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抗哈维氏弧菌、溶藻弧菌与副溶血性弧菌三联卵黄抗体的制备及体外作用效果评估

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水产学报 2024年第5期48卷 217-228页

作者：张林鹏杨诗燚白艳韩刘沥涵陶俊杰林蠡秦真东仲恺农业工程学院动物科技学院广东省水环境与水产品安全工程技术研究中心广州市水产病害与水禽养殖重点实验室

为研究三联特异性卵黄抗体对哈维氏弧菌、溶藻弧菌与副溶血性弧菌的体外抑菌效果，通过制备哈维氏弧菌、溶藻弧菌与副溶血性弧菌三联灭活疫苗，免疫蛋鸡。收集鸡蛋制备卵黄抗体并检测其效价、纯度和特异性。通过免疫荧光、扫描电镜和体... 详细信息

为研究三联特异性卵黄抗体对哈维氏弧菌、溶藻弧菌与副溶血性弧菌的体外抑菌效果，通过制备哈维氏弧菌、溶藻弧菌与副溶血性弧菌三联灭活疫苗，免疫蛋鸡。收集鸡蛋制备卵黄抗体并检测其效价、纯度和特异性。通过免疫荧光、扫描电镜和体外抑菌实验初步探究其制备的三联特异性卵黄抗体对3种弧菌的体外抑菌效果。结果显示，ELISA检测特异性卵黄抗体效价高达1∶51 200，并维持5周；SDS-PAGE对分离纯化的卵黄抗体分析显示，随着纯化步骤的进行，卵黄抗体中的蛋白杂带逐渐减少，纯度变高。免疫荧光和免疫印迹实验表明，特异性卵黄抗体与抗原的结合具有较高的特异性。扫描电镜进一步观察发现，相比非特异性卵黄抗体，特异性卵黄抗体处理过的弧菌，菌体互相黏附在一起，菌体细胞表面粗糙，细胞壁破损。在体外抑菌实验中，特异性卵黄抗体对弧菌具有明显的抑制效果，且抑制作用呈现剂量依赖性。研究表明，三联特异性卵黄抗体能够与哈维氏弧菌、溶藻弧菌和副溶血性弧菌发生特异性结合，通过体外实验发现，卵黄抗体通过凝集和黏附，破坏菌体细胞的完整性，从而发挥抑菌作用。实验结果为研发绿色、安全、高效的抗哈维氏弧菌、溶藻弧菌和副溶血弧菌三联特异性卵黄抗体提供理论和实验基础。

关键词：水产养殖哈维氏弧菌溶藻弧菌副溶血性弧菌卵黄抗体抑菌

流沙湾珍珠贝养殖区水体及微塑料表面细菌群落结构特征

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海洋通报 2024年

作者：王婷姚嘉莹廖永山杨秀艳邓岳文杨创业广东省珍珠养殖与加工工程技术研究中心广东海洋大学珍珠研究所广东省水产动物病害防控与健康养殖重点实验室广东海洋大学水产学院

微塑料作为新兴的环境污染物，在海洋中广泛存在，其表面生物膜引起了科研工作者的广泛关注。本论文以聚酰胺（PA）、聚苯乙烯（PS）和聚氯乙烯（PVC）材质的微塑料为材料，开展原位定殖实验，利用16S rDNA技术分析流沙湾珍珠贝养殖区... 详细信息

微塑料作为新兴的环境污染物，在海洋中广泛存在，其表面生物膜引起了科研工作者的广泛关注。本论文以聚酰胺（PA）、聚苯乙烯（PS）和聚氯乙烯（PVC）材质的微塑料为材料，开展原位定殖实验，利用16S rDNA技术分析流沙湾珍珠贝养殖区水体及不同微塑料表面细菌群落结构特征。α多样性分析显示，微塑料表面细菌群落的丰富度和多样性显著高于水体，不同类型的微塑料表面细菌群落的丰富度和多样性也存在显著差异；水体细菌群落主要包括变形菌门（Proteobacteria）、拟杆菌门（Bacteroidetes）、放线菌门（Actinobacteria）和蓝藻门（Cyanobacteria），而微塑料表面变形菌门（Proteobacteria）和浮霉菌门（Planctomycetota）相对丰度均增加，表明微塑料发展成了细菌独特的栖息环境；此外，在微塑料和水体中均检测到了鱼类病原体黄杆菌（Flavobacterium）和布鲁氏菌（Bruegeria）等病原菌，表明微塑料可能成为潜在病原菌的载体。研究结果丰富了水产养殖区微塑料污染的基础资料，并为海洋环境管理提供理论依据。

