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糖尿病足溃疡差异表达基因的筛选与功能分析及临床验证

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中华烧伤与创面修复杂志 2022年第10期38卷 944-951页

作者：王鹏陈昭宏蒋丽媛周小茜贾赤宇肖厚安西安市第九医院烧伤整形美容科西安710054 福建医科大学附属协和医院烧伤与创面修复科福建省烧伤研究所福建省烧伤医学中心福建省烧创伤重点实验室福州350001 厦门大学附属翔安医院烧伤整形与创面修复科厦门361102

目的筛选糖尿病足溃疡(DFU)的差异表达基因(DEG)并对其进行功能分析与临床验证,以期为慢性难愈性创面的表观遗传学治疗奠定理论基础。方法采用观察性研究方法。选取基因表达综合数据库(GEO)中的DFU患者基因表达谱数据集GSE80178,采用GE... 详细信息

目的筛选糖尿病足溃疡(DFU)的差异表达基因(DEG)并对其进行功能分析与临床验证,以期为慢性难愈性创面的表观遗传学治疗奠定理论基础。方法采用观察性研究方法。选取基因表达综合数据库(GEO)中的DFU患者基因表达谱数据集GSE80178,采用GEO2R工具分析筛选数据集中3个正常皮肤组织样本与6个DFU组织样本之间的DEG。对筛选出的DEG,采用R语言程序包中ClusterProfiler、org.Hs.***.db、GOplot和ggplot2分别进行生物学过程、分子功能、细胞组分的基因本体论(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析;采用STRING数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)分析,筛选DEG中的关键基因,用Cytoscape 3.9.1软件中Cytohubba插件进行关键基因的GO富集分析。取厦门大学附属翔安医院2018年9月—2021年3月收治的15例DFU患者(男7例、女8例,年龄55~87岁)的DFU组织和15例急性创面患者(男6例、女9例,年龄8~52岁)术后弃用的正常皮肤组织,分别采用实时荧光定量反转录PCR法与免疫组织化学法检测富含脯氨酸的小重复蛋白1A(SPRR1A)和晚期角质化包膜蛋白3C(LCE3C)的mRNA与蛋白表达。对数据行独立样本t检验。结果与正常皮肤组织比较,从DFU患者DFU组织中筛选出492个差异表达显著的DEG(校正P创面患者正常皮肤组织的1.069±0.025与1.053±0.044(t值分别为20.91、13.66,P值均<0.01)、0.38±0.04与0.45±0.05(t值分别为9.69、12.46,P值均<0.01)。结论相较于正常皮肤组织,DFU患者DFU组织中存在DEG谱,且DEG显著富集于KC分化及角蛋白功能方面;关键DEG与KC生物学功能相关,在DFU患者DFU组织中的低表达可能阻碍溃疡愈合。

关键词：糖尿病足溃疡计算生物学创面修复愈合机制差异表达基因

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中国烧伤医学领域临床试验现状和思考

中华烧伤与创面修复杂志 2022年第9期38卷 799-804页

作者：吴军陈昭宏王玉振深圳大学第一附属医院烧伤整形科深圳518037 福建医科大学附属协和医院烧伤与创面修复科福建省烧伤研究所福建省烧伤医学中心福建省烧创伤重点实验室福州350001

临床试验对制订烧伤诊治指南或共识具有重要意义,然而我国烧伤医学领域开展临床试验的先天优势并没有转化为循证医学数据。该课题组分别统计中英文数据库里国内外烧伤/重症医学领域主要学术期刊2010—2020年发表的文献,了解到中文期刊... 详细信息

临床试验对制订烧伤诊治指南或共识具有重要意义,然而我国烧伤医学领域开展临床试验的先天优势并没有转化为循证医学数据。该课题组分别统计中英文数据库里国内外烧伤/重症医学领域主要学术期刊2010—2020年发表的文献,了解到中文期刊发表烧伤医学领域临床试验的数量和比例普遍低于英文期刊,而且中文期刊中发表的烧伤医学领域临床试验文献数量和比例均低于重症医学领域。在此基础上,该课题组统计分析了2010—2020年烧伤医学领域临床试验注册情况,了解到我国烧伤医学领域临床试验的注册量和完成量不但低于美国烧伤医学领域,而且低于我国重症医学领域。烧伤医学领域临床试验开展不足的原因可能是烧伤发病率下降、烧伤专业医师数量下降且收入偏低、烧伤科研人才匮乏等。我国亟须整合烧伤医学领域临床资源优势,加强临床试验研究,提升国际话语权。

