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辣椒真叶原生质体的分离及瞬时转化

分子植物育种 2025年

作者：朱莉云李园王楠储谟立程伟安徽师范大学生命科学学院安徽省重要生物资源保护与利用研究重点实验室

辣椒是一种重要的蔬菜和工业原料作物，建立和优化辣椒的原生质体分离及瞬时转化体系具有重要意义。本研究以辣椒第5～7片真叶为供体材料，探究了不同条件对辣椒叶肉细胞原生质体分离效果的影响，结果表明：当酶解液含1.25%的Cellulose ... 详细信息

辣椒是一种重要的蔬菜和工业原料作物，建立和优化辣椒的原生质体分离及瞬时转化体系具有重要意义。本研究以辣椒第5～7片真叶为供体材料，探究了不同条件对辣椒叶肉细胞原生质体分离效果的影响，结果表明：当酶解液含1.25%的Cellulose R10和0.3%的Macerozyme R10，酶解时间为4 h时，原生质体产量约为11×106/g FW，活力在85%以上。利用此制备条件，不同基因型的辣椒真叶原生质体分离效果差异不显著。利用PEG-Ca2+介导法，将含有绿色荧光蛋白报告基因的载体转化辣椒原生质体，比较分析了不同条件对辣椒原生质体瞬时转化效率的影响，结果表明：当PEG4000浓度为35%，转化时间为20 min时，辣椒原生质体的瞬时转化效率最高，约64%的原生质体可检测到较高活性的绿色荧光。该研究为获得高质量的辣椒叶片原生质体及其瞬时表达提供了技术基础。

关键词：辣椒原生质体瞬时转化绿色荧光蛋白

黄精衍生的纳米囊泡抑制脂多糖诱导的炎症因子产生及其分子机制

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中国生物化学与分子生物学报 2025年

作者：曹腾辉龙兴旺刘林王刚林李伟温州医科大学检验医学院(生命科学学院)生物化学与分子生物学系浙江省医学遗传学重点实验室

植物外泌体样纳米囊泡是指从植物中分离的含有脂质、蛋白质、RNA和各种小分子的球状脂质囊泡，具有抗炎、抗肿瘤、抗氧化和药物载体等方面功效，然而黄精衍生的纳米囊泡的功能尚未见报道。本文利用超速离心和密度梯度离心，首次从黄精... 详细信息

植物外泌体样纳米囊泡是指从植物中分离的含有脂质、蛋白质、RNA和各种小分子的球状脂质囊泡，具有抗炎、抗肿瘤、抗氧化和药物载体等方面功效，然而黄精衍生的纳米囊泡的功能尚未见报道。本文利用超速离心和密度梯度离心，首次从黄精中获得了外泌体样纳米囊泡（rhizoma polygonati exosome-like nanovesicles， RP-EVs），并对其表征和抗炎功能进行探究。结果：RP-EVs是主要带负电荷，平均粒径为166.5±3.3 nm的球状脂质囊泡。细胞摄取实验显示，RP-EVs可以被巨噬细胞吞噬。qPCR以及ELISA研究表明，RP-EVs可以抑制脂多糖（lipopolysaccharides， LPS）刺激引起的白细胞介素6（interleukin 6， IL-6）、白细胞介素1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-alpha， TNF-α） (****P活性氧（reactive oxygen species， ROS）及DPPH清除实验证实，RP-EVs具有一定的抗氧化功能(*P实验，将RP-EVs腹腔注射至小鼠体内48 h，主要定位于小鼠的肝和脾。最后，利用腹腔注射LPS构建小鼠急性炎症模型，通过qPCR以及ELISA法检测炎症因子水平，发现RP-EVs可以缓解LPS引起的小鼠血清和脾中的炎症因子的表达(*P<0.05)。总之，本论文首次分离获得了RP-EVs，并揭示了其抗炎功能和潜在的机制，将为中药来源的纳米囊泡的功能探究提供一定的参考，为炎症性相关疾病的治疗提供新的策略。

