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骨调节蛋白作为潜在的胃癌预后标志物及免疫治疗新靶点

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中国生物化学与分子生物学报 2022年第1期38卷 97-107页

作者：潘凤彭红云聂佳琪张旭东李晓宁崔海康杨兰张文杰石河子大学医学院病理系及第一附属医院病理科新疆石河子832002 石河子大学医学院第一附属医院体检科新疆石河子832002 石河子大学新疆地方与民族高发病教育部重点实验室新疆石河子832002

胃癌患者术前检测能够预测其术后生存的标志物对外科术式和术后放化疗及随访有重要提示意义。本文利用多中心癌症公共数据库及在线分析,经过qRT-PCR及Western印迹等检测进行验证,发现骨调节蛋白(osteomodulin,OMD)在胃癌组织中高表达(P=... 详细信息

胃癌患者术前检测能够预测其术后生存的标志物对外科术式和术后放化疗及随访有重要提示意义。本文利用多中心癌症公共数据库及在线分析,经过qRT-PCR及Western印迹等检测进行验证,发现骨调节蛋白(osteomodulin,OMD)在胃癌组织中高表达(P=0.015),能够影响胃癌患者生存预后(P病理特征密切相关;与多种免疫细胞(静息状态下的树突状细胞、嗜酸性粒细胞)、免疫检查点调节剂ENTPD1(rho=0.634,P子CXCL12(rho=0.625,P<0.001)具有相关性,可能通过免疫微环境影响着胃癌的发生与发展。因此,OMD可能成为临床可行的胃癌预后标志物及免疫治疗的新靶点。

关键词：生物信息学分析骨调节蛋白胃癌生存预后免疫细胞浸润

新疆哈萨克族原发性高血压患者外周血淋巴细胞微小RNA表达谱的生物信息学分析

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生理学报 2022年第5期74卷 751-762页

作者：王彦张亮杨瑞单莉娅王璐张莹莹李新芝马克涛石河子大学医学院新疆地方与民族高发病教育部重点实验室石河子832000 石河子大学医学院国家卫健委中亚高发病防治重点实验室石河子832000 石河子大学医学院生理学教研室石河子832000 石河子大学医学院病理生理学教研室石河子832000

本研究旨在探讨新疆哈萨克族原发性高血压患者和健康者外周血淋巴细胞中微小RNA(microRNA,miRNA)差异表达谱,为高血压的发生机制研究提供理论基础。将2016年4月至2019年5月新疆石河子大学医学院第一附属医院心内科住院部及门诊就诊的30... 详细信息

本研究旨在探讨新疆哈萨克族原发性高血压患者和健康者外周血淋巴细胞中微小RNA(microRNA,miRNA)差异表达谱,为高血压的发生机制研究提供理论基础。将2016年4月至2019年5月新疆石河子大学医学院第一附属医院心内科住院部及门诊就诊的30例哈萨克族原发性高血压患者作为高血压组,将30例哈萨克族健康者作为对照组。比较6个哈萨克族高血压患者与6个配对的正常血压者外周血淋巴细胞中miRNA表达谱,对差异表达的miRNA进行聚类、GSEA富集、靶基因预测和靶基因注释等生物信息学分析,并进行qRT-PCR验证。结果显示,与对照组相比,高血压组筛选出73个差异表达miRNA,其中39个miRNA表达上调,34个miRNA表达下调;通过GSEA富集分析共筛选出11个与高血压相关的miRNA,分别是hsamiR-100-5p、hsa-miR-150-5p、hsa-miR-299-5p、hsa-miR-299-3p、hsa-miR-296-5p、hsa-miR-196b-5p、hsa-miR-503-5p、hsamiR-628-5p、hsa-miR-874-3p、hsa-miR-543、hsa-miR-940。通过qRT-PCR检验发现,与对照组相比,高血压组hsa-miR-100-5p、hsa-miR-299-5p、hsa-miR-299-3p、hsa-miR-196b-5p、hsa-miR-503-5p、hsa-miR-628-5p、hsa-miR-543表达上调,hsamiR-150-5p、hsa-miR-296-5p、hsa-miR-874-3p、hsa-miR-940表达下调。基因芯片中的表达趋势和qRT-PCR验证结果一致。利用在线数据库对11个与高血压相关的miRNA进行预测,共预测出1647个靶基因;GO功能富集分析显示,在生物过程方面,高血压相关靶基因主要与神经系统发育、细胞定位、细胞代谢过程的调节、神经元的产生以及生物过程的正调控等方面相关;在细胞组成方面,主要与膜界细胞器、细胞质、细胞内膜结合的细胞器、突触部分、神经元部分、核质等相关;在分子功能方面,主要与蛋白质结合、转录调控区DNA结合、RNA聚合酶II调节区DNA结合、转录调节活性、离子结合等方面相关;KEGG富集分析显示p53信号通路、心肌细胞中的肾上腺素能信号、cAMP信号通路、内分泌和其他因子调节的钙重吸收、mTOR信号通路、醛固酮调节的钠重吸收、TGF-β信号通路可能与高血压的发生和发展相关。以上结果提示,哈萨克族原发性高血压患者与健康者外周血淋巴细胞中miRNA表达存在差异,筛选出的miRNA可能与哈萨克族原发性高血压的发生和发展相关,其在高血压中的作用机制有待进一步探索验证。