关键词：烧伤临床试验思考国际临床试验注册平台

人羊膜上皮细胞外泌体对高糖环境下HaCaT增殖和迁移的影响及其机制

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中华烧伤杂志 2021年第12期37卷 1175-1184页

作者：卫裴许钊荣陈艺敏陈晓东陈昭宏福建医科大学附属协和医院烧伤与创面修复科福建省烧伤研究所福建省烧伤医学中心福建省烧创伤重点实验室福州350001

目的探讨人羊膜上皮细胞外泌体(hAEC-Exo)对高糖环境下HaCaT增殖和迁移的作用及其相关机制。方法采用实验研究方法。取2019年1—6月于福建医科大学附属协和医院妇产科10名足月分娩健康孕妇羊膜组织,分离原代人羊膜上皮细胞(hAEC)。观察... 详细信息

目的探讨人羊膜上皮细胞外泌体(hAEC-Exo)对高糖环境下HaCaT增殖和迁移的作用及其相关机制。方法采用实验研究方法。取2019年1—6月于福建医科大学附属协和医院妇产科10名足月分娩健康孕妇羊膜组织,分离原代人羊膜上皮细胞(hAEC)。观察培养第2、4、7天原代hAEC生长状态和形态改变,采用流式细胞术检测细胞表面标志物CD73、CD90、CD29、CD34及人白细胞抗原DR(HLA-DR)的表达,取第2~4代细胞用于后续实验。超速离心法分离hAEC-Exo。将HaCaT与hAEC-Exo共培养3 h,采用倒置荧光显微镜观察HaCaT对hAEC-Exo的摄取情况。取HaCaT,分为磷酸盐缓冲液(PBS)组、hAEC-Exo组和二甲基亚砜(DMSO)+PBS组、DMSO+hAEC-Exo组、LY294002+hAEC-Exo组,每组3孔,并进行相应处理,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测培养0(即刻)、12、24、36、48、60 h细胞增殖活力;划痕试验检测划痕后0、24、48、72 h划痕愈合情况,并计算划痕愈合率;Transwell实验检测培养48 h穿膜细胞数;蛋白质印迹法检测培养24 h后磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K-Akt-mTOR)通路相关的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)的蛋白表达。对数据行重复测量方差分析、单因素方差分析及独立样本t检验。结果原代hAEC培养第2天多数呈卵圆形,大小均一;培养第4、7天,细胞形态呈典型的鹅卵石样单层排列。原代hAEC高表达间充质干细胞表面标志物CD73、CD90及CD29,不表达或低表达造血干细胞相关表面标志物CD34及HLA-DR。培养3 h,hAEC-Exo成功被HaCaT内吞入细胞质,并聚集于细胞核周围。培养12、24、36、48、60 h,hAEC-Exo组HaCaT增殖活力明显高于PBS组(t=3.691、10.861、12.121、10.531、14.931,P0.05)。培养24 h,DMSO+hAEC-Exo组HaCaT中p-mTOR和p-Akt的蛋白表达量明显高于DMSO+PBS组(t=6.155、8.338,P0.05)。DMSO+hAEC-Exo组HaCaT培养12、24、36、48、60 h增殖活力为0.78±0.05、1.23±0.07、1.60±0.09、1.86±0.09、2.03±0.08,明显高于DMSO+PBS组的0.46±0.04、0.69±0.07、0.98±0.08、1.16±0.08、1.26±0.11(t=4.376、7.398、8.488、9.766、10.730,P<0.01);DMSO+hAEC-Exo组HaCaT培养24、36、48、60 h增殖活力明显高于LY294002+hAEC-Exo组的0.96±0.09、1.20±0.08、1.39±0.08、1.55±0.10(t=3.639、5.447、6.605、6.693,P<0.05或P<0.01)。DMSO+hAEC-Exo组HaCaT划痕后24、48、72 h划痕愈合率明显高于DMSO+PBS组(t=4.003、6.349、7.714,P<0.01)和LY294002+hAEC-Exo组(t=3.805、4.676、4.067,P<0.05或P<0.01)。培养48 h,DMSO+hAEC-Exo组HaCaT穿膜数明显多于DMSO+PBS组和LY294002+hAEC-Exo组(t=7.464、1.232,P<0.01)。结论PI3K-Akt-mTOR通路介导hAEC-Exo促进高糖环境下HaCaT增殖和迁移。

