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重组纳米级粉尘螨变应原第1组分的制备及其在哮喘小鼠中的作用研究

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免疫学杂志 2012年第3期28卷 185-190页

作者：马桂芳周鹰王运刚杨李崔玉宝盐城卫生职业技术学院检验医学教研室 224006

目的应用基因工程技术获得纳米级粉尘螨变应原第1组分s-layer/Der f 1,建立重组纳米级变应原的方法。方法利用S-layer/Strep-tag I这一具有自我组装能力的纳米模式母体嵌合粉尘螨变应原第1组分,并置大肠杆菌中表达,用分离纯化获得的表... 详细信息

目的应用基因工程技术获得纳米级粉尘螨变应原第1组分s-layer/Der f 1,建立重组纳米级变应原的方法。方法利用S-layer/Strep-tag I这一具有自我组装能力的纳米模式母体嵌合粉尘螨变应原第1组分,并置大肠杆菌中表达,用分离纯化获得的表达产物免疫治疗哮喘小鼠,从分子、细胞、组织和器官4个层面证实该重组变应原诱导哮喘小鼠免疫耐受的可能性和有效性。结果采用基因工程技术将球形芽孢杆菌S层蛋白编码基因sllB的3′端去除600 bp后与尘螨主要变应原第1组分Der f 1连接,5′端与Strep-tag I的编码基因连接,成功构建克隆质粒pMD19-T-Strep-tag I/sllB1-2 706 bp/Der f 1,测序正确后,成功构建表达质粒pET28a(+)-Strep-tag I/sllB1-2 706 bp/Der f 1并转化*** BL21诱导表达,透射电镜显示该表达产物rDer f 1/S-layer位于工程菌表面,平均粒径为(116.43±14)nm。用获得的重组变应原rDer f 1、rDer f 1/S-layer免疫治疗哮喘小鼠,证实其可改善小鼠肺部炎症,降低支气管肺泡灌洗液中细胞总数、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和总IgE、螨特异性IgE水平,增加总IgG、螨特异性IgG水平,并上调外周血Th1型、下调Th2型细胞因子表达水平,并以重组纳米级变应原疗效更好,免疫调节作用更强。结论获得了纳米级粉尘螨变应原第1组份重组体,该制品可以诱导哮喘小鼠免疫耐受,具有较强的免疫原性,所建立的纳米级变应原原核表达体系为生产纳米药物和疫苗提供了一个新的途径。

关键词：变态反应变应原免疫治疗粉尘螨纳米

基于学习者视觉思维的人体解剖学多媒体课件设计

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解剖学杂志 2014年第6期37卷 840-841页

作者：韩中保韩扣兰盐城卫生职业技术学院解剖学教研室盐城224006 盐城卫生职业技术学院临床教研室盐城224006

人体解剖学是一门重要的基础医学形态学科,教学的重点是学习者通过观察二维的图像、图形和三维的标本、模型,掌握人体器官和组织的形态结构,因此《人体解剖学》的教与学是基于视觉思维,教学目标是培养学习者的形象思维能力和表达能力.... 详细信息

人体解剖学是一门重要的基础医学形态学科,教学的重点是学习者通过观察二维的图像、图形和三维的标本、模型,掌握人体器官和组织的形态结构,因此《人体解剖学》的教与学是基于视觉思维,教学目标是培养学习者的形象思维能力和表达能力.以“学习者为中心”的人体解剖学多媒体课件设计和开发则应遵循视觉思维规律,提供丰富的、准确的、直观的视觉信息,激发学习者的视觉思考和知识的内化,鼓励学习者的视觉表达和知识的迁移.

关键词：《人体解剖学》视觉思维课件设计多媒体学习医学形态学科形象思维能力教学目标

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麇鹿角醇提液对雄鼠性腺功能的影响

解剖学杂志 2009年第5期32卷 607-610页

作者：成海龙田郡陆晓东秦红兵朱清盐城卫生职业技术学院人体学教研室盐城224006 盐城卫生职业技术学院生物学教研室盐城224006 盐城卫生职业技术学院药理学教研室盐城224006 南通大学医学院药学实验中心南通226001