关键词：黄精外泌体样纳米囊泡炎症因子活性氧细胞核因子p65

中国沙棘ACBPs基因家族成员鉴定及响应铅胁迫的表达分析

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果树学报 2025年

作者：陈科李昕娟张恬任乾丹孙菁周武青海大学生态环境工程学院中国科学院西北高原生物研究所·青海省青藏高原特色生物资源研究重点实验室·中国科学院藏药研究重点实验室

【目的】ACBPs（acyl-CoA-binding proteins）基因家族在植物的正常生长和发育、响应非生物胁迫以及生物膜修复等方面具有重要作用。旨在探究中国沙棘ACBPs基因家族成员在重金属铅胁迫下的基因表达量，为初步解析中国沙棘响应重金属铅... 详细信息

【目的】ACBPs（acyl-CoA-binding proteins）基因家族在植物的正常生长和发育、响应非生物胁迫以及生物膜修复等方面具有重要作用。旨在探究中国沙棘ACBPs基因家族成员在重金属铅胁迫下的基因表达量，为初步解析中国沙棘响应重金属铅胁迫的分子机制及利用基因工程手段培育重金属铅低积累性的新品种提供研究基础和分子靶标。【方法】通过生物信息学方法对中国沙棘ACBPs基因家族成员进行鉴定，并对其家族成员进行理化性质分析、多序列比对和系统进化分析、亚细胞定位和染色体定位分析、基因结构和Motif序列分析、顺式作用元件分析、蛋白互作网络和蛋白三维结构预测分析、物种内与物种间基因共线性分析以及对基因表达模式进行转录组分析和qRT-PCR验证。【结果】在中国沙棘全基因组中共鉴定出8个ACBPs基因，不均匀分布于7条染色体上。ACBPs家族成员可细分为4个组，同一组内的成员基因结构保守且蛋白基序差异较小。共线性分析表明，中国沙棘ACBPs基因家族与拟南芥ACBPs基因家族之间存在9条共线性，与翅果油树ACBPs基因家族之间存在17条共线性。转录组分析和qRT-PCR验证表明，中国沙棘ACBPs基因家族中大部分基因在铅浓度为1000 mg·kg-1时，表达量急剧下降；在铅浓度为5000 mg·kg-1时，表达量显著上升。【结论】在中国沙棘基因组中鉴定到8个ACBPs基因。Group1和Group3中的成员在基因结构、motif序列以及蛋白三维结构中均表现了一定的保守型；ACBPs基因家族成员的启动子区域含有多种顺式作用元件，能够响应植物激素的调控、影响分生组织的基因活性，以及响应胁迫应激。基因家族大部分成员在铅胁迫条件下的表达具有相似性，该基因家族通过调整基因的表达量响应不同浓度的重金属铅胁迫，从而降低铅胁迫带来的伤害。

关键词：中国沙棘生物信息学 ACBPs基因家族铅胁迫

屋尘螨变应原Der p2 T细胞表位疫苗对哮喘小鼠的特异性免疫治疗效果

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中国血吸虫病防治杂志 2017年第1期29卷 59-63页

作者：湛孝东段彬彬洪勇李朝品皖南医学院活性生物大分子研究安徽省重点实验室芜湖241002

目的探讨屋尘螨变应原Der p2的4个T细胞表位融合肽对哮喘小鼠的特异性免疫治疗效果。方法 30只雌性BALB/c小鼠随机分为3组,分别为阴性对照组(PBS组)、阳性对照组(哮喘组)以及Der p2 T细胞融合肽治疗组(Der p2 T组)。用屋尘螨粗提取液致... 详细信息