关键词：细胞增殖细胞迁移分析 HaCaT 外泌体人羊膜上皮细胞磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路

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芦荟促进创面愈合的机制及临床应用研究进展

中华烧伤杂志 2016年第10期32卷 634-637页

作者：宋信福陈晓东福建医科大学附属协和医院福建省烧伤研究所福州350001

芦荟是百合科多年生常绿、多肉质草本植物，具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗辐射、抗氧自由基、抗癌、镇痛以及促进创面愈合等作用，由于其具有安全、有效、低毒等特点，在国内外作为一种民间良药使用由来已久。芦荟活性物质包括多糖、蒽醌... 详细信息

芦荟是百合科多年生常绿、多肉质草本植物，具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗辐射、抗氧自由基、抗癌、镇痛以及促进创面愈合等作用，由于其具有安全、有效、低毒等特点，在国内外作为一种民间良药使用由来已久。芦荟活性物质包括多糖、蒽醌、凝集素、SOD、糖蛋白、维生素C、维生素E和矿物质等。近年来有关芦荟及其提取物对各类疾病的基础和临床研究已取得若干进展。本文就芦荟促进创面愈合的机制及其临床应用研究进展综述如下。

关键词：芦荟伤口愈合烧伤慢性创面

本科实习护生对下肢静脉曲张自身防护的知信行现状调查

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福建医药杂志 2022年第5期44卷 148-150页

作者：林芳卢思颖黄秋芳戴晶晶李琳陈昭宏福建医科大学附属协和医院烧伤与创面修复科福州350001 福建医科大学护理学院福建省烧伤医学中心福建省烧创伤重点实验室

随着健康中国战略的推进,新健康观大大超越了传统的疾病防治范畴,力求将各种健康危害因素降到最低.作为威胁临床护士身心健康的常见疾病,职业性下肢静脉曲张也是我们想要降低的健康危害因素.实习护生是将来的护理从业者,他们对于下肢静... 详细信息

随着健康中国战略的推进,新健康观大大超越了传统的疾病防治范畴,力求将各种健康危害因素降到最低.作为威胁临床护士身心健康的常见疾病,职业性下肢静脉曲张也是我们想要降低的健康危害因素.实习护生是将来的护理从业者,他们对于下肢静脉曲张的知信行现状同样值得我们关注.

关键词：下肢静脉曲张健康危害因素实习护生临床护士知信行现状健康观自身防护疾病防治

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早期应用负压封闭引流技术治疗深Ⅱ度手烧伤

实用手外科杂志 2022年第3期36卷 296-298,382页

作者：刘灿滨郑建军刘维郑林文许钊荣陈昭宏陈舜福建医科大学附属协和医院福建省烧伤研究所福建省烧伤医学中心福建省烧创伤重点实验室烧伤与创面修复科福建福州350001

目的评价早期应用负压封闭引流技术(Vacuum sealing drainage,VSD)治疗深Ⅱ度手烧伤创面的临床疗效。方法对2016年4月-2018年3月收治的深Ⅱ度手烧伤患者20例,伤后早期清创,负压材料覆盖后持续封闭引流,每周更换负压材料同时评估创面,根... 详细信息

目的评价早期应用负压封闭引流技术(Vacuum sealing drainage,VSD)治疗深Ⅱ度手烧伤创面的临床疗效。方法对2016年4月-2018年3月收治的深Ⅱ度手烧伤患者20例,伤后早期清创,负压材料覆盖后持续封闭引流,每周更换负压材料同时评估创面,根据创基情况决定是否继续负压治疗或手术植皮。观察创面愈合时间及愈合后手功能恢复情况。结果20例共20个创面平均愈合时间(22.6±7.3)d,第一次VSD技术治疗时间为伤后(2.9±2.6)d,第二次VSD技术治疗时间为伤后(10.0±2.3)d,第三次VSD技术治疗时间为伤后(16.0±1.2)d。15例VSD技术治疗后痊愈,5例VSD技术联合植皮手术痊愈。随访6个月,手部瘢痕形成少,手功能恢复优良率60%,合格率95%,功能恢复满意。结论早期应用负压封闭引流技术治疗深Ⅱ度手烧伤创面能缩短愈合时间、减轻瘢痕增生,手功能恢复良好,值得临床应用及推广。