目的：观察麋鹿角醇提液对雄性小鼠性腺功能的影响，对麋鹿角传统的壮阳作用进行初步实验研究。方法：以重复电刺激复制应激小鼠性功能低下模型，观察麇鹿角醇提液对成熟雄鼠捕捉雌性小鼠能力的影响。给正常幼龄雄性小鼠连续灌胃给药10... 详细信息

目的：观察麋鹿角醇提液对雄性小鼠性腺功能的影响，对麋鹿角传统的壮阳作用进行初步实验研究。方法：以重复电刺激复制应激小鼠性功能低下模型，观察麇鹿角醇提液对成熟雄鼠捕捉雌性小鼠能力的影响。给正常幼龄雄性小鼠连续灌胃给药10d，观察其性器官以及附性器官的脏器质量指数，检测其精子密度和精子活动率，并测定血清中睾酮与促黄体生成素的水平。结果：麋鹿角醇提液能增加应激后雄鼠捕捉雌鼠的能力，能够缩短跨骑潜伏期，增加舔舐和跨骑次数。麇鹿角醇提液能增加幼龄雄性小鼠睾丸质量指数，但对其附性器官质量指数没有影响，对其精子密度与精子活动率也没有影响。能提高幼鼠促黄体生成素水平，但对睾酮的水平没有影响。结论：麋鹿角醇提液对电刺激应激诱发的雄性小鼠性功能障碍有促进恢复作用；麇鹿角醇提液具有一定促性激素样作用，可能不具有雄性激素样作用。

关键词：麋鹿角性功能低下附性器官性激素促性激素睾酮促黄体生成素

内源性1,25(OH)_2D_3缺乏对哺乳期小鼠牙齿矿化和牙本质形成的影响

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口腔医学研究 2011年第7期27卷 575-579页

作者：刘洪高璀乡杨留才季吉盐城卫生职业技术学院口腔医学技术教研室江苏盐城224005 南京医科大学护理学院

目的:研究内源性1,25(OH)2D3缺乏对哺乳期小鼠牙齿矿化和发育的影响。方法:利用X线检测、HE染色、组织化学、免疫组织化学以及real-time RT-PCR等方法检测2周龄同窝的WT和1α(OH)ase-/-小鼠下颌牙齿。结果:和2周龄WT小鼠相比,1α(OH)ase... 详细信息

目的:研究内源性1,25(OH)2D3缺乏对哺乳期小鼠牙齿矿化和发育的影响。方法:利用X线检测、HE染色、组织化学、免疫组织化学以及real-time RT-PCR等方法检测2周龄同窝的WT和1α(OH)ase-/-小鼠下颌牙齿。结果:和2周龄WT小鼠相比,1α(OH)ase-/-小鼠下颌磨牙的X线透光率明显增加;1α(OH)ase-/-小鼠下颌第一磨牙及下颌切牙前期牙本质厚度与WT小鼠厚度有统计学差异。1α(OH)ase-/-小鼠下颌磨牙总胶原阳性面积与WT小鼠有统计学差异;1α(OH)ase-/-小鼠下颌第一磨牙牙本质I型胶原阳性面积与WT小鼠有统计学差异(P<0.05);OCN在1α(OH)ase-/-小鼠下颌第一磨牙的牙本质和牙髓相对阳性面积与WT小鼠相对阳性面积有统计学差异(P<0.01);Biglycan在1α(OH)ase-/-小鼠下颌第一磨牙的牙本质相对阳性面积与WT小鼠相对阳性面积有统计学差异(P<0.01);OCN与ALP在1α(OH)ase-/-小鼠下颌切牙牙髓细胞中mRNA的表达水平较WT小鼠有明显降低,有统计学差异(P<0.05)。结论:内源性的1,25(OH)2D3缺乏导致哺乳期小鼠牙齿的牙本质矿化不良和牙本质的形成减少。

关键词：内源性 1,25(OH)2D3缺乏哺乳期小鼠牙齿矿化牙本质形成

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球形芽胞杆菌S层蛋白基因的克隆及原核表达

中国病原生物学杂志 2012年第3期7卷 186-189,224页

作者：杨李周鹰王运刚马桂芳崔玉宝盐城卫生职业技术学院检验医学教研室江苏盐城224006

目的克隆球形芽胞杆菌S层蛋白的编码基因,实现其原核表达并纯化表达产物。方法提取球形芽胞杆菌菌体基因组DNA,根据GenBank公布的核酸序列设计并合成引物,扩增S层蛋白编码基因sllB,与pMD19-T载体连接;测序验证后,构建原核表达质粒pET28a... 详细信息

