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基于网络药理学、分子对接与动物实验探究百合地黄汤治疗阿尔茨海默病的作用机制

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中国现代应用药学 2024年第8期41卷 1027-1037页

作者：贾铷周小如陈燕张淑玲赖兆铠王玉露福建中医药大学福州350122

目的基于网络药理学、分子对接与动物实验探究百合地黄汤治疗阿尔茨海默病的作用机制。方法利用TCMSP数据库预测百合地黄汤的活性成分及靶点;在GeneCards、OMIM、DRUGBANK等数据库检索阿尔茨海默病靶点,利用Cytoscape 3.8.0建立交集... 详细信息

目的基于网络药理学、分子对接与动物实验探究百合地黄汤治疗阿尔茨海默病的作用机制。方法利用TCMSP数据库预测百合地黄汤的活性成分及靶点;在GeneCards、OMIM、DRUGBANK等数据库检索阿尔茨海默病靶点,利用Cytoscape 3.8.0建立交集靶点网络,GO富集及KEGG通路分析在Metascape数据库进行;运用AutoDock vina软件进行分子对接,并使用PyMOL等软件进行可视化分析;将小鼠分为空白组、模型组、咯利普兰组和百合地黄汤低、中、高剂量组,给药14 d后各组小鼠进行神经行为学评分,检测脑组织内相关蛋白表达,使用ELISA和Western blotting检测关键基因c AMP、PKA、p-CREB、BDNF的蛋白表达。最后通过呕吐实验观察百合地黄汤的不良反应。结果获得百合地黄汤活性成分13种,作用于阿尔茨海默病靶点39个,与PRKACA关系密切。动物实验结果表明,与正常组比较,模型组小鼠对新物体的辨认率明显下降,新位置的物体辨认率有下降趋势,Y迷宫中自主交替的反应率明显下降,Morris水迷宫中逃避潜伏期明显延长、平台所在象限停留时间和经过平台次数显著减少,且脑中cAMP、PKA、pCREB、BDNF蛋白表达下降,而百合地黄汤组与咯利普兰组能够逆转上述行为学以及蛋白指标的变化。在呕吐实验中,咯利普兰组麻醉苏醒时间显著延长,百合地黄汤组无明显影响。结论百合地黄汤治疗阿尔茨海默病的作用机制可能与其影响c AMP-PKA以及调控cAMP-PKA-CREB-BDNF信号通路有关,且不良反应较咯利普兰轻。

关键词：百合地黄汤东莨菪碱阿尔茨海默病行为学试验网络药理学

基于代谢组学探讨柴芍六君汤对肝郁脾虚型慢性萎缩性胃炎大鼠的中枢调节作用

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中国实验方剂学杂志 2024年第2期30卷 148-155页

作者：洪银洁涂文玲朱景茹罗文谦黄凯悦甘慧娟福建中医药大学中医学院福州350122 浙江中医药大学基础医学院杭州310053 福建中医药大学附属漳州中医院福建漳州363000

目的:基于超高效液相色谱质谱联用法(UPLC-MS)及非靶向代谢组学技术探讨柴芍六君汤对肝郁脾虚型慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠的中枢调节作用,并寻找大脑皮质、下丘脑与胃组织代谢状态的关联性。方法:将28只Wistar大鼠随机分为空白组8只和造... 详细信息