目的探讨屋尘螨变应原Der p2的4个T细胞表位融合肽对哮喘小鼠的特异性免疫治疗效果。方法 30只雌性BALB/c小鼠随机分为3组,分别为阴性对照组(PBS组)、阳性对照组(哮喘组)以及Der p2 T细胞融合肽治疗组(Der p2 T组)。用屋尘螨粗提取液致敏小鼠建立哮喘模型,PBS组以PBS缓冲液代替,Der p2 T组分别于小鼠致敏第25~27天雾化致敏前30 min行背部皮下注射相应治疗蛋白。最后一次雾化激发24 h后,收集各组小鼠血清及支气管肺泡灌洗液(BALF)。采用ELISA法检测小鼠BALF中IFN-γ、IL-4、IL-13以及血清中屋尘螨粗提取液致敏的特异性IgE、IgG2a抗体水平,并行肺组织切片HE染色。结果哮喘组小鼠BALF中的嗜酸性粒细胞数量为(5.57±0.64)×10~5个/ml,高于PBS组[(0.50±0.30)×10~5个/ml](P<0.01)和Der p2 T组[(3.45±0.36)×10~5个/ml](P<0.01)。PBS组、哮喘组、Der p2 T组小鼠BALF中IFN-γ含量分别为(267.00±21.98)、(155.80±20.53)pg/ml和(234.40±24.46)pg/ml;与哮喘组比较,Der p2 T组小鼠BALF中产生了较高的IFN-γ水平(P<0.01)。PBS组、哮喘组、Der p2 T组小鼠BALF中IL-4含量分别为(23.40±5.96)、(53.28±8.26)pg/ml和(30.00±5.50)pg/ml;与哮喘组比较,Der p2 T组小鼠BALF中IL-4含量显著降低(P<0.01)。与哮喘组[(308.10±28.32)pg/ml]比较,Der p2 T组小鼠BALF中IL-13含量[(174.50±25.99)pg/ml]显著下降(P<0.01);PBS组鼠BALF中IL-13含量为(95.99±31.14)pg/ml。肺组织切片显示,Der p2 T组小鼠肺部炎症较哮喘组明显减轻,且炎性细胞浸润显著减少、气道上皮结构重塑。结论 Der p2 T细胞表位融合肽可有效改善哮喘小鼠变态反应性气道及肺部炎症,可作为屋尘螨哮喘患者特异性免疫治疗的候选疫苗。

关键词：屋尘螨 Der p2 T细胞表位哮喘免疫治疗

家蚕小茧突变体sc生长发育相关通路差异表达基因转录分析

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昆虫学报 2025年

作者：吴赛王闪闪赵巧玲朱娟王梅仙唐顺明沈兴家江苏科技大学生物技术学院江苏省蚕桑与畜禽生物技术重点实验室中国农业科学院桑蚕科学研究中心农业农村部蚕桑遗传改良重点实验室

[目的]航天蚕(Bombyx mori)后代小茧突变体sc的幼虫发育缓慢,食桑量少,推测其生长发育相关通路受到基因突变的影响。前期研究表明,sc突变受一对位于家蚕第3连锁群的隐性基因控制,但其控制基因并未被鉴定。本研究拟通过比较分析sc与航天... 详细信息

[目的]航天蚕(Bombyx mori)后代小茧突变体sc的幼虫发育缓慢,食桑量少,推测其生长发育相关通路受到基因突变的影响。前期研究表明,sc突变受一对位于家蚕第3连锁群的隐性基因控制,但其控制基因并未被鉴定。本研究拟通过比较分析sc与航天蚕后代正常茧品系TG的转录组数据,为sc突变体负责基因的鉴定及分子机制的解析提供参考。[方法]分别取sc和TG 5龄第4天幼虫的头部和中肠组织进行转录组测序(RNA-seq),并通过比较转录组分析获得差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),对DEGs进行GO注释和KEGG富集分析。利用qRT-PCR验证被随机选取的DEGs在sc和TG中的表达量。此外,利用qRT-PCR调查感兴趣基因在sc中的表达量。[结果]TG vs sc比较组头部检测到1528个DEGs,其中820个上调表达,708个下调表达;TG vs sc比较组中肠检测到1401个DEGs,其中683个上调表达,718个下调表达。头部和中肠DEGs在生物学过程中,大多数DEGs参与细胞过程、代谢过程、生物调节、刺激反应等;在分子功能中,大多数DEGs参与结合、催化活性、结构分子活性、转运蛋白活性、ATP依赖活性等。头部和中肠DEGs均涉及Hippo,Insulin和mTOR等与家蚕生长发育相关的信号通路。qRT-PCR分析显示,基因的表达趋势与转录组测序结果一致;与TG相比,sc中生长发育相关通路中BMSK0008105,BMSK0009907,BMSK0002689,BMSK0000286,BMSK0012340和BMSK00083629等关键基因差异表达。[结论]生长发育相关的信号通路关键基因的差异表达,通过影响生长发育过程中的能量代谢、器官发生和细胞生长、增殖及凋亡等生理过程,进而影响小茧突变体sc的体型发育。研究结果有助于阐明sc突变体形成的分子机制,并为家蚕体型调控研究积累实验数据。