关键词：高血压哈萨克族淋巴细胞 microRNA 表达谱生物信息学分析

基于免疫检查点和肿瘤浸润免疫细胞筛选免疫治疗敏感的胃癌分子分型

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免疫学杂志 2022年第11期38卷 950-963页

作者：张旭东崔海康李晓宁杨希杨兰张文杰石河子大学医学院病理系新疆地方与民族高发病教育部重点实验室 832002 石河子大学医学院第一附属医院病理科 832002

目的筛选出胃癌(GC)免疫治疗敏感的免疫分型,为进一步研究GC的个体化免疫治疗提供新思路。方法收集分析石河子大学医学院第一附属医院2004年1月至2016年12月169例GC患者术后石蜡组织标本及其对应的癌旁组织;从癌症基因组图谱(TCGA)和高... 详细信息

目的筛选出胃癌(GC)免疫治疗敏感的免疫分型,为进一步研究GC的个体化免疫治疗提供新思路。方法收集分析石河子大学医学院第一附属医院2004年1月至2016年12月169例GC患者术后石蜡组织标本及其对应的癌旁组织;从癌症基因组图谱(TCGA)和高通量基因表达数据库(GEO)中下载800例GC患者的转录组数据及临床数据;采用IHC法和qRTPCR法检测组织中目的蛋白以及mRNA的表达情况;用Kaplan-Meier法绘制生存曲线;采用估计算法(ESTIMATE)和反卷积算法(CIBERSORT)分别评估各样本中免疫组成成分及免疫细胞浸润程度;使用“ConsensuClusterPlus”R包进行免疫分型分组;应用Spearman等级相关分析探究PD-1、PD-L1和CTLA4的mRNA表达水平与免疫细胞浸润程度以及临床病理特征的关系。结果PD-1、PD-L1和CTLA4 mRNA高表达的GC患者有较好预后;免疫分型A组的GC患者预后较好;免疫检查点mRNA的表达与CD8+T细胞、M1型巨噬细胞和激活的记忆性CD4+T细胞的浸润程度呈正相关。结论PD-1、PD-L1和CTLA4 mRNA高表达的GC患者(免疫分型A)有较好的预后,可能更易从免疫治疗中获益。

关键词：胃癌免疫治疗分子分型免疫细胞浸润肿瘤免疫微环境

Kir2.1在LPS或IL-4诱导的巨噬细胞M1/M2型极化中的作用

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中国病理生理杂志 2022年第3期38卷 385-393页

作者：王璐杨瑞张莹莹李新芝马克涛石河子大学医学院新疆地方与民族高发病教育部重点实验室新疆石河子832000 石河子大学医学院第一附属医院国家卫健委中亚高发病防治重点实验室新疆石河子832000 石河子大学医学院生理学教研室新疆石河子832000 石河子大学医学院病理生理学教研室新疆石河子832000

