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TAL效应子介导基因组DNA的靶向修饰

中国生物工程杂志 2014年第8期34卷 74-80页

作者：庄军吴祖建福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室福州350002

植物黄单胞菌病原细菌分泌的TAL效应子(Transcription activator-like effector)可结合特异的双链DNA。TAL是由序列几乎相同的多个DNA结合域的重复串联而构成的,每个DNA结合模块的重复可变双残基特异识别一个DNA碱基。TAL和核酸修饰相... 详细信息

植物黄单胞菌病原细菌分泌的TAL效应子(Transcription activator-like effector)可结合特异的双链DNA。TAL是由序列几乎相同的多个DNA结合域的重复串联而构成的,每个DNA结合模块的重复可变双残基特异识别一个DNA碱基。TAL和核酸修饰相关功能域融合而成的定制TAL效应子(dTALE)能特定靶向修饰基因组DNA,在新近遗传工程中扮演重要角色。目前,TAL效应子与核酸酶FokI融合成的TALEN核酸酶(TALEN)能够靶向识别基因组位点并由核酸酶切割双链DNA造成双链断裂,通过同源重组(HR)或非同源末端连接(NHEJ)进行双链修复从而引发特定位点的基因突变。TALENs在多个模式生物中都具有较高的靶向有效性,而且TAL效应子DNA结合域可进行模块化设计,能够发展成高通量的基因靶向修饰和调控的平台,具有广阔的实际应用前景。对TAL效应子特异识别DNA的结构分析、TALENs的设计策略以及TAL效应子在基因组靶向修饰中的应用与展望等方面进行了概述。

关键词： TAL效应子 TAL效应子核酸酶重复可变双残基靶向突变

木尔坦棉花曲叶病毒编码4个蛋白的抗血清制备

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福建农业学报 2021年第11期36卷 1359-1364页

作者：林丹林文忠尚鹏祥林文武丁新伦吴祖建张洁福建农林大学植物病毒研究所/福建农林大学闽台作物有害生物生态防控国家重点实验室福建福州350002

【目的】对入侵我国的木尔坦棉花曲叶病毒(Cotton leaf curl Multan virus,CLCuMuV)编码的V1、V2、C1和C4蛋白抗血清进行制备,为CLCuMuV的检验检疫及其致病机制的研究奠定基础。【方法】利用原核表达技术对V1、V2、C1和C4蛋白进行IPTG... 详细信息

【目的】对入侵我国的木尔坦棉花曲叶病毒(Cotton leaf curl Multan virus,CLCuMuV)编码的V1、V2、C1和C4蛋白抗血清进行制备,为CLCuMuV的检验检疫及其致病机制的研究奠定基础。【方法】利用原核表达技术对V1、V2、C1和C4蛋白进行IPTG诱导表达,western blot分析表达蛋白的特异性后,V1、V2、C1蛋白免疫新西兰大白兔,C4蛋白免疫小白鼠制备抗血清,利用western blot对抗血清的特异性进行分析。【结果】通过PCR分别扩增V1(768 bp)、V2(363 bp)、C1(1089 bp)和C4(300 bp)目的基因片段,分别连接于原核表达载体后,通过SDS-PAGE和western blot分析分别在34、16、44、13 kDa处存在与预期蛋白大小一致的条带,表明该4种蛋白均成功表达。Western blot分析发现获得的4种抗血清均具有较高的特异性。【结论】成功制备了CLCuMuV V1、V2、C1和C4蛋白的抗血清,可用于后续建立CLCuMuV的检疫方法及研究其致病机制。

关键词：棉花木尔坦棉花曲叶病毒原核表达免疫印迹抗血清

抑制南方水稻黑条矮缩病毒非结构蛋白P5-1的表达阻碍病毒在昆虫体内的增殖

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植物保护学报 2015年第3期42卷 418-424页

作者：曹金强王针针陈红燕毛倩卓贾东升魏太云福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室福州350002

为明确南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)编码的非结构蛋白P5-1参于SRBSDV在介体白背飞虱体内侵染过程中的作用机制,通过原核表达蛋白制备SRBSDV编码的非结构蛋白P5-1的多克隆抗体,并应用Western ... 详细信息

为明确南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)编码的非结构蛋白P5-1参于SRBSDV在介体白背飞虱体内侵染过程中的作用机制,通过原核表达蛋白制备SRBSDV编码的非结构蛋白P5-1的多克隆抗体,并应用Western blot和免疫荧光标记法检测抗体的特异性,以注射法将来源于P5-1基因的dsRNA(ds P5-1)注入获毒1 d的白背飞虱体内,5 d后通过免疫荧光标记法检测ds P5-1对SRBSDV在白背飞虱体内增殖的影响,同时以注射来源于GFP基因的dsRNA(ds GFP)为对照。结果显示,Western blot和免疫荧光标记分别检测到SRBSDV侵染水稻和白背飞虱表达的P5-1蛋白,表明所制备的P5-1抗体具有特异性。ds GFP处理的对照组白背飞虱带毒率高达81%,而ds P5-1处理的白背飞虱带毒率仅为21%,且P5-1蛋白的表达和SRBSDV在昆虫体内的增殖均受到抑制。表明P5-1蛋白是病毒在昆虫体内增殖的关键因子,可作为阻断病毒在昆虫体内增殖的理想靶标。