目的:基于超高效液相色谱质谱联用法(UPLC-MS)及非靶向代谢组学技术探讨柴芍六君汤对肝郁脾虚型慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠的中枢调节作用,并寻找大脑皮质、下丘脑与胃组织代谢状态的关联性。方法:将28只Wistar大鼠随机分为空白组8只和造模组20只,采用化学诱导+饥饱失常+慢性束缚+夹尾刺激的方法建立肝郁脾虚型CAG大鼠模型,成模大鼠随机分为模型组和柴芍六君汤组,每组8只,柴芍六君汤组大鼠灌胃给予5.1 g·kg^(-1)的柴芍六君汤中药煎液,空白组和模型组大鼠予等体积灭菌饮用水灌胃,持续4周。观察对比各组大鼠宏观表征、行为学指标和胃黏膜组织病理学改变,采用UPLCMS非靶向代谢组学技术探讨柴芍六君汤对肝郁脾虚型CAG大鼠大脑皮质、下丘脑和胃组织代谢物表达的影响,并用Pearson相关系数法分析不同组织代谢物之间的关联。结果:与模型组比较,柴芍六君汤组大鼠毛发色泽、精神状态和大便性状等宏观表征有所改善,旷场实验的跨格和直立次数显著增加,强迫游泳静止时间显著减少(P<0.01),胃黏膜萎缩程度减轻。各组大鼠大脑皮质的代谢数据共鉴定出3个共同的潜在生物标志物,但未富集到通路;在下丘脑中鉴定出26个共同的潜在生物标志物,涉及到的关键代谢通路主要富集于嘌呤代谢、甘油磷脂代谢、D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢;在胃中鉴定出17个共同的潜在生物标志物,涉及到的关键代谢通路主要富集于硫胺素代谢,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸生物合成,牛磺酸和亚牛磺酸代谢。不同组织的代谢物相关性分析筛选到多个氨基酸及其衍生物介导大鼠大脑皮质、下丘脑与胃之间的代谢联系。结论:肝郁脾虚型CAG大鼠大脑皮质、下丘脑和胃的代谢紊乱各有特征,主要表现为甘油磷脂类、脂肪酸类和胆汁酸类代谢物含量变化,并且柴芍六君汤可能通过纠正氨基酸代谢紊乱从而发挥对肝郁脾虚型CAG大鼠的中枢调节作用。

关键词：慢性萎缩性胃炎柴芍六君汤代谢组学中枢神经系统肝郁脾虚证超高效液相色谱质谱联用法(UPLC-MS) 氨基酸代谢

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基于病-证-症结合视域对方药配伍的思考

北京中医药大学学报 2024年

作者：王志斌唐文童康黄玮杰陈斌斌乔世杰韩海瑞李灿东王洋福建中医药大学中医证研究基地福建中医药大学附属人民医院

在当前疾病谱复杂多变的背景下，传统中医的方药配伍已难以全面满足临床诊疗的需要。故本文基于病-证-症结合的诊疗模式，结合西医学的发展成果，对传统方剂君臣佐使的组方原则进行探索性思考。本文提出以辨证用药为君、辨病用药为臣、... 详细信息

在当前疾病谱复杂多变的背景下，传统中医的方药配伍已难以全面满足临床诊疗的需要。故本文基于病-证-症结合的诊疗模式，结合西医学的发展成果，对传统方剂君臣佐使的组方原则进行探索性思考。本文提出以辨证用药为君、辨病用药为臣、对症用药为佐及调和用药为使的组方原则，从而形成以辨证论治、辨病论治、对症治疗与减毒增效为核心环节的治疗方案。本文致力于解决当前疾病谱增多、证候类型与症候群复杂化等临床问题，为中医临床组方用药提供新的思路，以期提高临床疗效。

关键词：病-证-症结合君臣佐使组方原则

构建电化学适配体传感器快速检测中药材中的赭曲霉毒素A

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分析试验室 2024年第1期43卷 18-23页

作者：范申黄榕芬毛伟伟张红艳福建中医药大学药学院福州350122

利用壳聚糖(CS)、还原氧化石墨烯(rGO)与氮掺杂多壁碳纳米管(N-MWCNTs)合成N-MWCNTs-rGO-CS复合材料,制备修饰电极,结合赭曲霉毒素A(OTA)的特异性适配体,构建高灵敏度电化学生物传感器,并用于中药中OTA的含量测定。在最优条件下,峰电流... 详细信息

利用壳聚糖(CS)、还原氧化石墨烯(rGO)与氮掺杂多壁碳纳米管(N-MWCNTs)合成N-MWCNTs-rGO-CS复合材料,制备修饰电极,结合赭曲霉毒素A(OTA)的特异性适配体,构建高灵敏度电化学生物传感器,并用于中药中OTA的含量测定。在最优条件下,峰电流变化值与OTA浓度对数值的线性响应范围为2.3 pmol/L~2.3 nmol/L,检测限为0.53 pmol/L。应用该方法对中药饮片中OTA的含量进行加标回收实验,回收率在97.6%~103.2%之间。该方法有望用于中药材中OTA污染的快速检测。