目的:通过激活或阻断内向整流钾通道2.1(inwardly-rectifying potassium channel 2.1,Kir2.1),检测巨噬细胞M1/M2型极化标志物及相关细胞因子的改变,探讨Kir2.1在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)或白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)诱导的巨噬细胞M1/M2型极化过程中的具体作用。方法:采用RAW264.7小鼠巨噬细胞系,将未转染慢病毒的RAW264.7细胞分为对照(control)组、LPS组、IL-4组、LPS+zacopride(Kir2.1选择性激动剂)组及IL-4+ML133(Kir2.1选择性阻断剂)组,将转染慢病毒的RAW264.7细胞分为vector组、LPS+vector组、IL-4+vector组、KD-shKir2.1组、LPS+KD-shKir2.1组及IL-4+KD-shKir2.1组。应用ELISA技术检测巨噬细胞培养液上清中IL-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的浓度;应用实时荧光定量PCR技术检测巨噬细胞中Kir2.1、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、CD86、CD206、IL-6及TNF-α的mRNA表达;应用细胞免疫荧光技术和Western blot技术检测巨噬细胞中Kir2.1、iNOS、CD86及CD206的定位和表达。结果:Kir2.1在RAW264.7细胞的胞膜及胞质中均有表达,并且LPS干预RAW264.7细胞后Kir2.1的蛋白表达显著下降(P子的释放(P子的释放(P<0.05或P<0.01),升高M1型极化标志物iNOS和CD86的mRNA和蛋白表达(P<0.05或P<0.01),降低M2型极化标志物CD206的mRNA和蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论:激活Kir2.1能够抑制LPS诱导的巨噬细胞向M1型极化;而阻断或敲减Kir2.1能够促进LPS诱导的巨噬细胞向M1型极化,抑制IL-4诱导的巨噬细胞向M2型极化。

关键词：巨噬细胞极化内向整流钾通道炎症动脉粥样硬化

拟钙剂R568通过激活PLC信号通路减轻自发性高血压大鼠肾损伤

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中国病理生理杂志 2022年第10期38卷 1781-1789页

作者：刘薇赵佳琪唐娜王腊梅何丽娟李佳怡钟华何芳石河子大学医学院新疆地方与民族高发病教育部重点实验室石河子大学医学院第一附属医院国家卫健委中亚高发病防治重点实验室石河子大学医学院病理生理学教研室新疆石河子832000 石河子大学医学院医学教学实验中心新疆石河子832000

目的:探讨钙敏感受体(calcium-sensing receptor,CaSR)激动剂R568对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)肾脏病变的影响。方法:以16周龄雄性SHR和Wistar Kyoto(WKY)大鼠(血压正常)为研究对象,实验分为WKY组、SHR+生理盐水(normal saline,NS)组及SHR+R568组。干预8周后(24周龄),使用无创血压仪器检测各组大鼠血压,接着处死大鼠,收集各组大鼠肾脏。采用苏木精-伊红、过碘酸-雪夫及Masson染色观察各组大鼠肾脏形态学改变;采用免疫组化检测各组大鼠肾脏组织中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NAGL)、CD68和磷脂酶C(phospholipase C,PLC)的表达;采用免疫荧光染色检测各组大鼠肾脏组织中CaSR表达及巨噬细胞的极化类型;采用Western blotting和qRT-PCR检测CaSR、NAGL、Ⅲ型胶原蛋白、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)、caspase-1、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)及IL-18的表达。结果:与WKY组相比,SHR+NS组大鼠血压显著升高,肾组织中CaSR和PLC表达及M2型巨噬细胞数量显著减少,而CD68、NAGL和NLRP3炎症小体相关蛋白表达及M1型巨噬细胞数量显著增多(P<0.05);与SHR+NS组相比,R568干预8周后大鼠血压显著降低,大鼠肾组织中CaSR和PLC表达及M2型巨噬细胞数量显著增多,而CD68、NAGL和NLRP3炎症小体相关蛋白表达及M1型巨噬细胞数量显著减少(P<0.05)。结论:CaSR激活可通过激活PLC信号通路抑制NLRP3炎症小体活化,减少巨噬细胞向M1极化,促进其向M2极化,以降低血压并减轻高血压肾损伤。

关键词：高血压肾损伤钙敏感受体磷脂酶C NLRP3炎症小体巨噬细胞极化

细胞焦亡分型和APOD预测胃癌患者预后作用的生物信息学分析

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吉林大学学报（医学版） 2023年第5期49卷 1268-1279页

作者：崔海康张旭东李晓宁杨希杨兰张文杰石河子大学医学院病理系新疆石河子832002 新疆地方与民族高发病教育部重点实验室新疆石河子832002

目的:寻找胃癌(GC)患者的预后标志物,实现GC的早诊早治,为提高GC患者的生存率提供依据。方法:从癌症基因图谱(TCGA)数据库和GSE84437数据集下载407和433例GC患者的临床数据和转录组数据并合并,根据细胞焦亡相关基因的表达水平和Consensu... 详细信息

