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靶向c-Met的CAR-T细胞构建及其对人浆液性卵巢癌细胞SKOV-3的体外杀伤性

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生理学报 2025年

作者：杜娜娜张艳君李艳秋张露安然甄翔程闵静婷李正红蚌埠医科大学基础医学院蚌埠医科大学生命科学院蚌埠医科大学公共基础学院蚌埠医科大学临床医学院蚌埠医科大学安徽省肿瘤演进及智能诊疗重点实验室

本研究旨在构建靶向细胞间质上皮转换因子(c-mesenchymal-epithelial transition factor, c-Met)的第二代和第三代嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cells, CAR-T)，观察其对人浆液性卵巢癌细胞SKOV-3的体外杀伤作用。采用生物信息学分析MET基因在卵巢浆液性囊腺癌中的表达情况、MET基因表达与免疫细胞浸润丰度的相关性及其对卵巢浆液性囊腺癌组织功能的影响；免疫组织化学染色法检测浆液性卵巢癌组织以及癌旁组织中c-Met的表达情况；流式细胞术检测SKOV-3表面c-Met蛋白的表达；通过慢病毒感染制备第二代和第三代c-Met CAR-T细胞，流式细胞术检测细胞亚群和感染效率。以CD19 CART和活化T细胞为对照组，以c-Met阴性表达的人卵巢癌细胞A2780细胞设置Non target组，通过乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)释放、ELISA、CCK-8等功能实验探究第二代[c-Met CAR-T(2G)]和第三代[c-Met CAR-T(3G)] c-Met CAR-T对c-Met阳性表达的SKOV-3细胞的杀伤效果、细胞因子分泌和增殖能力。生物信息学分析与免疫组织化学染色结果显示，与正常组织相比，卵巢癌组织的MET基因表达显著上调，而在各病理阶段MET表达无明显差异，且MET基因表达与卵巢癌患者的种族、年龄均没有相关性。成功构建第二代和第三代cMet CAR-T细胞，且在慢病毒感染后c-Met CAR-T(2G)的CD8+T细胞比例有所上调，c-Met CAR-T(3G)细胞亚群无明显变化；LDH释放实验显示，第二代和第三代c-Met CAR-T对靶细胞SKOV-3的杀伤效率随效靶比提高而上升，效靶比为20:1时，c-Met CAR-T(2G)的杀伤效率达到(42.02±5.17)%(P第二代和第三代c-Met CAR-T均能靶向识别并杀伤c-Met阳性的人浆液性卵巢癌细胞SKOV-3，两者的细胞毒性无明显差异，c-Met CAR-T(2G)的增殖能力更强，c-Met CAR-T(3G)释放细胞因子的水平更高。

关键词：浆液性卵巢癌 c-Met CAR-T 生物信息学

中文版RSS-12量表评价富马酸伏诺拉生治疗喉咽反流性疾病的疗效分析

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临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2025年第01期 66-70+76页

作者：卞朝荣周鹏神平臧云鹏刘稳徐州医科大学第一临床医学院徐州医科大学附属医院耳鼻咽喉科

目的:探讨中文版RSS-12量表评价富马酸伏诺拉生治疗喉咽反流性疾病(LPRD)的疗效。方法:纳入100例喉咽反流性疾病患者为研究对象，随机分为2组(各50例),观察组富马酸伏诺拉生(20 mg、qd)治疗，对照组艾司奥美拉唑肠溶胶囊(20 mg、bid)治... 详细信息

目的:探讨中文版RSS-12量表评价富马酸伏诺拉生治疗喉咽反流性疾病(LPRD)的疗效。方法:纳入100例喉咽反流性疾病患者为研究对象，随机分为2组(各50例),观察组富马酸伏诺拉生(20 mg、qd)治疗，对照组艾司奥美拉唑肠溶胶囊(20 mg、bid)治疗，持续12周。本次研究中选取的观察指标包括治疗前后RSI、中文版RSS-12及RFS评分。结果:治疗前，2组中文版RSS-12、RSI、RFS比较差异无统计学意义(P>0.05)。2组抗酸治疗后8周、12周中文版RSS-12、RSI均显著下降且差异有统计学意义(P0.05)。结论:富马酸伏诺拉生可明显改善喉咽反流的症状和体征，其治疗效果不劣于质子泵抑制剂。与RSI比较，中文版RSS-12可作为我国LPRD的临床诊断的新的筛查工具。