关键词：南方水稻黑条矮缩病毒 P5-1蛋白抗体制备 RNA干扰增殖

水稻矮缩病毒对3种内源激素含量及代谢相关基因转录水平的影响

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植物病理学报 2010年第2期40卷 151-158页

作者：吴建国王萍谢荔岩林奇英吴祖建谢联辉福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室福州350002

本文以抗病品种宜香2292(Oryzas ativa L. ssp. indica cv. Yixiang 2292)为材料,采用高效液相色谱技术(HPLC)和Real-time PCR技术研究了水稻矮缩病毒(Rice dwarfvirus,RDV)胁迫下水稻内源赤霉素(GA3)、生长素(IAA)和脱落酸(ABA)的动态变化。结果表明,受RDV侵染后,病株体内GA3含量显著低于健株,在显症后的第1d和第10d最为明显,分别较健株低6.28和5.92倍;IAA含量呈现波动变化,但病株体内的IAA含量始终较健株低,在显症后的10d最为明显,比健株低3.58倍;与GA3和IAA相反,病株体内ABA的含量始终高于健株,显症后的第1d和第13d最为明显,分别较健株高2.29和2.84倍。Real-time PCR定量检测了植物内源激素相关基因mRNA的表达,结果显示,GA3代谢相关的氧化还原酶基因表现为下调,而IAA和ABA代谢相关的Cullin-1和P-glycoprotein1基因表现出不同程度的上调。以上结果表明:水稻矮缩病的症状表现可能与病株体内的植物内源激素失调有关。

关键词：水稻矮缩病毒植物内源激素赤霉素生长素脱落酸

烟草花叶病毒及其弱毒株基因组的cDNA克隆和序列分析

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植物病理学报 2003年第4期33卷 296-301页

作者：邵碧英吴祖建林奇英谢联辉福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室福州350002

利用RT PCR技术获得了覆盖整个烟草花叶病毒 (Tobaccomosaicvirus,TMV)强毒株TMV W、2个弱毒株TMV 0 17和TMV 15 2基因组 (RNA)的cDNA克隆。序列测定结果表明 ,强、弱毒株全长均为 6 395个核苷酸 ,具有 4个开放阅读框 (openreadingframe... 详细信息

利用RT PCR技术获得了覆盖整个烟草花叶病毒 (Tobaccomosaicvirus,TMV)强毒株TMV W、2个弱毒株TMV 0 17和TMV 15 2基因组 (RNA)的cDNA克隆。序列测定结果表明 ,强、弱毒株全长均为 6 395个核苷酸 ,具有 4个开放阅读框 (openreadingframe,ORF) ,分别编码 12 6、183、30、17.6kDa蛋白。TMV W和普通株系TMV U1的基因组同源率达到 98% ,TMV W为普通株系。TMV 0 17、TMV 15 2基因组发生变异的部位主要在 12 6 /183kDaORF中。和TMV W相比 ,TMV 0 17仅在 12 6kDa蛋白ORF中有 18个碱基发生变异 ,其中 10个碱基引起氨基酸的改变 ;而TMV 15 2在 183kDaORF中有 16个碱基发生变异 ,其中有 11个引起氨基酸的改变。TMV 0 17和TMV 15 2有 11个共同变异的碱基 ,其中有 8个引起氨基酸的变异。TMV 15 2在 30kDaORF中有 1个碱基发生变异而引起氨基酸的改变。其它区域 ,三者完全相同。

关键词：烟草花叶病毒弱毒株基因组 cDNA克隆序列分析同源率氨基酸

水稻齿叶矮缩病毒非结构蛋白Pns7在水稻原生质体内的表达动态

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植物病理学报 2017年第1期47卷 61-67页

作者：张洁陈晓敏宛柏杰吴锦鸿林文武吴祖建福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室福州350002

水稻齿叶矮缩病毒(Rice ragged stunt virus,RRSV)属于呼肠孤病毒科(Reoviridae)水稻病毒属(Oryzavirus)。该病毒编码的非结构蛋白Pns7在昆虫细胞中可形成伸出细胞膜的纤维丝状结构。本研究利用水稻原生质体培养体系,对Pns7蛋白在水稻... 详细信息