关键词：赭曲霉毒素A 电化学适配体传感快速检测中药材

推拿“委中”穴对坐骨神经慢性压迫性损伤模型大鼠海马CA3区突触可塑性的影响

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中医杂志 2024年

作者：黄红叶陈水金陈乐春张幻真蒋晶晶江煜陈进城林志刚福建中医药大学附属康复医院

目的从海马突触可塑性角度探讨推拿委中穴缓解坐骨神经痛的可能作用机制。方法 60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、推拿组、MK-801组、MK-801+推拿组，每组12只。所有大鼠侧脑室置管术后，除假手术组外其余各组大鼠制备右侧坐骨神... 详细信息

目的从海马突触可塑性角度探讨推拿委中穴缓解坐骨神经痛的可能作用机制。方法 60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、推拿组、MK-801组、MK-801+推拿组，每组12只。所有大鼠侧脑室置管术后，除假手术组外其余各组大鼠制备右侧坐骨神经慢性压迫性损伤大鼠模型。在造模后第4天开始推拿组大鼠推拿“委中”穴干预，每日1次持续10 min，共干预14天；MK-801组在造模第4天大鼠开始侧脑室注射0.25μg/μl的N-甲基-D天冬氨酸受体2B (NR2B)阻断剂地佐环平（MK-801） 0.5μl，每日1次，共持续14天。MK-801+推拿组大鼠在侧脑室注射MK-801 30 min后进行推拿干预，时间方法同上；模型组和假手术组大鼠不进行任何干预。大鼠造模前1天（基础值）及造模第4、10、14、18天进行自发痛行为评分和机械足反射阈值（PWTs）检测，第19天各组大鼠脑组织取材后，使用尼氏染色观察海马CA3区尼氏阳性细胞数量与形态，透射电镜观察海马CA3区突触数目、突触间隙、突触后致密物厚度、活性带长度与突触界面曲率，免疫荧光染色和免疫印迹法检测海马CA3区突触相关蛋白NR2B、突触后致密物95(PSD95)的表达。结果与假手术组同时间比较，模型组造模后第4、10、14、18天时自发性疼痛评分显著增加，PWTs降低（P<0.05）；与模型组比较，推拿组大鼠在造模第10、14、18天自发性疼痛评分显著下降，在造模第14、18天PWTs显著升高（P<0.05）；与推拿组比较，MK-801+推拿组自发性疼痛评分在造模第10、14、18天升高，在造模第14、18天PWTs降低（P<0.05）。与假手术组比较，模型组大鼠海马CA3区神经元排列紊乱，尼氏阳性细胞数量、突触数目、突触后致密度厚度、活性带长度、突触界面曲率减小，突触间隙变宽，海马CA3区NR2B、PSD95免疫荧光阳性表达及免疫印迹蛋白表达减少（P<0.05）。与模型组比较，推拿组大鼠海马CA3区神经细胞排列密集，尼氏阳性细胞数量、突触数目、突触后致密物厚度、活性带长度均增加，突触间隙明显变窄，海马CA3区NR2B、PSD95免疫荧光阳性表达及免疫印迹蛋白表达较模型组增加（P<0.05）。与推拿组比较，MK-801+推拿组海马CA3区神经元形态破坏严重，尼氏阳性细胞数量、突触数目、突触后致密物厚度、活性带长度、突触界面曲率减小，突触间隙变宽，NR2B、PSD95免疫荧光阳性表达和免疫印迹蛋白表达降低（P<0.05）。结论推拿委中穴具有显著的镇痛作用，显著增加海马CA3区NR2B和PSD95蛋白表达水平从而调控海马突触可塑性是其发挥镇痛作用的可能作用机制之一。