关键词：喉咽反流性疾病富马酸伏诺拉生中文版RSS-12

原子力显微镜观察体外纯化蛋白分子的表面结构

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中国药理学通报 2025年第1期41卷 193-199页

作者：陈昭颖方骁枫刘丹彦陈梦琴凌夕赵洁旻魏伟吴育晶安徽医科大学临床药理研究所抗炎免疫药物教育部重点实验室安徽合肥230032 安徽医科大学第二临床医学院安徽合肥230022

目的以课题组纯化获得的蛋白样本为观察对象,对比原子力显微镜(atomic force microscope,AFM)及扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)的观察结果,并总结AFM观察生物大分子的主要问题和解决方法。方法将蛋白样本使用PBS稀释... 详细信息

目的以课题组纯化获得的蛋白样本为观察对象,对比原子力显微镜(atomic force microscope,AFM)及扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)的观察结果,并总结AFM观察生物大分子的主要问题和解决方法。方法将蛋白样本使用PBS稀释至15 nmol·L^(-1),分别固定于载玻片、硅片和云母片上烘干,制成固相观察样本,SEM样本在观察前镀铂,使用AFM及SEM观察蛋白质表面结构,计算样本高度,对比结果差异。结果带正电的蛋白样本在观察时由于AFM探针的斥力会向右偏移;云母片能很好地消除蛋白正电荷从而避免样本移动;PBS能为蛋白样本提供良好的稳定环境,但PBS盐结晶会干扰探针运行和成像清晰度;SEM样本需要镀铂后观察,无法达到AFM的精度。结论使用AFM和SEM均可在体外环境直接观察蛋白质结构,AFM能提供更高精度的观察结果;在蛋白样本稳定性允许的情况下首选超纯水为溶剂载体,乙醇等挥发性液体也可作为溶剂载体,AFM的应用可为药理学生物大分子互作研究提供一新途径。

关键词：原子力显微镜扫描电子显微镜受体结构蛋白质体外结构超微结构云母载体

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CXCL12可作为2型糖尿病合并慢性阻塞性肺疾病的潜在治疗靶点

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南方医科大学学报 2025年

作者：许怀文翁丽薛鸿福建医科大学临床医学部福建医科大学省立临床医学院//福建省立医院//福州大学附属省立医院呼吸及危重症医学科

目的探讨2型糖尿病与慢性阻塞性肺疾病（COPD）的关键基因与免疫学共同机制，并研究潜在的治疗靶点。方法利用基因表达综合数据库（GEO）获取COPD与T2DM的基因表达谱。筛选出共同差异表达基因，并对其进行富集分析和蛋白-蛋白相互网... 详细信息

目的探讨2型糖尿病与慢性阻塞性肺疾病（COPD）的关键基因与免疫学共同机制，并研究潜在的治疗靶点。方法利用基因表达综合数据库（GEO）获取COPD与T2DM的基因表达谱。筛选出共同差异表达基因，并对其进行富集分析和蛋白-蛋白相互网络构建后，综合4种拓扑算法与Friends分析得到候选基因。进行数据集和疾病验证集中候选基因的差异表达验证，得到最终靶点基因，通过受试者工作特征曲线评估诊断特征的准确性，通过临床收集的共患病患者资料和血液标本验证靶基因的表达和肺功能相关性。基于CIBERSORT算法分析数据集样品中22种免疫细胞丰度，通过相关性分析靶点基因与22种免疫细胞的关系。使用DGIdb数据库筛选药物-基因互作关系信息和可药用的基因。最后对进行基因集富集分析。结果选取两种疾病175个共同差异表达基因进分析，结果显示其主要富集于免疫与炎症相关通路，最终筛选趋化因子配体12(CXCL12)作为最终靶基因，其表达在两种疾病中均明显上升（P<0.05），且在受试者工作曲线中表现出较优异效能，并在COPD共患2型糖尿病患者的血液得到验证。CXCL12表达与肺功能的相关性也得到验证。免疫浸润分析结果显示，CXCL12与CD8+T细胞、γδT细胞和静息肥大细胞呈正相关，而与静息NK细胞和嗜酸性粒细胞呈负相关，差异均具有统计学意义（P<0.01）。GESA分析显示“细胞因子-细胞因子受体相互作用”为与CXCL12高表达密切相关的活化途径。药物-基因检测显示，与CXCL12相关的药物多为非靶向，有较大的细胞毒性，还有进一步改良的空间。结论 CXCL12可能是COPD与T2DM共同的关键发病基因，靶向CXCL12药物可能是未来COPD和T2DM共病患者更为合理、有效的药物治疗新方向。