目的克隆球形芽胞杆菌S层蛋白的编码基因,实现其原核表达并纯化表达产物。方法提取球形芽胞杆菌菌体基因组DNA,根据GenBank公布的核酸序列设计并合成引物,扩增S层蛋白编码基因sllB,与pMD19-T载体连接;测序验证后,构建原核表达质粒pET28a(+)-sllB并转化BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,SDS-PAG和Westernblot鉴定表达产物,亲和柱层析纯化重组蛋白。结果扩增获得S层蛋白编码基因sllB全长(3 306bp),与参考序列同源性为97.5%。构建的原核表达质粒pET28a(+)-sllB转化BL21(DE3)后,SDS-PAGE显示表达蛋白的分子质量为116ku,与理论值相符。Western blot显示其全蛋白、可溶性蛋白和不溶性蛋白中均被鼠抗Penta-His抗体识别。结论获得了球形芽胞杆菌S层蛋白编码基因sllB,并实现了其原核表达。

关键词： S层蛋白球形芽胞杆菌基因克隆表达

粉尘螨变应原第3组分基因克隆及序列多态性分析

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中国病原生物学杂志 2012年第9期7卷 693-696页

作者：卞勇华周鹰孙金霞王运刚杨李马桂芳崔玉宝盐城卫生职业技术学院检验医学教研室江苏盐城224006

目的获得粉尘螨变应原第3组分(Der f 3)的编码基因并了解其序列多态性。方法根据GenBank已公布的Der f 3核酸序列设计引物,用RT-PCR扩增获得其编码基因,插入pMD19-T载体,进行序列测定和多态性分析。结果获得粉尘螨变应原Der f 3编码基因... 详细信息

目的获得粉尘螨变应原第3组分(Der f 3)的编码基因并了解其序列多态性。方法根据GenBank已公布的Der f 3核酸序列设计引物,用RT-PCR扩增获得其编码基因,插入pMD19-T载体,进行序列测定和多态性分析。结果获得粉尘螨变应原Der f 3编码基因为780bp。5株Der f 3基因cDNA克隆的核苷酸序列与参考序列(*** 283291,GenBank No.D63858,GenBank ***312162,GenBank ***312163)相比,有19处cDNA序列发生突变,但有7处突变至少在3个cDNA克隆中序列一致;推导出氨基酸序列后进行比对,有11处氨基酸序列发生变化,有4处与上述7个位点相一致。结论获得了粉尘螨变应原Der f 3编码基因且证明其序列具有多态性,为进一步开展相关研究奠定了基础。

关键词：序列多态性粉尘螨变应原第3组分基因克隆变态反应性疾病

雷公藤多甙对A375黑色素瘤生长、侵袭和血管生成的影响及其机制

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重庆医学 2016年第20期45卷 2752-2755页

作者：徐红涛韩中保张慧丽马林伟盐城卫生职业技术学院临床医学教研室江苏盐城224005

目的探讨雷公藤多甙对黑色素瘤生长、侵袭和血管生成的影响及其作用机制。方法采用药物总评分(MTS)法考察雷公藤多甙对人黑色素瘤A375细胞增殖的影响;利用裸鼠皮下移植瘤模型考察雷公藤多甙对体内黑色素瘤生长的影响;Transwell实验考察... 详细信息

目的探讨雷公藤多甙对黑色素瘤生长、侵袭和血管生成的影响及其作用机制。方法采用药物总评分(MTS)法考察雷公藤多甙对人黑色素瘤A375细胞增殖的影响;利用裸鼠皮下移植瘤模型考察雷公藤多甙对体内黑色素瘤生长的影响;Transwell实验考察雷公藤多甙对人黑色素瘤A375细胞侵袭的影响;小管形成实验检测雷公藤多甙对人黑色素瘤血管生成的影响;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测雷公藤多甙对A375细胞分泌因子的影响,如血管内皮生长因子(VEGF)、碱性纤维母细胞生长因子(bFGF)、转化生长因子-β(TGF-β)及白细胞介素-8(IL-8)等。结果雷公藤多甙处理A375细胞后,肿瘤细胞的体外增殖及体内生长较对照组明显受到抑制;肿瘤细胞的侵袭能力较对照组明显减弱;雷公藤多甙能通过下调VEGF、bFGF及IL-8蛋白从而抑制肿瘤细胞诱导的血管生成;但对TGF-β蛋白的表达没有明显影响。结论雷公藤多甙具有抗黑色素瘤生长及侵袭的能力,其机制可能与抑制黑色素瘤的血管生成有关。

