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大鼠正加速度高耐力相关基因的分离

中国生物化学与分子生物学报 2001年第6期17卷 733-738页

作者：王晓丽刘丽刘建斌王烨曹颖空军总医院空军分子生物学重点实验室北京100036

为从基因水平上揭示正加速度 (+Gz)高耐力产生机理及寻找 +Gz高耐力相关功能性蛋白 ,利用抑制消减杂交技术分离 +Gz高耐力相关基因 .雄性SD大鼠在离心机上处理后 ,选取耐受终点在高、低两个极端的动物 ,立即取全脑 ,分离mRNA .以高耐力... 详细信息

为从基因水平上揭示正加速度 (+Gz)高耐力产生机理及寻找 +Gz高耐力相关功能性蛋白 ,利用抑制消减杂交技术分离 +Gz高耐力相关基因 .雄性SD大鼠在离心机上处理后 ,选取耐受终点在高、低两个极端的动物 ,立即取全脑 ,分离mRNA .以高耐力者为Tester ,低耐力者为Driver,利用抑制消减杂交技术进行 +Gz耐力处于高、低两个极端动物脑组织间基因表达差异显示 ,获得 +Gz高耐力大鼠脑组织相关cDNA .以高、低耐力大鼠脑组织mRNA来源的cDNA为探针 ,对获得的cDNA克隆进行斑点杂交 .分别以杂交筛选出的阳性克隆为探针 ,对高、低耐力大鼠脑组织总RNA进行Northern杂交分析 .两次杂交结果均选择高耐力组杂交信号是低耐力组 3倍以上的cDNA克隆 .经过斑点杂交筛选 ,从大鼠脑组织中获得了 6 7个在 +Gz高耐力大鼠脑组织中上调表达的cDNA克隆 .Northern杂交分析发现 ,钙离子钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱβ亚基 (Camk2b)和一未知基因在 +Gz高耐力大鼠脑组织中的表达量增加 .结果提示 ,+Gz耐力处于高、低两个极端的大鼠脑组织基因表达有明显差异 ,这些差异表达的基因很可能与 +Gz高耐力的产生有关 ,且钙离子钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱβ亚基和一未知基因是初步获得的与

关键词：正加速度耐力抑制消减杂交技术差异表达功能性蛋白相关基因分离

人α2A-AR基因及其第-1296位基因型与晕动病的易感性

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第3期34卷 291-297页

作者：刘丽袁栎王洪波于立身郑军罗超权王烨广州510089 空军总医院空军临床分子生物学中心实验室北京100036 中山医科大学生物化学教研室空军总医院空军临床分子生物学中心实验室空军航空医学研究所

对 39名中国人和 1名英国白人α2A 肾上腺素能受体 (α2A AR)全长基因序列分析显示 ,其序列与GenBank中人α2A AR基因序列在调控区、编码区和 3′非编码区存在 13处 g或C插入或缺失的不同 ,但所有人的α2A AR基因序列则完全一致 ,包括... 详细信息

对 39名中国人和 1名英国白人α2A 肾上腺素能受体 (α2A AR)全长基因序列分析显示 ,其序列与GenBank中人α2A AR基因序列在调控区、编码区和 3′非编码区存在 13处 g或C插入或缺失的不同 ,但所有人的α2A AR基因序列则完全一致 ,包括该基因不同批次PCR产物正义链和反义链测序结果。得到的人α2A AR基因序列已在GenBank登录 (AY0 32 736 )。对α2A AR基因调控区第 - 12 96位基因型在晕动病易感性不同人群中分布情况的分析结果显示 ,晕动病易感性较高的中国和日本人群分别与易感性较低的英国人群相比 ,前两者该位点 gg基因型分别是后者的 6 .8倍和 8.8倍 ,g等位基因频率均明显高于后者 (P <0 .0 1) ;中国汉族无亲缘关系的晕动病易感人群与不易感人群 (歼击机飞行员 )相比 ,前者该位点 gg基因型是后者的 2 .6倍 ,g等位基因频率亦明显高于后者(P <0 .0 1)。各组人群等位基因分布均符合Hardy Weinberg平衡。提示 ,α2A AR基因第 - 12 96位 gg基因型和g等位基因可能与晕动病易感性有关

关键词： α2A-肾上腺素能受体基因多态性晕动病

PSP94-TNFαD11a融合基因在NIH3T3细胞中的表达及其产物活性分析

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中国生物化学与分子生物学报 2001年第2期17卷 194-197页