关键词： 2型糖尿病慢性阻塞性肺疾病生物信息学分析趋化因子配体12 靶点分析

失眠障碍神经影像学特征及重复经颅磁刺激治疗效果

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中国医学影像技术 2025年

作者：袁泽琪张正楠王惠晓杨海庆冯平勇周立霞杨冀萍高铎河北医科大学第二医院医学影像科

目的基于静息态功能MRI（rs-fMRI）观察失眠障碍（ID）患者脑功能改变，以及重复经颅磁刺激（rTMS）治疗效果。方法前瞻性纳入37例ID患者（ID组）及20名健康受试者（对照组），比较组间及ID组内rTMS治疗前后睡眠状况及心理状态量表评... 详细信息

目的基于静息态功能MRI（rs-fMRI）观察失眠障碍（ID）患者脑功能改变，以及重复经颅磁刺激（rTMS）治疗效果。方法前瞻性纳入37例ID患者（ID组）及20名健康受试者（对照组），比较组间及ID组内rTMS治疗前后睡眠状况及心理状态量表评分；基于颅脑rs-fMRI观察组间低频振幅（ALFF）、局部一致性（ReHo）存在差异脑区，并对其与预设脑区进行体素水平静息态功能连接（FC）分析。结果治疗前ID组匹兹堡睡眠质量指数（PSQI）、失眠严重程度指数（ISI）、爱普沃斯嗜睡量表（ESS）评分、贝克忧郁量表（BDI）评分及贝克焦虑量表（BAI）评分均高于对照组（P均＜0.05）；ID组右侧正中扣带回和扣带旁回（Cingulum＿Mid＿R）ALFF值及ReHo均低于对照组（FWE校正P均＜0.05），Cingulum＿Mid＿R与左侧前扣带回和扣带旁回（Cingulum＿Ant＿L）、左侧海马（Hippocampus＿L）与右侧额中回（Frontal＿Mid＿R）间FC降低（FWE校正P均＜0.05）。rTMS治疗后ID患者PSQI、ISI及ESS评分均较治疗前减低（P均＜0.05），但上述神经影像学指标均无显著改变（FWE校正P均＞0.05）。结论 ID导致Cingulum＿Mid＿R ALFF值和ReHo同步减低，额叶-扣带回、额叶和边缘系统之间FC减弱。rTMS可改善ID患者睡眠及精神状态，但其对神经影像学的影响尚需进一步观察。

关键词：睡眠障碍,昼夜节律性磁共振成像低频振幅局部一致性功能连接经颅磁刺激前瞻性研究

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非编码RNA在肺纤维化过程中的调控作用

中国组织工程研究 2025年第8期29卷 1659-1666页

作者：于经邦吴亚云贵州医科大学临床医学院贵州省贵阳市550004

背景:截至目前,肺纤维化的发病机制不明,治疗手段或者药物有限。大量研究发现,非编码RNA在肺纤维化的发生发展过程中发挥重要作用。目的:综述近年来非编码RNA在肺纤维化发病机制中的调控作用,深入了解肺纤维化的发病机制。方法:由第一... 详细信息