关键词：坐骨神经痛推拿委中穴海马突触可塑性 N-甲基-D天冬氨酸受体2B

促卵合剂调控AMPK/mTOR/HIF-1/VEGF通路改善卵泡发育不良大鼠氧化应激及凋亡的作用机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第16期 76-84页

作者：胡莹莹丁珊珊林雪娟卓祖顺张梦婷朱龙李红陈莹魏佳吕绍光福建中医药大学福建中医药大学中医证研究基地福建省立医院

目的：探讨促卵合剂通过调控腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/缺氧诱导因子-1/血管内皮生长因子（AMPK/m TOR/HIF-1/VEGF）通路改善卵泡发育不良（FM）大鼠氧化应激及凋亡的作用机制。方法：将48只雌性SD大鼠随机分为正常组... 详细信息

目的：探讨促卵合剂通过调控腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/缺氧诱导因子-1/血管内皮生长因子（AMPK/m TOR/HIF-1/VEGF）通路改善卵泡发育不良（FM）大鼠氧化应激及凋亡的作用机制。方法：将48只雌性SD大鼠随机分为正常组8只，造模组40只，造模组大鼠连续灌胃雷公藤多苷混悬液(75 mg·kg-1)30 d进行造模，造模后随机分为模型组、克罗米芬组(4.5 mg·kg-1)、促卵合剂低、中、高剂量组(8.1、16.2、32.4 g·kg-1)，每组8只。相应剂量药物给药，正常组及模型组灌胃等体积灭菌水，连续干预14 d。巴氏染色检测各组大鼠动情周期变化；苏木素-伊红（HE）染色观察卵巢组织病理学及卵泡计数；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清促卵泡激素（FSH）、黄体生成素（LH）及雌二醇（E2）含量；化学荧光法检测卵巢组织中活性氧（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）水平；原位末端标记法（TUNEL）检测卵巢颗粒细胞凋亡率；免疫组化法检测卵巢组织B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）、Bcl-2蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测卵巢组织AMPK/m TOR/HIF-1/VEGF m RNA及蛋白表达。结果：与正常组比较，模型组大鼠动情周期紊乱，次级、成熟卵泡减少，闭锁卵泡增多，血清FSH及LH含量，卵巢组织ROS含量、Bax表达、卵巢颗粒细胞凋亡率、AMPK m RNA及蛋白表达均显著升高（P<0.01）,E2含量、SOD活性、Bcl-2表达、m TOR、HIF-1、VEGF m RNA及蛋白表达均显著降低（P<0.01）；与模型组比较，克罗米芬组及促卵合剂高、中剂量组次级卵泡和成熟卵泡增加，闭锁卵泡显著减少，血清FSH及LH含量、卵巢组织ROS含量、Bax表达、细胞凋亡、AMPK m RNA及蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01）,E2含量、SOD活性、Bcl-2、m TOR、HIF-1、VEGF m RNA及蛋白表达均升高（P<0.05,P<0.01）。结论：促卵合剂可能通过调控AMPK/m TOR/HIF-1/VEGF通路来抑制氧化应激减少颗粒细胞凋亡，促进卵泡正常发育成熟，减少卵泡闭锁，保护卵巢功能，进而对FM发挥治疗作用。

关键词：卵泡发育不良促卵合剂氧化应激凋亡腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/缺氧诱导因子-1/血管内皮生长因子(AMPK/mTOR/HIF-1/VEGF)通路

糖尿病前期痰证患者肠道菌群及血清代谢组学分析

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：王志汕黄亮亮张玮陈明燚肖绍坚陈淑娇福建中医药大学附属第三人民医院福建中医药大学中医学院福建中医药大学附属人民医院

目的：探讨糖尿病前期痰证患者的肠道菌群及血清代谢产物的差异性表达与潜在生物标志物。方法：共纳入34例糖尿病前期痰证患者为痰证组，并选取体检的37例健康人为正常组，留取2组研究对象的的血清和粪便标本，采用液质联用(LC-MS)非靶... 详细信息