关键词：手烧伤负压封闭引流植皮术功能康复

左半结直肠癌合并降结肠系膜旋转不良的解剖学分型和腹腔镜手术

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中华胃肠外科杂志 2023年第7期26卷 668-674页

作者：黄胜辉池畔黄颖王枭杰陈明宏孙艳武林惠铭蒋伟忠福建医科大学附属协和医院结直肠外科福州350001 福建医科大学附属协和医院放射科福州350001

目的初步探讨左半结直肠癌合并降结肠系膜旋转不良(PDM)的解剖形态与分型,并探究应用腹腔镜根治手术的安全性。方法本研究为描述性病例系列研究。回顾性分析2021年7月至2022年9月间,福建医科大学附属协和医院结直肠外科数据库中实施腹... 详细信息

目的初步探讨左半结直肠癌合并降结肠系膜旋转不良(PDM)的解剖形态与分型,并探究应用腹腔镜根治手术的安全性。方法本研究为描述性病例系列研究。回顾性分析2021年7月至2022年9月间,福建医科大学附属协和医院结直肠外科数据库中实施腹腔镜根治手术的995例左半结肠和直肠癌患者的临床资料,对其中24例(2.4%)合并PDM者回顾影像学资料和手术录像,观察降结肠及系膜分布形态,评估腹腔镜根治手术的可行性和并发症。根据解剖学形态特点,将PDM分型如下:0型为PDM合并中肠旋转不良或升结肠系膜旋转不良;1型为横结肠与降结肠移行处系膜未固定;2型为PDM降结肠在肠系膜下动脉水平附近明显内移,其中不越过腹主动脉者为2A型,越过腹主动脉者为2B型;3型为降乙交界结肠系膜未固定,在肠系膜下动脉水平以下明显内移。结果24例术中诊断左半结直肠癌合并PDM患者中,仅有9例(37.5%)术前影像被部分外科医师阅片时发现并诊断。全组患者男性22例,女性2例;年龄为(63±9)岁。24例PDM分型如下:0型占4.2%(1/24);1型占8.3%(2/24);2A型和2B型分别占37.5%(9/24)和25.0%(6/24);3型占25.0%(6/24)。全组患者均存在结肠系膜自身粘连并行松解,20例(83.3%)存在结肠与回肠系膜粘连,12例(50.0%)游离脾曲。14例(58.3%)患者的肠系膜下动脉分支为全共干型。24例接受腹腔镜D3手术,无中转开腹,其中22例(91.7%)保留肠系膜下动脉主干。术中发现2例(8.3%)患者近切端结肠缺血,均为肠系膜下动脉高位结扎者,其中1例为近肛管型低位直肠癌,因术前肛门功能差行经括约肌间腹会阴联合切除术;1例被迫行腹腔镜辅助结肠次全切除术。全组手术时间(260±100)min,中位出血量为50(20~200)ml,No.253淋巴结中位清扫数目3(0~20)枚,仅1例(4.2%)发生No.253淋巴结转移。术后中位住院时间8(4~23)d。术后并发症发生率16.7%(4/24),术后均未发生肠缺血坏死;1例(4.2%)ⅡA期直肠癌患者术后发生B级吻合口漏(Clavien-DindoⅢ级),择期行回肠袢式造口,余均为Ⅰ~Ⅱ级。结论PDM常伴系膜粘连,该分型有助于腹腔镜手术中粘连松解时识别降结肠及系膜,术中应尽可能保护拟切端结直肠血供,以避免非计划性扩大结肠切除、Hartmann术或永久造口。

关键词：结直肠肿瘤降结肠系膜旋转不良结肠中肠旋转不良腹腔镜手术

芦荟烧伤膏对小鼠烫伤创面组织中转化生长因子-β1和表皮生长因子样结构域7的影响

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中华实验外科杂志 2016年第5期33卷 1204-1206页

