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盐酸青藤碱诱导成纤维细胞凋亡对黏连性膝关节强直家兔的机制研究

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生物化学与生物物理进展 2023年

作者：侯新聚雷洪峰陈勇黎芙希孙敬宁刘佳铭马红梅广州中医药大学第四临床医学院广州中医药大学第二临床医学院南昌市洪都中医院

目的：观察盐酸青藤碱对膝关节黏连强直的家兔成纤维细胞增殖和相关基因mRNA表达的影响，并进一步尝试探讨其对抗膝关节黏连强直的作用机制。方法：以体外培养法培养成纤维细胞，并设对照组、盐酸青藤碱低中高浓度实验组。CCK-8法检测... 详细信息

目的：观察盐酸青藤碱对膝关节黏连强直的家兔成纤维细胞增殖和相关基因mRNA表达的影响，并进一步尝试探讨其对抗膝关节黏连强直的作用机制。方法：以体外培养法培养成纤维细胞，并设对照组、盐酸青藤碱低中高浓度实验组。CCK-8法检测成纤维细胞增殖的情况；Rt-PCR法检测经过盐酸青藤碱处理后，成纤维细胞相关基因mRNA表达的改变，用ELISA法检测药物的作用对血清中炎症因子等水平的影响，Western blot法检测相关蛋白的表达。结果：盐酸青藤碱能抑制成纤维细胞存活率，且随浓度升高存活率逐渐降低。盐酸青藤碱中各个组的效果均十分明显（P<0.05）。在相关基因mRNA的表达层面，与对照组比较，盐酸青藤碱各组炎症因子均显著下调（P< 0.05）；其凋亡蛋白的表达量显著上升、Bcl-2的mRNA表达量下降（P<0.05），而PI3K/mTOR/AKT3信号通路的mRNA表达量均下降（P<0.05）。在蛋白质的表达层面，与对照组相比较，中、高剂量盐酸青藤碱组血清中炎症因子IL-6、IL-8、IL-1β、TGF-β的水平均明显下调(P<0.05)，凋亡蛋白cleaved-PARP、cleaved caspase-3/7及Bax的表达量均上调，并且与给药剂量成正相关，而抗凋亡蛋白Bcl-2、PI3K/AKT3/mTOR信号通路的表达量则与给药剂量成负相关。盐酸青藤碱对家兔膝关节的成纤维细胞的存活率表现为显著的抑制作用，作用机制或与下调炎症因子IL-6、IL-8、IL-1β的表达，并促进凋亡蛋白cleaved-PARP、cleaved caspase-3/7及Bax的表达，抑制Bcl-2的表达，抑制其下游 PI3K/AKT3/mTOR 信号通路的基因表达有关。结论：盐酸青藤碱可抑制黏连性膝关节强直家兔膝关节的成纤维细胞的炎症反应和加速成纤维细胞的凋亡，或可通过该机制为改善和治疗黏连性膝关节强直的提供新的方法。

关键词：盐酸青藤碱黏连性膝关节强直家兔成纤维细胞

电针“百会”“神庭”对血管性痴呆大鼠认知障碍和线粒体能量代谢的影响

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针刺研究 2024年

作者：贾晓钰李惠菁饶婷游咏梅李涓龚一萌钟冬灵江一静福建中医药大学附属康复医院成都中医药大学养生康复学院成都中医药大学临床医学院

目的：探讨电针对血管性痴呆（VD）大鼠腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信号通路及线粒体能量代谢的影响，阐释其防治VD的可能机制。方法：雄性SD大鼠55只，随机分为假手术组、模型组、电针组、非经非穴组、电针+抑制剂组，每组11只，除假... 详细信息