目的：探讨糖尿病前期痰证患者的肠道菌群及血清代谢产物的差异性表达与潜在生物标志物。方法：共纳入34例糖尿病前期痰证患者为痰证组，并选取体检的37例健康人为正常组，留取2组研究对象的的血清和粪便标本，采用液质联用(LC-MS)非靶向代谢组学及16S rRNA高通量测序技术，来检测两者的血清代谢物和差异肠道菌群，探讨糖尿病前期痰证与血清代谢物、肠道菌群之间的关联性。结果：痰证组证素分布情况中，病性证素按照频数和占比前5位兼杂证素为湿（73.53%）、气滞（58.82%）、阴虚（50.00%）、血瘀（41.18%）、热（35.29%）；病位证素按照频数和占比前3位主要病位证素为脾（100.00%）、肝（41.18%）、肾（23.53%）。16S rRNA高通量测序结果显示：两组有44种差异肠道菌群，在目属上，双歧杆菌、韦荣氏球菌、罗氏菌两组间差异具有统计学意义（P<0.05）。两组在肠道菌群多样性、丰富度和均匀度较正常组减少，但差异无统计学意义，群落结构上两组亦差异无统计学意义。血清代谢组学结果显示，两组共同拥有13种差异代谢物，主要富集在氨基酸代谢、胆汁分泌和胆汁酸生物合成、脂质代谢（P<0.05）。将差异代谢物、肠道菌群和证素进行相关性分析，①赖氨酸和脾、阴虚、血瘀呈正相关；牛磺胆酸与肝、肾、血瘀、湿呈正相关，牛磺胆酸与阴虚、热呈显著正相关；牛磺鹅去氧胆酸与肝、湿呈正相关；花生四烯酸与湿呈负相关；葡萄糖与脾、血瘀呈正相关。②梭杆菌属和脾、肾、阴虚、气滞呈正相关；罗氏菌属与脾呈负相关；萨特氏菌属与湿呈负相关；拟杆菌属与脾、肾呈负相关；双歧杆菌与湿呈负相关。③双歧杆菌与甘氨酸、苏氨酸、赖氨酸、鹅去氧胆酸呈显著性正相关，与胆酸呈显著性负相关，与牛磺鹅去氧胆酸、丙酮酸呈正相关；梭杆菌属与甘氨酸呈显著性正相关，与苏氨酸、赖氨酸呈正相关；毛螺菌属与甘氨酸、苏氨酸、牛磺鹅去氧胆酸、丙酮酸呈负相关；赖氨酸还与粪杆菌属、凸腹真杆菌呈负相关，与巨单胞菌属呈正相关；鹅去氧胆酸与韦荣氏球菌属，牛磺胆酸、甘氨胆汁酸与弯曲杆菌属，牛磺鹅去氧胆酸与韦荣氏球菌属，葡糖糖与罗氏菌属、凸腹真杆菌呈正相关；丙酮酸和埃希氏-志贺氏菌属，牛磺鹅去氧胆酸与普雷沃氏菌属呈负相关。结论：糖尿病前期痰证患者与健康者之间存在肠道菌群和血清代谢物差异，肠道菌群及代谢产物在糖尿病前期这一疾病阶段已然发生紊乱，双歧杆菌、梭杆菌属、毛螺菌属、甘氨酸、苏氨酸、赖氨酸可能是探索糖尿病前期痰证发展的突破口。

关键词：糖尿病前期痰证肠道菌群代谢组学

基于转录-代谢组学联合分析红茶对胃生物节律的影响

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食品与发酵工业 2024年

作者：李加鹏丁启航和书宇沈志清福建中医药大学体育部福建中医药大学中西医结合研究院福建中医药大学附属人民医院

该研究主要探讨红茶干预小鼠胃组织和胃内容物代谢的差异变化，分析其对饱、空腹小鼠胃生物节律的影响。采用红茶对6周龄C57BL/6饱、空腹小鼠分别进行生理盐水和红茶提取物灌胃（450 mg/kg），30 min后取小鼠胃组织和胃内容物进行RNA测... 详细信息

