降低糖尿病小鼠的空腹血糖(P<0.05,P<0.01);可改善肠道菌群失调,显著降低厚壁菌门/拟杆菌门比例,提高有益菌相对丰度,降低有害菌相对丰度。结论:黄芪VLNs可能通过调节肠道菌群中厚壁菌门/拟杆菌门的比例来降低db/db糖尿病小鼠的血糖。

关键词：黄芪囊泡样纳米颗粒超速离心法尺寸排阻色谱法空腹血糖肠道菌群粒径分布