关键词：细菌群落微塑料 16 S rDNA 流沙湾

外源褪黑素对新白8号枇杷果实日灼和果皮解剖结构的影响

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果树学报 2024年第7期41卷 1387-1400页

作者：高雨薇邓朝军许奇志李浩伟项于倩马翠兰蒋际谋福建农林大学园艺学院福州350002 福建省农业科学院果树研究所·福建省龙眼枇杷育种工程技术研究中心福州350013

【目的】研究外源褪黑素对高温胁迫下枇杷果皮细胞结构的影响,探讨外源褪黑素缓解高温胁迫对枇杷果实日灼发生的影响,为防控技术研发提供依据。【方法】以4个浓度外源褪黑素喷施新白8号果实,观察比较40℃高温胁迫处理60 min内果实日灼... 详细信息

【目的】研究外源褪黑素对高温胁迫下枇杷果皮细胞结构的影响,探讨外源褪黑素缓解高温胁迫对枇杷果实日灼发生的影响,为防控技术研发提供依据。【方法】以4个浓度外源褪黑素喷施新白8号果实,观察比较40℃高温胁迫处理60 min内果实日灼发生差异,筛选最佳外源褪黑素浓度;进一步观察比较喷施清水(对照)和最佳浓度外源褪黑素在40℃高温胁迫处理0、10、30 min时,果皮显微结构与超微结构的差异变化。【结果】高温胁迫30 min时,150μmol·L^(-1)外源褪黑素处理的果实开始出现日灼病斑,比喷施清水(对照)果实日灼病斑出现时间延迟20 min,且日灼症状最轻、病果率及病害等级最低,是最佳浓度。显微和超微结构观察结果表明,高温胁迫处理10 min时,清水处理的枇杷果皮细胞角质层、表皮层、亚表皮层厚度均减小,角质层部分褶皱,表皮细胞部分断裂、变形,亚表皮层细胞变为长椭圆形或纺锤形、细胞壁厚度增加了63.46%;150μmol·L^(-1)外源褪黑素处理的果皮角质层平整、薄厚均匀,细胞形状基本不变,亚表皮细胞壁厚度增加了42.60%;高温胁迫处理30 min时,清水处理的果皮细胞角质层变薄、褶皱明显且数量变多,表皮细胞严重变形,亚表皮细胞呈不规则形、出现较大空腔、细胞壁厚度增加了84.62%,150μmol·L^(-1)外源褪黑素处理的果皮细胞角质层个别区域变薄、褶皱变形,少数表皮细胞破裂,亚表皮层少数空腔、细胞壁厚度增加了65.74%。【结论】喷施浓度为150μmol·L^(-1)外源褪黑素可降低枇杷果实日灼病果率及病害等级,延缓枇杷果实日灼的发生,缓解高温胁迫对果皮组织结构的伤害。

关键词：枇杷褪黑素日灼果皮解剖结构

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胡子鲇qRT-PCR内参基因的筛选

渔业科学进展 2024年

作者：沈奕君朱奕安杨志华叶明慧周大颜李广丽田昌绪广东海洋大学水产学院广东省名特优鱼类生殖调控与繁育工程技术研究中心广东省水产动物病害防控与健康养殖重点实验室广西壮族自治区水产引育种中心

实时荧光定量PCR (qRT-PCR)是研究基因表达有效的工具之一，选取合适的内参基因，是获得可靠的基因表达结果的关键。本研究以胡子鲇(Clarias fuscus)为研究对象，采用qRT-PCR技术检测了13个候选基因(actb1、actb2、ef1a、eef1b2、rpl13a... 详细信息