该研究主要探讨红茶干预小鼠胃组织和胃内容物代谢的差异变化，分析其对饱、空腹小鼠胃生物节律的影响。采用红茶对6周龄C57BL/6饱、空腹小鼠分别进行生理盐水和红茶提取物灌胃（450 mg/kg），30 min后取小鼠胃组织和胃内容物进行RNA测序和代谢物检测，检测红茶干预不同状态下小鼠胃组织在转录组和代谢组层面的差异变化。结果发现，饱腹组红茶干预后，有907基因表达上调，810基因表达下调；空腹组红茶干预后，有748基因表达上调，864基因表达下调；对两组差异基因分别进行KEGG通路富集分析提示：生物节律、脂代谢、糖代谢等相关通路都存在显著差异，对生物节律通路相关核心基因进行检测发现饱腹组或空腹组红茶干预后生物钟基因Nr1d2、Per2、Per3表达显著上调，Arntl表达显著下调；胃内容物代谢：红茶干预后，饱腹组小鼠中的上调代谢物有1 355种，下调代谢物有1 393种，空腹组小鼠胃中的上调代谢物1 324种，下调代谢物1 378种，差异代谢物均被显著富集在氨基酸生物合成途径、嘌呤途径等。上述结果表明，红茶干预可能通过调控氨基酸生物合成途径影响小鼠的生物节律，进而调控小鼠胃节律运动、代谢等生物进程，最终起到胃助消化等功能的作用。

关键词：红茶 RNA测序胃功能代谢生物节律

石斛合剂含药血清对高糖诱导小鼠足细胞损伤的保护作用

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中国实验方剂学杂志 2024年第5期30卷 65-71页

作者：陈勇林晓晖张捷平郑燕芳庄舒婷余文珍福建中医药大学中西医结合学院福州350122 福建中医药大学药学院福州350122

目的:探讨石斛合剂含药血清对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的影响及作用机制。方法:体外培养小鼠肾小球足细胞(MPC5),筛选高糖造模浓度和时间及石斛合剂含药血清最佳给药浓度;将细胞分为正常组(5.5 mmol·L^(-1)葡萄糖+10%空白血清)、模型... 详细信息

目的:探讨石斛合剂含药血清对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的影响及作用机制。方法:体外培养小鼠肾小球足细胞(MPC5),筛选高糖造模浓度和时间及石斛合剂含药血清最佳给药浓度;将细胞分为正常组(5.5 mmol·L^(-1)葡萄糖+10%空白血清)、模型组(30 mmol·L^(-1)葡萄糖+10%空白血清)、石斛合剂含药血清组(30 mmol·L^(-1)葡萄糖+10%石斛合剂含药血清),铁死亡抑制剂(Fer-1)组(30 mmol·L^(-1)葡萄糖+10%空白血清+1μmol·L^(-1)Fer-1)。采用试剂盒检测细胞中Fe^(2+)、乳酸脱氢酶(LDH)水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞谷胱甘肽(GSH)、过氧化脂质(LPO)含量;荧光探针检测活性氧(ROS)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测足细胞中肾母细胞瘤基因-1(WT-1)、结蛋白(Desmin)、长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)m RNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测足细胞中WT-1、Desmin、ACSL4和GPX4蛋白表达水平。结果:与空白组比较,30 mmol·L^(-1)高糖干预48 h可显著降低足细胞活力(P<0.01),10%石斛合剂含药血清改善高糖诱导的足细胞活力最为显著(P<0.01)。与正常组比较,模型组足细胞内Fe^(2+)、LDH、LPO、ROS水平及Desmin、ACSL4 m RNA和蛋白表达显著升高(P<0.01),GSH水平及WT-1、GPX4 m RNA和蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,石斛合剂含药血清组足细胞内Fe^(2+)、LDH、LPO、ROS水平及Desmin、ACSL4 m RNA和蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),GSH水平及WT-1、GPX4 m RNA和蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:石斛合剂含药血清对高糖诱导的足细胞损伤具有保护作用,与其抑制铁死亡有关。

关键词：石斛合剂糖尿病肾病足细胞铁死亡