作者：刘庆鑫刘丽石缨刘立忠王烨杨彦曹颖空军总医院空军分子生物学重点实验室北京100036

为了分析 PSP94- TNFαD1 1 a融合基因的表达和表达产物的生物学活性 ,将含该融合基因的质粒 pc DNA- PSP94- TNFα D1 1 a转染 NIH3T3细胞 ,72 h后收集细胞培养上清 ,并提取细胞总RNA,经 RT- PCR,得到与目的基因长度相符合的 c DNA片... 详细信息

为了分析 PSP94- TNFαD1 1 a融合基因的表达和表达产物的生物学活性 ,将含该融合基因的质粒 pc DNA- PSP94- TNFα D1 1 a转染 NIH3T3细胞 ,72 h后收集细胞培养上清 ,并提取细胞总RNA,经 RT- PCR,得到与目的基因长度相符合的 c DNA片段 ;以 PSP94c DNA为探针 ,对 RT-PCR产物进行 Southern印迹分析 .结果表明 :转染 PSP94- TNFαD1 1 a融合基因的 NIH3T3细胞 ,其 RT- PCR产物杂交信号为阳性 .细胞培养上清用 TNF抗体行 Western印迹和 ELISA分析 ,检测结果为阳性 .生物学活性分析表明 ,细胞培养上清不仅具有 PSP94抑制人前列腺癌细胞 PC- 3生长的活性 ,而且显示出 TNFα对 L92 9细胞的细胞毒作用 .以上结果表明 ,pc DNA- PSP94- TNFαD1 1 a质粒能够正确表达目的基因 PSP94- TNFα D1 1 a,且表达的 PSP94- TNFαD1 1 a融合蛋白具有预期的双重生物学活性 .

关键词：前列腺分泌蛋白 TNFα衍生物融合基因表达活性前列腺癌

靶向表达TNFR75的逆转录病毒载体的构建及其产毒细胞系的建立

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中国生物化学与分子生物学报 2001年第2期17卷 169-172页

作者：孙晓文刘丽石缨刘立忠谢宝树王烨杨彦冷爱军曹颖空军总医院空军分子生物学重点实验室北京100036

将编码人 TNFR75的 c RNA与血管内皮细胞特异性启动子 (KDRp)及缺失自身启动子的逆转录病毒载体 p LXSN- D2 99重组 .重组质粒 p LXSN- D2 99- KDRp- TNFR75与脂质体共转染包装细胞 PA31 7,经抗生素 G41 8(60 0 mg/L)筛选 1 4d,获得 1 ... 详细信息

将编码人 TNFR75的 c RNA与血管内皮细胞特异性启动子 (KDRp)及缺失自身启动子的逆转录病毒载体 p LXSN- D2 99重组 .重组质粒 p LXSN- D2 99- KDRp- TNFR75与脂质体共转染包装细胞 PA31 7,经抗生素 G41 8(60 0 mg/L)筛选 1 4d,获得 1 5个稳定的产病毒细胞克隆 .将各细胞克隆分别扩大培养收集所产病毒上清 ,并感染 NIH3T3细胞检测病毒滴度 ,其中 1个克隆滴度达 2×1 0 5CFU/ml.提取该克隆细胞总 RNA进行 RT- PCR分析 ,获得的 c DNA片段长度与目的基因一致 .结果提示 ,建立了 TNFR75反转录病毒产毒细胞系 .

关键词：肿瘤坏死因子受体逆转录病毒基因载体产毒细胞系建系

高+Gz反复暴露后大鼠心脏组织应激性差异表达基因的分离(英文)

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航天医学与医学工程 2004年第4期17卷 235-239页

作者：石缨宋志鸿朱美财空军总医院临床分子生物学中心北京100036

目的筛选+Gz反复暴露后大鼠心脏组织特异性应激基因。方法采用动物离心机处理对照组和实验组大鼠,实验组G值为+10 Gz,增长率为1 G/s,峰值持续3 min,共做3次,两次间歇30 min,对照组动物在离心机经历类似实验步骤,所承受的G值为+1 Gz;反... 详细信息