实时荧光定量PCR (qRT-PCR)是研究基因表达有效的工具之一，选取合适的内参基因，是获得可靠的基因表达结果的关键。本研究以胡子鲇(Clarias fuscus)为研究对象，采用qRT-PCR技术检测了13个候选基因(actb1、actb2、ef1a、eef1b2、rpl13a、rpl13、ccdc124、cfl1、nm23、eif3g、rap1a、ikbkg和ywhab)在胡子鲇性腺不同发育阶段和成鱼不同组织中的基因表达情况，并利用BestKeeper、GeNorm、NormFinder和RefFinder软件分析其表达稳定性，以筛选在胡子鲇性腺发育和不同组织中稳定表达的内参基因。结果发现，13个候选内参基因的定量PCR引物均可获得特异性扩增产物。在性腺不同发育阶段，候选基因表达稳定性顺序由高到低的顺序为actb2>rpl13>actb1> cfl1>rap1a>ef1a>rpl13a>ikbkg>eif3g>nm23>eef1b2>ywhab>ccdc124，成鱼不同组织中稳定性由高到低的顺序为actb2>rpl13>cfl1>rap1a>ef1a>rpl13a>ikbkg>eif3g>nm23>actb1> eef1b2>ywhab>ccdc124。随后，选择稳定性前二的actb2和rpl13作为候选内参基因，分析zp3、atp2b3、slc13a5和parp8基因在胡子鲇雌、雄性腺中的相对表达量，结果进一步证实，以actb2为内参时，其雌雄性状差异基因表达水平更接近于转录组结果。综合分析表明，actb2基因可作为内参基因用于今后胡子鲇性腺不同发育时期、不同组织间功能基因表达特征的研究。

关键词：胡子鲇 qRT-PCR 内参基因表达稳定性

中国大陆沿海裸胸鳝属鱼类新记录种——鞍头裸胸鳝的形态与分子系统学

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水产学报 2024年第6期 15-26页

作者：何浩斌杨杰銮杨森梁冠宇李江涛李清清林蠡梁日深仲恺农业工程学院动物科技学院广东省水环境与水产品安全工程技术研究中心广州市水产病害与水禽养殖重点实验室

为完善中国裸胸鳝属鱼类物种信息，实验报道了采集于中国大陆沿海水域(福建省厦门市和广东省汕头市)的新记录种——鞍头裸胸鳝，目前该物种世界上仅日本及中国台湾东部有分布记录。通过对采集样品进行详细的形态学特征分析，综合利用DN... 详细信息

为完善中国裸胸鳝属鱼类物种信息，实验报道了采集于中国大陆沿海水域(福建省厦门市和广东省汕头市)的新记录种——鞍头裸胸鳝，目前该物种世界上仅日本及中国台湾东部有分布记录。通过对采集样品进行详细的形态学特征分析，综合利用DNA条形码COⅠ及16S rRNA基因进行分子鉴定及系统分类研究。结果显示，鞍头裸胸鳝主要鉴别特征为：体色浅褐色，眼后头顶有一个暗色马鞍状斑纹，背鳍起点前有一黑色三角形大斑块，腹部有黑色条纹从鳃孔下方延伸至肛门，背鳍、臀鳍边缘均为白色；体修长，全长为体高的19.06～19.60倍；上下颌齿均单行，上颌齿每侧8个，下颌齿12～14个，总脊椎数为162～168。基于COⅠ及16S rRNA基因分析，鞍头裸胸鳝与其他裸胸鳝遗传距离分别为COⅠ(0.120～0.255),16S rRNA (0.059～0.132)，其中COⅠ遗传距离已远大于Herbert设定的2%最小物种鉴定遗传距离，揭示鞍头裸胸鳝为独立物种。进化树上，鞍头裸胸鳝与白缘裸胸鳝聚为一支，二者亲缘关系较为紧密。研究表明，鞍头裸胸鳝在中国大陆沿海也有分布，为有效新记录种。本研究为中国裸胸鳝属鱼类的系统分类及物种名录修订提供相关分类基础。

关键词：鞍头裸胸鳝新记录种形态特征 COⅠ基因 16S rRNA基因

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哈维氏弧菌LAMP可视化检测方法的建立

海洋渔业 2024年

作者：于劼豪黄郁葱孙良娟钟键鲁义善简纪常蔡双虎广东海洋大学水产学院广东省水产动物病害防控与健康养殖重点实验室广东海洋大学深圳研究院广东省水生动物健康评估工程技术研究中心湛江海关技术中心

为加强对哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）早期快速诊断，本研究探究建立一种基于环介导等温扩增（LAMP）技术的可视化快速检测方法。基于环二聚体磷酸二酯VieA基因序列在哈维氏弧菌中的保守性，将其作为靶基因设计引物并初步建立LAMP反应... 详细信息

