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原位DNA结合蛋白显示技术的改进

郑州大学学报（医学版） 2003年第5期38卷 696-698页

作者：丁一赵培荣吴景兰张莹王一菱郑州大学分子细胞生物学研究中心郑州450052

目的 :探讨DNA结合蛋白定位技术的改进。方法 :以左旋咪唑 /酒精先消除细胞的内源性碱性磷酸酶(AP) ,再分别以DNase和RNase消除细胞内源性核酸 ,应用低盐浓度的杂交液预杂交后再加特异DNA的标记探针 ,以链霉亲和素SA AP中介 ,最终以四... 详细信息

目的 :探讨DNA结合蛋白定位技术的改进。方法 :以左旋咪唑 /酒精先消除细胞的内源性碱性磷酸酶(AP) ,再分别以DNase和RNase消除细胞内源性核酸 ,应用低盐浓度的杂交液预杂交后再加特异DNA的标记探针 ,以链霉亲和素SA AP中介 ,最终以四氮唑盐 /5溴 4 氯 3 吲哚磷酸 (NBT/BCIP)作为底物 ,37℃下显色。结果 :DBP阳性信号呈紫色细颗粒 ,主要定位于胞核。结论

关键词： DNA结合蛋白定位技术方法染色过程

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NK细胞对结直肠癌细胞增殖的影响

重庆医学 2025年第1期54卷 18-23页

作者：刘素兵叶子瑜梁艳芳曾今诚东莞市石排医院检验科广东东莞523330 广东医科大学东莞市医学活性分子开发与转化重点实验室广东东莞523808 广东省宪华医学研究院广东东莞523808 东莞市分子免疫病理研究重点实验室/东莞市滨海湾中心医院病理科广东东莞523905

目的研究自然杀伤(NK)细胞对4种结直肠癌(CRC)细胞株增殖的影响,探讨过继性NK细胞免疫疗法治疗CRC的可行性,为CRC诊疗提供实验依据。方法采用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,在体外诱导活化为NK细胞并扩增,采用细胞计数试剂... 详细信息

目的研究自然杀伤(NK)细胞对4种结直肠癌(CRC)细胞株增殖的影响,探讨过继性NK细胞免疫疗法治疗CRC的可行性,为CRC诊疗提供实验依据。方法采用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,在体外诱导活化为NK细胞并扩增,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测NK细胞对CRC细胞株RKO、HCT15、HCT116、LoVo增殖的影响,统计学分析比较NK细胞对CRC细胞株的抑制率。结果在不同效靶比下,NK细胞对同一种靶细胞的抑制率差异有统计学意义(P细胞数量(5×10^(3)个vs.1×10^(4)个)下,NK细胞对靶细胞RKO(效靶比0.4∶1)、HCT15(效靶比0.4∶1和0.2∶1)、HCT116(效靶比3.2∶1、1.6∶1、0.8∶1、0.4∶1和0.2∶1)及LoVo(效靶比1.6∶1、0.8∶1、0.4∶1、0.2∶1和0.1∶1)的抑制率差异有统计学意义(P细胞各效靶比不同靶细胞数量组间抑制率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。在不同靶细胞数量下,NK细胞对4种CRC细胞株最高抑制率的效靶比均为12.8∶1。结论过继性NK细胞免疫疗法对CRC的早期干预和治疗有重要意义,且12.8∶1可能是一个安全且疗效较好的效靶比。

关键词： NK细胞结直肠癌细胞效靶比细胞增殖过继性细胞免疫疗法

基于网络药理学和实验验证探讨间苯三酚治疗类风湿性关节炎的作用及机制

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热带医学杂志 2025年第02期 149-156+289页

作者：陈学林黄珊兰佳明陈俊敏刘衍志刘义刘钰瑜广东医科大学天然药物研究与开发重点实验室

目的从网络药理学角度探究间苯三酚（PGL）在治疗类风湿性关节炎中的潜在作用和靶点，以及与其靶点相关的信号通路，并通过细胞实验进行验证。方法利用BATMAN-TCM、Swiss Target Prediction、Pharmapper等数据库检索并收集PGL潜在的... 详细信息