作者：李建学陈晓东宋信福江琼李荣府陈昭宏福建医科大学附属协和医院福建省烧伤研究所福州350001

目的观察芦荟烧伤膏对小鼠深Ⅱ＆#176;烫伤创面组织中转化生长因子-β1（TGF-β1）和表皮生长因子样结构域7（EGFL7）的影响.方法 c57bl/6小鼠96只,随机分为4组,每组24只,每只背部造成直径为2 cm的深Ⅱ＆#176;烫伤创面,每组创面分别外... 详细信息

目的观察芦荟烧伤膏对小鼠深Ⅱ＆#176;烫伤创面组织中转化生长因子-β1（TGF-β1）和表皮生长因子样结构域7（EGFL7）的影响.方法 c57bl/6小鼠96只,随机分为4组,每组24只,每只背部造成直径为2 cm的深Ⅱ＆#176;烫伤创面,每组创面分别外敷生理盐水、磺胺嘧啶银乳膏、基质和芦荟烧伤膏的纱布;苏木素-伊红（HE）染色观察烫伤后7、10、14 d创面组织结构变化;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测烫伤后3、7、10、14 d创面组织中TGF-β1和EGFL7含量.结果烫伤后,芦荟烧伤膏组创面组织上皮覆盖加快,新生血管增多;芦荟烧伤膏组第3、7天创面组织中TGF-β1水平分别为（22.72±1.05）、（31.58±3.91）μg./g,EGFL7水平分别为（99.67±3.33）、（161.60±12.74） μg/g,与各对照组比较均呈显著性升高（P＜0.05）;烫伤后第10天,芦荟烧伤膏组创面组织中EGFL7水平仍维持在较高水平[（148.25±15.33） μg/g],显著高于磺胺组和基质组（P＜0.05）.结论芦荟烧伤膏能增加创面组织中TGF-β1、EGFL7的表达,促进烫伤组织的修复.

关键词：芦荟烧伤膏烫伤转化生长因子-β1 表皮生长因子样结构域7

去白细胞悬浮红细胞来源外泌体的释放及其对血液肿瘤细胞的调控

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中国实验血液学杂志 2022年第4期30卷 1188-1192页

作者：黄豪博范丽萍林秋燕黄惠炆付丹晖福建医科大学附属协和医院输血科福建福州350001 福建医科大学附属协和医院血液科福建福州350001

目的:探讨不同储存时间去白细胞悬浮红细胞(LDRCS)中外泌体(exosome,Exo)的释放及其对血液肿瘤细胞增殖的调控与可能机制。方法:应用超高速离心方法获得不同储存时间的LDRCS中Exo(RBC⁃Exo),采用透射电镜术、蛋白免疫印迹法分别对RBC⁃Ex... 详细信息

目的:探讨不同储存时间去白细胞悬浮红细胞(LDRCS)中外泌体(exosome,Exo)的释放及其对血液肿瘤细胞增殖的调控与可能机制。方法:应用超高速离心方法获得不同储存时间的LDRCS中Exo(RBC⁃Exo),采用透射电镜术、蛋白免疫印迹法分别对RBC⁃Exo的形态、免疫标记进行检测。采用动态光散射检测不同储存时间LDRCS中RBC⁃Exo的粒径分布变化。采用CCK⁃8法检测RBC⁃Exo对血液肿瘤细胞增殖的影响。采用蛋白免疫印迹法检测与RBC⁃Exo共培养后血液肿瘤细胞内增殖相关蛋白的表达变化。结果:分离出呈类杯状、粒径分布于20-200 nm、CD63/TSG101富集、Calnexin阴性、CD235a阳性、CD41阴性的RBC⁃Exo。储存中晚期(>14 d)LDRCS中RBC⁃Exo粒径分布无显著差异,但显著大于储存早期(储存≤14 d)的RBC⁃Exo。与对照组相比,RBC⁃Exo可以明显促进血液肿瘤细胞HBL1、U2932和Jurkat的增殖。与RBC⁃Exo共培养3 d的HBL1、U2932和Jurkat细胞中周期相关蛋白P21的表达较对照组明显下调,而抗凋亡蛋白BCL⁃2并无明显变化。结论:储存中晚期的LDRCS中RBC⁃Exo形态与储存早期存在差异。RBC⁃Exo可以促进血液肿瘤细胞的增殖,其机制可能是通过调节周期相关蛋白P21的表达。

关键词：去白细胞悬浮红细胞外泌体肿瘤细胞增殖