目的:寻找胃癌(GC)患者的预后标志物,实现GC的早诊早治,为提高GC患者的生存率提供依据。方法:从癌症基因图谱(TCGA)数据库和GSE84437数据集下载407和433例GC患者的临床数据和转录组数据并合并,根据细胞焦亡相关基因的表达水平和ConsensusClusterPlus数据包对GC组织样本进行聚类分型,分为A分型(342例)和B分型(465例),将GC患者按照载脂蛋白D(APOD)水平分为低表达组和高表达组。采用survminer数据包比较不同分型患者预后的差异,采用ssGSEA算法比较不同分型患者免疫浸润的差异,采用Lasso回归和Cox回归构建GC患者预后风险模型,对模型基因进行临床性状过滤,采用公共数据库分析APOD在癌旁正常组织和GC组织中表达水平的差异,采用基因富集分析(GSEA)分析APOD的京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集情况,采用CIBERSORT算法评估免疫细胞含量并分析其与APOD表达的相关性,采用在线网站分析APOD的药物敏感性。结果:2种细胞焦亡分型患者预后比较差异有统计学意义(P=0.002);A分型患者中22种免疫细胞含量均高于B分型(P子配体12(CXCL12)(r=0.500,P子B1(TGFB1)(r=0.313,P子配体19(CCL19)(r=0.518,P子受体1(CX3CR1)(r=0.444,P系;药物敏感性分析,APOD与AZD-7762、KW-2449和TG-101348呈正相关关系(0

关键词：胃肿瘤细胞焦亡载脂蛋白D 生存预后免疫浸润

灭活的新型结核病疫苗菌株(B/R菌株)对小鼠T淋巴细胞免疫记忆的影响

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中国人兽共患病学报 2023年第11期39卷 1100-1106页

作者：丰启盈邓喜玲张杰董江涛柳小玲梁粟王菊张辉吴江东章乐吴芳张万江石河子大学医学院病理生理学教研室/新疆地方与民族高发病教育部重点实验室石河子832002 石河子大学药学院石河子832002 石河子大学医学院第一附属医院石河子832002

目的探讨灭活的新型结核病疫苗菌株(B/R菌株)对小鼠T淋巴细胞免疫记忆的影响。方法以PBS、BCG菌株、B/R菌株与灭活B/R菌株为分组方式,单次皮下接种免疫C57BL/6小鼠。于免疫后第9周、第12周和第15周,分别取各组小鼠脾脏,提取脾脏淋巴细... 详细信息

目的探讨灭活的新型结核病疫苗菌株(B/R菌株)对小鼠T淋巴细胞免疫记忆的影响。方法以PBS、BCG菌株、B/R菌株与灭活B/R菌株为分组方式,单次皮下接种免疫C57BL/6小鼠。于免疫后第9周、第12周和第15周,分别取各组小鼠脾脏,提取脾脏淋巴细胞。各组脾脏淋巴细胞半数直接检测,其余部分进行体外培养,并按实验设计以结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)进行刺激,而后进行检测。应用流式细胞技术分别检测未经PPD刺激和经刺激的小鼠脾脏淋巴细胞内中央型记忆性T细胞(T_(CM))和效应型记忆性T细胞(T_(EM))数量。结果免疫后未经PPD刺激,第9周时,灭活B/R组、B/R组、BCG组诱导产生的CD_(4)^(+)T_(CM)(F=13.20,P<0.05)与CD_(4)^(+)T_(EM)(F=28.15,P<0.05)高于PBS组;诱导产生的CD_(8)^(+)T_(CM)(F=8.92,P<0.05)与CD_(8)^(+)T_(EM)(F=6.13,P<0.05)高于PBS组。第12周时,各组诱导产生的CD_(4)^(+)T_(CM)(F=15.97,P<0.05)与CD_(4)^(+)T_(EM)(F=13.60,P<0.05)高于PBS组;诱导产生的CD_(8)^(+)T_(CM)(F=5.52,P<0.05)与CD_(8)^(+)T_(EM)(F=20.15,P<0.05)高于PBS组。第15周时,各组诱导产生的CD_(4)^(+)T_(CM)(F=15.40,P<0.05)与CD_(4)^(+)T_(EM)(F=7.43,P<0.05)高于PBS组;诱导产生的CD_(8)^(+)T_(CM)(F=6.57,P<0.05)与CD_(8)^(+)T_(EM)(F=9.27,P<0.05)高于PBS组。免疫后经结核特异性抗原PPD刺激,在第9周时,灭活B/R组、B/R组、BCG组诱导产生的CD_(4)^(+)T_(CM)(F=9.66,P<0.05)与CD_(4)^(+)T_(EM)(F=11.20,P<0.05)高于PBS组;诱导产生的CD_(8)^(+)T_(CM)(F=7.24,P<0.05)与CD_(8)^(+)T_(EM)(F=9.30,P<0.05)高于PBS组。第12周时,各组诱导产生的CD_(4)^(+)T_(CM)(F=9.33,P<0.05)与CD_(4)^(+)T_(EM)(F=6.94,P<0.05)高于PBS组;诱导产生的CD_(8)^(+)T_(CM)(F=67.71,P<0.05)与CD_(8)^(+)T_(EM)(F=10.86,P<0.05)高于PBS组。第15周时,各组诱导产生的CD_(4)^(+)T_(CM)(F=39.88,P<0.05)与CD_(4)^(+)T_(EM)(F=11.93,P<0.05)高于PBS组;诱导产生的CD_(8)^(+)T_(CM)(F=138.80,P<0.05)与CD_(8)^(+)T_(EM)(F=38.47,P<0.05)高于PBS组。值得注意的是,在第15周时,灭活B/R组与B/R组诱导产生的CD_(8)^(+)T_(CM)(q灭活B/R=12.24,q B/R=12.61,P<0.05)与CD_(8)^(+)T_(EM)(q灭活B/R=7.19,q B/R=5.00,P<0.05)均高于BCG组。结论灭活B/R菌株免疫小鼠后,所诱导对小鼠T淋巴细胞免疫记忆的能力与B/R菌株相当,热灭活未影响B/R菌株诱导小鼠免疫记忆的能力。