为加强对哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）早期快速诊断，本研究探究建立一种基于环介导等温扩增（LAMP）技术的可视化快速检测方法。基于环二聚体磷酸二酯VieA基因序列在哈维氏弧菌中的保守性，将其作为靶基因设计引物并初步建立LAMP反应体系，对LAMP反应体系中各反应物浓度、内外引物比例、反应时间和反应温度进行优化，并对优化后的LAMP反应的特异性和灵敏度进行检测；分别在优化后的LAMP反应体系中加入SYBR Green I、钙黄绿素-锰离子或羟基萘酚蓝作为指标剂对LAMP反应产物进行可视化判别，从而建立了一种针对哈维氏弧菌的LAMP可视化检测方法。研究表明该LAMP反应体系最佳反应温度60℃、反应时间60 min、Mg2+浓度1.2 mmol·L-1、dNTPs浓度0.64 mmol·L-1、甜菜碱浓度0.25 mmol·L-1及内外引物比例16:1；该反应体系能特异性检测到哈维氏弧菌，且灵敏度为3.4×10-6ng·μL-1。可视化指标剂钙黄绿素-锰离子的添加比例为12:1或羟基萘酚蓝的添加浓度为390 μmol·L-1时LAMP反应结果的可视化效果最好，临床应用表明该LAMP可视化技术能准确并特异性地检测到珍珠龙胆石斑鱼和凡纳滨对虾组织中感染的哈维氏弧菌。本研究提供了一种简单、快速和结果可视化的哈维氏弧菌LAMP检测方法，可以为水生动物哈维氏弧菌的现场检测和弧菌病的早期诊断提供技术支持。

关键词：哈维氏弧菌 LAMP技术可视化检测临床应用

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罗氏沼虾胞质锰超氧化物歧化酶的功能

水产学报 2024年第1期48卷 158-165页

作者：李亚男陆霖青张鹏张博林蠡秦真东仲恺农业工程学院动物科技学院广东省水环境与水产品安全工程技术研究中心广州市水产病害与水禽养殖重点实验室中国水产科学研究院南海水产研究所

为了解超氧化物歧化酶(SOD)分子生物学特性和免疫功能，实验克隆了罗氏沼虾胞质锰SOD基因(MrcMnSOD)，制备多克隆抗体，并分析在嗜水气单胞菌感染下该基因的表达模式。结果显示，嗜水气单胞菌感染可显著诱导MrcMnSOD在转录水平和蛋白质... 详细信息

为了解超氧化物歧化酶(SOD)分子生物学特性和免疫功能，实验克隆了罗氏沼虾胞质锰SOD基因(MrcMnSOD)，制备多克隆抗体，并分析在嗜水气单胞菌感染下该基因的表达模式。结果显示，嗜水气单胞菌感染可显著诱导MrcMnSOD在转录水平和蛋白质水平进行高表达。为探究MrcMnSOD参与免疫应答的机制，进一步的抑菌实验表明，该蛋白质可显著抑制3种革兰氏阴性细菌(大肠杆菌、副溶血性弧菌、嗜水气单胞菌)和2种革兰氏阳性细菌(无乳链球菌、金黄色葡萄球菌)的生长，且抑制作用与蛋白质浓度的关系不显著。研究表明，MrcMnSOD可能作为一种免疫相关分子参与免疫应答反应。本研究初步探讨了MrcMnSOD的免疫生物学功能，旨在为深入研究罗氏沼虾SOD的功能奠定相关基础。

关键词：罗氏沼虾 MnSOD 表达模式抑菌

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黄鹂无齿鲹胚胎及胚后发育特征

水产学报 2024年第4期48卷 73-85页

作者：黄炜坪甘松永王庆杨少森黄锦雄赵艳飞邹翠云黄培卫张潇潇陈永南秦真东吴锦辉林蠡广东省水环境与水产品安全工程技术研究中心广州市水产病害与水禽养殖重点实验室仲恺农业工程学院动物科技学院广东省农业技术推广中心华南农业大学海洋学院

黄鹂无齿鲹是一种兼具观赏与食用价值的名贵海水鱼类。本文通过人工催产方法，获取黄鹂无齿鲹受精卵并追踪观察，旨在对其胚胎及胚后发育特征进行观察记录。结果显示，受精卵孵化条件为盐度30.26±0.67、温度(24.72±0.32)°C、 pH值(7... 详细信息