目的：探讨电针对血管性痴呆（VD）大鼠腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信号通路及线粒体能量代谢的影响，阐释其防治VD的可能机制。方法：雄性SD大鼠55只，随机分为假手术组、模型组、电针组、非经非穴组、电针+抑制剂组，每组11只，除假手术组外，其余各组采用双侧颈总动脉永久性结扎法建立VD模型。电针组电针“百会”“神庭”，非经非穴组电针双侧胁下髂嵴上10 mm，疏密波2 Hz/15 Hz，30 min/次，1次/d，持续治疗7 d，电针+抑制剂组在电针干预前2 h腹腔注射AMPK抑制剂。干预后，Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力，ELISA法检测大鼠海马线粒体复合物含量，比色法检测海马三磷酸腺苷（ATP）含量，透射电镜观察海马线粒体超微结构，Western blot检测海马AMPKα1、脂肪酸转运酶（FAT）/分化簇36（CD36）、乙酰辅酶A羧化酶2（ACC2）蛋白表达。结果：与假手术组比较，模型组大鼠的逃避潜伏期与总路程增加，目标象限停留时间和穿越原平台次数减少（P<0.01），海马线粒体复合物Ⅰ～Ⅳ含量及ATP含量降低，线粒体结构重度破坏，海马AMPKα1、FAT/CD36蛋白表达降低、ACC2表达升高（P<0.01）。与模型组比较，电针组大鼠逃避潜伏期与总路程减少，目标象限停留时间和穿越原平台次数增加（P<0.01），海马线粒体复合物Ⅰ～Ⅳ含量及ATP含量升高（P<0.01），线粒体结构轻度异常，海马AMPKα1、FAT/CD36蛋白表达升高，ACC2表达降低（P<0.01），且改善程度优于非经非穴组与电针+抑制剂组（P<0.01，P<0.05）。相关性分析表明，线粒体复合物I与大鼠逃避潜伏期、总路程呈负相关，与穿越原平台次数、目标象限停留时间呈正相关（P<0.0001， P<0.05， P<0.01）。结论：电针可能通过激活AMPK，上调FAT/CD36同时下调ACC2蛋白的表达，促进线粒体脂肪酸代谢，改善线粒体形态与功能，从而改善VD大鼠认知功能障碍。

关键词：血管性痴呆电针线粒体能量代谢腺苷酸活化蛋白激酶

靳三针不同疗法治疗痰浊阻遏型高脂血症临床疗效观察

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针刺研究 2019年第12期44卷 916-921页

作者：李知行谢玉龙易玮张海华汤小荣刘霄潇许能贵广州中医药大学第四临床医学院广东深圳518033 广州中医药大学针灸康复临床医学院广州510405

目的:通过比较靳三针不同疗法治疗痰浊阻遏型高脂血症临床疗效的差异,为临床针灸治疗高脂血症的方案优化提供新思路和理论依据。方法:将痰浊阻遏型高脂血症患者随机分为宣教组、电针组、穴位埋线组,每组30例。宣教组予常规的健康教育;... 详细信息

目的:通过比较靳三针不同疗法治疗痰浊阻遏型高脂血症临床疗效的差异,为临床针灸治疗高脂血症的方案优化提供新思路和理论依据。方法:将痰浊阻遏型高脂血症患者随机分为宣教组、电针组、穴位埋线组,每组30例。宣教组予常规的健康教育;电针组在宣教组的基础上加电针治疗,30 min/次,每周2次;穴位埋线组在宣教组的基础上加穴位埋线,取穴同电针组,每周治疗1次。3组均连续治疗8周。于入组前及治疗后检测肥胖指标[体质量、腰围、体质量指数(BMI)]、血脂指标[总胆固醇(TC)、总甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)]、胰岛素抵抗指标[空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)]。结果:治疗后,电针组和穴位埋线组体质量、腰围、BMI及TC、TG、LDL-C含量和FINS、HOMA-IR均较治疗前明显下降(P0.05)。穴位埋线组总有效率为90.0%(27/30),电针组总有效率为83.3%(25/30),均明显优于宣教组的60.0%(18/30),差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论:宣教基础上加用靳三针电针或穴位埋线对高脂血症患者异常的脂质代谢及胰岛素抵抗均有良性调节作用,且穴位埋线疗法在降糖和改善LDL-C、HDL-C水平方面优于电针疗法。

关键词：靳三针高脂血症穴位埋线电针痰浊阻遏

经皮穴位电刺激对慢性疲劳综合征大鼠学习记忆能力的影响及其机制探讨

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针刺研究 2023年第4期48卷 317-324页

作者：钟晓玲童伯瑛杨一涵曾慧玲林驰靖媛何玲玲游世晶福建中医药大学针灸学院福州350122 福建中医药大学康复医学院福州350122

目的:观察经皮穴位电刺激(TEAS)对慢性疲劳综合征(CFS)大鼠海马CA1区组织形态学表现及细胞外调节蛋白激酶(ERK)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA与蛋白表达的影响,探讨TEAS改善CFS大鼠学习记忆能力的相... 详细信息