目的从网络药理学角度探究间苯三酚（PGL）在治疗类风湿性关节炎中的潜在作用和靶点，以及与其靶点相关的信号通路，并通过细胞实验进行验证。方法利用BATMAN-TCM、Swiss Target Prediction、Pharmapper等数据库检索并收集PGL潜在的作用靶点，同时通过Disgent、OMIM、Drugbank、NCBI、TTD数据库获取类风湿性关节炎疾病相关靶点。利用韦恩图求出两组靶点的交集，并在STRING数据库中构建靶基因的相互作用（PPI）网络，使用Metascape进行基因本体论（GO）功能富集和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路分析。应用分子对接技术进一步验证PGL治疗类风湿性关节炎的核心靶点。利用LPS诱导构建RAW264.7炎症细胞模型，分为空白组、模型组、0.1、1及10μmol PGL组，通过逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和蛋白质印迹（Western blot）等方法对PGL进行核心靶点的验证。结果筛选后获得168个PGL的潜在靶点，3 250个类风湿性关节炎相关靶点，将两者进行交集获得共有靶点79个。富集分析得到700个GO功能条目，其中GO生物学过程574个、GO分子功能75个、GO细胞组分51个和KEGG信号通路111个。分子对接结果提示核心靶点与PGL的结合能均细胞的增殖，与空白组相比，差异均有统计学意义（t=3.64、3.33、3.53、7.26、5.27,P均实验结果显示，与空白组相比，模型组中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6） mRNA表达升高，精氨酸酶1（ARG1）表达降低，差异均有统计学意义（t=33.41、76.16、43.16、95.69、12.29,P均学意义(t1μmol=14.51、14.40、4.49、64.06、4.97,t10μmol=22.42、56.63、12.22、47.97、4.62,P均学意义（P均>0.05）。与空白组相比，模型组中iNOS、IL-1β、IL-6、磷酸化的磷脂酰肌醇3-激酶（P-PI3K）/磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）及磷酸化的丝氨酸/苏氨酸激酶B（P-AKT）/丝氨酸/苏氨酸激酶B（AKT）等表达显著上升，ARG1蛋白表达显著下降，差异有统计学意义（t=231.61、25.85、13.96、12.26、4.75、9.20,P均学意义(t1μmol=23.93、13.51、6.25、6.94、7.20、7.20,t10μmol=8.14、12.65、6.42、14.31、5.78、12.98,P均学意义（P均>0.05）。结论 PGL可能通过调节PI3K-AKT信号通路，作用TNF-α、IL-1β、IL-6等关键靶点，从而发挥调节免疫、抗炎等作用，揭示了PGL治疗类风湿性关节炎的潜在作用机制，为开发其在临床上的新用途提供思路。

关键词：类风湿性关节炎间苯三酚网络药理学分子对接

RNAi对人胃癌BGC823细胞β-catenin基因的抑制作用

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郑州大学学报（医学版） 2005年第6期40卷 1031-1034页

作者：刘兴涛张钦宪丁一吴景兰郑州大学分子细胞生物学研究中心郑州450052

目的:应用RNAi技术抑制胃癌BGC823细胞βcatenin基因的表达,探讨该基因在胃癌细胞生长增殖中的作用。方法:体外转录合成短发夹状RNA,用脂质体转染系统将其导入细胞内。应用RTPCR检测转染后目的基因mRNA的表达水平;应用MTT检测转染后癌... 详细信息

目的:应用RNAi技术抑制胃癌BGC823细胞βcatenin基因的表达,探讨该基因在胃癌细胞生长增殖中的作用。方法:体外转录合成短发夹状RNA,用脂质体转染系统将其导入细胞内。应用RTPCR检测转染后目的基因mRNA的表达水平;应用MTT检测转染后癌细胞生长增殖情况。结果:RTPCR电泳结果显示RNAi可抑制胃癌细胞βcatenin的表达,第2d和第3d抑制率可达90%以上。MTT实验显示βcatenin基因受抑后细胞的生长增殖受到明显抑制,抑制率最高达43%;且抑制率随着时间而升高。结论:RNA干扰技术作为一种新的基因治疗技术在胃癌治疗方面有着巨大的应用潜力。