关键词：家蚕航天蚕小茧突变体转录组测序差异表达基因功能注释

隐花色素调节cAMP-PKA信号通路及其与疾病关系的研究现状

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生命科学 2020年第11期32卷 1198-1204页

作者：郑伟姚鹏程周志强徐蕾皖南医学院活性生物大分子研究安徽省重点实验室芜湖241002

隐花色素(cryptochrome, CRY)属于隐花色素/光裂解酶蛋白家族(CPF),与光裂解酶具有高度同源性。与光裂解酶不同的是,CRY在哺乳动物中主要起到调节生物钟的作用,并不具备修复紫外损伤DNA的功能。除了参与生物节律的调节外,CRY还可以调节c... 详细信息

隐花色素(cryptochrome, CRY)属于隐花色素/光裂解酶蛋白家族(CPF),与光裂解酶具有高度同源性。与光裂解酶不同的是,CRY在哺乳动物中主要起到调节生物钟的作用,并不具备修复紫外损伤DNA的功能。除了参与生物节律的调节外,CRY还可以调节cAMP-PKA (环磷酸腺苷-蛋白激酶A)信号通路,从而影响多种人类疾病,如炎症、肿瘤、代谢性疾病以及睡眠障碍性疾病的发展。近来,随着研究的深入,CRY在多种疾病中发挥的作用也受到更多人的关注。该文着重介绍CRY调节c AMP-PKA信号通路的作用机制,及其与肿瘤、糖代谢紊乱、炎症以及睡眠障碍等疾病的发生发展的关系。

关键词：隐花色素 cAMP-PKA信号通路肿瘤炎症糖代谢睡眠障碍

植物甾醇对桑椹花色苷脂质体及其抗氧化活性的影响

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食品与发酵工业 2025年第1期51卷 290-296页

作者：梁安雅林羡卜智斌余元善肖更生仲恺农业工程学院轻工食品学院广东广州510225 广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所农业农村部功能食品重点实验室广东省农产品加工重点实验室广东广州510610

植物甾醇的分子结构与胆固醇相似,作为膜结构调节剂,植物甾醇既能调节脂质体膜的结构性质,又能避免胆固醇摄入的负面影响。本研究以植物甾醇替代胆固醇,通过薄膜分散-超声法制备桑椹花色苷脂质体,评价了脂质体的包封率、粒径、电位和微... 详细信息

植物甾醇的分子结构与胆固醇相似,作为膜结构调节剂,植物甾醇既能调节脂质体膜的结构性质,又能避免胆固醇摄入的负面影响。本研究以植物甾醇替代胆固醇,通过薄膜分散-超声法制备桑椹花色苷脂质体,评价了脂质体的包封率、粒径、电位和微观形态等指标,并探究了植物甾醇对脂质体pH稳定性和抗氧化活性的影响。结果表明,与胆固醇脂质体类似,植物甾醇的添加也能够得到粒径小、分散性好、包封率高的桑椹花色苷脂质体。当β-谷甾醇添加量为卵磷脂质量的26%时,桑椹花色苷脂质体贮藏后的DPPH自由基清除能力提高率是添加了等量胆固醇的脂质体的1.6倍。植物甾醇脂质体贮藏前后的氧自由基吸收能力(oxygen radical absorbance capacity,ORAC)优于胆固醇脂质体的,尤其在胆固醇脂质体贮藏后,ORAC值下降2.42倍~3.65倍,植物混合甾醇脂质体的ORAC值则变化不大。综上,采用植物甾醇替代胆固醇制备桑椹花色苷脂质体,可制得较稳定、并具有良好抗氧化活性的脂质体,可为负载生物活性物质的植物甾醇脂质体的构建提供理论基础。

关键词：植物甾醇桑椹花色苷脂质体抗氧化

miR-20a-5p通过下调HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549增殖

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南方医科大学学报 2022年第4期42卷 568-574页