目的:观察经皮穴位电刺激(TEAS)对慢性疲劳综合征(CFS)大鼠海马CA1区组织形态学表现及细胞外调节蛋白激酶(ERK)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA与蛋白表达的影响,探讨TEAS改善CFS大鼠学习记忆能力的相关机制。方法:Wistar大鼠随机分为正常组、模型组和TEAS组,每组10只。采用睡眠剥夺结合负重游泳法制备CFS大鼠模型。TEAS组在双侧“足三里”“肾俞”连接韩氏穴位神经刺激仪,疏密波,每次20 min,每日1次,连续治疗6 d,休息1 d,共4周。采用实验大鼠一般情况半定量评分观察表评价大鼠一般状况,Morris水迷宫实验观察大鼠学习记忆能力,HE染色与透射电镜观察海马CA1区的组织形态与超微结构,实时荧光定量PCR法与Western blot法检测海马组织中ERK、CREB、BDNF mRNA与蛋白的相对表达量。结果:治疗后与正常组比较,模型组一般情况半定量评分升高(P<0.01),逃避潜伏期延长(P<0.05,P<0.01),穿越原平台次数减少(P<0.05),海马组织中ERK、CREB、BDNF mRNA和蛋白的相对表达量均降低(P<0.05,P<0.01);与同时点模型组比较,TEAS组第42、49天一般情况半定量评分降低(P<0.05,P<0.01),逃避潜伏期缩短(P<0.01,P<0.05),穿越原平台次数增加(P<0.05),海马组织中ERK、CREB、BDNF mRNA和蛋白的相对表达量均升高(P<0.01,P<0.05)。正常组海马CA1区神经元细胞形态正常;模型组海马CA1区神经元数量减少,神经细胞排列分散,凋亡细胞数量增多,部分细胞核结构消失,核异染色质增多,胞膜出现皱褶,染色质出现空亮区,嵴不完整;与模型组比较,TEAS组海马CA1区神经细胞排列仍有分散,但总体细胞形态较规则,凋亡细胞数量减少,染色质分布均匀,胞质均匀,嵴较完整。结论:TEAS可改善CFS大鼠的学习记忆能力,其作用机制可能与改善海马CA1区的组织结构、上调ERK/CREB/BDNF表达有关。

关键词：经皮穴位电刺激慢性疲劳综合征学习记忆海马CA1区神经可塑性

参附注射液调控HIF-1α/BNIP3通路介导线粒体自噬抗心肌缺血再灌注损伤作用

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中国中西医结合杂志 2024年

作者：谌治安袁颢孙晗刘思彤张帅姜爽宋伍刘智长春中医药大学临床医学院

目的探讨参附注射液调节线粒体自噬减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤（MIRI）的作用机制。方法 50只大鼠随机分成5组：假手术组，模型组，参附注射液低、中、高剂量[3.34、6.68、13.36 mL/（kg·d）]组，每组10只，造模前给药。干预组大鼠... 详细信息

目的探讨参附注射液调节线粒体自噬减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤（MIRI）的作用机制。方法 50只大鼠随机分成5组：假手术组，模型组，参附注射液低、中、高剂量[3.34、6.68、13.36 mL/（kg·d）]组，每组10只，造模前给药。干预组大鼠腹腔注射给药，假手术组及模型组腹腔注射生理盐水，每天1次，连续给药7天后造模。末次给药24 h后，将大鼠左冠状动脉前降支结扎30 min，再灌注120 min建立MIRI模型。超声评估心脏结构和心功能；ELISA法检测血清肌酸激酶（CK-MB）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌钙蛋白（c Tn I）含量；TTC染色观察心肌梗死面积；HE染色评估心肌病理变化；Western Blot、q RT-PCR检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、Bcl-2相互作用蛋白3(BNIP3)、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（LC3-Ⅱ）、微管相关蛋白1轻链3-Ⅰ（LC3-Ⅰ）蛋白及m RNA表达；TUNEL法检测心肌细胞凋亡率；电镜观察线粒体及自噬小体数量。结果与假手术组比较，模型组射血分数（LVEF）、短轴缩短率（LVFS）、左室舒张末期内径（LVEDd）降低（P<0.05），收缩末期内径（LVESd）升高（P<0.05），梗死面积增加（P<0.01）,CK-MB、LDH、cTnI含量升高（P<0.05），心肌细胞坏死和炎症浸润增加；HIF-1α、BNIP3表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高（P<0.05）,HIF-1α、BNIP3、LC3 mRNA表达升高（P<0.05）；心肌细胞凋亡率、单位面积内线粒体明损伤及自噬小体数量增多（P<0.01,P<0.05）。与模型组比较，参附注射液组LVEF、LVFS、LVEDd和LVESd升高（P<0.01）；除参附注射液高剂量组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值降低，参附注射液组HIF-1α、 BNIP3及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达升高（P<0.01,P<0.05）,HIF-1α、BNIP3、LC3 mRNA表达升高（P<0.01）；参附注射液组梗死面积减少（P<0.01）,CK-MB、LDH、cTnI含量降低（P<0.05），细胞凋亡率、线粒体损伤及自噬小体数量减少（P<0.01,P<0.05）。结论参附注射液具有保护MIRI大鼠心肌的作用，其机制与促进HIF-1α/BNIP3通路介导线粒体自噬有关。