关键词：雷公藤多甙黑色素瘤生长侵袭血管生成分子机制

麋鹿角醇提液对正常小鼠IL-2和IFN-γ的影响

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中国中药杂志 2009年第15期34卷 1986-1988页

作者：杨朝晔秦红兵朱清盐城卫生职业技术学院免疫学教研室江苏盐城224006 盐城卫生职业技术学院药理学教研室江苏盐城224006 南通大学医学院药理学教研室江苏南通226001

目的:观察麋鹿角醇提液对正常小鼠细胞因子白介素2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)的影响。方法:30只ICR小鼠随机分成3组:正常组、麋鹿角醇提液低剂量组(***-1.d-1)、高剂量组(***-1.d-1),灌胃给药,连续7d。采用ELISA法检测血清中细胞因子IL-2... 详细信息

目的:观察麋鹿角醇提液对正常小鼠细胞因子白介素2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)的影响。方法:30只ICR小鼠随机分成3组:正常组、麋鹿角醇提液低剂量组(***-1.d-1)、高剂量组(***-1.d-1),灌胃给药,连续7d。采用ELISA法检测血清中细胞因子IL-2,IFN-γ的浓度,RT-PCR法检测脾淋巴细胞IL-2,IFN-γmRNA的表达。结果:麋鹿角醇提液高剂量组小鼠血清中IL-2和IFN-γ的浓度升高,脾淋巴细胞IL-2,IFN-γmRNA的表达增强。结论:麋鹿角醇提液能促进正常小鼠细胞因子IL-2,IFN-γ的分泌与表达,增强其细胞免疫功能。

关键词：麇鹿角醇提液细胞因子细胞因子白介素2 γ-干扰素

不同体外条件培养对大鼠血管平滑肌细胞表型、增殖和细胞骨架的影响

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解剖学报 2010年第2期41卷 241-246页

作者：徐益荣刘斌杨亚安王旻晨刘珺吴开云盐城卫生职业技术学院护理系外科护理教研室江苏盐城224005 苏州大学医学部解剖学教研室苏州215123

目的探讨不同体外培养条件与血管平滑肌细胞(VSMCs)表型、增殖和细胞骨架蛋白表达之间的差异及生物学意义。方法体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,实验分为6组:2代对照组、2代血清饥饿组、4代对照组、4代血清饥饿组、6代对照组和6代血... 详细信息

目的探讨不同体外培养条件与血管平滑肌细胞(VSMCs)表型、增殖和细胞骨架蛋白表达之间的差异及生物学意义。方法体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,实验分为6组:2代对照组、2代血清饥饿组、4代对照组、4代血清饥饿组、6代对照组和6代血清饥饿组;用5-Brdu标记增殖细胞;RT-PCR检测表型基因SM22ɑmRNA的表达;免疫细胞化学检测细胞骨架蛋白SMɑ-actin、β-Tubulin和Desmin的表达。结果体外培养的VSMCs,随培养代数的增多,细胞骨架蛋白表达减少,电镜超微结构可见胞质中内质网、高尔基体等细胞器增多,有大量的分泌小泡;血清饥饿胞中线粒体增多并电子密度增高。血清培养条件下SMɑ-actin随培养代数的增加其表达减少,血清饥饿培养可使SMɑ-actin表达可逆性上调;β-Tubulin和Desmin随培养代数的增加表达减少更明显,而血清饥饿上调作用也不明显,至第6代基本不表达。结论血清培养和血清饥饿培养在不同代中对VSMCs表型转化、增殖和细胞骨架有着不同的影响,它们之间存在着内在的联系,在维持细胞形态、收缩功能和血管重构方面起了重要作用。β-Tubulin和Desmin表达消失可能具有重要生物学意义。

关键词：细胞骨架细胞增殖表型转化血管平滑肌细胞反转录-聚合酶链反应大鼠