黄鹂无齿鲹是一种兼具观赏与食用价值的名贵海水鱼类。本文通过人工催产方法，获取黄鹂无齿鲹受精卵并追踪观察，旨在对其胚胎及胚后发育特征进行观察记录。结果显示，受精卵孵化条件为盐度30.26±0.67、温度(24.72±0.32)°C、 pH值(7.46±0.12)、溶解氧(5.13±0.33) mg/L、光照强度约3 000 lx。黄鹂无齿鲹受精卵为透明浮性圆球形，平均卵径(764.29±14.74)μm；含单油球，油球平均直径(166.32±18.28)μm。胚胎发育历经受精卵期、胚盘期、卵裂期、囊胚期、原肠胚期、神经胚期、器官形成期与孵化出膜期8个阶段，再进一步细分成24个时期。受精后18 h 30 min孵化出膜，进入仔鱼阶段(含前仔鱼期和后仔鱼期)。前仔鱼期为孵化后0～3 d，卵黄囊没有完全吸收；后仔鱼期为孵化后4～20 d，卵黄囊完全吸收。初孵仔鱼全长(1 520±19)μm，出膜后第6天油球储备耗尽并形成鳔。孵化后第20天，鱼体后脊索完全弯曲，各鳍和消化系统发育完善，体表大量色素沉淀且具有独立生活的能力，仔鱼进入稚鱼阶段。研究表明，黄鹂无齿鲹的发育模式符合典型硬骨鱼类的规律，发育周期较其他鲹科鱼类更短，其胚胎及胚后发育特征与卵形鲳鲹比较接近。本研究为黄鹂无齿鲹苗种培育提供了重要参考。

关键词：黄鹂无齿鲹受精卵胚胎发育胚后发育

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马氏珠母贝Perlucin基因序列特征及其SNP与耐低温性状的关系

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广东海洋大学学报 2024年第1期44卷 55-63页

作者：王成赖卓欣宋欣霖钟如卓郑哲王庆恒广东海洋大学水产学院广东省珍珠养殖与加工工程技术研究中心广东省珍珠科技创新中心广东省水产动物病害防控与健康养殖重点实验室广东湛江524088

【目的】克隆马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)新的凝集素分子基因,命名为Perlucin,研究在低温胁迫下马氏珠母贝Perlucin的表达以及与抗低温性状相关的单核苷酸多态性(SNP)位点。【方法】根据马氏珠母贝基因组中Perlucin基因序列... 详细信息

【目的】克隆马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)新的凝集素分子基因,命名为Perlucin,研究在低温胁迫下马氏珠母贝Perlucin的表达以及与抗低温性状相关的单核苷酸多态性(SNP)位点。【方法】根据马氏珠母贝基因组中Perlucin基因序列设计引物,克隆Perlucin基因全长;用生物信息学方法分析Perlucin的结构和理化特征;设计17和22℃(对照)2个温度组,对马氏珠母贝进行低温胁迫实验,用实时荧光定量PCR检测低温胁迫下Perlucin表达量的变化;筛选和比较分析马氏珠母贝耐低温选育系(R)F3和北部湾野生群体(W)的Perlucin外显子区的SNP位点和单倍型。【结果】马氏珠母贝Perlucin全长631 bp,编码152个氨基酸;包含1个信号肽和1个C型凝集素结构域。同源分析表明,马氏珠母贝Perlucin与紫贻贝(Mytilus galloprovincialis)Perlucin的亲缘性最近。Perlucin在鳃中表达量最高,其次为足和肝胰腺。低温胁迫时,鳃组织中Perlucin基因在17℃低温组的表达量呈先升高后降低的趋势,在12 h时达到最高并显著高于22℃对照组(P<0.05),表明Perlucin可能参与马氏珠母贝的低温响应过程。对Perlucin外显子区的SNP进行分析,共得到30个SNP,其中13个SNP位点的基因型频率在R和W群体间差异显著(P<0.05)。【结论】Perlucin是参与调节马氏珠母贝低温适应过程中的候选基因,筛选出两个SNP位点g.40078856、g.40078945。

关键词：马氏珠母贝 Perlucin 基因克隆低温胁迫 SNP

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