关键词：参附注射液心肌缺血再灌注损伤缺氧诱导因子1α Bcl-2相互作用蛋白3 线粒体自噬中成药

腕踝针对慢性疼痛具有积极作用:一项系统综述和Meta分析

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Acupuncture and Herbal Medicine 2023年第1期3卷 7-19页

作者：潘梅花兰艳艳王志福福建中医药大学康复医学院福州福建中医药大学康复医学院福州

越来越多的医者使用针灸疗法,如腕踝针(WAA)来治疗疼痛。我们的目的是系统地评估WAA对癌症疼痛、原发性、慢性肌肉骨骼和病理性神经痛的影响。检索从创建到2022年7月31日的9个电子数据库,收集以腕踝针为主要干预成分的随机对照试验(RCT... 详细信息

越来越多的医者使用针灸疗法,如腕踝针(WAA)来治疗疼痛。我们的目的是系统地评估WAA对癌症疼痛、原发性、慢性肌肉骨骼和病理性神经痛的影响。检索从创建到2022年7月31日的9个电子数据库,收集以腕踝针为主要干预成分的随机对照试验(RCT)。结局指标包括疼痛评分、临床疗效(总体有效率)和不良反应的发生情况。采用Cochrane协作网标准评估偏倚风险,使用RevMan 5.4.1软件进行meta分析,以确定WAA干预效果的大小,认为P临床疗效(P<0.00001)优于CG。此外,结果还显示WAA比口服药物更安全(P=0.09)。因此,单独使用WAA或WAA联合其他疗法对几种常见的慢性疼痛具有良好的镇痛效果,且比口服药物更安全。然而,未来还需要更多高质量的随机对照试验来支持这一证据。

关键词：慢性疼痛 Meta分析随机对照试验 WAA 腕踝针

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慢性腰痛患者异常伤害性感受的研究进展

中国康复医学杂志 2023年第8期38卷 1163-1169页

作者：高真刘红李雅萍陈晓琳江征福建中医药大学第一临床医学院福建省福州市350122 福建中医药大学中医骨伤及运动康复教育部重点实验室福建中医药大学康复医学院

国际疼痛学会将疼痛定义为,与实际或潜在组织损伤相关的不愉快的感觉和情感体验[1]。但随着疼痛的慢性化发展,疼痛感受与组织损伤严重程度之间的相关性逐渐减弱[2]。以慢性腰痛(chronic low back pain,CLBP)为例,患者肌肉骨骼损伤的程... 详细信息

国际疼痛学会将疼痛定义为,与实际或潜在组织损伤相关的不愉快的感觉和情感体验[1]。但随着疼痛的慢性化发展,疼痛感受与组织损伤严重程度之间的相关性逐渐减弱[2]。以慢性腰痛(chronic low back pain,CLBP)为例,患者肌肉骨骼损伤的程度常与他们的主诉不成比例,提示伤害性刺激与伤害性感受之间失衡,即存在异常的伤害性感受[3—4]。这极大程度降低了腰痛患者的诊疗质量,造成严重的药物、手术滥用以及巨大的经济损失[5—7]。

关键词：肌肉骨骼损伤慢性腰痛伤害性感受慢性化伤害性刺激损伤严重程度疼痛感受腰痛患者

基于生物信息学、分子对接与细胞实验探究C5orf46高表达在胃癌中的意义及潜在的中药干预

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中国中药杂志 2023年第9期48卷 2368-2378页

作者：周映伽刘佳铭刘滨王梓霞范芯瑜黄沛桢黄雨欣孙敬宁陈奇祺沈红梅云南省肿瘤医院云南昆明650118 广州中医药大学第二临床医学院广东广州510405 广州中医药大学第四临床医学院广东广州510006 广州中医药大学第五临床医学院广东广州510405

该研究旨在探究C5orf46在胃癌中的表达、预后和临床意义,研究C5orf46的潜在有效成分与中药的相互作用。运用ggplot2包对胃癌组织和正常邻近组织中的C5orf46进行差异表达分析;运用survival包进行生存分析、单因素及多因素回归分析,运用No... 详细信息