关键词： RNAi β-catenin BGC-823细胞

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水源因素与戊型肝炎病毒感染的关联性

复旦学报（医学版） 2007年第5期34卷 662-668页

作者：陆一涵宋建根葛胜祥姜庆五王法弟郭清顺董晓莲朱连华范建良高眉扬夏宁邵郑英杰复旦大学公共卫生学院流行病学教研室-公共卫生安全教育部重点实验室上海200032 浙江省德清县疾病预防控制中心德清313200 厦门大学福建省医学分子病毒学研究中心厦门361005

目的通过检测浙江省德清县水系上下游地区农村人群血清戊型肝炎病毒抗体水平,以评价非爆发状态下水源因素与戊型肝炎病毒感染的关联性。方法通过统一的调查表收集1 720人的一般资料及可能危险因素,并采用间接酶联免疫吸附法检测血清抗HE... 详细信息

目的通过检测浙江省德清县水系上下游地区农村人群血清戊型肝炎病毒抗体水平,以评价非爆发状态下水源因素与戊型肝炎病毒感染的关联性。方法通过统一的调查表收集1 720人的一般资料及可能危险因素,并采用间接酶联免疫吸附法检测血清抗HEV-IgG抗体。结果总标化抗体阳性率为48.79%。其中,上游地区人群标化抗体阳性率为43.52%,下游标化阳性率为51.26%。将两地人群不同的构成特征调整后,下游抗体阳性率仍显著高于上游。同时发现,男性抗体阳性率高于女性;各年龄组阳性率随年龄升高而增加;家庭养猪、喜食猪肝、主要饲养动物和饮酒皆与戊肝感染有统计学关联。结论浙江农村地区戊型肝炎病毒感染情况与当地水源因素有较为显著的关联;猪可能是戊型肝炎病毒的自然宿主之一。

关键词：肝炎病毒抗戊型肝炎-IgG抗体经水传播人畜共患病

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基于微流控技术的循环肿瘤细胞分析研究进展

中国科学：化学 2019年第9期49卷 1220-1236页

作者：张惠敏吴玲玲林冰倩王奕迪毕云鹏王炜宋彦龄杨朝勇上海交通大学医学院分子医学研究院仁济医院上海200217 谱学分析与仪器教育部重点实验室福建省化学生物学重点实验室厦门大学化学化工学院厦门361005

癌症的精准诊疗是提高癌症患者生存率和生存质量的重要手段.液体活检通过采用非侵入采样方式,获取肿瘤病人全面、准确、实时的基因组、转录组及蛋白组等生物学信息,是一种新兴的癌症诊断技术,对癌症精确诊断、个体化治疗、预后评估等方... 详细信息

癌症的精准诊疗是提高癌症患者生存率和生存质量的重要手段.液体活检通过采用非侵入采样方式,获取肿瘤病人全面、准确、实时的基因组、转录组及蛋白组等生物学信息,是一种新兴的癌症诊断技术,对癌症精确诊断、个体化治疗、预后评估等方面具有重要意义.循环肿瘤细胞(CTC)是一种从实体瘤组织脱落进入外周血的肿瘤细胞,因能提供完整的细胞生物学信息,是最具应用前景的液体活检靶标.然而, CTC的数量极其稀少、异质性强、所处外周血环境复杂等特点,给CTC的富集和分析带来了巨大的技术挑战.本文将总结本课题组近年来发展的基于CTC液体活检策略,着重讨论在CTC识别、富集与单细胞分析等方面的研究进展.