关键词：结核病灭活疫苗 T淋巴细胞免疫记忆

连接子蛋白43(Cx43)抑制氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的大鼠胸主动脉平滑肌细胞自噬

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细胞与分子免疫学杂志 2022年第6期38卷 501-506页

作者：秦叙青张爱梅刘鲁倩何文君杨瑞单莉娅李新芝马克涛石河子大学医学院新疆地方与民族高发病教育部重点实验室新疆石河子832000 石河子大学医学院生理学教研室新疆石河子832000 石河子大学第一附属医院心内科新疆石河子832000 石河子大学病理生理学教研室新疆石河子832000

目的探讨连接子蛋白43(Cx43)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)自噬中的作用。方法采用α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光细胞化学染色鉴定原代VSMC,ox-LDL处理后,采用油红O染色鉴定泡沫细胞;Western blo... 详细信息

目的探讨连接子蛋白43(Cx43)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)自噬中的作用。方法采用α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光细胞化学染色鉴定原代VSMC,ox-LDL处理后,采用油红O染色鉴定泡沫细胞;Western blot法检测(0、40、80、160)μg/mL ox-LDL处理0、6、12、24 h,VSMC中微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白的表达以及80μg/mLox-LDL干预24 h,Cx43蛋白的表达;将VSMC随机分为对照组、ox-LDL组和ox-LDL联合Cx43特异性阻断剂Gap26组,Western blot法检测各组细胞LC3、beclin 1的表达。结果分离的细胞α-SMA阳性率达95%以上,与对照组相比,ox-LDL处理的细胞油红O阳性细胞明显增加,ox-LDL呈浓度依赖及时间依赖地降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值及beclin 1蛋白表达,Cx43蛋白的表达明显升高;给予Gap26后,可上调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值及beclin 1蛋白表达。结论Cx43抑制ox-LDL引起的自噬。

关键词：动脉粥样硬化连接子蛋白43(Cx43) 氧化低密度脂蛋白(ox-LDL) 自噬

长链非编码RNA在骨与软组织肉瘤中的研究进展

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中华病理学杂志 2017年第4期46卷 277-279页

作者：孟莲刘春霞李锋石河子大学医学院病理系石河子大学医学院第一附属医院病理科新疆地方与民族高发病重点实验室 832000 首都医科大学附属北京朝阳医院病理科

人类骨肉瘤与软组织肉瘤的发生率分别为每年1／10万和（4～5）／10万，大约占所有恶性肿瘤的1％。人类骨肉瘤与软组织肉瘤的发生、增殖、转移、放化疗抵抗和复发等生物学行为机制有待从多方面进行更深入的研究。

关键词：软组织肉瘤非编码RNA 骨肉瘤长链恶性肿瘤行为机制化疗抵抗发生率