该研究旨在探究C5orf46在胃癌中的表达、预后和临床意义,研究C5orf46的潜在有效成分与中药的相互作用。运用ggplot2包对胃癌组织和正常邻近组织中的C5orf46进行差异表达分析;运用survival包进行生存分析、单因素及多因素回归分析,运用Nomogram分析评估C5orf46在胃癌中的表达和总体生存率的关系;最后利用GSVA包对肿瘤浸润淋巴细胞丰度进行计算。Coremine数据库、TCMSP数据库与PubChem数据库用于查找C5orf46基因对应的潜在成分与中药成分,分子对接用于探讨潜在成分与C5orf46基因的结合强度,并利用细胞实验探究空白组、模型组、不同浓度给药组细胞C5orf46基因的相对表达情况。对比正常组织,胃癌组织中C5orf46的表达较高,在早期(T2期、N0期、M0期)有更显著的预测效应;肿瘤原发灶-区域淋巴结-远处转移(tumor-node-metastasis,TNM)分期越晚,C5orf46表达越高,胃癌患者生存概率越低;C5orf46的表达与胃癌中的辅助性T细胞1、巨噬细胞的浸润水平呈正相关趋势,与B细胞、中央记忆型T细胞、辅助性T细胞17、滤泡辅助性T细胞呈显著负相关趋势。C5orf46的对应潜在成分有7个,经过筛选得到3个有效成分,对应中药成分5个,分别为黑豆、大枣、瓜蒌、水飞蓟、天竺黄。分子对接显示唾液酸、单磷酸腺苷(adenosine monophosphate,AMP)与C5orf46结合情况较牢固。RTqPCR和Western blot结果显示,不同浓度AMP给药组C5orf46 mRNA和蛋白的表达水平均显著低于模型组,且浓度为40μmol·L^(-1)时表达水平最低。研究结果能为临床上治疗胃癌以及其他癌症的中药复方研发提供思路。

关键词：胃癌 C5orf46 单磷酸腺苷细胞实验生物信息学分子对接

清热化瘀与清热益气化瘀中药巴布膏对PGE2在家兔急性软组织损伤模型中的影响

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中华中医药学刊 2023年第6期41卷 187-190,I0027,I0028页

作者：钟静蒋顺琬佘锐豪何富平马笃军李亨广州中医药大学第四临床医学院广东深圳518030

目的比较清热化瘀与清热益气化瘀中药巴布膏对急性软组织损伤家兔的前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)的影响。方法由广东省医学实验动物中心提供24只SPF级雄性家兔,建立家兔急性软组织损伤动物模型,将其编号后,随机分为空白组、造模... 详细信息

目的比较清热化瘀与清热益气化瘀中药巴布膏对急性软组织损伤家兔的前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)的影响。方法由广东省医学实验动物中心提供24只SPF级雄性家兔,建立家兔急性软组织损伤动物模型,将其编号后,随机分为空白组、造模组、清热化瘀巴布膏组(清巴组)以及清热益气化瘀巴布膏组(益巴组),观测其皮下瘀血、肌肉肿胀、肌肉颜色和疼痛反应,检测24 h、72 h时各组受损肌肉组织及血清的PGE2含量变化,观察24 h、72 h时各组肌肉组织HE染色并予评分。结果造模24 h、48 h、72 h时观测损伤症状评分,在损伤评分中造模后0 h,各组与空白组比较差异均有统计学意义(P0.05),在造模及给药24 h后,各组与空白组差异仍有统计学意义(P<0.05),而各组间无明显差异,在造模48 h后与模型组相比,益巴组差异具有统计学意义(P<0.05);模型组HE染色形态学观察评分较空白组差异有统计学意义(P<0.05)。益巴组的评分较模型组的差异有统计学意义(P<0.05);肌肉PGE2含量中24 h清巴组与72 h清巴组差异有统计学意义(P<0.05)。24 h益巴组与72 h益巴组差异有统计学意义(P<0.05),造模24 h后,与空白组对比,模型组差异有统计学意义(P<0.05),治疗组差异无统计学意义。与模型组对比,两种治疗方法也差异无统计学意义。造模72 h后,与空白组对比模型组、治疗组无统计学差异。与模型组对比也差异无统计学意义。两种治疗方法对比无统计学意义。24 h清巴与72 h清巴、24 h益巴与72 h益巴无差异。结论相比清热化瘀巴布膏,清热益气化瘀巴布膏对家兔软组织受损部位的PGE2抑制效果更好,对急性软组织损伤的修复和消炎镇痛有明显作用。

关键词：急性软组织损伤 PGE2 清热化瘀清热益气化瘀中药巴布膏中药外治