关键词：液体活检循环肿瘤细胞核酸适体微流控芯片单细胞分析

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腺相关病毒介导的肝细胞癌靶向治疗策略

药学学报 2017年第9期52卷 1359-1365页

作者：高三星蔡双凤许瑞安华侨大学生物医学学院分子药物教育部工程研究中心福建省分子医学重点实验室厦门市海洋与基因工程药物重点实验室福建厦门361021

肝细胞癌是最为常见的肝脏原发性肿瘤,也是致死率居第二位的癌症。随着分子生物学的发展,基因治疗成为有治愈癌症潜力的新途径。腺相关病毒以其较高的感染率、低致病性和低免疫原性等优势成为最有前景的基因治疗载体。靶向基因治疗能实... 详细信息

肝细胞癌是最为常见的肝脏原发性肿瘤,也是致死率居第二位的癌症。随着分子生物学的发展,基因治疗成为有治愈癌症潜力的新途径。腺相关病毒以其较高的感染率、低致病性和低免疫原性等优势成为最有前景的基因治疗载体。靶向基因治疗能实现目的基因的靶向表达,避免对非靶向器官的毒性作用而弥补了传统腺相关病毒在基因治疗中的不足。本文就近年来肝细胞癌发病机制、腺相关病毒的生物学特点及其介导的靶向治疗肝细胞癌策略做一综述,为肝细胞癌靶向基因治疗的进一步研究提供参考。

关键词：肝细胞癌分子机制腺相关病毒靶向治疗基因治疗

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方格星虫dmrt1基因的克隆和表达分析

水生生物学报 2019年第6期43卷 1210-1215页

作者：李文华吴雅琴马国兴袁铭瑞许瑞安华侨大学生物医学学院分子药物教育部工程研究中心福建省分子医学重点实验室厦门市海洋与基因工程药物重点实验室

为了研究dmrt1(Double sex and mab-3 related transcription factor 1)基因在方格星虫(Sipunculus nudus)的表达特征,首先采用RACE方法克隆了方格星虫dmrt1基因。方格星虫dmrt1的cDNA全长1509 bp,开放阅读框615 bp,共编码204个氨基酸。生物信息学分析表明方格星虫DMRT1的DM结构域具有一定的保守性,与其他物种的同源性能够达到70%以上。成体组织荧光定量PCR分析表明方格星虫dmrt1仅在方格星虫雄性个体的体腔液中表达,通过原位杂交显示dmrt1定位于体腔液精子团周围的滋养细胞。这些结果提示,方格星虫dmrt1可能在调控方格星虫的雄性个体的生殖发育过程中发挥着重要作用。

关键词：方格星虫 Dmrt1 雄性个体性别分化

戊型肝炎病毒颗粒性蛋白疫苗H-2^d限制性Th表位的筛选

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病毒学报 2006年第3期22卷 176-179页

作者：伍小路吴婷欧山海林春鑫程通李少伟张军夏宁邵厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心福建省医学分子病毒学研究中心福建厦门361005

戊型肝炎病毒衣壳蛋白重组抗原HEV239能形成类病毒颗粒，具备演变成多价疫苗的载体的潜力，此文旨在筛选、鉴定其内包含的H-2^4限制性Th表位。以50μg HEV 239蛋白与完全弗式佐剂混合后皮下免疫BALB／c鼠，以覆盖HEV 239蛋白全长的15氨... 详细信息

戊型肝炎病毒衣壳蛋白重组抗原HEV239能形成类病毒颗粒，具备演变成多价疫苗的载体的潜力，此文旨在筛选、鉴定其内包含的H-2^4限制性Th表位。以50μg HEV 239蛋白与完全弗式佐剂混合后皮下免疫BALB／c鼠，以覆盖HEV 239蛋白全长的15氨基酸肽库体外刺激其脾细胞，用IFN-γ-ELISPOT方法检测其细胞免疫应答，并通过磁珠剔除脾细胞中CD4^＋ T细胞或CD8^＋ T细胞以分析筛选得到的T细胞表位的特性。结果显示：HEV239中包含优势的T细胞表位P34（HEV PORF2 AA533～AA547，HSKTF FVLPL RGKLS）及数个较弱的T细胞表位。P34对HEV 239免疫的BALB／c鼠脾细胞的刺激效果与HEV 239蛋白相当，剔除实验表明该表位为CD4^＋T细胞表位，即Th表位。

关键词：戊型肝炎病毒 T辅助细胞 T细胞表位