目的筛选+Gz反复暴露后大鼠心脏组织特异性应激基因。方法采用动物离心机处理对照组和实验组大鼠,实验组G值为+10 Gz,增长率为1 G/s,峰值持续3 min,共做3次,两次间歇30 min,对照组动物在离心机经历类似实验步骤,所承受的G值为+1 Gz;反复暴露后1 h提取实验组和对照组大鼠心脏组织总RNA,分离纯化poly A+RNA,与Atlas Rat Stress Array膜杂交,并用半定量RT-PCR进行差异基因表达的特异性鉴定。结果得到10个差异表达基因,其中8个在+Gz反复暴露后大鼠心脏组织中表达上调,2个表达下调,选取热休克蛋白70、P21和血红素加氧酶-1基因作为候选基因,经半定量RT-PCR得到特异性验证,P21和血红素加氧酶-1表达水平升高,热休克蛋白70表达下降。结论应用Atlas Rat Stress Array杂交技术可以发现与+Gz反复暴露相关的特异性应激基因,为+Gz反复暴露对心脏组织的作用机制研究提供新的思路和方法。

关键词：正加速度 +Gz 心脏血红素加氧酶-1 P21 热休克蛋白70

+Gz重复暴露大鼠脑cDNA消减文库的构建

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航天医学与医学工程 2002年第6期15卷 415-418页

作者：蔡庆刘红巾林凯姜建东朱美财空军总医院分子生物学研究中心北京100036

目的应用抑制性消减杂交技术构建 +Gz重复暴露大鼠脑和正常大鼠脑差异表达的cDNA消减文库 ,为筛选 +Gz暴露大鼠脑差异表达基因 ,探讨 +Gz引起脑损伤的分子机制奠定基础。方法Wister大鼠随机分成对照组和 +Gz重复暴露组 ,对照组大鼠G值为... 详细信息

目的应用抑制性消减杂交技术构建 +Gz重复暴露大鼠脑和正常大鼠脑差异表达的cDNA消减文库 ,为筛选 +Gz暴露大鼠脑差异表达基因 ,探讨 +Gz引起脑损伤的分子机制奠定基础。方法Wister大鼠随机分成对照组和 +Gz重复暴露组 ,对照组大鼠G值为 + 1Gz,实验组大鼠在动物离心机上经历了 3次+ 1 0Gz/1min(两次间间隔 30min)作用 ,于暴露后 6h处死取脑。分别从 +Gz重复暴露组和对照组大鼠脑中提取poly(A) +RNA ,依次合成单链及双链cDNA ,用RsaⅠ酶切成大小不等的片段。将 +Gz重复暴露组cDNA分为两组 ,分别与两种不同的接头连接 ,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR ,将PCR产物与T/A载体连接构建 +Gz暴露大鼠脑cDNA消减文库。结果成功构建具有高消减效率的 +Gz暴露大鼠脑cDNA消减文库 ,非特异性cDNA片段被有效地消减 ,特异表达的cDNA得到富集。结论 +Gz暴露大鼠脑cDNA消减文库的建立为进一步筛选、克隆 +Gz重复暴露大鼠脑差异表达基因奠定了基础。

关键词： +Gz 重复暴露大鼠脑 cDNA消减文库抑制性消减杂交

可溶性人TNFR75的表达、纯化及活性鉴定

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中国生物化学与分子生物学报 2002年第3期18卷 299-302页

作者：袁栎刘丽赵显玲王烨曹颖空军总医院空军分子生物学中心实验室北京100036

将编码可溶性人TNFR75 (shTNFR75 )的cDNA与酵母整合载体pPICZαA重组 ,构建的重组质粒线性化后转染酵母细胞GS 115 ,获得了shTNFR75在酵母细胞中遗传性稳定表达酵母工程细胞 .甲醇诱导的pPICZαA shTNFR75 GS115重组酵母工程细胞培养... 详细信息

将编码可溶性人TNFR75 (shTNFR75 )的cDNA与酵母整合载体pPICZαA重组 ,构建的重组质粒线性化后转染酵母细胞GS 115 ,获得了shTNFR75在酵母细胞中遗传性稳定表达酵母工程细胞 .甲醇诱导的pPICZαA shTNFR75 GS115重组酵母工程细胞培养上清 ,经CNBr活化的TNF Sepharose4B亲和层析柱纯化 ,纯化产物纯度为 92 % ;经Western印迹分析 ,可被TNFR75单克隆抗体特异性识别 ,分子量约为 31kD ;受体配体结合试验 ,shTNFR75纯化产物与rhTNFα和rhTNFβ的结合能力与其阳性对照基本相同 ;中和试验显示 ,该shTNFR75可完全阻断TNF对L92 9细胞的细胞毒活性 .表明酵母系统分泌表达的shTNFR75产物具有良好的结合TNF的能力 .