作者：刘海军王杰申珈馨吴旭李玉磊皖南医学院第一附属医院安徽芜湖241002 皖南医学院活性生物大分子安徽省重点实验室安徽芜湖241002

目的探讨miR-20a-5p调控HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549增殖的分子机制。方法转染HOXB13过表达质粒与HOXB13 siRNA到肺癌细胞系A549,通过qRT-PCR及Western blot实验检测HOXB13 mRNA及蛋白的表达水平;CCK-8及EdU实验检测HOXB13对肺癌... 详细信息

目的探讨miR-20a-5p调控HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549增殖的分子机制。方法转染HOXB13过表达质粒与HOXB13 siRNA到肺癌细胞系A549,通过qRT-PCR及Western blot实验检测HOXB13 mRNA及蛋白的表达水平;CCK-8及EdU实验检测HOXB13对肺癌细胞系A549细胞增殖的影响;利用生物信息学分析筛选HOXB13可能结合的miRNA;通过qRT-PCR检测转染miR-20a-5p mimic与miR-20a-5p inhibitor到肺癌细胞系后miR-20a-5p的表达水平;Western blot实验检测HOXB13在肺癌细胞系中的表达情况;CCK-8及EdU实验检测miR-20a-5p肺癌细胞系A549细胞增殖的影响;在A549细胞中共转染miR-20a-5p mimic及HOXB13过表达质粒,CCK-8及EdU实验检测A549细胞增殖能力。结果HOXB13促进了A549细胞的增殖(P生物信息学筛选出HOXB13可能结合的miRNA为miR-20a-5p;在肺癌细胞系中过表达miR-20a-5p后,HOXB13蛋白表达量降低(P实验结果显示,miR-20a-5p与HOXB13对细胞增殖的影响相反,miR-20a-5p及HOXB13同时过表达,细胞增殖情况介于单独过表达miR-20a-5p及单独过表达HOXB13组之间(P<0.05)。结论miR-20a-5p调控HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549的增殖。

关键词： miR-20a-5p 肺癌细胞增殖 A549 HOXB13

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瑞香素对HMGB1释放及HMGB1诱发的炎症反应的双重抑制作用

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南方医科大学学报 2015年第11期35卷 1519-1523页

作者：戚之琳齐世美凌烈锋冯遵永皖南医学院生物化学教研室安徽省活性生物大分子重点实验室安徽芜湖241002

目的探讨瑞香素对高迁移率族蛋白1(HMGB1)释放及其诱发炎症反应的双重抑制作用。方法 RAW264.7细胞常规培养,不同浓度的瑞香素单独或联合脂多糖(LPS)作用细胞不同的时间,ELISA检测晚期炎症因子HMGB1的释放;Western blot检测JAK1/2、STAT... 详细信息

目的探讨瑞香素对高迁移率族蛋白1(HMGB1)释放及其诱发炎症反应的双重抑制作用。方法 RAW264.7细胞常规培养,不同浓度的瑞香素单独或联合脂多糖(LPS)作用细胞不同的时间,ELISA检测晚期炎症因子HMGB1的释放;Western blot检测JAK1/2、STAT1的磷酸化。THP-1细胞常规培养,不同浓度的瑞香素单独或联合rh HMGB1刺激细胞不同的时间,ELISA检测炎症因子TNF-α,IL-6,PGE2的释放;NO检测试剂盒检测NO水平;Western blot检测i NOS、COX-2的表达及p38、ERK、JNK的磷酸化水平。结果瑞香素浓度依赖性的下调HMGB1的释放,抑制rh HMGB1诱导的i NOS、COX-2的表达及TNF-α,IL-6,PGE2、NO的释放。WB结果显示,瑞香素显著下调脂多糖诱导的JAK-STAT1信号磷酸化,但对rh HMGB1诱导的MAPKs磷酸化无明显抑制作用。结论瑞香素能够抑制HMGB1释放及其诱发的炎症反应,而且瑞香素可能通过抑制JAK-STAT1信号途径减弱HMGB1的释放。

关键词：瑞香素 HMGB1 脂多糖炎症