水稻齿叶矮缩病毒(Rice ragged stunt virus,RRSV)属于呼肠孤病毒科(Reoviridae)水稻病毒属(Oryzavirus)。该病毒编码的非结构蛋白Pns7在昆虫细胞中可形成伸出细胞膜的纤维丝状结构。本研究利用水稻原生质体培养体系,对Pns7蛋白在水稻原生质体内的复制与表达情况进行了分析。本研究首先构建了Pns7蛋白的原核表达载体,通过IPTG诱导获得大量Pns7蛋白,免疫兔子获得抗血清。Western blot证明抗血清具有特异性,间接ELISA测得其效价为1∶2 500。利用实时荧光定量PCR技术,对病毒侵染水稻原生质体后的Pns7 RNA含量进行检测,结果表明:Pns7 RNA在8 h时开始积累,24h左右达到最大值,32 h后表达量维持在一个平台期;同时,以制备的抗血清为探针,通过Western blot检测到Pns7蛋白在病毒侵染原生质体后16 h开始表达,32 h左右达到最大值,60 h后开始下降,但仍保持在较高水平。

关键词：水稻齿叶矮缩病毒水稻原生质体 Pns7 RNA Pns7蛋白

戴云山国家级自然保护区访花昆虫DNA条形码数据集

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生物多样性 2023年第8期31卷 125-130页

作者：罗小燕李强黄晓磊闽台作物有害生物生态防控国家重点实验室福建农林大学植物保护学院福州350002

访花和传粉昆虫对于维持生态系统功能具有重要作用,但我国相关昆虫类群的本底数据非常缺乏。作为基于特定基因序列的物种划分方法,DNA条形码在标本鉴定、新物种发现、生物多样性保护、种群遗传和进化等研究领域具有重要的应用价值。本... 详细信息

访花和传粉昆虫对于维持生态系统功能具有重要作用,但我国相关昆虫类群的本底数据非常缺乏。作为基于特定基因序列的物种划分方法,DNA条形码在标本鉴定、新物种发现、生物多样性保护、种群遗传和进化等研究领域具有重要的应用价值。本文报道了福建戴云山国家级自然保护区双翅目、膜翅目和鞘翅目3个类群访花昆虫的815条线粒体COI条形码数据,并详细提供了所获样品的海拔分布信息。该数据集可为地区性昆虫多样性的DNA条形码数据库构建、隐存种发现、海拔梯度物种遗传多样性和生物多样性保护等方面研究提供帮助。

关键词：戴云山海拔梯度马氏网陷阱 DNA条形码

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三种蚜虫的线粒体基因组数据

生物多样性 2022年第7期30卷 233-238页

作者：卢聪聪刘倩黄晓磊闽台作物有害生物生态防控国家重点实验室福建农林大学植物保护学院福州350002

完整的线粒体基因组已被广泛应用于分子进化、基因组学、系统发育等方面的研究。蚜虫是一类重要的农林业害虫,但目前公开报道的蚜虫完整线粒体基因组非常有限,因此获得更多的基因组数据对相关研究具有重要价值。本文报道了榕毛管蚜(Gree... 详细信息

完整的线粒体基因组已被广泛应用于分子进化、基因组学、系统发育等方面的研究。蚜虫是一类重要的农林业害虫,但目前公开报道的蚜虫完整线粒体基因组非常有限,因此获得更多的基因组数据对相关研究具有重要价值。本文报道了榕毛管蚜(Greenidea ficicola)、橘二叉蚜(Aphis aurantia)和油杉纩蚜(Mindarus keteleerifoliae)3种蚜虫的完整线粒体基因组的序列、详细注释信息、基因结构图、密码子使用情况等。该数据集可为昆虫系统发育关系、种群分化格局、害虫防治等方面的工作提供帮助。

关键词：蚜虫线粒体基因组基因注释基因组数据

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植物病原物的群体遗传学

遗传 2012年第2期34卷 157-166页

作者：祝雯詹家绥福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室福州350002 福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室福州350002

品种单一化、生产密集型和一年多茬的现代农业特点导致病原物呈现出进化速度加快、致病力增强及流行风险增大趋势。深入研究病原物群体遗传学对认识病害的流行、有效选育和使用抗性品种乃至控制病害具有重要意义。文章阐述了植物病原物... 详细信息

品种单一化、生产密集型和一年多茬的现代农业特点导致病原物呈现出进化速度加快、致病力增强及流行风险增大趋势。深入研究病原物群体遗传学对认识病害的流行、有效选育和使用抗性品种乃至控制病害具有重要意义。文章阐述了植物病原物群体遗传学的研究目标和内容、突变、基因迁移、基因重组、随机遗传漂变和自然选择5大遗传机制在植物病原物进化过程中的作用,以及目前植物病原物群体遗传学研究的现状。

关键词：植物病原物群体遗传进化机制