关键词：可溶性人TNFR75 表达纯化活性鉴定肿瘤坏死因子受体

离心机训练对大鼠脑及其它组织IL-6和TNFα基因表达水平的影响

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中国生物化学与分子生物学报 2002年第5期18卷 649-653页

作者：刘建彬王洪波刘丽梁雪清于立身空军总医院空军临床分子生物学中心实验室北京100036

为了解离心机训练前后大鼠脑及心、肺、肾和小肠组织中IL 6和TNFα基因表达水平的变化 ,对雄性SD大鼠进行动物离心机训练 ,刺激值从 + 7Gz～ + 12Gz ,每天增加 + 0 5Gz ,第 12d重复 + 12Gz刺激 ,第 13d离心机训练后 ,断头处死 ,取心、... 详细信息

为了解离心机训练前后大鼠脑及心、肺、肾和小肠组织中IL 6和TNFα基因表达水平的变化 ,对雄性SD大鼠进行动物离心机训练 ,刺激值从 + 7Gz～ + 12Gz ,每天增加 + 0 5Gz ,第 12d重复 + 12Gz刺激 ,第 13d离心机训练后 ,断头处死 ,取心、脑、肺、肾和小肠组织 ,分别提取mRNA并定量 .用地高辛标记IL 6和TNFαcDNA作为探针 ,进行狭缝杂交 ,杂交结果通过光密度扫描定量后 ,进行统计学处理 .离心机训练不同时间 ,比较大鼠各组织IL 6和TNFα基因表达水平的变化 .结果显示随着训练时间的延长 ,表达水平均有所差异 .提示训练对大鼠脑及其它主要组织IL 6和TNFα基因表达水平有影响。

关键词：离心机训练大鼠脑 IL-6 TNFα 基因表达水平脑组织心肌组织加速度耐力

吴茱萸次碱改善MAFLD小鼠脂肪肝和骨质疏松的作用

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药学学报 2025年第01期 141-149页

作者：张煜皓李依宁姜新海王伟志李顺旺盛任雷丽娟张语嫣王晶锐魏欣玮许艳妮林燕唐琳司书毅中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所卫健委微生物药物生物技术重点实验室天然药物活性物质与功能国家重点实验室国家新药(微生物)筛选实验室首都医科大学附属北京地坛医院首都医科大学附属北京中医医院北京市中医药研究所盛实百草药业有限公司

代谢相关脂肪性肝病（metabolic-associated fatty liver disease,MAFLD）和骨质疏松症（osteoporosis,OP）是两种非常普遍的代谢性疾病。越来越多的实验证据支持MAFLD和OP之间有病理生理联系,MAFLD常伴随OP的发生。吴茱萸次碱（rutaeca... 详细信息

代谢相关脂肪性肝病（metabolic-associated fatty liver disease,MAFLD）和骨质疏松症（osteoporosis,OP）是两种非常普遍的代谢性疾病。越来越多的实验证据支持MAFLD和OP之间有病理生理联系,MAFLD常伴随OP的发生。吴茱萸次碱（rutaecarpine,RUT）是中药吴茱萸的主要活性成分之一,课题组前期研究发现RUT具有降脂、抗炎和抗动脉粥样硬化作用,并且可以改善大鼠的OP。但是,RUT能否同时改善MAFLD小鼠的脂肪肝和OP症状,目前尚待研究。本研究利用高脂饲料饮食（high fat diet,HFD） 4个月喂养的C57BL/6小鼠构建MAFLD模型。灌胃给予RUT低剂量(5 mg·kg-1)和高剂量(15 mg·kg-1) 4周,实验结束时评价RUT在体内对肝脏脂肪变性和骨代谢的影响（本实验获得中国医学科学院医药生物技术研究所动物伦理委员会批准,批准号:IMB-20190124D303）。研究结果表明,RUT治疗显著减少了肝脏脂肪变性和脂质积累,同时显著减少骨丢失并促进了骨形成。综上,本研究表明RUT具有改善MAFLD小鼠的脂肪肝和OP的作用。

关键词：吴茱萸次碱非酒精性脂肪性肝病代谢相关脂肪性肝病骨质疏松症骨代谢

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