背景:截至目前,肺纤维化的发病机制不明,治疗手段或者药物有限。大量研究发现,非编码RNA在肺纤维化的发生发展过程中发挥重要作用。目的:综述近年来非编码RNA在肺纤维化发病机制中的调控作用,深入了解肺纤维化的发病机制。方法:由第一作者应用计算机检索2000-2024年出版的文献,以“非编码RNA,微小RNA,长链非编码RNA,环状RNA,肺纤维化,综述”等为中文检索词检索中国知网、万方和维普数据库;以“ncRNA,miRNA,lncRNA,circRNA,Pulmonary fibrosis,review”等为英文检索词检索PubMed数据库,按照入选标准最终共纳入65篇文献进行综述。结果与结论:肺纤维化作为一种慢性且通常致命的肺部疾病,不仅可能自发产生,也可能是其他疾病的继发结果,主要特点是肺部间质中细胞外基质的异常增生和大量积累。非编码RNA是指由基因组转录出来的RNA分子,这些RNA分子并不涉及蛋白质的编码过程,凭借其调节能力已成为各种生物学现象中的一线分子参与者之一。非编码RNA在肺纤维化的发病机制中扮演着关键角色,微小RNA(miRNA)、长链非编码RNA(lncRNA)和环状RNA(circRNA)可以通过影响基因表达、转录后修饰以及细胞间的信号传导,参与到肺纤维化的发展过程中,为后续探索肺纤维化疾病的具体分子发生机制提供了新方向,为研发肺纤维化疾病的新靶向药物提供了理论依据及新思路。

关键词：非编码RNA 微小RNA 长链非编码RNA 环状RNA 肺纤维化综述

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微容量负荷试验对老年骨科患者蛛网膜下腔阻滞后低血压的预测价值

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实用医学杂志 2025年第1期 60-64页

作者：梁长宁陈小萍魏静静葛亚丽高巨扬州大学临床医学院江苏省苏北人民医院麻醉科大连医科大学扬州临床医学院

目的探讨微容量负荷试验对老年骨科患者腰麻后低血压的预测价值。方法严格按照入选和排除标准筛选出行髋关节或膝关节置换的老年患者72例，均为安排蛛网膜下腔阻滞麻醉的择期手术患者。依据研究对象接受单次细针腰麻后于仰卧位状态下1... 详细信息

目的探讨微容量负荷试验对老年骨科患者腰麻后低血压的预测价值。方法严格按照入选和排除标准筛选出行髋关节或膝关节置换的老年患者72例，均为安排蛛网膜下腔阻滞麻醉的择期手术患者。依据研究对象接受单次细针腰麻后于仰卧位状态下15 min内血压改变进行分组，参考既往文献低血压定义标准分为血压降低组（H组）和血压正常组（N组）共两组。实施细针腰麻前进行微容量负荷试验，采用无创心排血量监测仪测量每搏量指数变异度（variation of stroke volume index，ΔSVI）并记录血压及心率等循环数据的基线值。采用多因素logistic回归分析接受腰麻下行骨科关节置换手术的老年患者低血压的影响因素，绘制ΔSVI的受试者工作特征（ROC）曲线并计算曲线下面积（AUC），评价ΔSVI的预测价值。结果腰麻后有29例（40.27%）患者发生低血压。与N组相比，仰卧位状态下15 min内发生低血压的H组患者年龄更大，ASAⅢ级、合并高血压比例更高。分析结果显示ΔSVI是老年患者腰麻后低血压的独立影响因素。ΔSVI在≥0.805%时，预测腰麻后低血压的敏感度为82.8%，特异度为81.4%，曲线下面积为0.868。ΔSVI与SBP最大降低幅度呈正相关（r=0.562,P 科患者腰麻后低血压的方法。

关键词：老年髋关节置换术膝关节置换术蛛网膜下腔阻滞后低血压微容量负荷试验蛛网膜下腔阻滞

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基于中国药物相关问题分类系统对306例眼科慢病患者药学服务的评价

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中国医院药学杂志 2025年第01期 84-91页

作者：陆海钮昕闫瑾王兴马一平天津市眼科医院药剂科天津医科大学临床医学院药学系

目的：基于中国药物相关问题分类系统（V1.0），对眼科慢病药学服务进行评价。方法：收集2023年1—6月期间，在天津市眼科医院就诊的干眼症、青光眼、糖尿病性视网膜病变的眼科慢病患者，依据中国药物相关问题分类系统（V1.0）分析药物... 详细信息

目的：基于中国药物相关问题分类系统（V1.0），对眼科慢病药学服务进行评价。方法：收集2023年1—6月期间，在天津市眼科医院就诊的干眼症、青光眼、糖尿病性视网膜病变的眼科慢病患者，依据中国药物相关问题分类系统（V1.0）分析药物相关问题（drug-related problems,DRPs）类型、原因、介入方案及接受结果，提供6个月的眼科药学服务，并从眼科相关临床指标、用药依从性、视力生活质量、疾病及用药知晓程度等8个维度评价眼科药学服务结果。结果：纳入患者306例，其中247例患者出现523条DRPs，其中与治疗有效性相关的DRPs 225条（43.02%）。共识别出543条相关原因，最常见是未正确储存或使用药品141条（19.37%）。药师为患者/家属层面提供接入方案最多为318条（38%），介入方案接受并完全执行392条（74.95%）。经过6个月的眼科药学服务，眼科相关临床指标、用药依从性、视力生活质量、疾病及用药知晓程度及用药相关问题数量等评价指标均改善，且具有统计学意义（P科慢病患者DRPs，为眼科药学服务规范、标准的开展提供临床依据，有效地降低了眼科DRPs地发生，保障患者合理用药。

关键词：中国药物相关问题分类系统药物相关问题眼科慢病眼科药学服务

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人工智能在膀胱癌影像评估应用中的研究进展

临床放射学杂志 2025年第1期44卷 182-185页

作者：梁琪(综述) 张继(审校) 南京医科大学泰州临床医学院泰州225300 南京医科大学附属泰州人民医院医学影像科泰州225300

根据全球癌症统计,膀胱癌(bladder cancer,BC)是全世界第十大常见的癌症,男性BC发病率和死亡率约为女性的4倍,其已成为男性第六大常见癌症和第九大癌症死亡原因[1]。目前,BC诊断取决于膀胱镜活检或经尿道膀胱肿瘤切除术(transurethral r... 详细信息

根据全球癌症统计,膀胱癌(bladder cancer,BC)是全世界第十大常见的癌症,男性BC发病率和死亡率约为女性的4倍,其已成为男性第六大常见癌症和第九大癌症死亡原因[1]。目前,BC诊断取决于膀胱镜活检或经尿道膀胱肿瘤切除术(transurethral resection of bladder tumor,TURBT)的组织学检查[2]。据研究报道,大约75%的患者为非肌肉侵袭性膀胱癌(NMIBC),其余25%的患者为肌肉侵袭性膀胱癌(MIBC),不同分期有不同的治疗目标和策略。简单地说,NMIBC患者主要通过经尿道膀胱肿瘤电切术治疗,其预后良好,5年生存率约90%;MIBC则需要更为积极的治疗方案,包括根治性全膀胱切除术(radical cystectomy,RC)和新辅助化疗等全身治疗,其预后不佳,5年生存率低于50%[3~5]。因此,正确区分NMIBC和MIBC对制订合理的治疗方案以及提高患者的术后生活质量至关重要。然而,由于采样误差,TURBT常低估了肿瘤分期,约40%的MIBC患者在重复采样后被误诊为NMIBC[6]。为优化BC患者的管理计划,需要一些强大的诊断工具来提高分期和预后预测的准确性。近年来,人工智能(artificial intelligence,AI)在医疗领域表现出巨大潜力,其可基于现有数据并通过复杂的非线性数学建模系统模仿人类神经元的活动[7]。机器学习(machine learning,ML)是AI的一个分支,而深度学习(deep learning,DL)又是ML领域中的一个方向,其以卷积神经网络(convolution neural network,CNN)应用最为广泛,其在图像识别和分类中发挥着重要作用,有望在诊断和风险分层方面帮助临床决策[8]。

关键词：临床决策卷积神经网络组织学检查诊断工具人工智能采样误差膀胱癌深度学习

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